具有抗皱作用的缓释脂质体护肤液及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于化妆品及其制备技术领域，具体涉及一种具有抗皱作用的缓释脂质体 护肤液及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 皮肤老化是由自然因素或非自然因素造成的皮肤衰老现象。皱纹是皮肤老化的标 志之一。通常长期光照、精神应激、药物刺激、氧化损伤、皮肤水分流失等均可导致皱纹产生 或增多。
[0003] 褪黑素和维生素 C是目前常用的抗皱活性物质。中国专利文献CN113102KX申请号 00125700.5，申请日2000年10月17日），公开了一种抗皱化妆品，其活性成分之一即为褪黑 素。
[0004] 目前国内外常用的抗皱化妆品多为普通乳膏或乳液，由于皮肤屏障作用的存在尤 其是角质层的阻碍，大部分外用化妆品的活性成分尤其是非脂溶性活性成分，难以透过皮 肤屏障，导致其吸收效果较差，且极易因水洗等导致成分流失，实际到达皮肤的活性成分较 少，造成活性成分的浪费，需要较大的用量才能达到预期效果。
[0005] 脂质体制剂最初用于药物制剂领域，作为注射给药使用，其主要作用是利用脂质 体的粒径不同，实现药物的靶向给药，使药物到达目标病灶，提高药物的疗效，降低不良反 应。由于脂质体的外层是由具备双分子层的成膜物质组成，与哺乳动物皮肤屏障结构相似。 近年来国内外对脂质体的外用制剂尤其是脂质体护肤品进行了广泛研究。用于护肤品的脂 质体主要包括小单室脂质体(粒径20~200nm，在液体状态下稳定性高）、大单室脂质体(粒径 200~lOOOnm，稳定性低）、多室脂质体(1~5μηι，可包封亲水和亲脂性成分、多囊脂质体(粒径5 ~50μπι，包封体积大，药物渗漏少），详见王海平、王咏梅、杜喜平论文，题目为护肤化妆品配 方中的月旨质体种类选择(《中国化妆品：行业》2010(14) :75-78)。目前常用的脂质体材料 为卵磷脂、神经酰胺等。其中卵磷脂脂质体稳定性差，神经酰胺是一种制备脂质体的新材 料，性质稳定，且有独特的护肤作用，但价格昂贵，实际应用较少(许琛琦，秦德安.S0D-GC 脂质体的制备及包封率的测定.日用化学工业.2001，31 (1): 57-58.)。
[0006]目前已发现的脂质体护肤品的优点包括： 1.提高活性成分的稳定性，脂质体包裹活性成分后，可将活性成分与外界不利因素如 pH隔离，提高活性成分的稳定性，如维生素 Α。例如维生素 Α结构中含有较多的不饱和双键， 对光与热稳定性较差，接触空气后易被氧化，维生素 A神经酰胺脂质体比较稳定。超氧化物 歧化酶、维生素 C和维生素 E很不稳定，用脂质体包封后，其稳定性大大增强。
[0007] 2.提高活性成分进入皮肤屏障的效率：由于脂质体与生物膜结构相似，功能性成 分在脂质体的携带下经皮透过量增加，脂质体对皮肤的穿透性与传统乳膏剂相比，增加了 30%;维A酸脂质体经皮肤局部给药后生物利用度高于其凝胶剂。
[0008] 3.实现活性成分的缓释：脂质体在体内可缓慢释放功能性成分，以实现缓释目 的。如中国专利文献CN1207034A(申请号97191626.8,申请日1997年1月17日）公开了一种含 防晒自黑剂的磷脂脂质体，缓释防晒效果可达14天。
[0009] 但脂质体作为一种活性成分载体，其制剂制备也存在诸多技术难点。迄今为止，月旨 质体制剂的研发仍然是药物制剂和化妆品制剂领域的难题，存在诸多技术难题亟待克服： 1.影响脂质体包封率的因素较多，提高活性成分包封率的技术手段有限： 活性成分的油水分配系数是影响脂质体包封率的因素之一，通常只有LogP低于0.3或 高于4.5的活性成分能够较好的包封，介于二者之间的成分需要化学修饰，改变油水分配系 数方可提高包封率;分子量大的活性物质更容易获得较高的包封率，小分子活性成分包封 后易于渗漏，效果不理想，而分子量过大的药物包封后难易通过脂质体膜释放;脂质体类型 也是影响包封率的因素之一，一般大单室脂质体、多室脂质体包封率高，小单室脂质体包封 率低，而粒径大的脂质体虽然能获得较高的包封率，其透过皮肤屏障的能力以及耐洗能力 也会相应降低。在包封率问题的解决上，目前仅能根据有限的参数、理论依据或经验进行调 节，如制备温度等。
[0010] 包封率是脂质体研究的主要内容，也是脂质体制备的关键因素。影响脂质体包封 率的因素较多，又因活性物质理化性质的不同而不同。大部分活性成分的脂质体制备仍然 难以实现(于波涛，张志荣，刘文胜.提高脂质体包封率的方法及其研究进展.中国医药 工业杂志· 2002，33( 11) : 564-568 ·)。
[0011] 2.脂质体透皮吸收缓释效果不理想： 脂质体借助其双分子层特性可以接到活性成分透过皮肤屏障，但对小分子物质的缓释 效果并不理想，目前已知的提高小分子物质脂质体制剂缓释效果的方法是在包封之前对活 性物质溶液的pH值进行调节。Sankavam和Kim于1993年11月16日提交美国专利申请文件（申 请号US08/153657)公开的规律如下：无机酸如盐酸、硝酸、高氯酸调节活性物质溶液的pH 值，包封后脂质体缓释效果最优;醋酸、三氟乙酸和三氯乙酸较快;而二元酸如磷酸、硫酸释 放速度最快。但采用酸对活性物质溶液的pH值进行调节，对于遇酸不稳定的物质并不适用， 且对工艺过程中的金属器具腐蚀作用较强，因此设备损耗严重。
[0012] EP0126580BU 申请人VESTAR RESEARCH INC，公开日 1984年 11 月28)公开一种将脂 质体通过人为设置脂质体内外溶液的渗透压差以维持脂质体内活性物质缓释效果的方法， 但该方法实际应用价值并不大。因为用药部位的渗透压属于恒定值，因此脂质体内外液体 的渗透压难以维持动态压差，当二者等渗时，活性物质将无法从脂质体释放，因此极易造成 活性物质释放不完全，甚至释放过少。中国专利文献CN1096850C(申请号95196186.1，申请 日1995年9月13日）对此进行改进，公开了一种通过渗透压和多泡脂质体改善活性成分缓释 性能的技术。但其制备需要采用液态C0 2或液态NH3等，制备条件苛刻。
[0013] 目前已公开的抗皱脂质体护肤品种，已有褪黑素脂质体和维生素脂质体的制备技 术公开，如申请号为93106692.1的中国专利申请文献(公开日1994年12月14日）公开一种含 维生素 E、C的卵磷脂脂质体，仅解决了活性成分的稳定性问题，未能解决活性成分的缓释和 渗漏问题。赵少杰等(赵少杰，叶盛英，欧春凤，郑森鸿.超临界C0 2法制备褪黑素脂质体 的工艺优化.农业工程学报.2014, 30(3):251-258.)公开一种褪黑素脂质体的制备方法， 其方法为超临界C02法，大多数脂质体粒径可以达到100 nm以下，但制备工艺复杂，设备 昂贵，虽提高了包封率，降低了脂质体平均粒径，但仍未解决体内缓释问题。
[0014] 细胞膜穿透肽也称为穿膜肽，是一类具有生物膜穿透能力的短肽，目前已发现的 穿膜肽包括HIV-1 TAT蛋白部分多肽片段、penetratin、VP-22等(吴强，徐翔，梁华平，张 明.穿膜肽的结构特点和穿膜机制.生命的科学.2005,2(4):304.)。
[0015] 由于穿膜肽具有良好的穿膜性，目前已被用于对药物分子及药物辅料的共价修 饰，以实现药物分子或药物制剂的靶向给药或透皮给药。典型的，在脂质体制剂领域，穿膜 肽已被用于共价修饰脂质体膜材，通过化学共价键与膜材如胆固醇结合，以提高脂质体的 穿膜能力。如蔺伟等(蔺伟，李庭，杜金瑞.RGD与细胞穿膜肽共修饰miRNA脂质体的构建及 抗肿瘤研究.中华肿瘤防治杂志.2015，22(3) :179-188.)采用R⑶和TAT两种穿膜肽共同 对脂质体进行共价修饰，制备了 miRNA脂质体，提高了其肿瘤靶向性。张莉等(张莉，唐洁， 尹愈佳，覃瑶，刘亚圆，何勤.基于胆固醇上不同连接方式修饰的穿膜肽脂质体的对比研 究.2012, 27( 5) :490~493.)分别研究了TAT通过聚乙二醇以醚键和酯键两种方式与胆 固醇相连后，对脂质体的影响，结果表明，醚键修饰的胆固醇衍生物材料所制备的连接TAT 的脂质体相较于酯键连接者，有较好的体内外摄取效果。但上述穿膜肽仅通过共价连接于 脂质体材料方可实现靶向性和细胞膜穿透性。而穿膜肽本身不存在直接与脂质体成共价键 的基团，需要聚乙二醇(PEG)或DPSE-PEG等作为中间连接臂，才能实现与脂质体材料的共价 结合。
【发明内容】
[0016] 针对上述现有技术，本发明的目的之一是提供一种具有抗皱作用的缓释脂质体护 肤液。
[0017] 为实现上述的目的，本发明采用的技术方案为： 一种具有抗皱作用的缓释脂质体护肤液，由pH调节剂和下列重量比的成分制成:褪黑 素100~140重量份、维生素 C 300~460重量份、大豆卵磷脂1500~2400重量份、胆固醇300~600 重量份、吐温-80 5~15重量份、无水乙醇100~200重量份、Dowicil 200 5~10重量份、HIV-1-TAT蛋白47-57多肽片段5~15重量份、去离子水3000~8000重量份;所述脂质体护肤液中脂质 体的平均粒径为20~150nm;所述具有抗皱作用的缓释脂质体护肤液通过如下步骤制得:取 处方量褪黑素、吐温-80和处方量4/25~8/25的去离子水，制成配液A;取处方量维生素 C和处 方量4/25~8/25的去离子水，制成配液B;取处方量大豆卵磷脂、胆固醇、无水乙醇、HIV-1-TAT蛋白47-57多肽片段和处方量6/25~9/2