专利名称：从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法
技术领域：
本发明涉及一种应用逆流色谱技术分离加兰他敏的方法，特别涉及一种应用高速逆流色谱技术从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法。
背景技术：
加兰他敏(galanthamine)是50年代开发的胆碱酯酶抑制剂，是由石蒜科石蒜等植物提取的生物碱，多年来一直用于治疗重症肌无力、肌营养不良和小儿麻痹后遗症。加兰他敏(4a，5，9，10，11，12-六氢-3-甲氧基-11-甲基-6H-苯并呋喃并(3a，3，2-ef)-(2)并氮杂卓-6-醇)是一种四环生物碱，因其药理特性其作用类似于毒扁豆碱和新斯的明，但加兰他敏的治疗范围比毒扁豆碱和新斯的明宽，副作用更小。加兰他敏还被用于脊髓灰质炎和各种神经系统疾病的治疗，在治疗青光眼方面也具有较好治疗作用。近年，很多国家相继开展了大量加兰他敏深入研究相关的药理学、药效学和药代动力学实验，研究表明，作为第二代胆碱酯酶抑制剂的加兰他敏在神经突触中通过与乙酰胆碱竞争同乙酰胆碱酯酶结合，阻断此酶对乙酰胆碱的降解，进而增加脑内乙酰胆碱的浓度。加兰他敏治疗早老性痴呆的新适应症因此得到了深入广泛的研究，相继获得世界各国的批准。
加兰他敏在石蒜科植物中的含量很低，只有万分之一左右，相伴其它生物碱的种类却很多，因而提取分离纯加兰他敏存在很大的困难。采用传统的提取萃取分离工艺，得率低，纯度差，周期长，类似生物碱杂质去除困难，不适应目前世界各国对加兰他敏的高质量要求，迫切需要一种稳定的高纯度的加兰他敏生产工艺。
发明内容
本发明的目的是采用逆流色谱技术分离得到98％以上高纯度的加兰他敏。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案以逆流色谱为分离技术，以逆流色谱设备为分离设备，应用动态液-液分配原理，以混合后上下分层的两相溶剂组合为流动相和固定相，利用相对移动的互不混溶的两相溶剂，在处于动态平衡的两相中将具有不同分配比的石蒜粗提取物溶解液组进行分离，收集目标成分加兰他敏，得到固体，其溶剂系统组合可为烷烃、卤代烃、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、醚类、无机盐缓冲液、水等溶剂的其中三个、四个或二个组分所构成；根据粗提物性质任一溶剂系统可包含适当无机盐类等；其中烷烃是正乙烷、正庚烷、正戊烷；卤代烃是氯仿、二氯甲烷、四氯化碳；脂肪醇、脂肪酮是甲醇、乙醇、丙酮；脂肪酯是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯；醚类是乙醚、石油醚、叔丁基甲基醚等，无机盐类是磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、碳酸氢钠与碳酸钠缓冲液等；典型的溶剂系统组合可以为卤代烃、脂肪醇、水组合以上相为流动相，下相为固定相，调节体积比为2-6∶0-4∶2-6，经一次分离得到加兰他敏纯品。
脂肪酯、脂肪醇、水组合以上相为固定相，下相为流动相，调节体积比为2-5∶0-3∶2-5，经一次分离得到加兰他敏纯品。
烷烃、脂肪酯、脂肪醇、水组合以上相为固定相，下相为流动相，调节体积比为2.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3，经一次分离得到加兰他敏纯品。
醚类、烷烃、脂肪醇、水组合以上相为固定相，下相为流动相，调节体积比为1.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3，经一次分离得到加兰他敏纯品。
具体操作按以下步骤进行按体积比将上述溶剂体系配置，摇匀后静置分层。将上、下相分开，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满色谱柱中，使主机转动，再将流动相泵入柱内，进样，控制流速，按目标成份收集洗脱液，得到固体。
本发明的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法与传统方法相比，它是一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，避免了固态支持体或载体带来的被吸附、损耗和变性等问题，具有分离量大，样品无损失，回收率高，分离环境温和，节约溶剂等特点，可以直接用粗提物分离结果能达到相当高的纯度，且适用于各种工艺途径制备的不同含量石蒜粗提取物分离制备高纯度加兰他敏单体。
具体实施例方式
实施例1本实施例溶剂系统采用三氯甲烷-甲醇-水，溶剂组分按4∶3∶2配置摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
实施例2本实施例溶剂系统采用二氯甲烷-乙醇-水，溶剂组分按4∶3∶2配置摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
实施例3本实施例溶剂系统采用乙醚-正己烷-甲醇-水，溶剂组分按4∶1∶3∶4配置摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
实施例4本实施例溶剂系统采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，溶剂组分按1∶1∶1∶1配置摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
实施例5本实施例溶剂系统采用正己烷-乙酸丙酯-甲醇-水，溶剂组分按2∶4∶3∶4配置摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
实施例6本实施例溶剂系统采用乙酸乙酯-甲醇-水，溶剂组分按4∶2∶3配置，加入适当无机盐摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
实施例7本实施例溶剂系统采用乙酸乙酯-乙醇-水，溶剂组分按4∶2∶3配置，加入适当无机盐摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
实施例8本实施例溶剂系统采用叔丁基甲基醚-正乙烷-甲醇-水，溶剂组分按1∶3∶2∶3配置，加入适当无机盐摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
实施例9本实施例溶剂系统采用三氯甲烷-磷酸盐缓冲液，溶剂组分按1∶1配置，摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
实施例10本实施例溶剂系统采用正戊烷-乙酸乙酯-碳酸钠缓冲液，溶剂组分按1∶5∶5配置，摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
实施例11本实施例溶剂系统采用乙醚-正庚烷-甲醇-水，溶剂组分按2∶4∶3∶4配置摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
实施例12本实施例溶剂系统采用正己烷-乙酸正丁酯-乙醇-水，溶剂组分按2∶4∶3∶4配置摇匀后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。称取石蒜粗提物溶解于流动相中，先用固定相充满整个色谱柱，调整主机转速为500-600rpm，以4.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，调整设备平衡后，进样，用收集器收集洗脱液，根据检测器接收目标成分。得到固体，用HPLC检测纯度达到98％以上。
权利要求
1.一种从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于它是采用逆流色谱技术从石蒜粗提物中分离制备加兰他敏，所用的溶剂体系为烷烃、卤代烃、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、醚类、无机盐缓冲液、水等其中的三个、四个或二个组分所构成。
2.根据权利要求1所述的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于其三个组分构成的溶剂体系是由卤代烃、脂肪醇、水构成，体积比为2-6∶0-4∶2-6。
3.根据权利要求1所述的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于其三个组分构成的溶剂体系是由脂肪酯、脂肪醇、水构成，体积比为2-5∶0-3∶2-5。
4.根据权利要求1所述的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于其四个组分构成的溶剂体系是由烷烃、脂肪酯、脂肪醇、水构成，体积比为2.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3。
5.根据权利要求1所述的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于其四个组分构成的溶剂体系是由醚类、烷烃、脂肪醇、水构成，体积比为1.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3。
6.根据权利要求1所述的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于其二个组分构成的溶剂体系是由卤代烃或脂肪醇与无机盐缓冲液构成，体积比为1∶1。
7.根据权利要求1所述的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于烷烃是正乙烷、正庚烷、正戊烷。
8.根据权利要求1所述的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于卤代烃是氯仿、二氯甲烷、四氯化碳。
9.根据权利要求1所述的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于脂肪醇、脂肪酮是甲醇、乙醇、丙酮。
10.根据权利要求1所述的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于脂肪酯是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯。
11.根据权利要求1所述的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于醚类是乙醚、石油醚、叔丁基甲基醚等。
12.根据权利要求1所述的从石蒜粗提物中分离高纯度加兰他敏的方法，其特征在于无机盐类是磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、碳酸氢钠与碳酸钠缓冲液等。
全文摘要
本发明涉及一种用逆流色谱技术从石蒜粗提物中分离制备高纯度加兰他敏的方法，其所用的溶剂体系为烷烃、卤代烃、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、醚类、无机盐缓冲液、水等溶剂其中的三个、四个或二个组分构成，具体是按体积比将上述溶剂体系配置，摇匀后静置分层，以混合后上下分层的两相溶剂组合为流动相和固定相，利用相对移动的互不混溶的两相溶剂，在处于动态平衡的两相中将具有不同分配比的石蒜粗提取物溶解液组份进行分离，得到固体加兰他敏。该方法避免了固态支持体或载体带来的被吸附、损耗和变性等问题，具有分离量大，样品无损失，回收率高，分离环境温和，节约溶剂等特点。
文档编号C07D491/00GK1490319SQ03142010
公开日2004年4月21日 申请日期2003年7月28日 优先权日2003年7月28日
发明者郑亚津, 陈红辉 申请人:浙江一新制药股份有限公司