专利名称：一种生物芯片醛基化载玻片的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物芯片载体玻片，特别涉及到采用醛基化方法制备的一种生物芯片 载玻片。载玻片表面醛基化修饰，便于氨基修饰的核酸探针和蛋白质性质的抗原抗体以及其 它物质的化学结合。本发明适合于核酸类、蛋白质类和其它种类的探针、模板片段点制微阵 列芯片，具有牢固的特异的化学键结合特点，为生物芯片的制备提供可靠的载体。
背景技术：
生物芯片以其高通量、多靶位的检测模式正在被越来越多地应用于生物科学领域。以载 玻片为载体的微阵列芯片，更以其高效、高通量、低价位等特点，已经广泛用于基础研究和 临床筛査、辅助诊断。
微阵列芯片包括寡核苷酸芯片、cDNA芯片、抗原芯片、抗体芯片等，以特殊化学方法 处理后的载玻片为载体，将各种探针或靶标片段以化学键结合的方式固定在玻片表面，形成 可用于杂交反应或抗原抗体反应的微阵列芯片。
作为微阵列芯片载体的载玻片，表面化学修饰方法很多，包括氨基化、醛基化、巯基化、 环氧乙基化等，都可以达到目标片段与玻片表面化学结合的目的。但是，对于以上任何一种 表面化学修饰方法，每家的制备技术和工艺都有差别，并且总体的技术方法都还不成熟，制 备的载玻片存在本底过高、表面均一度不够、结合力不够、杂交分别率不好、点样点不规整 等问题，影响了微阵列芯片的后续制备和总体质量，阻碍了微阵列芯片技术的发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种用特殊技术和工艺制备的醛基化载玻片，该载玻片本底低、表 面均一、结合力强、杂交分别率高、点样点大小和形状规整。可以广泛用于高质量的寡核苷 酸芯片、cDNA芯片、抗原芯片、抗体芯片等的制备，从而很好地解决了上述问题。
本发明提供的微阵列芯片用醛基化载玻片，制备程序如下-
1、 空白玻片处理工艺浓硫酸-重铬酸钾溶液浸泡8小时，水洗5次；氨水洗液(氨水过 氧化氢水=1: 1: 5)浸泡8小时，水洗5次；放入蒸馏水中，超声洗涤5分钟；IO(TC烘烤 45分钟。
2、 氨基化处理工艺空白片放入氨基硅垸反应液(95。/。乙醇600ml，冰醋酸600ul，氨基硅 垸12ml) 25分钟，95%乙醇超声洗涤5分钟，蒸馏水超声洗涤5分钟，100'C45分钟烘干。
33、醛基片制备工艺氨基片放入醛基化反应液(25。/。戊二醛260ml+双蒸水390ml)超声5分 钟，再非超声反应40分钟，双蒸水超声洗涤3次，5分钟/每次，取出室温干燥。
通过以上特殊制备工艺，制成本发明醛基化载玻片，放置一周后，可以用于点样制备微 阵列芯片。
图1点样制备成的微阵列芯片示意图
1醛基化载玻片
2点样制备的微阵列 图2杂交后显示阳性探针点
1阳性探针点
2阴性探针点
具体实施例方式
本发明用下列实施例进行解释，目的只是为了解释而不是以任何方式限制本发明。
实施例l:醛基化载玻片点样制备微阵列芯片
如图1所示，取本发明醛基化载玻片一张，贴上分隔围栏作为杂交区，配以HLA-DR4 基因分型寡核苷酸探针(17条)，以及点样液成分，通过点样仪将探针点制在玻片上。探针 矩阵为，每个探针横向重复3点，9个点一行，共6行。本发明醛基化玻片点制的探针点大 小均匀，形状规整。
实施例2:通过杂交反应检验微阵列芯片的信号特性
将上述点制好的芯片放置过夜，用2XSSC和蒸馏水各洗涤1分钟，晾干。取HLA-DR4 基因分型试剂的其它成分，扩增1份己知基因型别的DNA样本得到杂交模板。取PCR产物 2ul加到芯片杂交区，再加入杂交液(5xSSC) 8ul,芯片放到自动杂交洗涤仪的槽内，设定杂 交温度52'C，杂交时间40分钟。杂交后自动洗涤和风干。
采用GnenPix4100A扫描仪，扫描杂交信号，得到杂交结果扫描图(如图2所示)，并将 图像转换成数据，采用分析软件，将以上数据转换成基因型别。结果分析得到的阳性杂交点 和阴性杂交点与样本基因序列和基因型别符合，从图中可见，阳性探针点信号强，阴性点本 底低，结合力和分辨力都很好，能够满足微阵列芯片的制备和杂交反应要求。
权利要求
1、一种生物芯片醛基化载玻片，其特征在于醛基化载玻片是通过空白玻片处理工艺、氨基化处理工艺及醛基片制备工艺制备而成。
2、 根据权利要求l所述的生物芯片醛基化载玻片，其特征还在于空白玻片处理工艺为浓硫酸-重铬酸钾溶液浸泡8小时，水洗5次；氨水洗液(氨水过氧化氢水=1: 1: 5)浸泡8小时，水洗5次；放入蒸馏水中，超声洗涤5分钟；100'C烘烤45分钟。
3、 根据权利要求l所述的生物芯片醛基化载玻片，其特征还在于氨基化处理工艺为空白片放入氨基硅垸反应液(95%乙醇600ml，冰醋酸600ul，氨基硅烷12ml) 25 分钟，95%乙醇超声洗涤5分钟，蒸馏水超声洗涤5分钟，100'C45分钟烘干。
4、 根据权利要求l所述的生物芯片醛基化载玻片，其特征还在于醛基片制备工艺为氨基片放入醛基化反应液(25%戊二醛260ml+双蒸水390ml)超声5分钟，再非超 声反应40分钟，双蒸水超声洗涤3次，5分钟/每次，取出室温干燥。
5、 根据权利要求1所述的生物芯片醛基化载玻片，其特征还在于醛基化载玻片可以和寡核 苷酸、cDNA、抗原、抗体等探针和靶标以化学键共价牢固结合。
6、 根据权利要求1所述的生物芯片醛基化载玻片，其特征在于醛基化载玻片可以广泛用于 高质量的寡核苷酸芯片、cDNA芯片、抗原芯片、抗体芯片等的制备。
全文摘要
本发明涉及一种生物芯片载体玻片，特别涉及到采用醛基化方法制备的一种生物芯片载玻片。载玻片表面醛基化修饰，便于氨基修饰的核酸探针和蛋白质性质的抗原抗体以及其它物质的化学结合。本发明适合于核酸类、蛋白质类和其它种类的探针、模板片段点制微阵列芯片，具有牢固的特异的化学键结合特点，为生物芯片的制备提供可靠的载体。
文档编号C03C17/00GK101486532SQ20081002586
公开日2009年7月22日 申请日期2008年1月18日 优先权日2008年1月18日
发明者何蕴韶, 帆 张, 明 李, 钢 程, 胡守旺 申请人:中山大学达安基因股份有限公司;广州达泰生物工程技术有限公司