杜仲皮或杜仲叶中萜类和木脂素类物质的制备方法及其在制备治疗老年性痴呆药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及杜仲皮或杜仲叶中萜类和木脂素类物质的制备方法及其在制备治疗 老年性痴呆以及阿尔茨海默病药物或保健食品中的应用，属于中医药制备技术领域。
【背景技术】
[0002] 杜仲皮为杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥树皮，其味甘、微辛， 性温，归肝、肾经，具补肝肾、强筋骨、降血压、安胎等诸多功效。杜仲皮现代研究证明杜仲具 有双向调节血压、增强免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗衰老、降低血糖、调节血脂等多方 面的功效。杜仲叶为杜仲科杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥叶，于2005年作为一种新 药材收入中国药典，其性温，味微辛，具补肝肾、强筋骨、降血压之功效。杜仲叶现代药理研 究具有抗衰老、抗氧化、降血压、降血脂、增强免疫力等作用。发明人最新研究证实杜仲皮或 杜仲叶总提取物治疗H/MAD具有抗Αβ损伤的药理活性。
[0003] 综合考虑衰老、血管危险因子(高血压、动脉粥样硬化和短暂性脑缺血发作等）导 致的脑低灌注和Αβ在AD成因中作用，杜仲皮或杜仲叶对防治上述三种主要因素在H/MAD的 发生、发展和对症治疗有其独特的优势，发明人最新研究证实杜仲皮或杜仲叶60%乙醇总 体物能使H/MAD模型大鼠学习记忆有明显的改善作用，能使血清中T-A0C的活力恢复，能明 显提高CAT、SOD、GSH-Px的活力水平，增强机体清除自由基的能力；能降低TChE的含量，防止 神经递质的减少，同时又能降低MDA的含量以减少机体受自由基损伤的程度，显著提高H/ MAD大鼠的抗氧化能力。发明人体外细胞培养实验中，利用Αβ25-35致PC12细胞损伤模型，采 用ΜΤΤ法检测了各实验组细胞的活力，从而确证杜仲皮或杜仲叶治疗老年性痴呆以及阿尔 茨海默病(AD)的有效部位和活性成分，为杜仲皮或杜仲叶治疗老年性痴呆以及阿尔茨海默 病(AD)的新药研究奠定理论基础。上述研究还没有报道，我们通过系统的体内外实验研究， 首先发现杜仲皮或杜仲叶对由衰老、心脑血管疾病（心脏病、高血压、动脉粥样硬化和短暂 性脑缺血发作等）导致脑低灌注状态、淀粉样蛋白Αβ沉积病因形成的老年性痴呆以及阿尔 茨海默病疾病具有良好的治疗作用。为寻找在临床研究领域杜仲叶可以部分替代杜仲皮的 应用提供理论依据，具有良好的学术与临床应用价值。
【发明内容】
[0004] 杜仲皮或杜仲叶中萜类和木脂素类物质的制备方法及其在制备治疗老年性痴呆 药物中的应用
[0005] 本发明采用了下述技术方案。
[0006] 杜仲皮或杜仲叶萜类物质中杜仲醇、1-脱氧杜仲醇、1-脱氧-Λ4,5-杜仲醇、2,3-二羟基-Λ4,5-杜仲醇、乙酰基-杜仲醇、杜仲醇苷Α、杜仲叶苷Α、杜仲叶苷Β、杜仲叶苷C、 杜仲叶苷D和木脂素类物质中（+ )松脂素-4,4'-〇-i3_D-双葡萄吡喃糖苷、（+ )8_羟基一松脂 素-4'-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基一松脂素-4-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-8- Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-4-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、（ + )8，9 '-二羟基-松脂素-4 '-0-β-D-葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基-松脂素-4,4'-(H3-D-双葡萄吡喃糖苷、丁香脂素-4-(H3-D-吡喃葡萄糖苷、中脂素-4-〇-i3-D-吡喃葡糖糖苷、橄榄树脂素-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖苷、橄榄树 脂素-4-〇-i3_D-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4，4 '-Ο-β-D-双葡萄吡喃糖苷、8-羟基-落叶松 脂醇-4'-0-?Η)-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4-〇-i3_D-葡萄吡喃糖苷、橄榄素二糖苷、耳草 素二糖苷、丁香丙三醇-β_ 丁香脂素醚二糖苷的制备方法，其特征在于步骤如下：
[0007] (1).将杜仲皮或杜仲叶药材粉碎成粗粉，用0-100 %乙醇浸泡，加入4-12倍量溶剂 加热回流提取若干次，过滤，合并滤液；
[0008] (2).上述滤液减压浓缩至0.5-1.8g生药材/ml，冷藏过夜，析胶，过滤，滤液再用有 机溶剂萃取或滤液上大孔吸附树脂进行梯度洗脱，回收有机溶剂，得浸膏上硅胶柱；
[0009] (3).上硅胶柱后依次用三氯甲烷：甲醇或二氯甲烷：甲醇或三氯甲烷：甲醇：水或 二氯甲烷：甲醇:水梯度洗脱，以上述杜仲皮或杜仲叶萜类物质中杜仲醇、1-脱氧杜仲醇、1-脱氧-Λ4，5-杜仲醇、2，3-二羟基-Λ4，5-杜仲醇、V -乙酰基-杜仲醇、杜仲醇苷A、杜仲叶苷 A、杜仲叶苷B、杜仲叶苷C、杜仲叶苷D和木脂素类物质中（+ )松脂素-4,4'-〇-i3-D-双葡萄吡 喃糖苷、（+) 8-羟基一松脂素-4 '-Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、（+) 8-羟基一松脂素-4-(H3-D-葡萄 吡喃糖苷、（+ )松脂素-8-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-4_(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )8， 9 ' -二羟基-松脂素-4 '-Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基-松脂素-4，4 '-Ο-β-D-双葡萄吡喃 糖苷、丁香脂素-4-0-?Η)_吡喃葡萄糖苷、中脂素-4-0-?Η)_吡喃葡糖糖苷、橄榄树脂素-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖苷、橄榄树脂素-4-0-?Η)-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4，4 '-Ο-β-D-双葡萄吡 喃糖苷、8-羟基-落叶松脂醇-4 '-Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4-〇-i3-D-葡萄吡喃糖 苷、橄榄素二糖苷、耳草素二糖苷、丁香丙三醇-β_ 丁香脂素醚二糖苷作为对照品TLC或HPLC 检测，合并相应流份；
[0010] (4).将上述杜仲皮或杜仲叶砲类物质中杜仲醇、1-脱氧杜仲醇、1-脱氧-Λ4,5-杜 仲醇、2,3-二羟基-Λ4,5-杜仲醇、V-乙酰基-杜仲醇、杜仲醇苷Α、杜仲叶苷Α、杜仲叶苷Β、 杜仲叶苷C、杜仲叶苷D和木脂素类物质中（+ )松脂素-4,4'-0-?Η)_双葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基一松脂素-4'_(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )8_羟基一松脂素-4-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（+ ) 松脂素-8-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-4-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、（+ )8，9 ' -二羟基-松 脂素-4 ' -Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )8-羟基-松脂素-4，4 ' -Ο-β-D-双葡萄吡喃糖苷、丁香脂 素-4-〇-i3-D-吡喃葡萄糖苷、中脂素-4-(H3-D-吡喃葡糖糖苷、橄榄树脂素-4 '-Ο-β-D-葡萄 糖苷、橄榄树脂素-4_(H3-D-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4,4'-〇-i3-D-双葡萄吡喃糖苷、8-羟基-落叶松脂醇-4'-〇-i3_D-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4-〇-i3_D-葡萄吡喃糖苷、橄榄素 二糖苷、耳草素二糖苷、丁香丙三醇-β-丁香脂素醚二糖苷的相应流份减压浓缩蒸干，用适 量乙醇溶解，过滤，减压回收乙醇至含醇量为10-60%之间，析胶，过滤，滤液中加入适量的 聚酰胺，搅拌〇 . 5-2小时，静置4-24小时，过滤，滤液中加入适量活性炭，搅拌0.5-2小时，静 置4-24小时，过滤，滤液用喷雾干燥或冷冻干燥法进行干燥，收集喷雾干燥粉或冻干粉，用 10-100%乙醇结晶并重结晶，即得。或者将相应流份减压浓缩蒸干或结晶产物，经中压制备 色谱或高效液相制备色谱制备纯化，流动相为甲醇水5-100 %或乙腈水5-100 %的等度或梯 度洗脱，回收洗脱液，即得。
[0011] 更具体地，步骤(1)中，加入4-12倍量溶剂加热回流提取2-4次，每次1-3小时。
[0012]更具体地，步骤⑵中，于〇-4°C冷藏过夜。
[0013] 更具体地，步骤(2)中，减压浓缩温度为45_80°C。
[0014] 更具体地，步骤（2)中，滤液经大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、25%乙醇水洗 脱、40 %乙醇水洗脱、60 %乙醇水洗脱、95 %乙醇水洗脱，主要收集水洗脱部位、25 %乙醇水 洗脱部位、40 %乙醇水洗脱部位，回收洗脱液得浸膏上硅胶柱。其中，水洗脱部位主要为单 萜杜仲醇类化合物中杜仲醇、1-脱氧杜仲醇、1-脱氧-Λ4，5-杜仲醇、2，3-二羟基-Λ4，5-杜 仲醇、乙酰基-杜仲醇、杜仲醇苷A，25%乙醇水洗脱部位主要为木脂素类物质中（+ )松脂 素-4,4'-0-?Η)_双葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基一松脂素-4'-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟 基一松脂素-4-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、(+ )松脂素-8-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、(+ )松脂素-4-0-β-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )8,9'_二羟基-松脂素-4'-〇-i3-D-葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基-松脂 素-4,4'-0-?Η)-双葡萄吡喃糖苷、丁香脂素-4-0-?Η)_吡喃葡萄糖苷、中脂素-4-0-?Η)_吡 喃葡糖糖苷、橄榄树脂素-4'-0-?Η)-葡萄糖苷、橄榄树脂素-4_(H3-D-葡萄吡喃糖苷、落叶 松脂醇-4，4 ' -Ο-β-D-双葡萄吡喃糖苷、8-羟基-落叶松脂醇-4 ' -Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、落叶 松脂醇-4-〇-i3_D-葡萄吡喃糖苷、橄榄素二糖苷、耳草素二糖苷、丁香丙三醇-β-丁香脂素醚 二糖苷，40 %乙醇水洗脱部位主要为倍半萜大柱烷类化合物中杜仲叶苷A、杜仲叶苷Β、杜仲 叶苷C、杜仲叶苷D。
[0015] 前述方法制备的杜仲皮或杜仲叶中萜类物质中杜仲醇、1-脱氧杜仲醇、1-脱氧-Λ 4，5 -杜仲醇、2，3 -二羟基-Λ 4，5 -杜仲醇、V -乙酰基-杜仲醇、杜仲醇苷A、杜仲叶苷A、杜仲 叶苷B、杜仲叶苷C、杜仲叶苷D和木脂素类物质中(+ )松脂素-4，4 ' -Ο-β-D-双葡萄吡喃糖苷、 ( + )8-羟基一松脂素-4'-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基一松脂素-4-(H3-D-葡萄吡喃糖 苷、（+ )松脂素-8-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-4-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )8,9'_二羟 基-松脂素-4 ' -Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、（+ ) 8-羟基-松脂素-4，4 ' -Ο-β-D-双葡萄吡喃糖苷、丁 香脂素-4_(H3-D-吡喃葡萄糖苷、中脂素-4_(H3-D-吡喃葡糖糖苷、橄榄树脂素-4'_(H3-D-葡萄糖苷、橄榄树脂素-4-〇-i3_D-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4，4 ' -Ο-β-D-双葡萄吡喃糖 苷、8-羟基-落叶松脂醇-4 '-Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4-〇-i3-D-葡萄吡喃糖苷、橄 榄素二糖苷、耳草素二糖苷、丁香丙三醇-β_丁香脂素醚二糖苷的物质，可用于制备治疗老 年性痴呆以及阿尔茨海默病的药物，所述药物包括口服液、胶囊、片剂、泡腾片、颗粒剂、注 射剂或各种已知剂型，所述药物还包括各种单方和复方制剂。
[0016] 所涉及的老年性痴呆以及阿尔茨海默病是由衰老、心脑血管疾病（心脏病、高血 压、动脉粥样硬化和短暂性脑缺血发作等)导致脑低灌注状态、淀粉样蛋白Αβ沉积病因形成 的老年性痴呆以及阿尔茨海默病疾病中的任意一种。
[0017] 本发明的优点是:提供了杜仲皮或杜仲叶萜类物质中杜仲醇、1-脱氧杜仲醇、1-脱 氧-Λ4，5-杜仲醇、2，3-二羟基-Λ4，5-杜仲醇、V -乙酰基-杜仲醇、杜仲醇苷Α、杜仲叶苷Α、 杜仲叶苷Β、杜仲叶苷C、杜仲叶苷D和木脂素类物质中（+ )松脂素-4,4'-〇-i3-D-双葡萄吡喃 糖苷、（+ )8_羟基一松脂素-4'-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基一松脂素-4-(H3-D-葡萄吡 喃糖苷、（+ )松脂素-8-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-4-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、（+ )8,9'_ 二羟基-松脂素-4'-〇-i3-D-葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基-松脂素-4,4'-(H3-D-双葡萄吡喃糖 苷、丁香脂素-4_(H3-D-吡喃葡萄糖苷、中脂素-4-0-?Η)_吡喃葡糖糖苷、橄榄树脂素-4 ' -0-β-D-葡萄糖苷、橄榄树脂素-4-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4，4 '-Ο-β-D-双葡萄吡喃 糖苷、8-羟基-落叶松脂醇-4 '-Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4-〇-i3-D-葡萄吡喃糖苷、 橄榄素二糖苷、耳草素二糖苷、丁香丙三醇-β_ 丁香脂素醚二糖苷的提取与制备方法，所得 物质为杜仲皮或杜仲叶萜类物质中杜仲醇、1-脱氧杜仲醇、1-脱氧-Λ4,5-杜仲醇、2，3_二 羟基-Λ4,5-杜仲醇、乙酰基-杜仲醇、杜仲醇苷Α、杜仲叶苷Α、杜仲叶苷Β、杜仲叶苷C、杜 仲叶苷D和木脂素类物质中（+ )松脂素-4,4'-〇-i3-D-双葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基一松脂素-4'-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基一松脂素-4-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-8-0-β-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-4-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、(+ )8，9 ' -二羟基-松脂素-4 '-Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )8_羟基-松脂素-4，4 ' -Ο-β-D-双葡萄吡喃糖苷、丁香脂素-4-0-?Η)_吡喃 匍萄糖苷、中脂素_4_〇m比喃匍糖糖苷、撤榄树脂素-4'-〇-β-?-匍萄糖苷、撤榄树脂素- 4-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4,4'-(H3-D-双葡萄吡喃糖苷、8-羟基-落叶松脂醇-4 '-Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4-〇-i3-D-葡萄吡喃糖苷、橄榄素二糖苷、耳草素二糖 苷、丁香丙三醇-β-丁香脂素醚二糖苷中的一种或多种，所得物质可用于制备治疗老年性痴 呆以及阿尔茨海默病或制备各类应用药物的口服液、胶囊、片剂、泡腾片、颗粒剂、注射剂或 各种已知剂型。
[0018] 杜仲皮或杜仲叶萜类物质中杜仲醇、1-脱氧杜仲醇、1-脱氧-Λ4，5-杜仲醇、2，3-二羟基-Λ4,5-杜仲醇、乙酰基-杜仲醇、杜仲醇苷Α、杜仲叶苷Α、杜仲叶苷Β、杜仲叶苷C、 杜仲叶苷D和木脂素类物质中（+ )松脂素-4,4'-〇-i3-D-双葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基一松脂 素-4'-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基一松脂素-4-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-8-Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-4-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、（+ )8，9 '-二羟基-松脂素-4 '-0-β-D-葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基-松脂素-4,4'-(H3-D-双葡萄吡喃糖苷、丁香脂素-4-(H3-D-吡喃葡萄糖苷、中脂素-4-〇-i3-D-吡喃葡糖糖苷、橄榄树脂素-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖苷、橄榄树 脂素-4-〇-i3_D-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4，4 '-Ο-β-D-双葡萄吡喃糖苷、8-羟基-落叶松 脂醇-4'-0-?Η)-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4-〇-i3_D-葡萄吡喃糖苷、橄榄素二糖苷、耳草 素二糖苷、丁香丙三醇-β_ 丁香脂素醚二糖苷在体内外对由衰老、心脑血管疾病(心脏病、高 血压、动脉粥样硬化和短暂性脑缺血发作等)导致脑低灌注状态、淀粉样蛋白Αβ沉积病因形 成的老年性痴呆以及阿尔茨海默病具有良好的治疗作用和较强的生物活性。
[0019] 杜仲皮或杜仲叶萜类物质中杜仲醇、1-脱氧杜仲醇、1-脱氧-Λ4,5-杜仲醇、2,3-二羟基-Λ4,5-杜仲醇、乙酰基-杜仲醇、杜仲醇苷Α、杜仲叶苷Α、杜仲叶苷Β、杜仲叶苷C、 杜仲叶苷D和木脂素类物质中（+ )松脂素-4,4'-〇-i3-D-双葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基一松脂 素-4'-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基一松脂素-4-(H3-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-8-Ο-β-D-葡萄吡喃糖苷、（+ )松脂素-4-0-?Η)_葡萄吡喃糖苷、（+ )8，9 '-二羟基-松脂素-4 '-0-β-D-葡萄吡喃糖苷、（ + )8-羟基-松脂素-4,4'-(H3-D-双葡萄吡喃糖苷、丁香脂素-4-(H3-D-吡喃葡萄糖苷、中脂素-4-〇-i3-D-吡喃葡糖糖苷、橄榄树脂素-4 ' -Ο-β-D-葡萄糖苷、橄榄树 脂素-4-〇-i3_D-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4，4 '-Ο-β-D-双葡萄吡喃糖苷、8-羟基-落叶松 脂醇-4'-0-?Η)-葡萄吡喃糖苷、落叶松脂醇-4-〇-i3_D-葡萄吡喃糖苷、橄榄素二糖苷、耳草 素二糖苷、丁香丙三醇-β_ 丁香脂素醚二糖苷在治疗老年性痴呆以及阿尔茨海默病时，主要 针对病因病机的对症治疗，达到