aCl)(批号 90FIS521)、Voluven⑧ 10% (l〇〇g/L聚（0-2-羟乙基）淀粉(HES 130/0.4)、9g/L NaCl)(批 号 14FC3308)和Cardioplegische Peifusionsldsung彳(60g/L聚（0-2-羟乙基）淀粉(HES450/ 0 · 7)、0 · 721g/L DL-天冬氨酸氢镁4H20、1 · 091g//L盐酸普鲁卡因、0 · 074g/L氯化钙2H20、 1.461g/L氯化钠、0.373g/L氯化钾、1.982g//L葡萄糖单水合物、36.44g/L甘露糖醇、其它组 分：盐酸、氢氧化钠、注射用水）（批号16FA0199)以备用产品形式从Fresenius Kabi Deutschland GmbH(Bad Homburg,Germany)获得。
[0183] Adept?'(40g/L艾考糊精、5 · 4g/l氯化钠、4 · 5g//L乳酸钠、257mg/L氯化钙、6lmg/L 氯化镁）（批号11892004)以备用产品形式从Baxter Deutschland GmbH (1]]^6^〇111618116；[111，661'1]^117)获得。所有溶液都储存在室温(〈25°〇下直至使用。所有溶液 都在无菌条件下注射。
[0184] 动物：
[0185] 成年雌性 BALB/c 裸小鼠（品系 CAnN.Cg-Foxnlnu/Crl)(Charles River GmbH, Sulzf eld ,Germany)用于研究中。在实验开始时，它们是5-6周龄，并且具有在16与18g之间 的中值体重。
[0186] 所有小鼠都维持在严格控制以及标准化屏障条件下。它们被舍饲-最多四只小鼠/ 笼-在处于以下环境条件下的个别通风的笼中：22+/-3°C室温，30-70%相对湿度，12小时人 工荧光光照/12小时黑暗。它们接受热压处理的食物和垫料(S SnifT，S〇est，Germany)，并且 随意取用热压处理的公用自来水。
[0187] 癌病模型：
[0188] 研究由6个实验组组成，各自含有25(组1)或24(组2-6)只雌性BALB/c裸小鼠。在第 0天，通过腹膜内注射将2xl0 6个LS174T细胞于300μ1 PBS中施用至所有BALB/c裸小鼠（组1-6)的腹腔中。新鲜制备的细胞混悬液用于各轮植入，其中组1-6各自4个动物被植入。对于每 组24个动物的植入，针对24个动物(组1-6)需要用新鲜制备的细胞混悬液进行6轮植入(在 末轮中考虑用于组1的1个额外动物的细胞）。在细胞植入之后10至15分钟内，动物用不同淀 粉溶液和Thelosan? (组2-5)腹膜内治疗一次。组6的动物接受Adeptφ。所有溶液都如所供 应，各自以每只小鼠500μ1的体积加以施用。组1的动物接受500μ1盐水溶液(参见表1)。
[0189] 表1
[0191] 每隔一天(星期一、星期三和星期五)获取动物重量。每日监测动物行为。
[0192] 在研究的过程期间，由于伦理原因（腹水、局部麻痹、腹壁肿胀），出自所有研究组 的若干动物提前被处死，并且进行尸检。在第43研究日，由于伦理原因，终止研究，处死所有 剩余动物并进行尸检。在尸检时，称重所有动物，并且通过颈部脱位来杀死。宏观检查动物， 并且通过计算腹膜癌指数(PCI)来对可见肿瘤进行定量。
[0193] 出于这个目的，腹腔的所有肿瘤通过11种不同目标区域加以分类(参见下表2)，并 且使用肿瘤直径，根据病变尺寸评分分类成LS-O至LS-4,列于表2中。接着，累加不同目标区 域内对应各病变尺寸的肿瘤的数目，并且乘以分别对应于LS-O、LS-I、LS-2、LS-3和LS-4的 相应因数〇、1、2、3或4以获得病变尺寸特异性PCI值PCI lsq至PCUS4。最后，累加这5个结果以 得到总体腹膜癌指数(PCI总体)。
[0194] 另外，计算各组的器官特异性PCI值。出于这个目的，计算如上所述的各动物针对 各目标区域的个别PCI值，从而获得器官特异性PCI值PCIr 11至PCIRm。最后，对于各目标区 域，累加每组所有动物的?(：11?1值，并且确定平均值和中值。
[0195]表2:腹膜癌指数(PCI):评估流程
[0197]统计评估：
[0198] 使用描述性数据分析(平均值伴SEM;中值)来分析动物重量、每组PCI总体值以及 器官特异性PCI值。此外，也显示遍及所有样品的所有单一值和器官特异性（单一值和中 值）。所有数据分析都使用来自 GraphPad Sof tware，Inc ·，San Diego ,USA的GraphPad Prism 5进行。
[0199] 结果：
[0200] 相较于对照组，羟乙基淀粉和艾考糊精导致腹膜癌指数明确降低（图1和2)。这个 作用尤其在肝(图3和4)、肾（图5和6)和结肠（图7和8)中被观察到。未检测到物质相关毒性， 因为所有组的动物重量进展都是类似的(未显示）。
[0201] 实施例2
[0202] 概述:在用人结肠癌细胞LS147T接种之后，成年雌性BALB/c裸小鼠以单次i.p.注 射盐水、Voluven? 6 %、Voluven? 1〇 %、1〇 %右旋糖苷40或Adept?治疗以历经实验过程 相较于未治疗对照组测定肿瘤细胞生长和体重。
[0203]物质：
[0204] 盐水（0·9%NaCl)(批号120148091，B.Braun Melsungen AG，Melsungen，Germany) 用作对照2。含有羟乙基淀粉(HES)的测试物品V〇luven? 6%(60g/L聚（0-2-羟乙基）淀粉 (HES 130/0.4)、9g/L NaCl)(批号 14EL3310)和 Vo丨uvenK l〇%(l〇〇g/L聚（0-2-羟乙基）淀 粉（HES130/0.4)、9g/L NaCl)(批号 14FC3308)以备用产品形式从Fresenius Kabi Deutschland GmbH(Bad Homburg,Germany)获得。10%右旋糖苷40(100g/L聚葡萄糖、9g/L NaCI)(批号2881143432)从AlIeMan Pharma GmbH(Rimbach,Germany)获得，并且 Adeptli' (40g/L艾考糊精、5.4g/L氯化钠、4.5g/L乳酸钠、257mg/L氯化钙、61mg/L氯化镁）（批号 11892004)以备用产品形式从Baxter Deutschland GmbH(Unterschlei0heim，Germany)获 得。所有溶液都储存在室温(<25°C)下直至使用。所有溶液都在无菌条件下注射。
[0205] 动物：
[0206] 成年雌性 BALB/c 裸小鼠（品系 CAnN.Cg-Foxnlnu/Crl)(Charles River GmbH, Sulzfeld,Germany)用于研究中。在实验开始时，它们是5-6周龄，并且具有在16与20g之间 的中值体重。
[0207] 所有小鼠都维持在严格控制以及标准化屏障条件下。它们被舍饲-最多四只小鼠/ 笼-在处于以下环境条件下的个别通风的笼中：22+/-3°C室温，30-70%相对湿度，12小时人 工荧光光照/12小时黑暗。它们接受热压处理的食物和垫料(S SnifT，S〇est，Germany)，并且 随意取用热压处理的公用自来水。
[0208] 癌病模型：
[0209] 研究由6个实验组组成，各自含有25只雌性BALB/c裸小鼠。在第0天，通过腹膜内注 射将2xl06个LS174T细胞于300μ1 PBS中施用至所有BALB/c裸小鼠（组1-6)的腹腔中。新鲜 制备的细胞混悬液用于各轮植入，其中组1 -6各自4个动物被植入。对于每组25个动物的植 入，针对25个动物(组1-6)需要用新鲜制备的细胞混悬液进行6轮植入(在末轮中考虑用于 组1的1个额外动物的细胞）。在细胞植入之后10至15分钟内，动物用Vo丨uven x 6 %、 Voluveiiif 10 %、10 %右旋糖苷4〇和Actept?:(组3-6)腹膜内治疗一次。所有溶液都如所供 应，各自以每只小鼠500μ1的体积加以施用。组1的动物保持未治疗，并且组2的动物接受500 μL盐水溶液(参见表3)。
[0210]表3
[0212] 每隔一天(星期一、星期三和星期五)获取动物重量。每日监测动物行为。
[0213]在研究的过程期间，由于伦理原因（腹水、局部麻痹、腹壁肿胀），出自所有研究组 的若干动物提前被处死，并且进行尸检。在第34研究日，由于伦理原因，终止研究，处死所有 剩余动物并进行尸检。在尸检时，称重所有动物，并且通过颈部脱位来杀死。宏观检查动物， 并且通过计算腹膜癌指数(PCI)来对可见肿瘤进行定量。
[0214] 出于这个目的，腹腔的所有肿瘤通过11种不同目标区域加以分类(参见上表2)，并 且使用肿瘤直径，根据病变尺寸评分分类成LS-O至LS-4,列于表2中。接着，累加不同目标区 域内对应各病变尺寸的肿瘤的数目，并且乘以分别对应于LS-O、LS-I、LS-2、LS-3和LS-4的 相应因数〇、1、2、3或4以获得病变尺寸特异性PCI值PCI lsq至PCUS4。最后，累加这5个结果以 得到总体腹膜癌指数(PCI总体)。
[0215] 另外，计算各组的器官特异性PCI值。出于这个目的，计算如上所述的各动物针对 各目标区域的个别PCI值，从而获得器官特异性PCI值PCIr 11至PCIRm。最后，对于各目标区 域，累加每组所有动物的?(：11?1值，并且确定平均值和中值。
[0216]统计评估：
[0217]使用描述性数据分析(平均值伴SEM;中值)来分析动物重量、每组PCI总体值以及 器官特异性PCI值。此外，也显示遍及所有样品的所有单一值和器官特异性（单一值和中 值）。所有数据分析都使用来自 GraphPad Sof tware，Inc ·，San Diego ,USA的GraphPad Prism 5进行。
[0218]结果：
[0219]相较于对照组，羟乙基淀粉、右旋糖苷40和艾考糊精导致腹膜癌指数明确降低（图 9和10)。这个作用尤其在肝（图11和12)和结肠（图13和14)中被观察到。未检测到物质相关 毒性，因为所有组中的动物重量进展都是类似的。
【主权项】
1. 一种包含通过α-糖苷键连接的任选取代的单糖单元的多糖，其中所述多糖是中性不 带电荷的多糖，所述多糖作为治疗活性化合物用于通过向罹患癌症的受试者的体腔施用来 预防转移形成和/或复发。2. 如权利要求1所述的供使用的多糖，其中所述多糖用于手术后施用、手术期内施用 和/或手术前施用。3. 如权利要求1或2所述的供使用的多糖，其中所述多糖包含糖苷键连接的脱水葡萄糖 单元，优选包含α-l，4-糖苷键连接的脱水葡萄糖单元和α-l，6-糖苷键连接的脱水葡萄糖单 元，其中所述脱水葡萄糖单元任选被取代。4. 如权利要求1至3中任一项所述的供使用的多糖，其中所述多糖中至少90%的所述糖 苷键联是α-1，4_糖苷键联和/或α-l，6_糖苷键联。5. 如权利要求1至4中任一项所述的供使用的多糖，其中所述多糖还包含至少一个羟烷 基。6. 如权利要求1至5中任一项所述的供使用的多糖，其中所述多糖是羟烷基淀粉，优选 是轻乙基淀粉。7. 如权利要求1至6中任一项所述的供使用的多糖，其中所述癌症形成实体肿瘤。8. 如权利要求1至7中任一项所述的供使用的多糖，其中所述癌症是卵巢癌、卵巢癌瘤、 胃癌、肺癌、胰腺癌、膀胱癌、肝癌、结肠直肠癌或乳腺癌。9. 如权利要求1至8中任一项所述的供使用的多糖，其中所述多糖包含在药学上可接受 的溶液，优选是水溶液中。10. 如权利要求9所述的供使用的多糖，其中所述多糖在所述药学上可接受的溶液中的 浓度是1%(￥八)至25%(*八），优选是2%(￥八)至15%(￥八），更优选是3%(￥八)至12.5% (w/v)，并且最优选是4% (w/v)至10% (w/v)。11. 如权利要求1或10中任一项所述的供使用的多糖，其中所述受试者的体腔，优选是 腹腔中的转移和/或复发得以预防。12. 如权利要求1至11中任一项所述的供使用的多糖，其中所述多糖具有5至1200kDa、 优选13至800kDa的平均分子量。13. 如权利要求5或6所述的供使用的多糖，其中所述多糖具有在0.1至3的范围内的摩 尔取代度(MS)值。14. 一种用于通过向罹患癌症的受试者的体腔施用来预防转移形成和/或复发的组合 物，优选是药物组合物，其包含治疗活性多糖，所述多糖包含通过α-糖苷键连接的任选取代 的单糖单元。15. 如权利要求14所述的供使用的组合物，其中所述组合物包含多糖作为预防转移形 成和/或复发的唯一成分。16. -种试剂盒，其包括根据权利要求14或15所述的包含根据权利要求1至13中任一项 所述的多糖的组合物以及使其溶解的药学上可接受的物质。17. -种用于预防罹患癌症的受试者中的转移形成和/或复发的方法，所述方法包括向 有需要的受试者施用治疗有效量的包含多糖的组合物，所述多糖包含通过糖苷键连接的 任选取代的单糖单元。18. 如权利要求17所述的方法，其中所述多糖包含糖苷键连接的脱水葡萄糖单元，优选 包含α-l，4_糖苷键连接的脱水葡萄糖单元和α-l，6_糖苷键连接的脱水葡萄糖单元，其中所 述脱水葡萄糖单元任选被取代。19. 如权利要求17所述的方法，其中所述多糖还包含至少一个羟烷基。20. 如权利要求17所述的方法，其中所述多糖是羟烷基淀粉。21. 如权利要求17所述的方法，其中所述多糖是羟乙基淀粉。22. 如权利要求17所述的方法，其中向所述受试者的体腔施用所述多糖。23. 如权利要求17所述的方法，其中向所述受试者的腹腔施用所述多糖。24. 如权利要求17所述的方法，其中所述癌症呈实体肿瘤形式。25. 如权利要求24所述的方法，其中所述方法还包括在施用所述组合物之后移除所述 实体肿瘤的至少一部分的步骤。26. 如权利要求24所述的方法，其中所述实体肿瘤或其一部分在施用所述组合物之前 从所述受试者手术移除。27. 如权利要求17所述的方法，其中所述组合物在手术后、在手术期内、在手术前或以 其组合方式施用。28. 如权利要求17所述的方法，其中所述组合物以药学上可接受的溶液形式施用。28. 如权利要求28所述的方法，其中所述药学上可接受的溶液具有l%(w/v)至25% (w/ v)的多糖浓度。29. 如权利要求28所述的方法，其中所述药学上可接受的溶液具有2% (w/v)至15% (w/ v)的多糖浓度。30. 如权利要求28所述的方法，其中所述药学上可接受的溶液具有3% (w/v)至12.5% (w/v)的多糖浓度。31. 如权利要求28所述的方法，其中所述药学上可接受的溶液具有4% (w/v)至10% (w/ v)的多糖浓度。
【专利摘要】本发明涉及一种包含通过α-糖苷键连接的任选取代的单糖单元，用于通过向罹患癌症的受试者的体腔施用来预防转移形成和/或复发的多糖。本发明还涉及一种用于预防罹患癌症的受试者中的转移形成的方法，其包括向所述受试者的体腔施用所述组合物，以及由此预防所述受试者中的转移形成。本发明也涉及一种组合物以及一种包括多糖和使其溶解的药学上可接受的物质的试剂盒和一种包括多糖和用于施用其的部件的装置。
【IPC分类】A61K31/718, A61P35/04, A61K9/08, A61K31/721, A61K31/716
【公开号】CN105555280
【申请号】CN201480043108
【发明人】B·宗德曼, L·瓦尔兹, S·巴斯纳, F·诺肯, C·梅尔
【申请人】德国费森尤斯卡比公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2014年7月25日
【公告号】CA2918180A1, EP2832360A1, EP3027196A1, US20160175340, WO2015014730A1, WO2015014730A4