同小写字母表示0. 05水平上差异显著）；C为球毛壳菌生物菌肥 粉剂对黄瓜苗生长的促生效果。
【具体实施方式】
[0049] 下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0050] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0051] 本发明的球毛壳菌（化aetomiumglobosum)ND35菌株的分类命名为球毛壳菌，保 藏号为CGMCCNo. 4136,在公开号为CN102311925B中公开过。
[0052] PDA培养基配方；马铃馨200g、葡萄糖20g、琼脂17g和自来水1000ml。
[0053] PDA培养基的制备方法；称取去皮马铃馨200g，放入1000ml自来水中煮沸30min 后，用双层纱布过滤掉马铃馨残渣，滤液中放入琼脂17g，加热使其融化，再加入葡萄糖 2〇g，溶解后，加入自来水定容至1000ml。然后分装S角瓶中，于121°C灭菌25min后，备用。
[0054] PDB培养基配方；马铃馨200g、葡萄糖20g和自来水1000ml。
[005引 PDB培养基的制备方法基本与PDA培养基的制备方法相同，只是没有添加琼脂，制 备成为液体培养基。
[0056] 腐植酸是山东汉高生物工程有限公司的产品。
[0057] 壳聚糖是河北百味生物科技有限公司的产品。
[0058] 高岭±是国药集团化学试剂有限公司的产品，产品目录号为20020528。
[0059] 实施例1、球毛壳菌生物菌肥粉剂的制备方法
[0060] -、球毛壳菌生物菌肥粉剂生产原料的制备
[00川 1、制备原料
[0062] W金针茹（平茹、香茹、金针茹等食用菌）出茹后的废弃菌慷为原材料，将其粉碎、 惊干后作为培养球毛壳菌的原料。
[006引 2、配制营养液
[0064] 营养液的配制方法为将一定量的±豆、葡萄糖和水（马铃馨70g、葡萄糖7g、自来 水1000ml)放入锅中煮沸保持一定时间（40min)，配制成营养液。
[0065] 3、培养料的制备
[0066] 将步骤1制备得到的粉碎惊干后的菌慷与步骤2制备的营养液按照质量比为1 ;2 的比例揽拌混匀（湿度控制在55%左右，自然pH)，得到培养料；将培养料装聚丙締袋。
[0067] 4、培养料的灭菌
[006引将步骤3制备得到的培养料在121°C高温高压灭菌lOOmin，得到灭菌后的培养料 备用。
[0069] 5、接种液的制备
[0070] 将球毛壳菌ND35菌株接种于PDA培养基上培养，待产抱后刮取抱子加入PDB培养 基中，得到抱子悬浮液（浓度为2Xl〇8c化/ml)即接种液。
[0071] 6、接种与发酵培养
[0072] 将步骤5中制备得到的抱子悬浮液接种步骤4中灭菌后的培养料中，抱子悬浮液 W2X108c化/ml的量接种在所述含有食用菌菌慷的培养料中。25°C条件下将接种后的培 养料发酵培养28天（当培养到25天时，将袋口解开），得到含有抱子粉发酵产物。
[0073] 7、粗抱子粉的获得
[0074] 待球毛壳菌ND35菌株完全产抱后，将含有抱子粉发酵产物取出惊干，使用超微粉 碎机将其粉碎，先后通过80目和100目的筛网，得到小于100目的含有抱子粉发酵产物（命 名为粗抱子粉），再采用梯度稀释法检测粗抱子粉中的抱子数量，具体检测方法如下：
[00巧](1)称取粗抱子粉0. 02-0. 05g;
[0076] (2)将称取的粗抱子粉放入含有5ml无菌水的烧杯中，揽拌，放置5-lOmin;
[0077] (3)取上悬液滴到准备好的血球计数板上，进行镜检；
[0078] (4)按照血球计数板的使用规则进行计量；
[0079] (5)按照血球计数板的计算公式计算出1ml菌液中的总菌数（1ml菌液中的总菌数 =A/5X25X10000XB，A为5个中格中的总菌数，B为菌液稀释倍数）；
[0080] 做根据1ml菌液中的总菌数计算Ig样品中的抱子数；
[0081] (7)重复上述步骤2-3次，计算平均数。
[0082] 经检测，粗抱子粉中的抱子量为2X108c化/g，将其作为球毛壳菌生物菌肥粉剂的 生产原料备用。
[0083]二、球毛壳菌生物菌肥粉剂的制备
[0084] 1、称取260g腐植酸、39g壳聚糖和上述一制备的1kg粗抱子粉；充分混匀，得到混 匀后的粉剂。
[0085] 2、将混匀后的粉剂过100目筛网，得到球毛壳菌生物菌肥粉剂（如图1所示）。
[0086] 3、按照农用微生物菌剂佑B20287-2006)标准检测球毛壳菌生物菌肥粉剂的有 效活菌数、霉菌杂菌数、水分和杂菌率、细度和pH值等指标。
[0087] 检测结果如下；有效活菌数为2.55X108c化/g;霉菌杂菌数为2.4X106个/ g(mL);杂菌率为20.0%;水分为35.0%;细度为85%;抑值为7. 5。
[008引实施例2、不同组分的粉剂对黄瓜生长的影响[008引 1、试验地点和方法
[0090] 试验地点在山东农业大学温室。分如下4组进行处理：
[0091] 第1组为空白对照CK(记做CK);
[0092] 第2组为粉剂A(按照实施例1的方法制备得到的粉剂，组分；腐植酸、壳聚糖和粗 抱子粉；腐植酸、壳聚糖和粗抱子粉的质量比分别为260g;39gaOOOg);
[009引第3组为粉剂B(按照实施例1的方法制备得到的粉剂，组分；腐植酸、粗抱子粉和 高岭±;腐植酸、粗抱子粉和高岭±的质量比分别为260gaOOOg;39g);
[0094] 第4组为粉剂C(按照实施例1的方法制备得到的粉剂，组分；壳聚糖、粗抱子粉和 高岭±;壳聚糖、粗抱子粉和高岭±的质量比为39g;1000g;39g)
[0095] 在种植时，每棵黄瓜添加2g粉剂。
[0096] 在黄瓜生长期对其株高和地茎进行测量，并用SPSS软件对数据进行统计分析。
[0097] 2、试验结果
[0098] 试验结果如表1所示；施加粉剂的=个处理（粉剂A、粉剂B、粉剂C)的黄瓜苗均 与空白对照CK有显著差异，粉剂A、粉剂B、粉剂C处理的黄瓜苗的株高和地径分别比空白 对照黄瓜苗的株高和地径提高23. 92 %、16. 70 %、9. 26 %和8. 47 %、8. 06 %、0. 62 %，而且 粉剂A处理组的黄瓜苗（4-5叶期）的株高、地径均高于其他组（CK、粉剂B、粉剂C)的黄瓜 苗。
[0099] 表1、不同组分粉剂对黄瓜苗期生长的影响
[0100]
【主权项】
1. 一种制备生物菌肥的方法，包括如下步骤：将球毛壳菌（Chaetomiumglobosum)ND35 CGMCCNo. 4136的孢子、腐植酸和壳聚糖混匀，得到生物菌肥。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述球毛壳菌（Chaetomiumglobosum) ND35CGMCCNo. 4136的孢子、所述腐植酸和所述壳聚糖的配比为2XIO11Cfu:(245-275)g: (35-45)g〇
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述球毛壳菌（Chaetomium globosum)ND35CGMCCNo. 4136的孢子为小于100目的孢子粉。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，在将所述球毛壳菌 (Chaetomium globosum)ND35 CGMCC No. 4136的孢子、所述腐植酸和所述壳聚糖混勾后还 包括如下步骤：选取小于100目混匀后的产物。
5. 根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，还包括在混匀时添 加填料的步骤。
6. 根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述填料为高岭土。
7. 由权利要求1-6中任一所述的方法制备的生物菌肥。
8. 权利要求7所述的生物菌肥在如下（1)-(14)中至少一种中的应用： (1) 增加植物的株高； (2) 提高植物的叶绿素a含量； (3) 提高植物的叶绿素b含量； (4) 提高植物的叶绿素总含量； (5) 提高植物的类胡萝卜素含量； (6) 提高植物叶片的还原糖含量； (7) 提高植物叶片的脯氨酸含量； (8) 提高植物单株产量； (9) 增加植物的叶宽； (10) 增加植物的叶长； (11) 增加植物的地径； (12) 促进植物苗期的生长； (13) 促使植物提前开花结果； (14) 防治植物苗期猝倒病。
9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述植物为辣椒和/或黄瓜。 10?权利要求 1-6 中任一所述的球毛壳菌（Chaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136 或其孢子或其发酵产物在作为生物菌肥添加剂或在制备生物菌肥添加剂的产品中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种球毛壳菌生物菌肥粉剂的制备方法及应用。本发明的球毛壳菌生物菌肥粉剂是将球毛壳菌(Chaetomium globosum)ND35CGMCC No.4136的孢子、腐植酸、壳聚糖混匀制备得到的。通过试验表明：该生物菌肥粉剂不仅能够防治多种植物病害，还对作物具有良好的促生作用，使作物在生物量和产量方面有显著的提高，具有良好的经济效益；并且该生物菌肥粉剂使用简单，避免了飞扬的微粉，减少了环境污染。在理论上和市场需求上都具有非常大的可行性。
【IPC分类】C05G3-00, C05G3-04
【公开号】CN104774105
【申请号】CN201510164252
【发明人】高克祥, 田叶韩, 刘晓光, 尹成林, 郭君兴, 李超, 王献礼, 张修国
【申请人】山东农业大学
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年4月8日