专利名称：葡膦酰胺结晶及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种葡膦酰胺的结晶，本发明也涉及所述结晶的制备方法及其应用。
背景技术：
葡膦酰胺(Glufosfamide)，化学命名N，N′-双(2-氯乙基)磷酰二胺酸-β-D-吡喃葡萄糖酯(N，N′-bis(2-chloroethyl)phosphorodiamidate acid β-D-Glucopyranosyl ester)，为一种新型烷化剂，属于磷酰胺氮芥类衍生物，是由烷基化物的活性部分和一个葡萄糖分子连接而得。其作用机制符合烷化剂的特点，为诱导DNA发生不可逆的链间交连，导致了DNA双链的断裂，进而引起细胞凋亡，起到抑制肿瘤细胞生长的作用。
体内实验表明，葡膦酰胺对鼠L-1210、人KB肿瘤细胞、儿童白血病抑制活性与异环磷酰胺氮芥相当。体外实验表明，抗鼠P388细胞、大鼠L5222细胞和AH13r肝瘤、抗鼠Ehrlich腹水瘤、鼠黑色素瘤B16以及在人类肿瘤异种移植的裸鼠上进行的抗肿瘤作用试验中均显示出较高的活性，特别对人类乳腺、肺部肿瘤和黑色素瘤有显著抗瘤作用。
葡膦酰胺是由美国百特(Baxter)医疗公司开发的新型烷化剂，现由美国Threshold制药公司进行临床研究。主要用于手术不能治疗的晚期胰腺癌，而且对多种实体瘤均具有抑瘤活性。2004年11月15日制药公司宣布FDA已经指定其开发的候选药物葡膦酰胺(Glufosfamide)注射剂为快通道产品。该产品目前正在进行单一用药一线治疗晚期胰腺癌的III期临床试验，并计划进行与吉西他滨联合用药治疗晚期胰腺癌的II期临床试验。目前，本品在国内外尚未上市，国外正针对不同适应症进行II、III期临床研究。
德国专利DE 3835772和US 5,622,936等揭示了葡膦酰胺的制备方法，其所制备的都为无定形形式，其物理性能不利于产品的稳定，大规模制备及后续应用。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种葡膦酰胺结晶及其制备方法与应用。
一种葡膦酰胺结晶，包括使用CuKα辐射、以2θ角度和晶面间距(d值)表示的粉末X射线衍射基本上在下列各处有特征峰的N，N′-双(2-氯乙基)磷酰二胺酸-β-D-吡喃葡萄糖酯2θ角度 晶面间距(d值)4.82 18.319.70 9.1117.525.0620.444.3421.744.0824.103.69
25.86 3.4434.58 2.59。
有关上述特征峰的测定需要说明的是，当在一定的位置(2θ值)鉴定出一个独立的XRD尖峰时，意味着该峰为该2θ值±0.1，当在一定的位置(2θ值)鉴定出一个XRD宽峰时，这意味着该峰为该2θ值±0.3。由化合物结晶得到的衍射图对一给定的结晶形态是特征性的，虽然一些弱的或很弱的衍射峰在不同批次的结晶得到的衍射图中可能并不总是出现。谱带(尤其是在低角度X射线入射值(低2θ))的相对强度可能会由测定条件的差异、结晶习性等因素而变化，因此，衍射峰的相对强度对所针对的结晶形态并非是特征性的，相反更应注意的是峰的相对位置而不是它们的相对强度，以决定该结晶的形态。
本发明的葡膦酰胺结晶，其空间群为P1，晶胞参数a＝5.841(1)，b＝7.813(1)，c＝18.271(2)，α＝95.795(1)，β＝93.442(1)，γ＝89.925(1)°。晶胞体积V＝828.0(2)3，晶胞内分子数z＝1。
本发明的结晶葡膦酰胺的制备方法，步骤如下(1)葡膦酰胺粗品20-50℃溶解于结晶化溶剂I中，或者溶解于结晶化溶剂I后再加入结晶化溶剂II，或者溶解于结晶化溶剂I和结晶化溶剂II的混合溶剂中，葡膦酰胺粗品与结晶化溶剂的质量体积比m∶v为1∶1-100，结晶化溶剂I和结晶化溶剂II的体积比为1∶1-100；所述的结晶化溶剂I，选自下述溶剂中的一种或多种脂肪族酮类溶剂、芳香族酮类溶剂、脂肪族醇类溶剂、芳香族醇类溶剂；所述的结晶化溶剂II，选自下述溶剂中的一种或多种脂肪烃类溶剂、芳香烃类溶剂、卤代烃类溶剂、脂肪族酯类溶剂、芳香族酯类溶剂、脂肪醚类溶剂、芳香醚类溶剂；(2)-20℃-50℃放置2-48小时，析晶；(3)抽滤、20-50℃真空干燥，得葡膦酰胺白色结晶。
上述步骤(1)中的葡膦酰胺粗品为任一种现有公知技术制备的，对其纯度没有特别要求。
上述步骤(1)中结晶化溶剂I的脂肪族类酮溶剂选自丙酮、丁酮、戊酮，芳香族酮类溶剂选自苯甲酮、苯乙酮，脂肪族醇类溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇，芳香族醇类溶剂选自苯甲醇、苯乙醇。
上述步骤(1)中结晶化溶剂II中的脂肪烃类溶剂选自正己烷、环己烷或正庚烷，芳香烃类溶剂选自苯、甲苯或二甲苯，卤代烃类溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷；脂肪族酯类溶剂选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异戊酯或丙酸乙酯，芳香族酯类溶剂选自苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯或苯甲酸异丁酯；脂肪醚类溶剂，选自乙醚、异丙醚、四氢呋喃或二氧六环，芳香醚类溶剂选自苯甲醚或苯乙醚。
本发明方法得到的葡膦酰胺结晶产品纯度在98.5％以上。
本发明方法制备的结晶具有如下优点
(1)具有进行大规模工业制备的性能。例如，具有良好的熔点或流动性。葡膦酰胺结晶的熔点稳定(106℃-111℃)，流动性良好，有助于药物制剂生产时的可操作性及大规模工业制造。
(2)具有良好的稳定性，便于生产、运输和贮存。经试验表明，葡膦酰胺结晶在2-8℃条件下贮存保持18个月，各项质量指标均符合该药物的质量标准。
本发明的结晶葡膦酰胺的制药用途，用于制备抗肿瘤药物。
小鼠抑瘤实验以小鼠肿瘤为荷瘤小鼠模型，葡膦酰胺腹腔注射给药，给药剂量50、100、150、200mg/kg，隔日1次，连续给药5次；对小鼠S180肉瘤、Lewis肺癌、B16黑色素瘤均有显著抗肿瘤作用(抑瘤率＞40％，P＜0.05)；当用药至200mg/kg时，葡膦酰胺动物体重下降19％左右；重复实验的结果基本一致。对Lewis肺癌的抑制作用最强，抑瘤率可达95％，明显优于对照药CPM。葡膦酰胺对小鼠实体瘤抑瘤作用强度为Lewis肺癌＞S180肉瘤＞B16黑色素瘤，且有明显的量效关系；给药剂量为50mg/kg时无明显抗肿瘤作用。
一种药物组合物，包括所述的结晶葡膦酰胺和药用载体。可制成粉针剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂等注射剂或口服制剂。药物载体包括甘露醇、乳糖、环糊精、淀粉、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、硬脂酸镁、滑石粉及其他本技术领域人员所熟知的药用辅料。
图1葡膦酰胺结晶的结构及原子编号图。
图2葡膦酰胺结晶单位晶胞的堆积图。
图3葡膦酰胺粉末X-射线衍射图。扫描参数3.0/80.0/0.02/0.15(秒)，Cu(40KV，150mA)；图中的1、2、9、13、14、16、18、19、27峰是特征峰。
具体实施例方式
下面的实施例将对本发明作进一步的解释，但是本发明并不仅仅局限于这些实施例，这些实施例不以任何方式限制本发明的范围。本领域的技术人员在权利要求范围内所作出的某些改变和调整也应认为属于本发明的范围。
实施例1.
葡膦酰胺粗品10g加入500ml三颈瓶中，加入丙酮50ml于20-50℃溶解，放置至-20℃-50℃析晶，24小时后，抽滤、20-50℃真空干燥，即得葡膦酰胺白色结晶。
所述的葡膦酰胺结晶，分子量为383.17，结晶密度为1.537g/cm3，呈无色透明片状，衍射试验用晶体大小0.02×0.40×0.50mm，属三斜晶系，空间群为P1，晶胞参数a＝5.841(1)，b＝7.813(1)，c＝18.271(2)，α＝95.795(1)，β＝93.442(1)，γ＝89.925(1)°。晶胞体积V＝828.0(2)3，晶胞内分子数z＝1。
表1葡膦酰胺结晶的原子坐标参数及等价温度因子
所述的葡膦酰胺结晶的结构及原子编号如图1所示。
所述的葡膦酰胺结晶的单位晶胞的堆积图如图2所示。
所述的葡膦酰胺结晶的粉末X-射线衍射图如图3所示。
实施例2.
葡膦酰胺粗品10g加入500ml三颈瓶中，加入乙醇50ml于20-50℃溶解，放置至-20℃-50℃析晶，2-48小时后，抽滤、20-50℃真空干燥，即得葡膦酰胺白色结晶。
实施例3.
葡膦酰胺粗品10g加入500ml三颈瓶中，加入丁酮50ml于20-50℃溶解，加入正己烷500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽滤、20-50℃真空干燥，即得葡膦酰胺白色结晶。
实施例4.
葡膦酰胺粗品10g加入500ml三颈瓶中，加入甲醇50ml于20-50℃溶解，加入环己烷500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽滤、20-50℃真空干燥，即得葡膦酰胺白色结晶。
实施例5.
葡膦酰胺粗品10g加入500ml三颈瓶中，加入丙酮50ml于20-50℃溶解，加入乙酸乙酯500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽滤、20-50℃真空干燥，即得葡膦酰胺白色结晶。
实施例6.
葡膦酰胺粗品10g加入500ml三颈瓶中，加入苯甲醇50ml于20-50℃溶解，加入乙酸丁酯500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽滤、20-50℃真空干燥，即得葡膦酰胺白色结晶。
实施例7.
葡膦酰胺粗品10g加入500ml三颈瓶中，加入苯甲醇50ml于20-50℃溶解，加入乙醚500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽滤、20-50℃真空干燥，即得葡膦酰胺白色结晶。
实施例8.
葡膦酰胺粗品10g加入500ml三颈瓶中，加入苯乙醇50ml于20-50℃溶解，加入二氯甲烷500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽滤、20-50℃真空干燥，即得葡膦酰胺白色结晶。
实施例9.
葡膦酰胺粗品10g加入500ml三颈瓶中，加入丙酮∶乙酸乙酯(v∶v＝1∶8)450ml于20-50℃溶解，放置至-20℃-50℃析晶，抽滤、20-50℃真空干燥，即得葡膦酰胺白色结晶。
实施例10.
葡膦酰胺粗品10g加入500ml三颈瓶中，加入甲醇∶二氯甲烷(v∶v＝1∶8)450ml于20-50℃溶解，放置至-20℃-50℃析晶，抽滤、20-50℃真空干燥，即得葡膦酰胺白色结晶。
实施例11.
葡膦酰胺粗品10g加入500ml三颈瓶中，加入乙醇∶三氯甲烷(v∶v＝1∶8)450ml于20-50℃溶解，放置至-20℃-50℃析晶，抽滤、20-50℃真空干燥，即得葡膦酰胺白色结晶。
权利要求
1.一种葡膦酰胺结晶，包括使用CuKα辐射、以2θ角度和晶面间距(d值)表示的粉末X射线衍射基本上在下列各处有特征峰的N，N′-双(2-氯乙基)磷酰二胺酸-β-D-吡喃葡萄糖酯2θ角度 晶面间距(d值)4.8218.319.709.1117.52 5.0620.44 4.3421.74 4.0824.10 3.6925.86 3.4434.58 2.59。
2.根据权利要求1所述的葡膦酰胺结晶，其特征在于，其空间群为P1，晶胞参数a＝5.841(1)，b＝7.813(1)，c＝18.271(2)，α＝95.795(1)，β＝93.442(1)，γ＝89.925(1)°，晶胞体积V＝828.0(2)3，晶胞内分子数z＝1。
3.根据权利要求1所述的葡膦酰胺结晶，其特征在于，它属于三斜晶系。
4.根据权利要求3所述的葡膦酰胺结晶，其特征在于，外形呈无色透明片状，尺寸为0.02×0.40×0.50mm。
5.权利要求1所述的葡膦酰胺结晶的制备方法，步骤如下(1)葡膦酰胺粗品20-50℃溶解于结晶化溶剂I中，或者溶解于结晶化溶剂I后再加入结晶化溶剂II，或者溶解于结晶化溶剂I和结晶化溶剂II的混合溶剂中，葡膦酰胺粗品与结晶化溶剂的质量体积比m∶v为1∶1-100，结晶化溶剂I和结晶化溶剂II的体积比为1∶1-100；所述的结晶化溶剂I，选自下述溶剂中的一种或多种脂肪族酮类溶剂、芳香族酮类溶剂、脂肪族醇类溶剂、芳香族醇类溶剂；所述的结晶化溶剂II，选自下述溶剂中的一种或多种脂肪烃类溶剂、芳香烃类溶剂、卤代烃类溶剂、脂肪族酯类溶剂、芳香族酯类溶剂、脂肪醚类溶剂、芳香醚类溶剂；(2)-20℃-50℃放置放置2-48小时，析晶；(3)抽滤、20-50℃真空干燥，得葡膦酰胺白色结晶。
6.根据权利要求5中所述的葡膦酰胺结晶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中葡磷酰胺粗品与结晶化溶剂的质量体积比m∶v为1∶1-50，结晶化溶剂I和结晶化溶剂II的体积比为1∶1-50。
7.根据权利要求5中所述的葡膦酰胺结晶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中结晶化溶剂I的脂肪族类酮溶剂选自丙酮、丁酮或戊酮，芳香族酮类溶剂选自苯甲酮或苯乙酮，脂肪族醇类溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇，芳香族醇类溶剂选自苯甲醇或苯乙醇。
8.根据权利要求5中所述的葡膦酰胺结晶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中结晶化溶剂II中的脂肪烃类溶剂选自正己烷、环己烷或正庚烷，芳香烃类溶剂选自苯、甲苯或二甲苯，卤代烃类溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷；脂肪族酯类溶剂选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异戊酯或丙酸乙酯，芳香族酯类溶剂选自苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯或苯甲酸异丁酯；脂肪醚类溶剂，选自乙醚、异丙醚、四氢呋喃或二氧六环，芳香醚类溶剂选自苯甲醚或苯乙醚。
9.权利要求1所述的葡膦酰胺结晶的制药用途，用于制备抗肿瘤药物。
10.一种药物组合物，包括权利要求1所述的葡膦酰胺结晶和药用载体。
全文摘要
本发明涉及一种N，N′－双(2－氯乙基)磷酰二胺酸－β－D－吡喃葡萄糖酯(葡膦酰胺)的结晶，其空间群为P1，晶胞参数a＝5.841(1)，b＝7.813(1)，c＝18.271(2)，α＝95.795(1)，β＝93.442(1)，γ＝89.925(1)°。晶胞体积V＝828.0(2)
文档编号C07F9/24GK1827629SQ20061004225
公开日2006年9月6日 申请日期2006年2月14日 优先权日2006年2月14日
发明者王晶翼, 胡晓燕, 初乐玲, 张明会, 朱屹东, 范传文, 冷传新, 孙金凤 申请人:海南天源康泽医药科技有限公司