两亲性聚合物载药纳米胶束
[0035]将5mg两亲性聚合物壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸加入到5ml去离子水中，磁力搅拌至完全溶解且混合均匀，把所得聚合物溶液先经过孔径为30-50μπι的中速滤纸，然后再经过0.8μηι的滤膜，在4000r/min离心5min，取上清液过0.45μηι针式过滤器，弃去前两滴，得到的两亲性聚合物溶液。将称取的4mg雷特格韦溶解在对应的溶剂(乙腈或甲醇)中，磁力搅拌使药物溶解均匀。两亲性聚合物溶液在搅拌的情况下，把已溶解的药物溶液逐滴的加入到两亲性聚合物溶液中，将搅拌好的以上两种混合溶液使用旋转蒸发减压蒸出溶剂乙腈或甲醇，开始出现浑浊时停止，把所剩溶液在探头式超声仪下超声1min(功率150W，工作5s，间歇3s)。所得溶液在3000r/min离心5min，取上清液过0.45μπι针式过滤膜，即得载药的两亲性聚合物胶束。
[0036]本实施例提供的采用粒度仪测定壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸改性壳聚糖聚合物在空白胶束和载药后胶束的粒径如图1所示；空白胶束的平均粒径为180nm，载药胶束平均粒径为200nm，在载完药之后粒径略大于空白胶束。
[0037]本实施例提供的采用粒度仪测定的壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸改性壳聚糖聚合物载药后胶束的粒径分布如图2所示;胶束粒子粒径分布范围较窄，均在100-600nm之间，分布较为均匀。
[0038]本实施例提供的采用粒度仪测定壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸改性壳聚糖聚合物在空白胶束和载药后胶束的电位如图3所示;空白胶束的电位为55mv，载药胶束粒径为56mv，在载完药之后电位值略大于空白胶束。
[0039]本实施例提供的装载雷特格韦的壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸改性壳聚糖聚合物在水溶液中自组装形成胶束的电位分布图如图4所示;载完药之后电位值为56mv。
[0040]本实施例提供的利用粒径仪测定壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸聚合物载雷特格韦胶束在不同pH介质中的稳定性实验的结果图如图5所示；纳米粒子在pH为1.2、6.8、7.4的模拟体液中和在pH为7.4FBS中均有很好的稳定性，与中性的溶液(空白对照、pH 7.0)中的胶束粒子的粒径比较，其他介质溶液中的胶束粒子均在开始半个小时内粒径不同程度的变大，但是在之后的10个小时的检测中粒径大小一直保持很稳定，说明纳米胶束在人体内的各种体液中具有一定的稳定性。
[0041]本实施例提供的壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸聚合物在水溶液中自组装形成胶束的透射电镜图如图6所示;壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸聚合物在水溶液中自组装形成的胶束呈均匀分散的呈现较规整的球状颗粒;干燥后，透射电镜粒径约为30nm，胶束粒子分布范围较窄。
[0042]本实施例提供的壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸聚合物载雷特格韦胶束在不同缓冲液中的体外释放曲线如图7所示；用动态透析法测定雷特格韦溶液(雷特格韦-Sol)，壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸聚合物载药胶束的体外释放行为。测定方法:精密量取2mL的雷特格韦溶液或壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸聚合物载药胶束于透析袋中，两端扎紧，投入30!1^含2%吐温-60到？83(?!1=1.2、6.8、7.4)溶液中，于37±0.5°(:，10(^/1^11振摇，分别于4、12、24、36、4811后取样21^，同时补充相同温度相同体积的新鲜释放介质(缓冲液)。样品经0.22um微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液2mL.用HPLC法测定雷特格韦含量，并计算累积释放百分数。
[0043]图7是雷特格韦溶液剂及壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸聚合物载药胶束的体外释放情况。雷特格韦溶液剂的释放速率较快，在5h内基本全部释放。相比于雷特格韦溶液剂，壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸改性壳聚糖载药胶束的体外释放则相对缓慢，48h内壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸改性壳聚糖胶束释放了82.16%，表明壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸改性壳聚糖系列载药胶束具有明显的缓释作用体外释放行为是考察载药纳米粒子是否具有缓释或者控释效果的一个重要指标，是评价纳米粒子性能的重要依据。
[0044]聚合物胶束的释放行为与胶束中药物的载入形式有重要关系。当药物以共价键形式载入时，药物的释放行为主要取决于水分子向胶束内核的渗入、药物与胶束载体材料之间化学键的断裂及药物从胶束内核向外的扩散。当药物以物理包埋形式载入时，药物的释放行为主要取决于粒子表面药物在介质中的溶解，水分子穿过胶束外壳进入内核，载体材料的溶烛或降解，药物向外水相的扩散。聚合物胶束以物理包埋方式进行载药，均具有较好的缓释效果。其中，胶束的释放最为缓慢，这是因为该载药胶束的粒径最小，胶束内核的结构最为致密，不利于外水相中水分子向胶束内核的扩散及胶束内核中药物向外水相的扩散，并且载体材料本身在体外的降解速率也比较慢，因此形成了较为缓慢的释放行为。
[0045]实施例2
[0046]将5mg两亲性聚合物壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸加入到5ml去离子水水中，磁力搅拌至完全溶解且混合均匀，把所得聚合物溶液先经过孔径为30-50μπι的中速滤纸，然后再经过0.8μπι的滤膜，在4000r/min离心5min，取上清液过0.45μπι针式过滤器，弃去前两滴，得到的两亲性聚合物溶液。将已称取的5mg喜树碱溶解在对应溶剂中，磁力搅拌使喜树碱溶解均匀。在聚合物溶液搅拌的情况下，把已溶解的喜树碱溶液逐滴的加入到两亲性聚合物溶液中，将搅拌好的以上两种混合溶液使用旋转蒸发器减压蒸出溶剂，开始出现浑浊时停止，把所剩溶液在探头式超声仪下超声1min(功率150W，工作5s，间歇3s)。所得溶液在3000r/min离心5min，取上清液过0.45μηι针式过滤膜，即得载药的两亲性载喜树碱聚合物胶束。
[0047]测得具有同时实力I相似的效果。
【主权项】
1.一种两亲性壳聚糖衍生物载药纳米胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将两亲性聚合物壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸加入到去离子水中，磁力搅拌至形成半透明的溶液且混合均匀，把所得聚合物溶液先经过孔径为30-50μπι的中速滤纸，然后再经过0.8μπι的滤膜，进行3000-5000r/min的离心，然后取上清液过0.45ym针式过滤器，弃去前两滴，得到的两亲性聚合物溶液； (2)将称取的疏水性药物溶解在可溶性溶剂中，搅拌使药物溶解均匀；在搅拌的情况下，把已溶解的药物溶液逐滴的加入到两亲性聚合物溶液中，搅拌均匀； (3)将搅拌好的以上两种混合溶液使用旋转蒸发器减压蒸出步骤(2)的溶剂，开始出现浑浊时停止，把所剩余溶液在探头式超声仪下进行超声，所得溶液在3000-5000r/min条件下离心，取上清液过0.45μπι针式过滤膜，即得载药的两亲性聚合物胶束。2.按照权利要求1所述的一种两亲性壳聚糖衍生物载药纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤⑶超声条件:超声lOmin，功率150W，工作5s，间歇3s。3.按照权利要求1所述的一种两亲性壳聚糖衍生物载药纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤(I)聚合物溶液的配制，优选每5mg壳聚糖-维生素E琥珀酸酯-N-乙酰-L-半胱氨酸对应溶于5mL去离子水中。4.按照权利要求1所述的一种两亲性壳聚糖衍生物载药纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤(2)中把已溶解的药物溶液逐滴的加入到两亲性聚合物溶液中。5.按照权利要求1所述的一种两亲性壳聚糖衍生物载药纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的疏水性药物为雷特格韦或喜树碱中的一种。6.按照权利要求5所述的一种两亲性壳聚糖衍生物载药纳米胶束的制备方法，其特征在于，与雷特格韦相对应的溶剂是乙腈、甲醇中的一种；与喜树碱相对应的溶剂是DMSO、或甲醇和氯仿混合溶液、或碱水中的一种。7.按照权利要求1-5任一项方法所得的两亲性壳聚糖衍生物载药纳米胶束。
【专利摘要】一种两亲性壳聚糖衍生物载药纳米胶束及制备方法，属于药物制剂领域。由两亲性壳聚糖衍生自组装形成胶束，以维生素E琥珀酸酯为内核，巯基壳聚糖为外壳；疏水性内核用于包载疏水性的抗HIV药物，携带正电荷的外壳用于吸附细胞膜，在体内能够稳定地释放所负载的药物，亲水性的外壳用于增强胶束溶解性和保持胶束在溶液中的稳定，延长其在系统给药后的血液循环时间。本发明提供的胶束在颗粒形成后可以稳定的存在于各种体液中超过10个小时，粒径均小于200纳米，有利于控制胶束颗粒的进入细胞而不被巨噬细胞所清除。这种递送系统可以在血清存在的条件下保持稳定性，把药物送入细胞，且具有良好的生物相容性。
【IPC分类】A61P31/18, A61K47/36, A61K31/506, A61K9/107, A61K31/4745
【公开号】CN105687133
【申请号】CN201610125193
【发明人】胡利明, 吴加周, 曾程初, 王小利
【申请人】北京工业大学
【公开日】2016年6月22日
【申请日】2016年3月4日