一种防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法，本发明药物组合物是以柃木、草本三角枫、α?香树脂醇棕榈酸酯、树头菜、缘桑螺为原料药，配比而成，可按常规制剂工艺制成各种剂型，防治膀胱癌疗效显著。
【专利说明】
一种防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种防治膀胱癌的药物组合物及其制备方 法。
【背景技术】
[0002] 膀胱癌是我国泌尿外科发病率最高的恶性肿瘤，由于早期临床症状不明显，大多 数患者并没有定期进行检查，导致疾病发现较晚，往往不能早期根治，而多数患者因根治术 后对生活影响较大，拒绝行根治手术，选择经尿道膀胱肿瘤电切术。因膀胱癌多为移行细胞 癌，易复发，且复发后肿瘤的浸润、恶性程度均有增加，虽多数患者术后进行膀胱灌注治疗， 但预防复发效果并不理想，术后每次膀胱灌注治疗间隔的空白期再无任何辅助治疗，导致 许多患者需多次入院行相关治疗，给患者带来诸多痛苦的同时也给临床医生出了一个难 题。
[0003] Bcl-2是Bcl-2基因家族最重要的抗凋亡基因，近年来的研究发现其表达高低 与膀胱癌的发生发展有关，低表达的细胞存活率明显降低，高表达则细胞存活率明显增高。 膀胱癌多为移行上皮癌，是泌尿系统常见的恶性肿瘤。随着我国人口的老龄化、吸烟、环境 污染、不良生活习惯等因素的影响，膀胱癌的发病率呈逐年上升的趋势。膀胱癌早期不易发 现，多数患者可通过膀胱镜取病理确定诊断，之后行手术治疗，但复发率高，且恶性度逐渐 增强。
[0004] 草本三角楓:本品为伞形科植物川漬变豆菜Sanicula astrantifolia Wolff ex Kresch.的全草。6-9月采收，晒干。【性味】辛、微苦，温。【归经】归肝经。【功能主治】祛风湿； 通经络。主风湿痹痛;筋脉拘挛;跌打损伤。【原植物形态】多年生草本，高30-70cm。全株无 毛。根粗短，有多数细长支根。茎直立，上部立，上部2-4叉状分枝。基生叶叶柄长5-20cm，基 部有宽膜质鞘。叶片近革质，心状三角形成圆肾形，长2.5-8cm，宽2.5-9cm，掌状三溶裂，中 间裂片宽倒卵形，侧面裂片鞭形卵状披针形，有时又有1-2深缺刻，边缘有粗圆锯齿，齿端有 短尖头，掌状脉3-5。复伞形花序顶生;总苞片数个，线形;伞辐少数;小总苞片7-10,线形;小 伞形花序有花约10个;萼齿线状披针形;花瓣倒卵形，白色或粉红色;花柱向外展开。双悬果 倒圆锥状，长约2mm，下面皮刺短，上部皮刺呈钩状，金黄色或紫红色;分生果横剖面呈圆形， 胚乳腹面平直，油管小，不明显。花、果期7-10月。收载于中药大辞典。
[0005] 柃木：为山茶科植物柃木Eurya japonica Thunb.的枝叶或果实。【性味】苦；湿； 凉。【归经】脾;膀胱经。【功能主治】祛风清热；利水消肿；止血生肌。主风湿痹痛;腹水膨胀； 发热口干;疮肿;跌打肿痛;创伤出血。【性状】枝条灰色，皮孔明显，有枝痕和叶柄痕。叶多破 碎，完整叶片披针形，长4-6cm，宽1.5-2cm，先端急尖或渐尖，基部楔形，边缘有细圆锯齿或 呈锯齿状;表面黄绿色或暗绿色，嫩叶色淡，有柔毛，老叶色深，较光滑;革质。果实呈不规则 的球形，皱缩，直径3-4_，暗红色或紫黑色。气微，味微苦。【化学成份】新鲜的叶中含维生 素〇29-219111〖/100〖。果实含矢车菊戒（〇11巧83111:116111；[11)，矢车菊素3-乙酰芸香糖戒 (cyanidin 3-acetylrutinodide);花含柃木花戒（euryanoside)，哈里瑞酮(halleridone) 和木来木戒(cornoside)。【原植物形态】柃木灌木，高l-3m。嫩枝有棱，无毛或有疏毛。单 叶互生;叶柄长2-5mm;叶片革质，成两列状，椭圆形至圆状披针形，长3-6cm，宽1.5-3cm，先 端锐尖或渐尖，微凹，基部楔形，边缘具钝齿，上面深绿色，下面黄绿色，两面均无毛，主脉在 上面下陷，侧脉不明显。花单性，雌雄异株，常1-3朵簇生于叶腋和枝侧;花梗短，下垂;萼片 5,近圆形，宿存;花瓣5,白色或黄绿色，卵形，基部连合;雄花的雄蕊多数，短于花瓣，退化子 房有或无;雌花无雄蕊，花柱短，先端3浅裂。浆果圆球形，径约5mm，成熟时紫黑色。花期3-4 月，果期7-8月。收载于中药大辞典。
[0006] 树头菜:本品为白花菜科鱼木属植物树头菜Crateva unilocularis Buch.Ham. [C.religiosa auct.non Forst.f.]的莖、叶。【性味】味苦;性寒。【功能主治】清热解毒;健 胃。主痧症发热;烂疮;蛇咬伤；胃痛;风湿性关节炎。【原植物形态】树头菜，落叶无刺乔木， 高达10m以上。指状复叶；具长柄;小叶3枚，卵形或卵状披针形，长7-12cm，宽3-5cm，先端急 尖或渐尖，背灰绿色伞房花序顶生;花大，杂性，直径5_7cm，初绿黄色，后变淡紫色;萼片4， 下部与花盘粘合;花瓣4,卵形或矩圆形，先端钝或短尖，有柄;雄蕊无数，与雌蕊柄的基部合 生;子房具柄，1室。浆果近球形，直径2.5-4cm。种子多数。花期3-4月，果期7-8月。收载于中 药大辞典。
[0007] 缘桑螺:本品为琥泊螺科琥泊螺属动物赤琥泊螺511〇〇;[1163 erythrophana Ancey 的全体。可在潮湿的草丛中、树叶下或乱石堆中捕捉，捕得后，洗净，鲜用。【性味】味甘;咸； 性寒。【归经】肝经。【功能主治】熄风镇惊；消肿止痛。主小儿惊风;痔疮;脱肛。【原形态】赤 琥珀螺，贝壳小型，高8mm，宽4.5mm。壳质薄，易碎，半透明，呈长卵状圆锥形，有3个螺层，前2 个螺层增长缓慢，但稍突出。体螺层增长迅速，特别膨大，其高度约为壳高的4/5,壳顶尖，缝 合线深，壳面淡黄色或黄褐色，有光泽，具有稠密细致的生长线和皱褶，壳口长卵圆形，外 唇薄，常被损坏，其上方与体螺层形成一锐角，内唇贴附于体螺层上，形成不明显的胼胝部， 无脐孔。收载于中药大辞典。
[0008] α-香树脂醇棕榈酸酯(α-Amyrin palmitate):CAS号22255-10-3,分子式C46H8〇〇2， 分子量665. 15。【成分来源】蒙古山萝卜Scabiosa comosa，球花牛奶菜Marsdenia globifera，天文草Spilanthes acmella。
[0009] α-香树脂醇棕榈酸酯(α-Amyrin palmitate)。
【发明内容】
[0010] 本发明的目的是克服【背景技术】的不足，提供一种有效防治膀胱癌的药物组合物及 其制备方法。
[0011] 本发明是采用如下技术方案实现的： 制成该防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为： 柃木356-358重量份草本三角楓360-364重量份α-香树脂醇棕榈酸酯12-14重量份 树头菜350-352重量份缘桑螺330-336重量份。
[0012]优选的用于防治膀胱癌的药物组合物，是由如下重量份的原料药组成： 柃木357重量份草本三角楓362重量份α-香树脂醇棕榈酸酯13重量份树头菜351重 量份缘桑螺333重量份。
[0013] -种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于药物组合物可以采用制剂学的常规方 法制备成片剂或胶囊剂或滴丸。
[0014] -种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于药物组合物与化学药或中药组成的防 治膀胱癌药物。
[0015] -种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下步骤制备： 原料药的组成和重量份为:柃木356-358重量份草本三角楓360-364重量份α-香树脂 醇棕榈酸酯12-14重量份树头菜350-352重量份缘桑螺330-336重量份； 制备方法： (1) 按原料药配比取柃木、草本三角楓、α_香树脂醇棕榈酸酯、树头菜、缘桑螺，混匀，用 重量百分比浓度22%乙醇作为溶剂，在37°C温浸提取，提取次数为36次，每次提取时间为19 小时，每次溶剂用量为原料药总重量的52倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇， 浓缩至相对密度1.09,滤过，药液通过D316大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比 浓度39%乙醇溶液洗脱D316大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度39%乙醇洗脱液，回收乙 醇，浓缩干燥，即得提取物A; (2) 取步骤(1)药渣A，用重量百分比浓度48%乙醇作为溶剂，加热回流提取15次，每次提 取时间为0.4小时，每次溶剂用量为药渣A重量的49倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回 收乙醇，浓缩至相对密度1.13,滤过，药液通过DM-7HP大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重 量百分比浓度91 %乙醇溶液洗脱DM-7HP大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度91 %乙醇洗脱 液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B; (3) 将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
[0016] 优选的一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下步骤制备： 原料药的组成和重量份为:柃木357重量份草本二角楓362重量份α-香树脂醇棕榈酸 酯13重量份树头菜351重量份缘桑螺333重量份； 制备方法： (1) 按原料药配比取柃木、草本三角楓、α_香树脂醇棕榈酸酯、树头菜、缘桑螺，混匀，用 重量百分比浓度22%乙醇作为溶剂，在37°C温浸提取，提取次数为36次，每次提取时间为19 小时，每次溶剂用量为原料药总重量的52倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇， 浓缩至相对密度1.09,滤过，药液通过D316大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比 浓度39%乙醇溶液洗脱D316大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度39%乙醇洗脱液，回收乙 醇，浓缩干燥，即得提取物A; (2) 取步骤(1)药渣A，用重量百分比浓度48%乙醇作为溶剂，加热回流提取15次，每次提 取时间为0.4小时，每次溶剂用量为药渣A重量的49倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回 收乙醇，浓缩至相对密度1.13,滤过，药液通过DM-7HP大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重 量百分比浓度91 %乙醇溶液洗脱DM-7HP大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度91 %乙醇洗脱 液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B; (3)将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
[0017] -种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组合物可以采用制剂 学的常规方法制备成片剂或胶囊剂或滴丸。
[0018] -种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组合物与化学药或中 药组成防治膀胱癌药物。
[0019] 药物组合物防治膀胱癌疗效显著。
【具体实施方式】
[0020] 实施例1:防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法 防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为:柃木357g草本三角楓362g α-香树脂醇棕榈酸酯13g树头菜351g缘桑螺333g; 制备方法： (1) 按原料药配比取柃木、草本三角楓、α_香树脂醇棕榈酸酯、树头菜、缘桑螺，混匀，用 重量百分比浓度22%乙醇作为溶剂，在37°C温浸提取，提取次数为36次，每次提取时间为19 小时，每次溶剂用量为原料药总重量的52倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇， 浓缩至相对密度1.09,滤过，药液通过D316大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比 浓度39%乙醇溶液洗脱D316大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度39%乙醇洗脱液，回收乙 醇，浓缩干燥，即得提取物A; (2) 取步骤(1)药渣A，用重量百分比浓度48%乙醇作为溶剂，加热回流提取15次，每次提 取时间为0.4小时，每次溶剂用量为药渣A重量的49倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回 收乙醇，浓缩至相对密度1.13,滤过，药液通过DM-7HP大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重 量百分比浓度91 %乙醇溶液洗脱DM-7HP大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度91 %乙醇洗脱 液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B; (3) 将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
[0021] 实施例2:防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法 防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为:柃木356g草本三角楓364g α-香树脂醇棕榈酸酯12g树头菜352g缘桑螺330g; 制备方法： (1) 按原料药配比取柃木、草本三角楓、α_香树脂醇棕榈酸酯、树头菜、缘桑螺，混匀，用 重量百分比浓度22%乙醇作为溶剂，在37°C温浸提取，提取次数为36次，每次提取时间为19 小时，每次溶剂用量为原料药总重量的52倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇， 浓缩至相对密度1.09,滤过，药液通过D316大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比 浓度39%乙醇溶液洗脱D316大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度39%乙醇洗脱液，回收乙 醇，浓缩干燥，即得提取物A; (2) 取步骤(1)药渣A，用重量百分比浓度48%乙醇作为溶剂，加热回流提取15次，每次提 取时间为0.4小时，每次溶剂用量为药渣A重量的49倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回 收乙醇，浓缩至相对密度1.13,滤过，药液通过DM-7HP大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重 量百分比浓度91 %乙醇溶液洗脱DM-7HP大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度91 %乙醇洗脱 液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B; (3)将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
[0022]实施例3:防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法 防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为:柃木358g草本三角楓360g α-香树脂醇棕榈酸酯14g树头菜350g缘桑螺336g; 制备方法： (1) 按原料药配比取柃木、草本三角楓、α_香树脂醇棕榈酸酯、树头菜、缘桑螺，混匀，用 重量百分比浓度22%乙醇作为溶剂，在37°C温浸提取，提取次数为36次，每次提取时间为19 小时，每次溶剂用量为原料药总重量的52倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇， 浓缩至相对密度1.09,滤过，药液通过D316大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比 浓度39%乙醇溶液洗脱D316大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度39%乙醇洗脱液，回收乙 醇，浓缩干燥，即得提取物A; (2) 取步骤(1)药渣A，用重量百分比浓度48%乙醇作为溶剂，加热回流提取15次，每次提 取时间为0.4小时，每次溶剂用量为药渣A重量的49倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回 收乙醇，浓缩至相对密度1.13,滤过，药液通过DM-7HP大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重 量百分比浓度91 %乙醇溶液洗脱DM-7HP大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度91 %乙醇洗脱 液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B; (3) 将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
[0023]实施例4:片剂的制备 取实施例1药物组合物96g，加入淀粉145g，混匀，制粒，干燥，加微晶纤维素33g，硬脂酸 镁4g，混匀，压制成600片，即得药物组合物片剂。
[0024]实施例5:胶囊的制备 取实施例2药物组合物68g，加入淀粉182g，混匀，制粒，干燥，整粒，加入适量硬脂酸镁， 混匀，装胶囊300粒，即得药物组合物胶囊。
[0025] 实施例6:滴丸的制备 称取聚乙二醇6000 320g水浴(80°C)加热煮熔，加入实施例3药物组合物12g，充分搅 拌均匀，以液体石蜡为冷却剂，置玻璃管(4*80cm)中，冷却温度为-3°C，滴口内外径为7.0/ 2.0 (mm/mm)，滴口距液面为2.5cm，滴速以每分45滴为最佳条件，用棉布吸干滴丸表面的冷 凝剂，即得药物组合物滴丸。
[0026] 实施例7:防治膀胱癌的药物组合物 防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为： 柃木383重量份树头菜365重量份缘桑螺340重量份。
[0027] 实施例8:防治膀胱癌的药物组合物 防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为： α_香树脂醇棕榈酸酯12重量份树头菜136重量份缘桑螺250重量份。
[0028] 实施例9:防治膀胱癌的药物组合物 防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为： α_香树脂醇棕榈酸酯14重量份树头菜350重量份缘桑螺345重量份。
[0029]实验例1:防治膀胱癌的试验研究 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1细胞株 人膀胱癌Biu-87细胞购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。
[0030] 1.1.2药物组合物 药物组合物为实施例1药物组合物，装入容器中加入适量蒸馏水浸泡24 h，密封，后以 筛网过滤，使药物组合物终浓度为lg/ml生药，本实验其余浓度药物均使用该溶液稀释。
[0031] 1.1.3实验仪器 二氧化碳培养箱（ESC0-CCL-170B-8)，全自动化洁净工作台（苏净集团苏州安泰空气 技术有限公司-SW-CJ-1FD)，高速冷冻离心机(sigma-3kl5)，分析天平(METTLER T0-LED0-AL204)，低速离心机（中佳-SC-3610 )，TS-1脱色摇床(江苏晓阳电子仪器厂-TS-92)，三用 电热恒温水浴箱（巨轮-SHH·W21· 420)，微量移液器（德国EppendOrf)，超声细胞粉碎 机(SCI-ENTZ-JY-IIN)，流式细胞仪（美国BD-FACSAr-ia)，全自动化学发光分析系统 (上海天能科技有限公司-4200SF)。
[0032] 1.1.4实验试剂 实验试剂DMEM高糖培养基（Hyclone-SH30022-01B，生产批号NZD1135)，PBS (Hyclone-SH30256-01B，生产批号NZB1083)，胰蛋白酶（Bioind-03-050-lB，生产批号 978194)，青霉素，链霉素溶液双抗（Bioind - 03 - 031-1B，生产批号1425127)，胎牛血清 (GIBC0 - 16000044,生产批号1347575)，WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(碧云 天-C0036,生产批号Y733417)，Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(碧云天-cl063,生产 批号 N637394)，BCL-2 抗体(Proteintech-12789-1-AP，生产批号BC027258)，HRP，山羊 抗兔（Earthox-E030120,生产批号 T443914)。
[0033] 1.2实验方法 1.2.1 Wst-Ι检测人膀胱癌Biu-87细胞抑制率 将人膀胱癌Biu - 87细胞接种至培养瓶，加10%胎牛血清和双抗的DMEM高糖培养 基5 ml，温度为37°C，C02浓度为5%，饱和湿度的培养箱，3 d更换1次培养基，0.25%胰 酶1 ml消化传代。将细胞传代后培养2~3 d后消化、计数，接种于96孔板中，每孔细 胞数约为IX 1〇4，1%胎牛血清和双抗的DMEM高糖培养基100 ml，置培养箱中静置培养 24h贴壁，于96孔板中依次加入不同浓度的药物组合物，每一浓度设5个复孔，设1空白 组（只加培养基）和1个对照组。继续培养24、48、72 h，每孔加入10 ml wst-Ι试剂和90μ1 DMEM高糖培养基，置于温箱中培养2 h后在酶标仪450 nm发射波长下测量吸光度（ optical density，0D)，计算细胞抑制率。抑制率=(1-0D实验组-0D空白组/0D对照组-0D 空白组）X 100%。
[0034] 1.2.2流式细胞术检测细胞凋亡 取对数生长期的Biu-87细胞，消化收集不同浓度药物组合物作用的各组细胞，使细 胞密度约为2X105/ ml，用磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline，PBS)洗涤、吹打均 匀，注意操作轻柔，避免细胞碎片过多，将细胞悬液收集至离心管中，分别加入500μ1的结 合缓冲液(Binding Buffer)悬浮细胞；加入5μ1标记过的膜联蛋白V混勾后。加入5μ1碘 化丙啶(Pro-pidium Iodide，PI)混勾；室温避光反应30 min;用流式细胞仪（Ex=488 nm; Em=530nm)检测细胞凋亡情况。
[0035] 1·2·3 Western-blot 法 消化收集Biu-87细胞，接种至6孔培养板中，每孔约2 X105细胞，置培养箱中静置培养 24h贴壁，于6孔板中依次加入不同浓度的药物组合物，作用24h，48h，72h后用裂解液作用 于6孔板中细胞，二喹啉甲酸(bicin-choninic acid，BCA)测定蛋白浓度，取等量总蛋白加 入10%十二烷基硫酸钠 (Sodium dodecyl sulfate，SDS)聚丙稀酰胺预制胶中电泳分离，聚 偏氟乙稀(Polyvinlidene fluoride，PVDF)膜进行转膜，封闭，敷1抗，TBST洗膜缓冲 液（Tis-buffered-salinetween，TBST)洗涤后，敷2抗，再次TBST洗涤后，涂曝光液， 用灰度扫描仪扫描各组条带，得出Bcl-2的相对表达量，以对照组的相对量为1，其他相对 量与其进行对比，得出各组的比值。膜经剥脱缓冲液处理后重新封闭，用肌动蛋白-iKBeta-actin，0-Actin)单克隆抗体进行杂交，过程、方法同上。
[0036] 1.3统计学处理 测得数据均使用社会科学统计软件包19.0(SolutionsStatistical Package for the Social Sciences，SPSS)软件进行单因素方差分析，计量数据用(x土s)表示，PC0.05 提示差异具有统计学意义。
[0037] 2 结果 2.1 Wst-Ι检测人膀胱癌Biu-87细胞抑制率 以Wst-Ι检测不同浓度药物组合物作用后的膀胱癌Biu-87细胞每组细胞0D值， 根据0D值可以看出药物组合物对该细胞增殖有抑制作用，随着浓度、时间的增长，细胞株 凋亡明显增加，凋亡比率差异具有统计学意义（P<0.05)。
[0038] 2.2流式细胞术检测细胞凋亡 48 h组的抑制细胞增殖效果较为明显，故取48 h组的0.05 g/ml，0.1 g/ml，lg/ml 细胞行细胞凋亡检测。检测结果：人膀胱癌Biu-87细胞经以上3个浓度药物组合物作用 48h，凋亡率分别为(8.6±1.11)%，（17.35±3.23)%，（42.56±4.56)%，细胞凋亡随着药物浓 度的增加逐渐增多，细胞凋亡率差异具有统计学意义（P<〇.05)。
[0039] 2.3药物组合物对人膀胱癌Biu-87细胞Bcl-2表达的影响 随着药物组合物浓度的增加，5组癌细胞的Bcl-2表达分别为92.43±1.54,82.15土 1.76,70.32±1.24,62.36±1.92,33.22±2.17，对照组灰度值为101.13±2.10，各实验组 灰度值与对照组灰度值相比，差异具有统计学意义(P<〇.05)，可得出结论药物组合物可 降低人膀胱癌Biu-87细胞Bcl-2蛋白的表达，据此推测药物组合物可能通过阻断Bcl-2 蛋白所在途径，从而促进人膀胱癌Biu-87细胞凋亡，抑制其增殖。
【主权项】
1. 一种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重 量份为： 柃木356-358重量份草本三角楓360-364重量份α-香树脂醇棕榈酸酯12-14重量份 树头菜350-352重量份缘桑螺330-336重量份。2. 根据权利要求1所述一种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物 的原料药的组成和重量份为： 柃木357重量份草本三角楓362重量份α-香树脂醇棕榈酸酯13重量份树头菜351重 量份缘桑螺333重量份。3. 根据权利要求1所述一种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于药物组合物可以采 用制剂学的常规方法制备成片剂或胶囊剂或滴丸。4. 根据权利要求1所述一种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于药物组合物与化学 药或中药组成的防治膀胱癌药物。5. -种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下步骤制备： 原料药的组成和重量份为:柃木356-358重量份草本三角楓360-364重量份α-香树脂 醇棕榈酸酯12-14重量份树头菜350-352重量份缘桑螺330-336重量份； 制备方法： (1) 按原料药配比取柃木、草本三角楓、α_香树脂醇棕榈酸酯、树头菜、缘桑螺，混匀，用 重量百分比浓度22%乙醇作为溶剂，在37°C温浸提取，提取次数为36次，每次提取时间为19 小时，每次溶剂用量为原料药总重量的52倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇， 浓缩至相对密度1.09,滤过，药液通过D316大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比 浓度39%乙醇溶液洗脱D316大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度39%乙醇洗脱液，回收乙 醇，浓缩干燥，即得提取物A; (2) 取步骤（1)药渣A，用重量百分比浓度48%乙醇作为溶剂，加热回流提取15次，每次提 取时间为0.4小时，每次溶剂用量为药渣A重量的49倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回 收乙醇，浓缩至相对密度1.13,滤过，药液通过DM-7HP大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重 量百分比浓度91 %乙醇溶液洗脱DM-7HP大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度91 %乙醇洗脱 液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B; (3) 将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。6. 根据权利要求5所述一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下 步骤制备： 原料药的组成和重量份为:柃木357重量份草本二角楓362重量份α-香树脂醇棕榈酸 酯13重量份树头菜351重量份缘桑螺333重量份； 制备方法： (1)按原料药配比取柃木、草本三角楓、α_香树脂醇棕榈酸酯、树头菜、缘桑螺，混匀，用 重量百分比浓度22%乙醇作为溶剂，在37°C温浸提取，提取次数为36次，每次提取时间为19 小时，每次溶剂用量为原料药总重量的52倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇， 浓缩至相对密度1.09,滤过，药液通过D316大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比 浓度39%乙醇溶液洗脱D316大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度39%乙醇洗脱液，回收乙 醇，浓缩干燥，即得提取物A; (2) 取步骤（1)药渣A，用重量百分比浓度48%乙醇作为溶剂，加热回流提取15次，每次提 取时间为0.4小时，每次溶剂用量为药渣A重量的49倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回 收乙醇，浓缩至相对密度1.13,滤过，药液通过DM-7HP大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重 量百分比浓度91 %乙醇溶液洗脱DM-7HP大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度91 %乙醇洗脱 液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B; (3) 将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。7. 根据权利要求5所述一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组 合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂或胶囊剂或滴丸。8. 根据权利要求5所述一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组 合物与化学药或中药组成防治膀胱癌药物。
【文档编号】A61K35/618GK106038824SQ201610502416
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月30日
【发明人】不公告发明人
【申请人】济南星懿医药技术有限公司