专利名称：：长耳齿状藻的亲脂提取物在皮肤再生中的用途、组合物和使用该提取物的化妆方法
技术领域：
：本发明涉及长耳齿状藻((^/0"^/&^"n'to)中的至少一种亲脂提取物在制备用于皮肤再生的化妆组合物中的应用，特别是作为防老剂的用途。
背景技术：
：皮肤是聚集成覆盖全身的坚固且柔软的组织的细胞集合。其主要功能是建立对抗外界剌激的保护屏障，同时允许内部和外部介质之间一定的交换。这是很多代谢过程通过器官的生理状况和环境状况进行调节的地方。皮肤由两个相连的层(表皮和真皮)形成，各层均连接有皮下组织。表皮的主要功能是保护身体，其构成皮肤的最表层且为皮肤提供不渗透性和强度。其约每4周自我更新一次。各种细胞类型共存于表皮中；主要为角化细胞(90%)。其特征活性是角蛋白的合成，角蛋白占表皮总蛋白的95%。角蛋白为不溶于水的纤维状蛋白，其为表皮角质层的成分，保护皮肤不受外界刺激，例如热、冷、脱水等。表皮与真皮通过称为真皮表皮交界或表皮基底膜(epidermalbasalmembrane)的区域连接。这一结构使真皮与表皮结合，并提供部分参予皮肤紧张的机械支持。其包括基底角化细胞和真皮纤维原细胞，并含有大量IV型胶原，所述胶原涉及锚斑(anchoringplaques)，将基底膜与乳突真皮(papillarydermis)中的锚斑连接。真皮，即皮肤的内层，是纤维弹性结缔组织，由细胞、纤维原细胞组成，分散在称为细胞外基质的复合介质中。该基质由胶原和弹性蛋白纤维、糖蛋白(也就是纤维粘连蛋白和层粘连蛋白)和蛋白聚糖(通过在核心蛋白上加上糖胺聚糖或GAGS而形成)组成。这些组分的性质和量控制皮肤的机械特性，且作为对老化时的皮肤状况观察到的明显病理生理改进的来源。纤维为皮肤提供硬度、强度、弹性和紧张性。糖蛋白和蛋白聚糖构成体积并参与水合。胶原，特别是来自真皮纤维网的纤维胶原I和III，其为构成75%真皮的蛋白质。其通过赋予皮肤大部分的支持和弹性而扮演力学上的角色。其特别的空间排列为真皮结构提供了一定的刚性，因此对其机械性能做出贡献。其源自前胶原(即由纤维原细胞合成的前体)。分散在真皮结缔组织的纤维之间的蛋白聚糖提供皮肤主要的紧张性。其结构(糖胺聚糖和长链多糖形成的聚合物)为蛋白聚糖提供捕获离子、水和各种代谢物的负电，因而主要对皮肤的保湿和抗压和抗拉作出贡献。在老化时，皮肤变皱、松弛、含水量减少并且难以自身修复。这些影响外观或引起皮肤病的临床标记是由外在过程和内在过程引起的叠加结果，外在过程基本由UV作用和环境因素(例如污染)的侵害所导致，内在过程由20岁开始的慢性老化所造成的。老化一开始发生在表皮。角质化细胞在其基底层中的分裂能力下降，且表面角质层再生时间延长。表皮细胞分裂能力下降还导致与"细胞长寿"相关的酶(SIR2s)族特别是酶SIRTl的降低。细胞成熟不完全且角质化不再产生正常均匀的角质层，导致表皮厚度减少、干燥且表面粗糙。同时，皮肤深层组织化降低。真皮为皮肤提供内聚和营养的基本功能，其是皮肤受损的主要目标。老化时，纤维原细胞(皮肤的组成物质源)消失或转变为纤维细胞。结果观察到纤维粘连蛋白的量降低(1)。纤维粘连蛋白在粘结和细胞功能中、以及降低弹性蛋白纤维的数量和质量方面扮演主要的角色以下物质的减少解释了真皮弹性的降低和皮肤厚度的减少胶原(1%/年)(2)、糖胺聚糖(3)和TIMP1(与皮肤退化有关的金属蛋白酶的抑制剂)(4)。使真皮细胞连接在一起的连接物柔软度的损失是在老人中观察到的各种挫伤和撕裂的根源。这还解释了出现眼袋和皮肤细纹以及小外伤时真皮损伤的加重。延长寿命同时欲保持年轻外表的想法促使了对老化过程中皮肤结构变化的研究。皱纹和细纹的出现主要归究于皮肤的结构性组织，也就是结缔组织、角质层和纤维原细胞组织。在其成分中，胶原、弹性蛋白和角蛋白在改善皮肤表面形态方面扮演着重要的角色。抗衰老化妆产品对上述的某些起作用。市场上的许多"提拉"面部处理和项目的目的在于减少皱纹并改善皮肤弹性。这些通常在皮肤表面上作用或仅在上述靶蛋白之一上作用；其效果是暂时的且仅部分地令人满意。而且，很多施用的化合物不是完全无毒且其慢性使用会引起皮肤问题，例如刺激。其一般使用化学合成或从天然物质萃取而得到，然而化学合成或萃取两者均十分费时且成本高昂。由于这些原因，需要没有上述缺点的化合物或组合物，即，无毒、易得且同时作用在几个靶蛋白上。
发明内容令人惊奇地，申请人发现长耳齿状藻的亲脂提取物可以同时作用在真皮和表皮中的几个靶点上，并因而可以同时在几个水平上发挥作用。这样的提取物还具有可以简单分离和简单使用的优点。而且，由于其性质，即亲脂性，其尤其富含固醇，这样的提取物对有机体而言毒性非常低或没有毒性。长耳齿状藻的脂质提取物是已知的(CTFA12540)，且在法国专利文件FR-A-2795958中说明了其在抗肥胖方面的用途。因此，本发明涉及长耳齿状藻中的至少一种亲脂提取物在制备用于皮肤再生或防止皮肤变性试剂中的用途。特别是，本发明涉及长耳齿状藻的亲脂提取物在制备用于防止皮肤内在或外在老化的试剂的组合物中的用途，特别是改善皮肤弹性和紧张性和/或防止、减少和/或克服皮肤上出现皱纹或细纹。在另一方面，本发明涉及长耳齿状藻的亲脂提取物在制备用于磨皮、化学去皮或激光磨削后的皮肤再生或改善皮肤再生的试剂中的用途。更确切地说，本发明涉及长耳齿状藻的亲脂提取物在制备用于改善和/或刺激前胶原、纤维粘连蛋白、糖胺聚糖和/或SIRTl合成的试剂中的用途。进而，本发明涉及化妆用组合物或皮肤病用组合物，其包括长耳齿状藻的亲脂提取物和透皮载体媒介(transdermalvectorvehicle)。透皮媒介介质为纳米胶体型或纳米颗粒型，优选纳米胶体型。可提及的纳米胶体型透皮载体的实例为纳米乳液、脂质体和环糊精。最后，本发明还涉及用于护理和/或处理和/或防止皮肤衰老或皮肤变性的化妆方法，其中将化妆组合物施加在皮肤上，所述化妆组合物包括长耳齿状藻中的至少一种脂质提取物和化妆可接受的媒介。优选地，长耳齿状藻的脂质提取物以纳米胶体形式存在于媒介中。本发明的最佳实施方式通过以下详细说明，特别是实施例，说明包含长耳齿状藻的亲脂提取物或这样的提取物的化妆用组合物的用途，其可以刺激人皮肤的表皮结构，导致受处理的外植体(treatedexplants)中活细胞层数目的增加和表皮厚度的增加。进而，在测量有丝分裂指数或GAGs、纤维粘连蛋白或去乙酰化酶(sirtuins)的表达的具体测试中，利用本发明的亲脂提取物得到正结果，即，有丝分裂指数随着在乳突真皮上的控制或作用而增加，特别是在沿着真皮表皮交界的区域，且在纤维原细胞中的GAGs增加，在受处理皮肤的活组织检查中SIRT1和纤维粘连蛋白密度高。这意味着表皮和真皮已在长耳齿状藻的亲脂提取物的作用下再生。根据本发明，可以使用任何长耳齿状藻的亲脂提取物，其为蓝藻菌、微藻或浮游生物。得到的浮游生物以常用方法处理，得到亲脂提取物。这些长耳齿状藻的亲脂提取物可以例如利用己垸或二氯甲烷等有机溶剂常规提取得到。还可以使用任何可以提取长耳齿状藻脂质相的方法或任何从浮游生物提取亲脂提取物的方法。因此，FR-A-2795958说明了利用超临界流体(例如二氧化碳)的萃取方法。最后，长耳齿状藻油可购自Codif。这些脂质提取物是亲脂的。在任何油、或硅油或其他化妆可接受的亲脂物质中的其他亲脂提取物都适用于本发明。长耳齿状藻的亲脂提取物在本发明的组合物中的量为组合物总重的0.00150wt%，优选为0.5~20wt%，特别优选为0.110wt%。本发明中所用的术语"透皮载体媒介"指可以使提取物渗透皮肤的媒介。特别是，这样的媒介为纳米胶体。术语"纳米胶体"是指任何纳米级的、单分散的、尺寸小于约200nm的非固体形式。其通常是表面活性剂类乳液。纳米胶体通常包括纳米乳液(单层表面活性剂)，但还可包括小尺寸脂质体(至少一个天然磷脂类双层表面活性剂)或笼分子，例如a-、卩-、或Y-环糊精，其可形成包合络合物。本发明所用的化妆用组合物为局部施用，且可以任何这类应用中常用的盖伦制剂形式(galenicalforms)提供，特别是水包油乳液(0/W)、油包水乳液(W/0)、油/水/油三重乳液(o/w/o)或水/油/水乳液(w/o/w)、水凝胶、或水性溶液、水醇溶液或油溶液。因此，透皮载体可以包括OAV、W/0、W/O/W、O/W/O乳液、凝胶或亲脂液体。其或多或少为流体，为白色或有色乳霜、润发油(或发蜡(pomade))、乳液(milk)、洗液(lotion)、浆液(semm)、糊、泡沬或两相液体。其可以为固态，例如棒状，或为气溶胶形式。除了亲脂长耳齿状藻以外，本发明所用的组合物还包含一种或多种赋形剂，其选自与配方中的活性成分有良好相容性的化合物。实例为水溶性天然聚合物，例如多糖(黄原胶、角豆胶、果胶等)或多肽、甲基纤维素类纤维素衍生物、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素或合成的聚合物、泊咯沙姆(poloxamers)、卡波姆(carbomers)、或聚丙烯酸乙烯酯(PVA)或聚乙烯比咯烷酮(PVP)类胶凝剂。最后，本发明的组合物还可以含有各种其他助溶剂类赋形剂(例如乙醇、甘油、苯甲醇)、湿润剂(例如甘油)、扩散助剂(例如尿素)或抗菌防腐剂(例如0.15%对羟基苯甲酸甲酯)。其还可以含有表面活性剂、稳定剂、乳化剂、增稠剂、其他可以具有补充或可能的协同作用的活性物质、奥立多元素、精油、芳香剂、着色剂、防腐剂、胶原蛋白、化学滤器或矿物滤器、增湿剂或温水(thermalwater),上述赋形剂可任选加入，如果加入时，可加入其中的一种或多种，本领域技术人员可根据需要选择其加入量。长耳齿状藻提取物可以与至少一种其他活性物质组合，例如水化剂。本发明的方法通过局部施用本发明的组合物以常用的方式实行，例如每日一次，每日两次或于每次皮肤清洁后使用，或在脱皮、磨损和激光处理后加强使用。该方法适用于所有皮肤可以将本发明的组合物涂在脸上，但是也可以涂在身体的其他部位；配方可根据区域的不同而不同和/或可以特定对某一区域。以下实施例仅用于说明本发明，但不限制其范围。活性测试研究含有长耳齿状藻的亲脂提取物的制剂的再生和抗衰老活性。这项研究可以在从对49岁女性进行的腹部皮肤整形手术获得的36块人类皮肤外植体上进行。将所有的外植体在培养基中保持存活4天。将油溶剂(辛酸/癸酸甘油三酸酯(capryliccaprictriglyceride)，"Myritol318NeutralOil"，COGNIS出品)中稀释并沉积在无菌纸表面的30ul长耳齿状藻的脂质提取物(Codif)每日涂在外植体上。在处理的第0天和第4天(D0和D4)，从每批取3个外植体(对照10%脂质提取物，1%脂质提取物)制备用于组织研究。进行一般形态说明，即有丝分裂指数和不含酸基的糖胺聚糖表达的评价，得到以下结果。I.一般形态利用PGanter禾口GJolles,pub.GautierVillars(1970)"Histochimienormaleetpathologique"[正常和病理组织化学]中公开的方法进行观察。对所有外植体进行观察并显示从处理的第4天开始，2种测试浓度的稀释的长耳齿状藻的脂质提取物的施用诱导了对上皮结构的刺激，导致活细胞层的增加。在涂了10%长耳齿状藻的脂质提取物后，表皮的厚度增加得更多。II有丝分裂指数禾U用"Effectofraloxafeneonbreastcancercells画Ki67apoptosis",MDowsett,publishedinCancerEpidemiologyBiomarkers,September(2001)中说明的方法测量有丝分裂指数。在活组织检测切片上，有丝分裂中的细胞用抗-Ki67、单克隆抗体克隆7B11、小鼠IgGl标记。在丙酮中固定后，在冷冻切片上进行标记。在PBS中将抗-Ki67稀释到1/100并在室温下将其涂2小时。用VectastainRTUuniversalvectorrevealingkit(VectastainRTU万會g载体显不盒)显不，参照PK-7200。用物镜为40的光学显微镜观察，结果为平均每厘米表皮长度。在Gl,S，G2和M相中用抗-Ki67标记细胞表I<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>如表I所示，在D4，用脂类提取物长耳齿状藻处理的皮肤的活组织检查观察到的有丝分裂指数的值高于由未处理的对照组和由稀释提取物的溶剂得到的值。该值随着提取物剂量的增加而增加。III.糖胺聚糖(GAGs)的表达用JeanChevreau,JacquelineBellot禾口Marie-JoseCabanier，publishersMaloine，1956在"Formulairedetechniqueshistologiques"[组织学技术文集]中公开的方法研究GAGs的表达。用阿尔新蓝PAS(对没有酸基的GAGs具有特异性)对皮肤外植体的组织切片进行染色，显示用2种测试浓度的长耳齿状藻的脂质提取物处理外植体后，皮肤上这些组分显著增加。在D4清楚显示的效果用乳突真皮中(特别是在真皮表皮交界处一带)PAS染色阳性纤维原细胞数目的增加，以及纤维原细胞中GAGs的增加表征。IV纤维粘连蛋白和去乙酰化酶sirtuins(SIRTl)的表达用Fy體dO在ActaDermVenereol1979;59(6):487-92"Studiesonfibronectinintheskin.III.Indirectimmunofluorescencestudiesinlichenplanus(皮肤中纤维粘连蛋白的研究，III.扁平苔藓中间接免疫荧光研究)"中公开的方法评价纤维粘连蛋白的表达，以检测纤维粘连蛋白，用DalFarraC禾口DomlogeN在SocCosmChemAnnualSciMeeting,"SIRT1,thehumanhomologuetoSir2etc(SIRT1，Sir2等的人类同类物)",2005,65-66中公开的方法评价去乙酰化酶(SIRT1)的表达，以检测SIRT1。用特异性抗SIRT1和抗纤维粘连蛋白抗体标记的结果显示，与用溶剂处理的组织检测切片或未处理的对照比较，在D4时，用长耳齿状藻的脂质提取物处理的皮肤得到的组织检测切片中这些SIRT1和纤维粘连蛋白分子的密度较高。结论上述观察表明在长耳齿状藻的脂质提取物的作用下，表皮和真皮发生重建。这些改进表示了更年轻或复原的皮肤的标准。配方实例按照本领域技术人员的标准方式制备以下配方，配方中的百分比(％)表示基于组合物总重量的各组分的重量百分比。在实施例l-4中，加热至80。C后，通常在强烈搅拌下混合水相和油相，将其乳化。长耳齿状藻的脂质提取物由Codif提供。实施例l:用于老化皮肤的再生霜A-水相水qsp(sufficientquantityto)100%甘油2.0%戊二醇3.0%黄原胶0.5%防腐齐Uqs(sufficientquantity)卡波姆0.35%B-油相异三十烷(Squalane)15%十六醇2%二十醇/二十二醇/二十垸基葡糖苷1%硬脂酸甘油酯5%长耳齿状藻的脂质提取物1%水1.5%NaOH0.35%防腐剂+芳香剂qs实施例2:用于中性皮肤的保湿霜A-油相鲸蜡硬脂醇聚醚-2(Ceteareth-2)3.5%鲸蜡硬脂醇聚醚-2124%麦芽油3%<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>实施例5:用于成熟皮肤的卸妆水<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>实施例6:用于脆弱的和缺乏营养的皮肤的再生油<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>实施例7:长耳齿状藻纳米胶体抗衰老液-1-长耳齿状藻脂类提取物纳米胶体的制备将溶解在油(Myritol318-辛酸癸酸甘油三酯)中的长耳齿状藻的脂质提取物(10%)用乳化剂(AxolC62-硬脂酸柠檬酸甘油酯，Degussa出品，食品级，植物基(onavegetablebase)，HLB为12)稳定。乳化剂相对于油相的比例为0.1。用含有10%甘醇和0.1。/。抗坏血酸钠的矿泉水(SourceSteAlix,Brittany)按1:3的比例将海水/矿泉水水相(海泉水(marinespringwater)，SOMAIG出品，lieGrande)稀释。其按照如下生产:用转子/定子(RAYNERIVMITURBOTEST)将乳化剂分散到热水相中3分钟。在高压下将该第一混合物均匀化700巴(1次)(Lab1000，APV)。冷却到室温。加入添加剂和热敏感的长耳齿状藻的亲脂提取物，用转子/定子均匀化。再将混合物在高压下均匀化(700巴，1次)。用光衍射技术(MASTERSIZERHYDRO2000S,MALVERNINSTRUMENTS激光粒度计)验证颗粒粒径和单分散性颗粒粒径为200nm数量级。-2-长耳齿状藻纳米胶体抗衰老液的组成<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>实施例长耳齿状藻纳米胶体抗衰老液的人体试验。对两组15人(3060岁)进行研究一组(平均年龄41岁)早晚使用安慰剂(即实施例7(-2-)的长耳齿状藻纳米胶体液的赋形剂)49天不间断；一组(平均年龄45岁)早晚使用实施例7(-2-)的长耳齿状藻纳米胶体抗衰老液49天不间断。处理的最后，对人做问巻调査，所得反应示于表II中，表示为a%。表II<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>参考文献(1)Ageingoftheextracellularmatrixanditspathology(细胞夕卜基质的老化及其病理学)，Labat-RobertJandRobertL，ExpGerontol1988,23(1):5-18.(2)Theageingdermis:themaincausefortheappearanceofoldskin(老化的真皮皮肤出现衰老的主要原因)，byLapiereCM,BrJdermato11990,122,Suppl35:5-11.(3)Age-relatedchangesofwatercontentintheratskin(鼠类皮肤的含水量与年龄相关的变化)，byJungJWetal，JDermatolSci1997,145(1):12-9.(4)DownregulationofTissueInhibitorofMatrixmetalloprotease-1(TIMP-1)inagedhumanskincontributestomatrixdegradationandimpairedcellgrowthandsurvival(在老年人皮肤中基质金属蛋白酶-l(TIMP-l)的组织抑制剂的减量调节对基质退化和受损细胞生长和存活的贡献)，HomebeckW,PatholBiol2003，51(10):569-73.权利要求1.长耳齿状藻的亲脂提取物在制备用于皮肤重建或防止皮肤变性的试剂中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其为抗内在皮肤或外在皮肤的老化。3.根据权利要求1或2所述的用途，其为改善皮肤的弹性和/或紧张性、和/或防止、减少和/或阻止皮肤出现皱纹或细纹。4.根据权利要求1所述的用途，其为改善磨皮、化学去皮或激光磨削后的皮肤再生。5.根据权利要求14中任一项所述的用途，其为改善和/或刺激前胶原、纤维粘连蛋白、糖胺聚糖和/或SIRTl的合成。6.化妆用组合物或皮肤病用组合物，其包括长耳齿状藻的亲脂提取物和纳米胶体类透皮载体媒介。7.根据权利要求6所述的化妆用组合物或皮肤病用组合物，其包括长耳齿状藻的亲脂提取物和纳米乳液类透皮载体媒介。8.根据权利要求6所述的化妆用组合物或皮肤病用组合物，其包括长耳齿状藻的亲脂提取物和脂质体类透皮载体。9.根据权利要求6或7所述的化妆用组合物或皮肤病用组合物，其包括长耳齿状藻的亲脂提取物和环糊精类透皮载体。10.根据权利要求6~9中任一项所述的化妆用组合物或皮肤病用组合物，其中所述的透皮载体包括油包水、水包油、水/油/水或油/水/油乳液、凝胶或亲脂液体。11.根据权利要求610中任一项所述的化妆用组合物或皮肤病用组合物，其中所述的长耳齿状藻的亲脂提取物的量为组合物总重的0.01~10wt%，优选为0.055wt。/。，更优选为0.1~2wt%。12.用于护理和/或处理和/或防止皮肤衰老或皮肤变性的化妆方法，其中在皮肤上施加化妆用组合物，所述化妆用组合物包括至少一种长耳齿状藻的亲脂提取物和化妆可接受的媒介。全文摘要本发明涉及具有至少一种长耳齿状藻的亲脂提取物的组合物的化妆用途，其用于皮肤再生或对抗皮肤变性。本发明还涉及新配方，其包括作为活性成分的长耳齿状藻的亲脂天然提取物和化妆或皮肤病学合适的透皮纳米-胶体类媒介。本发明还涉及对抗皮肤老化或皮肤变性和/或用于皮肤再生的化妆护理方法。文档编号A61Q19/00GK101357113SQ20081013579公开日2009年2月4日申请日期2008年7月14日优先权日2007年7月13日发明者戴尔芬·东吉,杰勒德·雷济尼克申请人:太平洋创生公司