专利名称：苄基哌啶类化合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及苄基哌啶类化合物及其制备方法和用途。
背景技术：
早老性痴呆(Alzheimer’s disease，下文简称AD)是常见于老年人群的一种慢性神经退行性疾病，其临床表现为进行性加重的智能障碍、记忆力减退、精神行为异常等。它严重威胁着老年人的健康，尤其是当今社会逐渐老龄化，这一情况越加严峻，引起了人们的普遍关注。
目前乙酰胆碱酯酶抑制剂仍然是临床治疗AD的主要药物，虽然可以逆转胆碱功能损伤导致的学习、记忆缺陷，使部分病人症状减轻，但并不能从根本上改变疾病状态(Barril，X.et al Mini Rev.Med.Chem.2001，1，255)。
近年来的研究表明，大脑中的β淀粉样蛋白(β-amyloid peptide，下文简称Aβ)的产生和聚集被认为是导致疾病产生的一个重要因素。Aβ是由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein，下文简称APP)水解产生的约4kD的多肽，其末端11-15个氨基酸位于APP的跨膜区。主要有三种分泌酶参与了对APP的水解过程，分别称为α、β和γ-分泌酶。α-分泌酶的酶切位点位于Aβ序列内，作用于APP后产生可溶的α-APP片段和C83肽，C83肽可继续被γ-分泌酶水解生成P3肽，不产生Aβ。而β-分泌酶的酶切位点位于AβN端第一个氨基酸，作用于APP后产生β-APP和C99肽，C99肽再经γ-分泌酶作用产生Aβ。由此可见，β-分泌酶是Aβ形成过程中非常关键的限速酶。而且敲除β-分泌酶基因的小鼠显示完全没有Aβ的生成同时无明显的神经和其它生理功能方面的障碍，因此β-分泌酶被认为是治疗AD安全而且有效的新靶点(D.J.Selkoe Science.2002，297，353-356.)。
由于AD是一种多病因疾病(Michael W.Marlatt.et al.Current MedicinalChemistry，2005，12，1137.)，而使得针对单一靶点的治疗策略受到极大的挑战。最近，研究开发具有多靶点作用的单一分子，用于治疗疾病的策略引起了关注(Moussa B.H.Youdim et al.Trends in Pha Sci，2005，1，27)。应用这种策略已经成功的开发出了几种效果良好的抗癌药。基于此，考虑到Aβ的形成是疾病发展的重要环节，而提高中枢胆碱功能是目前改善AD症状的主要临床治疗方法，本发明人设计并合成了一系列能够同时抑制乙酰胆碱酯酶和β-分泌酶的双重抑制剂，以期达到提高治疗AD的目的。
发明内容
本发明的一个目的是提供一类对β-分泌酶和乙酰胆碱酯酶有双重抑制作用的苄基哌啶类化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的另一目的是提供该类化合物的制备方法。
本发明的再一目的是提供该类化合物作为β-分泌酶和乙酰胆碱酯酶双重抑制剂的用途，即其作为治疗AD的药物应用。
本发明的苄基哌啶类化合物具有如下的结构通式
其中
X为NH、O、CH2或空缺；Y为
CH2或空缺； R5为H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C1-C6烷氧基； R2为
(Z＝0-6)、H、C1-C4直链或支链烷基、硝基、氨基、氰基、羟基、甲氧基、三氟甲基、乙酰胺基或卤素； R6为H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C1-C6烷氧基； R7为H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C1-C6烷氧基； R3为H、C1-C6直链或支链烷基、C3-C6环烷基、芳香环或者含有卤素或羟基取代的芳香环； W为CH或N； U为CHR8或空缺； R8为H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C1-C6烷氧基； V为
或空缺； R4为H、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、硝基、氨基、氰基、羟基、三氟甲基、乙酰胺基或卤素； m＝0-5，n＝0-5； 且化合物结构中有手性中心未具体标明的，包括所有单一异构体或其混合物。
在本发明一优选的实施方案中，上述的结构通式中m＝0，U为空缺，V为
并进一步优选 R1为
或
X为NH；Y为
R5为H或C1-C6烷基； R2为
或硝基； R6为H或C1-C6烷基； R7为H或C1-C6烷基； R4为H或C1-C4烷基； R3为苯基； W为CH； n＝0、1或2。
该类化合物可以通过如下路线1合成。
路线1
如路线1所示，所用的原料1a可参考文献方法(Scott L.Harbeson.et alJMC.1994，37，2918)制得。
1a在1-乙基-3-(3-二甲基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDCI)、1-羟基-苯并-三氮唑(HOBt)为缩合剂，N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)为有机碱的条件下与胺反应得1b，反应温度在15-40℃之间，溶剂为N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。
1b在4N HCl/1，4-二氧六环的酸性条件下脱去Boc得1c。
1c在EDCI、HOBt为缩合剂，DIPEA为有机碱的条件下与酸反应得1d，反应温度在15-40℃之间，溶剂为DMF。
1d初产物可通过甲醇∶二氯甲烷＝1∶10的淋洗剂进行硅胶柱层析分离纯化。
将1d溶解在乙醚溶液中，向其中通入干燥的氯化氢气体，可以得到其盐酸盐。
在本发明又一优选的实施方案中，上述的结构通式中m＝1，U为空缺，V为
该类化合物可以通过如下路线2合成。
路线2
如路线2所示，所用的原料2a可参考文献方法(Dawei Ma.et al.TetrahedronAsymmetry.1996，7，2365)制得。
2a在EDCI、HOBt为缩合剂，DIPEA为有机碱的条件下与胺反应得2b，反应温度在15-40℃之间，溶剂为DMF。
2b在碱性条件下脱去芴甲氧羰基(Fmoc)得2c，碱可用20％哌啶DMF溶液，反应温度在15-40℃之间。
2c在EDCI、HOBt为缩合剂，DIPEA为有机碱的条件下与相应的酸反应得2d，反应温度在15-40℃之间，溶剂为DMF。
以上的2d可通过甲醇∶二氯甲烷＝1∶10的淋洗剂进行硅胶柱层析分离纯化。
将2d溶解在乙醚溶液中，向其中通入干燥的氯化氢气体，可以得到其盐酸盐。
在本发明又一优选的实施方案中，上述的结构通式中m＝1，U为CHCH3，V为
并进一步优选， R1为
X为NH；Y为
R5为H或C1-C6烷基； R2为
R6为H或C1-C6烷基； R7为H或C1-C6烷基； R4为H或C1-C4烷基； R3为H或C1-C6直链或支链烷基； W为CH； n＝0、1或2。
该类化合物可以通过如下路线3合成。
路线3
如路线3所示，所用的原料3a可参考文献方法(Arun K.Ghosh.et al.J.Am.Chem.Soc.2000，122，3522)制得。
3a在30％三氟乙酸的二氯甲烷酸性溶液条件下脱去Boc得3b，反应温度在15-40℃之间。
3b在以DMF为溶剂，EDCI为缩合剂，以DIPEA为碱的条件下与相应的酸反应得3c，反应温度在15-40℃之间。
3c在1N氢氧化锂的碱性条件下开环，反应温度在15-40℃之间，产物用10％柠檬酸溶液调节pH值到3左右，以乙酸乙酯萃取，有机相水洗，无水硫酸钠干燥，减压移除溶剂得3d。
3d在咪唑为碱，DMF为溶剂的条件下与叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl)反应得到初产物，反应温度在15-40℃之间。得到的初产物在以甲醇∶二氯甲烷＝1∶20为淋洗剂的条件下硅胶柱层析纯化得产物3e。
3e在EDCI、HOBt为缩合剂，DIPEA为有机碱的条件下与胺反应得3f，反应温度在15-40℃之间，溶剂为DMF。
3f在以四氢呋喃(THF)为溶剂，四丁基氟化胺条件下，脱去叔丁基二甲基硅烷(TBDMS)基团，得到的初产物在以甲醇∶二氯甲烷＝1∶10为淋洗剂的条件下硅胶柱层析纯化得产物得3g。
将3g溶解在乙醚溶液中，向其中通入干燥的氯化氢气体，可以得到其盐酸盐。
在本发明再一优选的实施方案中，上述的结构通式中m＝1，U为空缺，V为空缺时，并进一步优选， R1为
X为NH；Y为
R5为H、C1-C6烷基或者C3-C6环烷基； R2为
H或硝基； R6为H或C1-C6烷基； R7为H或C1-C6烷基； R4为H或C1-C4烷基； R3为苯基； W为CH； n＝0、1或2。
该类化合物可以通过路线4合成。
路线4
如路线4所示，所用的原料4a可买到或参考文献方法(Ping Chen.et al.Tet.Lett.1997，38)制得。
4a与胺反应得4b，反应温度在60-120℃之间，溶剂为异丙醇，所得初产物在甲醇∶二氯甲烷＝1∶15为淋洗剂的条件下进行硅胶柱层析纯化得4b。
4b在4N HCl/1，4-二氧六环的酸性条件下脱去Boc得4c，反应温度在15-40℃之间。
4c在EDCI、HOBt为缩合剂，DIPEA为有机碱的条件下与酸反应，反应温度在15-40℃之间，溶剂为DMF，所得初产物在甲醇∶二氯甲烷＝1∶10为淋洗剂的条件下硅胶柱层析纯化得4d。
将4d溶解在乙醚溶液中，向其中通入干燥的氯化氢气体，可以得到其盐酸盐。
本发明的苄基哌啶类化合物药学上可接受的盐，例如苄基哌啶类化合物与盐酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸等形成的盐。
有益效果 β-分泌酶蛋白的获得及β-分泌酶活性测定方法 实验采用β-分泌酶胞外区蛋白，1-454氨基酸(下文简称BACE1)，为分泌蛋白，将此蛋白的基因构建于pFastBacTM1载体中，C端添加6个组氨酸。通过
(Invitrogen)杆状病毒表达系统获得目的蛋白。
首先将重组质粒转化到大肠杆菌DH10BacTM感受态细胞中，其中包含了杆状病毒穿梭载体，即杆粒，挑取经转位后含有pFastBacTM中目的基因段的重组克隆，培养并抽提重组杆粒。将重组杆粒转染complete TNM-FH培养基培养的Sf9昆虫细胞，培养3-5天后收获含有第一代病毒的培养基，继续转染分别获得第二代、第三代病毒。采用含有第三代病毒的培养基感染Express
无血清培养基培养的High FiveTM昆虫细胞，表达目的蛋白，72小时后收集含有目的蛋白的培养基，有待下一步的纯化。将含有目的蛋白的培养基(25-30mL)在1L的平衡缓冲液(20mM磷酸钠(sodium phosphate)pH8.0，300mM NaCl，10mM咪唑(imidazole))中透析过夜，12000rpm离心15分钟，重复一次，收集上清液。将上清液上样至经平衡缓冲液平衡的金属离子螯合层析柱1mL HiTrapTM chelating HP column(GE Healthcare，LifeSciences)，在洗净杂蛋白后采用洗脱缓冲液(20mM sodium phosphate pH8.0，300mM NaCl，250mM imidazole)洗脱得到目的蛋白即β-分泌酶胞外区(BACE1)，12％聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离鉴定纯化得到的蛋白，纯度为90％左右。
实验使用DABCYL-Ser-Glu-Val-Asn-Leu-Asp-Ala-Glu-Phe-EDANS(Synpep，下简称BS)作为底物，测活反应在384孔微孔板中进行，反应体积为25μl，含有100mM醋酸钠(sodium acetate)(pH4.0)，20μM BS，50nMBACE1，2μl二甲亚砜(DMSO)或溶于DMSO的化合物。室温反应，在多功能读板仪器EnvisionTM(PerkinElmer)中检测荧光信号，激发和吸收波长分别为355nm和460nm，记录并计算得到酶反应初期单位时间荧光信号的增长量，以此代表酶反应初速度，抑制率(inhibition)计算见公式1。
公式1 公式1中υcompound和υDMSO分别代表含有化合物和DMSO的酶反应初速度。
如果待检测化合物在20μg/mL时抑制率大于50％，再进一步稀释7-9个浓度，计算IC50，即酶初速度被抑制一半时化合物的浓度。阳性抑制剂为化合物OM99-2(OM99-2是以八肽[谷氨酸-缬氨酸-天冬酰胺-亮氨酸-丙氨酸-丙氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸]为基础的，用一过渡状态的等配物羟乙烯基代替了亮氨酸-丙氨酸肽键的化合物)。
胆碱酯酶活力测定方法 乙酰胆碱酯酶酶源采用大鼠皮层5％匀浆(用75mmol，pH7.4，4℃磷酸缓冲液作匀浆介质)，实验前按10∶1加4mmol丁酰胆碱酯酶的选择性抑制剂四异丙基焦磷酰胺(iso-OMPA)，37℃保温5分钟。丁酰胆碱酯酶酶源系大鼠血清。用比色法测定乙酰胆碱酯酶(AChE)活力。反应总容量为4ml，内含碘化硫代乙酰胆碱0.3mmol，0.1M pH7.4磷酸钠缓冲液1ml，化合物0.1-0.5ml，加水补至4ml(包括后加酶液量)，于37℃保温5分钟后加入酶液0.1或0.2ml，再保温8分钟后加入1ml 3％十二烷基磺酸钠(SDS)终止反应，最后加1ml0.2％二(3-羧基-4-硝基)苯基二硫化物(即Ellman′s试剂)溶液显色，产生黄色5-硫-2-硝基苯酸阴离子。用752型分光光度计于440nm测定光密度，所有样品均测双管。以未加化合物的测定管光密度作为100％，化合物测定管光密度与之比较，降低的百分率即为酶抑制率。每个化合物均配成10-5mol/L浓度进行初筛，酶抑制率达到60％以上者进行IC50的测定。按照初筛结果选择化合物的七至九个浓度测定其酶抑制率，并以该化合物摩尔浓度的负对数与酶抑制率进行线性回归，求得50％抑制时的摩尔浓度即为该化合物的IC50值。所得部分化合物活性列表如下
“-”表示未测 通过在分子水平上的筛选，发现部分化合物表现出对两种酶都具有较好的活性，尤其是化合物12，15，为进一步研究可能具有改善认知功能，同时缓解AD疾病进展的创新药物提供了有价值的信息。
具体实施例 例1N-[(1S，2(R，S))-1-苄基-2-羟基-3-(1-苄基哌啶-4-氨基)羰基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-(4-氟苯基)乙基]间苯二甲酰胺(化合物1)
将30mg2-(R，S)-羟基-3-(S)-(N-叔丁氧羰氨基)-4-苯丁酸溶解于2mlDMF中，在冰水浴条件下加入20mg EDCI，14mg HOBt，20μl DIPEA，搅拌十分钟后加入4-氨基苄基哌啶20μl，于室温条件下反应过夜。加20ml水稀释DMF溶液，用20ml乙酸乙酯萃取两次，有机相相继用1N稀盐酸，饱和的NaHCO3溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压移除溶剂得粗产物，粗产物通过甲醇∶二氯甲烷＝1∶15为洗脱剂硅胶柱层析进一步纯化。得到的产物在1ml 4NHCl/二氧六环中反应两个小时，减压移除溶剂，得到的粗产物未经纯化直接进行下一步反应。将35mg 5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸溶解于2ml DMF中，在冰水浴条件下加入20mg EDCI，14mg HOBt，20μl DIPEA，搅拌十分钟后，将其慢慢加入上述粗产物反应体系中，于室温条件下反应过夜。加水20ml稀释DMF溶液，用20ml乙酸乙酯萃取两次，有机相相继用1N稀盐酸，饱和的NaHCO3溶液洗，无水Na2SO4干燥，过滤，减压移除溶剂，得粗产物，以甲醇∶二氯甲烷＝1∶10为洗脱剂硅胶柱层析进一步纯化得无定型泡沫状固体17mg，产率25.5％。
LC-MSm/z 744.8[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3Cl)δ8.10(s，0.5H)，8.06(s，0.5H)，7.91(s，0.5H)，7.88(s，0.5H)，7.81(s，0.5H)，7.72(s，0.5H)，7.06-7.60(m，12H)，6.85-6.98(m，2H)，5.20(m，1H)，4.52(br，1H)，4.34(m，0.5H)，4.14(m，0.5H)，3.70(m，2H)，3.59(s，1H)，3.61(s，1H)，3.24(s，1.5H)，3.20(s，1.5H)，2.54-3.16(m，8H)，2.07-2.33(m，2H)，1.82(m，2H)，1.55(d，J＝6.7Hz，3H)。
例2N-[(1S，2(R，S))-1-苄基-2-羟基-3-(1-苄基哌啶-4-甲氨基)羰基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-(4-氟苯基)乙基]间苯二甲酰胺(化合物2)
操作过程如例1，只是用1-苄基哌啶-4-甲胺代替4-氨基苄基哌啶，终产物为无定型泡沫状固体36mg，产率53.0％。
LC-MSm/z 758.8[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3Cl)δ8.27(s，0.5H)，8.26(s，0.5H)，7.95(s，0.5H)，7.89(s，0.5H)，7.88(s，0.5H)，7.76(s，0.5H)，7.03-7.44(m，12H)，6.80-6.98(m，2H)，5.23(m，1H)，4.62(m，1H)，4.35(m，0.5H)，4.12(m，0.5H)，3.52-3.61(m，2H)，2.69-3.29(m，12H)，1.88-2.14(m，2H)，1.24-1.85(m，6H)。
例3N-[(1S，2(R，S))-1-苄基-2-羟基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)羰基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-(4-氟苯基)乙基]间苯二甲酰胺(化合物3)
操作过程如例1，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，终产物为无定型泡沫状固体26mg，产率37.6％。
LC-MSm/z 772.8[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3Cl)δ8.40(s，0.5H)，8.20(s，0.5H)，7.97(s，0.5H)，7.95(s，0.5H)，7.88(s，0.5H)，7.81(s，0.5H)，7.12-7.90(m，12H)，6.86-7.12(m，2H)，5.20(m，1H)，4.62(m，1H)，4.30(m，0.5H)，4.14(m，0.5H)，2.72-3.38(m，14H)，1.18-2.44(m，12H)。
例4N-[(1S，2(R，S))-1-苄基-2-羟基-3-(1-苄基哌啶-4-氨基)羰基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-苯基乙基]间苯二甲酰胺(化合物4)
操作过程如例1，只是用32mg 5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体30mg，产率49.2％。
LC-MSm/z 726.5[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3Cl)δ8.13(s，0.5H)，8.07(s，0.5H)，7.91(s，0.5H)，7.86(s，0.5H)，7.81(s，0.5H)，7.72(s，0.5H)，7.05-7.39(m，15H)，5.22(m，1H)，4.56(m，1H)，4.36(m，0.5H)，4.12(m，0.5H)，3.72(br，2H)，3.58(s，1H)，3.56(s，1H)，3.21(s，1H)，3.17(s，1H)，2.68-3.13(m，18H)，1.62-2.24(m，4H)，1.58(s，1.5H)，1.55(s，1.5H)。
例5N-[(1S，2(R，S))-1-苄基-2-羟基-3-(1-苄基哌啶-4-甲氨基)羰基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-苯基乙基]间苯二甲酰胺(化合物5)
操作过程如例1，只是用1-苄基哌啶-4-甲胺代替4-氨基苄基哌啶，32mg 5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体24mg，产率38.5％。
LC-MSm/z 741.0[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3Cl)δ8.34(s，0.5H)，8.24(s，0.5H)，7.78-8.02(m，3H)，7.07-7.46(m，14H)，5.29(m，1H)，4.63(m，1H)，4.36(m，0.5H)，4.11(m，0.5H)，3.47-3.63(m，2H)，2.69-3.29(m，12H)，1.88-2.14(m，2H)，1.24-1.85(m，6H)。
例6N-[(1S，2(R，S))-1-苄基-2-羟基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)羰基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-苯基乙基]间苯二甲酰胺(化合物6)
操作过程如例1，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，32mg 5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸代替35mg 5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体27mg，产率42.6％。
LC-MSm/z 754.6[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3Cl)δ8.04(s，0.5H)，7.97(s，0.5H)，7.94(s，0.5H)，7.85(s，0.5H)，7.83(s，0.5H)，7.70(s，0.5H)，7.64(m，0.5H)，7.46(m，0.5H)7.01-7.39(m，14H)，5.20(m，1H)，4.44(m，1H)，4.36(m，0.5H)，4.09(m，0.5H)，3.66(m，2H)，3.46(s，1H)，3.42(s，1H)，2.70-3.29(m，12H)，2.00-2.13(m，1H)，1.86(m，2H)，0.80-1.43(m，9H)。
例7N-[(1S，2(R，S))-1-苄基-2-羟基-3-(1-苄基哌啶-4-氨基)羰基丙基]-5-硝基-N’，N’-二丙基间苯二甲酰胺(化合物7)
操作过程如例1，只是30mg 5-硝基-3-(N，N-二丙基氨羰基)苯甲酸代替35mg 5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体23mg，产率35.8％。
LC-MSm/z 644.7[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3Cl)δ8.54(m，1H)，8.25(m，1H)，8.03(m，1H)，7.88(m，1H)，7.08-7.39(m，9H)，4.62(m，1H)，4.20(m，1H)，2.89-3.87(m，13H)，2.31(m，2H)，1.45-1.94(m，6H)，0.66-0.99(m，6H)。
例8N-[(1S，2(R，S))-1-苄基-2-羟基-3-(1-苄基哌啶-4-甲氨基)羰基丙基]-5-硝基-N’，N’-二丙基间苯二甲酰胺(化合物8)
操作过程如例1，只是用1-苄基哌啶-4-甲胺代替4-氨基苄基哌啶，30mg 5-硝基-3-(N，N-二丙基氨羰基)苯甲酸代替35mg 5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体40mg，产率60.9％。
LC-MSm/z 658.7[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3Cl)δ8.58(t，J＝1.7Hz，0.5H)，8.50(t，J＝2.1Hz，0.5H)，8.32(d，J＝9.0Hz，0.5H)，8.20(m，1H)，8.16(m，0.5H)，8.03(m，0.5H)，7.97(d，J＝8.0Hz，0.5H)，7.56(br，0.5H)，7.09-7.46(m，8.5H)，4.61-4.85(m，2H)，4.37(m，0.5H)，4.21(m，0.5H)，3.70-3.92(m，2H)，3.42(t，J＝6.9Hz，2H)，2.77-3.50(m，9H)，2.17(m，2H)，1.43-1.73(m，7H)，0.96(m，3H)，0.74(m，3H)。
例9N-[(1S，2(R，S))-1-苄基-2-羟基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)羰基丙基]-5-硝基-N’，N’-二丙基间苯二甲酰胺(化合物9)
操作过程如例1，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，30mg 5-硝基-3-(N，N-二丙基氨羰基)苯甲酸代替35mg 5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体30mg，产率44.7％。
LC-MSm/z 672.8[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3Cl)δ8.48(s，0.5H)，8.41(s，0.5H)，8.25(s，0.5H)，8.18(m，1H)，8.02(s，0.5H)，7.96(m，1H)，7.10-7.29(m，9H)，5.28(m，1H)，4.57(m，1H)，4.33(m，0.5H)，4.19(m，0.5H)，2.77-3.50(m，13H)，2.16(m，1H)，1.86(q，J＝5.1Hz，2H)，1.11-1.74(m，8H)，0.90-1.03(m，3H)，0.66-0.78(m，3H)。
例10N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-氨基)-2-羟基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-苯乙基]间苯二甲酰胺(化合物10)
26mg(2S，3S)-1，2-环氧-3-(N-叔丁氧羰氨基)-4-苯丙烷溶解于1ml异丙醇中，加入60μl 4-氨基苄基哌啶，于100℃反应24小时。浓缩溶剂后，直接上硅胶柱，以甲醇∶二氯甲烷＝1∶15为洗脱剂分离纯化得到相应的产物。将得到的产物在1ml 4N HCl/二氧六环中反应两个小时，蒸干溶剂得粗产物，该粗产物未经纯化直接进行下一步反应。20mg 5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸溶解于2ml DMF中，在冰浴条件下加入20mg EDCI，14mgHOBt，20μl DIPEA，搅拌十分钟后，将其慢慢加入上述粗产物反应体系中，于室温条件下反应过夜。加水20ml稀释DMF溶液，用乙酸乙酯20ml萃取两次，有机相分别用1N稀盐酸洗，饱和的NaHCO3溶液洗，无水Na2SO4干燥，过滤，减压移除溶剂，得粗产物，以甲醇∶二氯甲烷＝1∶10为洗脱剂进行硅胶柱层析进一步纯化得无定型泡沫状固体14mg，产率39.3％。
LC-MSm/z 712.6[M+H]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.00(m，1H)，7.96(m，1H)，7.78(m，1H)，7.30(m，15H)，5.22(q，J＝7.0，14.1Hz，1H，)，4.27(m，1H)，3.79(m，1H)，3.53(s，2H)，3.32(s，3H)，3.22(m，1H)，2.79(m，9H)，2..07(m，2H)，1.91(m，2H)，1.56(d，J＝7.0Hz，3H)，1.48(m，2H).13C NMR(100MHz，CDCl3)166.396，164.707，143.333，141.912，137.873，137.791，135.773，135.468，129.024，128.473，128.409，128.140，127.607，127.156，127.034，126.410，126.268，123.900，70.073，62.700，55.331，51.888，49.765，48.057，37.669，36.335，35.228，31.352，21.888.[α]D20＝-56.5°(c1.1000，CH2Cl2)。
例11N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-甲氨基)-2-羟基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-苯乙基]间苯二甲酰胺(化合物11)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-甲胺代替4-氨基苄基哌啶，得无定型泡沫状固体12mg，产率33.1％。
LC-MSm/z 726.6[M+H]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.03(t，J＝1.3Hz，1H)，7.96(t，J＝2.1Hz，1H)，7.78(t，J＝2.0Hz，1H)，7.30(m，15H)，5.48(s，1H)，5.22(q，J＝7.0，14.1Hz，1H)，4.27(m，1H)，3.81(m，1H)，3.52(s，2H)，3.30(s，3H)，3.23(m，1H)，2.83(m，8H)，2.58(m，2H)，2..02(m，2H)，1.75(m，2H)，1.57(d，，J＝7.0Hz，4H)，1.27(m，2H).13C NMR(100MHz，CD3OD)166.457，164.786，143.416，142.01 8，137.742，137.650，135.811，135.068，129.289，129.152，128.596，128.519，128.232，127.850，127.276，127.203，126.565，126.374，124.106，69.986，63.036，54.840，54.834，52.894，51.359，49.906，37.796，36.111，35.605，34.244，29.798，22.033.[α]D20＝-42.4°(c 0.9000，CH2Cl2)。
例12N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-苯乙基]间苯二甲酰胺(化合物12)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，得无定型泡沫状固体20mg，产率54.1％。
LC-MSm/z 740.5[M+H]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.02(m，1H)，7.96(m，1H)，7.78(m，1H)，7.30(m，15H)，5.21(m，1H)，4.25(m，1H)，3.79(m，1H)，3.50(s，2H)，3.32(s，3H)，3.17(m，1H)，2.78(m，10H)，2.01(m，2H)，1.66(m，2H)，1.50(m，5H)，1.28(m，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)166.401，164.802，143.365，141.908，137.914，137.809，135.778，135.218，129.247，129.092，12.541，128.459，128.131，127.698，127.229，127.006，126.492，126.332，124.132，70.114，63.264，55.103，53.486，51.159，49.834，47.133，37.760，36.030，35.360，34.818，33.470，31.876，21.975；[α]D20＝-34.0°(c0.3000，CH2Cl2)。
例13N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-氨基)-2-羟基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-(4-氟苯基)乙基]间苯二甲酰胺(化合物13)
操作过程如例10，只是用5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体24mg，产率65.8％。
LC-MSm/z 730.8[M+H]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.05(m，1H)，7.96(m，1H)，7.80(m，1H)，7.41(m，2H)，7.25(m，12H)，5.22(q，J＝7.2，13.7Hz，1H，)，4.27(m，1H)，3.81(m，1H)，3.51(s，2H)，3.31(s，3H)，3.23(m，1H)，2.79(m，8H)，2.67(m，1H)，2..09(m，2H)，1.92(m，2H)，1.54(d，J＝7.0Hz，3H)，1.48(m，2H).13C NMR(100MHz，CD3OD)159.197，158.190，155.002，152.584，134.125，131.625，130.381，128.774，127.817，127.599，121.232，120.836，119.929，119.838，119.706，119.624，119.314，119.005，117.893，116.454，62.873，54.197，47.056，46.587，45.311，43.462，40.834，40.479，28.788，27.905，26.388，22.244，21.993，12.657.[α]D20＝(c，CH2Cl2)。
例14N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-甲氨基)-2-羟基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-(4-氟苯基)乙基]间苯二甲酰胺(化合物14)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-甲胺代替4-氨基苄基哌啶，用5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体15mg，产率40.4％。
LC-MSm/z 744.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.01(m，1H)，7.95(m，1H)，7.78(m，1H)，7.41(m，2H)，7.24(m，12H)，5.22(q，J＝7.0，14.0Hz，1H)，4.27(m，1H)，3.77(m，1H)，3.49(s，2H)，3.31(s，3H)，3.24(m，1H)，2.87(m，8H)，2.49(m，2H)，1.99(m，2H)，1.71(m，2H)，1.57(m，4H)，1.28(m，2H).[α]D20＝-27.8°(c 0.4000，CH2Cl2)。
例15N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-(4-氟苯基)乙基]间苯二甲酰胺(化合物15)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体20mg，产率52.8％。
LC-MSm/z 758.6[M+H]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.05(m，1H)，7.97(m，1H)，7.80(m，1H)，7.42(m，2H)，7.30(m，12H)，5.48(s，1H)，5.22(m，1H)，4.26(m，1H)，3.87(m，1H)，3.52(s，2H)，3.31(s，3H)，3.30(m，1H)，2.92(m，10H)，2.03(m，2H)，1.71(m，2H)，1.57(m，5H)，1.28(m，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)166.328，164.688，162.962，160.521，141.972，139.239，138.100，137.800，135.659，135.318，129.160，129.024，128.411，128.086，128.040，127.958，127.580，126.924，126.492，124.023，115.315，115.101，70.123，63.278，55.303，53.372，51.209，49.137，47.242，37.706，36.152，35.360，35.223，33.570，31.994，21.939；[α]D20＝-53.1°(c 0.5500，CH2Cl2)。
例16N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’，N’-二丙基间苯二甲酰胺(化合物16)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用5-(甲基甲磺基)氨基-3-(N’，N’-二丙基)氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体14mg，产率38.9％。
LC-MSm/z 720.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.69(m，1H)，7.56(m，1H)，7.49(m，1H)，7.28(m，10H)，5.30(m，1H)，4.35(m，1H)，3.69(m，1H)，3.47(m，4H)，3.30(s，3H)，3.13(m，2H)，3.01(m，2H)，2.83(m，7H)，2.68(m，2H)，1.93(m，2H)，1.64(m，4H)，1.48(m，3H)，1.28(m，4H)，0.97(s，3H)，0.73(s，3H).[α]D22＝-15.6°(c 0.4500，CH2Cl2)。
例17N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[4-氟苯甲基]间苯二甲酰胺(化合物17)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用5-(甲基甲磺基)氨基-3-(4-氟苯甲基氨羰基)苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体13mg，产率34.9％。
LC-MSm/z 744.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.07(m，1H)，7.92(m，2H)，7.80(m，1H)，7.30(m，1H)，7.26(m，10H)，6.97(m，2H)，4.54(m，2H)，4.35(m，1H)，3.76(m，1H)，3.45(s，2H)，3.28(s，3H)，3.00(m，3H)，2.84(m，6H)，2.63(m，2H)，1.88(m，2H)，1.56(m，2H)，1.43(m，2H)，1.25(m，3H).[α]D22＝-47.7°(c 0.7500，CH2Cl2)。
例18N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-异丁基间苯二甲酰胺(化合物18)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用5-(甲基甲磺基)氨基-5-(异丁基氨羰基)苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体16mg，产率46.3％。
LC-MSm/z 692.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.17(m，2H)，7.90(m，1H)，7.80(m，1H)，7.30(m，1H)，7.26(m，8H)，4.34(m，1H)，3.90(m，1H)，3.46(s，3H)，3.33(s，3H)，3.21(m，2H)，2.83(m，10H)，1.90(m，3H)，1.54(m，4H)，1.25(m，2H)，0.95(s，3H)，0.93(s，3H).[α]D22＝-44.6°(c 0.8500，CH2Cl2)。
例19N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-5-硝基-N’-[(1R)-1-(4-氟苯基)乙基]间苯二甲酰胺(化合物19)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用5-硝基-3-(R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体18mg，产率51.8％。
LC-MSm/z 696.7[M+H]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.62(s，1H)，8.53(s，1H)，8.47(s，1H)，7.54(m，1H)，7.26(m，11H)，6.95(m，2H)，5.30(m，1H)，4.39(br，1H)，3.90(br，1H)，3.46(s，2H)，2.82(m，8H)，1.89(m，2H)，1.58(d，J＝6.5Hz，6H)，1.47(m，1H)，1.25(m，3H).[α]D22＝-40.2°(c 0.4500，CH3OH)。
例20N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-5-硝基-N’-[(1R)-1-苯乙基]间苯二甲酰胺(化合物20)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用5硝基-3-(R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体14mg，产率41.4％。
LC-MSm/z 678.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.65(m，1H)，8.49(m，1H)，8.43(m，1H)，8.34(d，J＝8.3Hz，1H)，7.30(m，13H)，7.03(d，J＝7.5Hz，1H)，5.29(m，1H)，4.42(m，1H)，3.76(m，1H)，3.46(s，2H)，3.02(m，1H)，2.82(m，5H)，2.64(m，2H)，1.88(m，2H)，1.59(m，5H)，1.41(m，2H)，1.26(m，3H).[α]D22＝-45.6°(c 0.5500，CH3OH)。
例21N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-5-硝基-N’，N’-二丙基间苯二甲酰胺(化合物21)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用5-硝基-3-(N’，N’-二丙基氨羰基)苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体16mg，产率48.7％。
LC-MSm/z 658.6[M+H]+；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.61(m，1H)，8.29(m，1H)，8.14(m，1H)，7.30(m，10H)，4.38(m，1H)，3.83(m，1H)，3.46(m，1H)，3.42(s，3H)3.20(m，3H)，2.78(m，7H)，1.90(m，2H)，1.22(m，11H)，0.95(m，3H)，0.72(m，3H).[α]D22＝-27.1°(c 0.3500，CH2Cl2)。
例22N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-N’-[(1R)-1-苯乙基]间苯二甲酰胺(化合物22)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用3-(R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体14mg，产率44.3％。
LC-MSm/z 633.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.10(s，1H)，7.86(d，J＝7.8Hz，1H)，7.70(d，J＝10.8Hz，1H)，7.47(d，J＝4.6Hz，1H)，7.30(m，13H)，6.85(d，J＝7.3Hz，1H)，5.30(m，1H)，4.39(m，1H)，3.78(m，1H)，3.46(s，2H)，2.98(d，J＝6.9Hz，2H)，2.81(m，4H)，2.64(m，2H)，1.87(m，2H)，1.58(m，5H)，1.44(m，2H)，1.25(m，3H).[α]D22＝-34.0°(c 0.7500，CH2Cl2)。
例23N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-N’-[(1R)-1-(4-氟苯乙基)]间苯二甲酰胺(化合物23)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用3-(R)-1-(4-氟苯乙基)氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体15mg，产率46.2％。
LC-MSm/z 651.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(s，1H)，7.80(d，J＝7.7Hz，1H)，7.65(d，J＝7.7Hz，1H)，7.55(d，J＝8.9Hz，2H)，7.24(m，11H)，6.91(m，3H)，5.23(m，1H)，4.31(m，1H)，3.72(m，1H)，3.39(s，2H)，2.89(d，J＝6.9Hz，2H)，2.78(m，4H)，2.58(m，2H)，1.81(m，2H)，1.50(d，J＝7.0Hz，5H)，1.36(m，2H)，1.17(m，3H).[α]D22＝-52.9°(c 0.8500，CH2Cl2)。
例24N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-N’，N’-二丙基间苯二甲酰胺(化合物24)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用3-(N，N-二丙基氨羰基)苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体13mg，产率42.5％。
LC-MSm/z 613.6[M+H]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.70(m，1H)，7.56(m，1H)，7.49(m，2H)，7.25(m，10H)，4.26(m，1H)，3.84(m，1H)，3.51(s，2H)，3.46(m，2H)，3.27(m，1H)，3.13(m，2H)，2.86(m，7H)，2.02(m，2H)，1.72(m，4H)，1.51(m，4H)，1.28(m，3H)，0.99(t，J＝7.3Hz，3H)，0.69(t，J＝7.3Hz，3H)。
例25N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-N’-环戊基间苯二甲酰胺(化合物25)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用3-(N-环丁基氨羰基)苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体10mg，产率34.4％。
LC-MSm/z 597.7[M+H]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.08(M，1H)，7.91(m，1H)，7.76(m，1H)，7.48(m，1H)，7.31(m，10H)，5.48(s，1H)，4.28(m，2H)，3.86(m，1H)，3.53(s，2H)，3.26(m，1H)，2.88(m，8H)，2.04(m，4H)，1.60(m，15H).[α]D22＝-27.0°(c 0.2500，CH2Cl2)。
例26N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-N’-异丁基间苯二甲酰胺(化合物26)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用3-(N-异丁基氨羰基)苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体11mg，产率37.7％。
LC-MSm/z 585.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.99(m，1H)，7.80(m，1H)，7.66(m，1H)，7.55(m，1H)，7.31(m，1H)，7.22(m，8H)，6.58(m，1H)，4.33(m，1H)，3.67(m，1H)，3.39(s，2H)，3.17(t，J＝6.8Hz，2H)，2.87(m，2H)，2.76(m，4H)，2.53(m，2H)，1.81(m，3H)，1.53(m，2H)，1.33(m，2H)，1.18(s，3H)，0.89(d，J＝6.7Hz，3H).[α]D22＝-30.6°(c 0.5000，CH2Cl2)。
例27N-[(1S，2R)-1-苄基-3-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)-2-羟基丙基]-N’-3-三氟甲基苯基间苯二甲酰胺(化合物27)
操作过程如例10，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，用3-(N-3-三氟甲基苯基)氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体11mg，产率37.7％。
LC-MSm/z 673.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.26(s，1H)，8.21(d，J＝7.9Hz，1H)，8.10(s，1H)，7.91(d，J＝8.5Hz，1H)，7.73(m，2H)，7.40(m，2H)，7.28(m，9H)，7.14(m，1H)，5.48(s，1H)，4.26(m，1H)，3.87(m，1H)，3.50(s，2H)，3.43(m，1H)，2.89(m，7H)，2.35(m，1H)，2.01(m，2H)，1.54(m，6H).[α]D22＝(c 0.5000，CH2Cl2)。
例28N-[(1S，2S，4R)-1-异丁基-2-羟基-4-(1-苄基哌啶-4-氨基)羰基戊基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-(4-氟苯基)乙基]间苯二甲酰胺(化合物28)
化合物1.4g(3R，5S，1’S)-5-[1’-[(叔丁氧羰基)氨基]-3’-甲基丁基]-3-甲基二氢呋喃-2(3H)-酮加至含4mL三氟醋酸20mL二氯甲烷溶液中反应35分钟，抽掉溶剂，加入10mL水，滴加饱和碳酸氢钠水溶液至溶液体系呈碱性，30mL×3乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗涤两遍，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得0.59g去掉BOC保护基的化合物，不经纯化直接进行下步反应。取上步得到的化合物0.233g，溶于8mL无水DMF中，冰水浴冷却，加入化合物5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯基)乙氨羰基苯甲酸0.496g，HOBt 0.179g和DIPEA 0.22mL，搅拌10分钟后加入EDCI 0.254g，自然升温至室温，搅拌过夜，向反应体系中加入100mL乙酸乙酯，1N稀盐酸洗涤三遍，水洗涤一遍，饱和碳酸氢钠洗涤三遍，饱和食盐水洗涤两遍，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得白色泡沫状固体产物0.656g，产率24.3％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.12(s，1H)，7.96(s，2H)，7.32(m，2H)，7.01(m，2H)，6.83(br，1H)，6.81(br，1H)，5.21(m，1H)，4.62(m，1H)，4.48(m，1H)，3.38(s，3H)，2.84(s，3H)，2.62(m，1H)，2.40(m，1H)，1.99(m，1H)，1.68(m，1H)，1.53(d，J＝7.0Hz，3H)，1.44(m，1H)，1.25(d，J＝7.2Hz，3H)，0.94(d，J＝6.4Hz，6H)。
取上步化合物0.640g溶于5mL四氢呋喃中，冰水浴冷却下，滴加1N氢氧化锂水溶液6mL，加毕，自然升温至室温，搅拌过夜，TLC板显示完全转化后，蒸掉四氢呋喃，剩余溶液冰水浴冷却，用25％柠檬酸酸化至pH至3～4，乙酸乙酯10ml萃取三次，合并有机相，水洗一遍，饱和食盐水洗涤两遍，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得五元环开环的化合物，为白色泡沫状固体0.66g(不太稳定，室温下放置会慢慢转变成上步反应物)，不经进一步纯化直接进行下一步反应。
将上步产物0.66g溶于9mL无水DMF中，加入咪唑1.71g，叔丁基二甲基氯化硅1.892g，室温反应26小时后，加入6mL甲醇，搅拌1小时，加入30mL 25％柠檬酸水溶液，乙酸乙酯10ml提取三遍，合并有机层，纯水和饱和食盐水各洗涤一遍，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，甲醇∶二氯甲烷＝1∶20为洗脱剂进行硅胶柱层析分离得羟基被保护的白色泡沫状固体产物0.603g.产率79.9％。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ9.01(broad d，J＝7.6Hz，1H)，8.32(broadd，J＝7.9Hz，1H)，8.26(s，1H)，7.98(s，1H)，7.96(s，1H)，7.42(m，2H)，7.16(m，2H)，5.16(m，1H)，4.08(m，1H)，3.72(m，1H)，3.31(s，3H)，3.02(s，3H)，2.45(m，1H)，1.92(m，1H)，1.58(m，2H)，1.50(d，J＝7.0Hz，3H)，1.40-1.22(m，2H)，1.11(d，J＝7.1Hz，3H)，0.93(d，J＝8.2Hz，3H)，0.86(s，9H)，0.82(d，J＝6.3Hz，3H)，0.16(s，3H)，0.08(s，3H)。
将上步化合物80mg溶于1mL DMF中，冰水浴冷却，加入4-氨基苄基哌啶0.027mL，DIPEA 0.022mL和HOBt 18mg，搅拌10分钟后，加入EDCI25mg，室温反应过夜，向反应体系中加入30mL乙酸乙酯，用1N稀盐酸洗涤三遍，水洗涤一遍，饱和碳酸氢钠溶液洗涤三遍，饱和食盐水洗涤两遍，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到产物； 将上步得到的产物溶于1mL四氢呋喃，加入1.0M四丁基氟化铵四氢呋喃溶液0.3mL，反应一天，蒸掉溶剂，残余物用甲醇∶二氯甲烷＝1∶10为展开剂，制备硅胶薄板层析分离，得无定型泡沫状固体56mg，产率56.0％。
LC-MS(m/z)752.7[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.25(s，1H)，8.02(s，2H)，7.45-7.32(m，7H)，7.06(m，2H)，5.22(q，J＝6.9Hz，1H)，4.19(m，1H)，3.80(s，2H)，3.62(m，2H)，3.38(s，3H)，3.29(m，2H)，3.10(m，2H)，2.96(s，3H)，2.65(m，1H)，2.38(m，2H)，1.72-1.40(m，7H)，1.12(d，J＝7.2Hz，3H)，1.01(d，J＝7.3Hz，3H)，0.99(d，J＝7.3Hz，3H)，0.94(d，J＝6.2Hz，3H)。
例29N-[(1S，2S，4R)-1-异丁基-2-羟基-4-(1-苄基哌啶-4-甲氨基)羰基戊基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-(4-氟苯基)乙基]间苯二甲酰胺(化合物29)
操作过程如例28，只是用1-苄基哌啶-4-甲胺代替4-氨基苄基哌啶，得无定型泡沫状固体42mg，产率48.0％。
LC-MS(m/z)766.8[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.31(s，1H)，8.02(s，2H)，7.58-7.35(m，7H)，7.02(m，2H)，5.22(q，J＝7.1Hz，1H)，4.18(m，1H)，4.01(m，2H)，3.60(m，1H)，3.38(s，3H)，3.25(m，4H)，2.99(s，3H)，2.82(m，1H)，2.72-2.63(m，3H)，1.92(m，1H)，1.70-1.48(m，6H)，1.12(d，J＝6.6Hz，3H)，1.02(d，J＝7.2Hz，3H)，0.93(d，J＝6.5Hz，3H)，0.88(d，J＝6.4Hz，3H)。
例30N-[(1S，2S，4R)-1-异丁基-2-羟基-4-(1-苄基哌啶-4-乙氨基)羰基戊基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-(4-氟苯基)乙基]间苯二甲酰胺(化合物30)
操作过程如例28，只是用1-苄基哌啶-4-乙胺代替4-氨基苄基哌啶，得无定型泡沫状固体47mg，产率52.7％。
LC-MS(m/z)780.7[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.25(s，1H)，8.03(s，1H)，8.01(s，1H)，7.43(m，2H)，7.32(m，5H)，7.02(m，2H)，5.23(q，J＝7.1Hz，1H)，4.21(m，1H)，3.63(s，2H)，3.58(m，1H)，3.36(s，3H)，3.16(m，2H)，2.98(s，3H)，2.92(m，2H)，2.61(m，1H)，2.18(m，2H)，1.90(m，2H)，1.62(m，4H)，1.58(d，J＝7.0Hz，3H)，1.45-1.23(m，6H)，1.13(d，J＝7.3Hz，3H)，0.95(d，J＝6.6Hz，6H)。
例31N-[(1S，2S，4R)-1-异丁基-2-羟基-4-(1-苄基哌啶-4-氨基)羰基戊基]-5-[(甲基甲磺基)氨基]-N’-[(1R)-1-(4-氟苯基)乙基]间苯二甲酰胺(化合物31)
操作过程如例28，只是5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-苯基乙基氨羰基苯甲酸代替5-(甲基甲磺基)氨基-3-(1R)-1-(4-氟苯基)乙基氨羰基苯甲酸，得无定型泡沫状固体50mg，产率59.6％。
LC-MS(m/z)734.6[M+H]+；1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.26(s，1H)，8.03(s，1H)，7.99(s，1H)，7.42-7.21(m，10H)，5.27(q，J＝7.1Hz，1H)，4.20(m，1H)，3.79(s，2H)，3.58(m，2H)，3.38(s，3H)，3.26(m，2H)，3.09(m，2H)，2.98(s，3H)，2.62(m，1H)，2.44(m，2H)，1.90(m，2H)，1.75-1.45(m，5H)，1.13(d，J＝7.1Hz，3H)，1.01(d，J＝7.6Hz，3H)，0.95(d，J＝6.6Hz，3H)，0.94(d，J＝6.5Hz，3H)。
权利要求
1、具有如下结构通式的苄基哌啶类化合物或其药学上可接受的盐
其中
R1为
X为NH、O、CH2或空缺；Y为
CH2或空缺；
R5为H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C1-C6烷氧基；
R2为
(Z＝0-6)、H、C1-C4直链或支链烷基、硝基、氨基、氰基、羟基、甲氧基、三氟甲基、乙酰胺基或卤素；
R6为H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C1-C6烷氧基；
R7为H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C1-C6烷氧基；
R3为H、C1-C6直链或支链烷基、C3-C6环烷基、芳香环或者含有卤素或羟基取代的芳香环；
W为CH或N；
U为CHR8或空缺；
R8为H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C1-C6烷氧基；
V为
或空缺；
R4为H、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、硝基、氨基、氰基、羟基、三氟甲基、乙酰胺基或卤素；
m＝0-5，n＝0-5；
且化合物结构中有手性中心未具体标明的，包括所有单一异构体或其混合物。
2、根据权利要求1所述的苄基哌啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，m＝0，U为空缺时，V为
3、根据权利要求2所述的苄基哌啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，
R1为
X为NH；Y为
R5为H或C1-C6烷基；
R2为
或硝基；
R6为H或C1-C6烷基；
R7为H或C1-C6烷基；
R4为H或C1-C4烷基；
R3为苯基；
W为CH；
n＝0、1或2。
4、根据权利要求1所述的苄基哌啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，m＝1，U为空缺时，V为
5、根据权利要求1所述的苄基哌啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，m＝1，U为CHCH3时，V为
6、根据权利要求5所述的苄基哌啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，
R1为
X为NH；Y为
R5为H或C1-C6烷基；
R2为
R6为H或C1-C6烷基；
R7为H或C1-C6烷基；
R4为H或C1-C4烷基；
R3为H或C1-C6直链或支链烷基；
W为CH；
n＝0、1或2。
7、根据权利要求1所述的苄基哌啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，m＝1，U为空缺时，V为空缺。
8、根据权利要求7所述的苄基哌啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，
R1为
X为NH；Y为
R5为H、C1-C6烷基或者C3-C6环烷基；
R2为
H或硝基；
R6为H或C1-C6烷基；
R7为H或C1-C6烷基；
R4为H或C1-C4烷基；
R3为苯基；
W为CH；
n＝0、1或2。
9、根据权利要求1所述的苄基哌啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的苄基哌啶类化合物为如下化合物之一
10、如权利要求2或3所述的苄基哌啶类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤
1a在1-乙基-3-(3-二甲基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDCI)、1-羟基-苯并-三氮唑为缩合剂(HOBt)，N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)为有机碱的条件下与胺反应得1b，反应温度在15-40℃之间，溶剂为N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；
1b在4N HCl/1，4-二氧六环的酸性条件下脱去Boc得1c；
1c在EDCI、HOBt为缩合剂，DIPEA为有机碱的条件下与酸反应得1d，反应温度在15-40℃之间，溶剂为DMF；
1d初产物可通过甲醇∶二氯甲烷＝1∶10的洗脱剂进行硅胶柱层析分离纯化。
11、如权利要求4所述的苄基哌啶类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤
2a在EDCI、HOBt为缩合剂，DIPEA为有机碱的条件下与胺反应得2b，反应温度在15-40℃之间，溶剂为DMF；
2b在碱性条件下脱去芴甲氧羰基得2c，碱可用20％哌啶DMF溶液，反应温度在15-40℃之间；
2c在EDCI、HOBt为缩合剂，DIPEA为有机碱的条件下与相应的酸反应得2d，反应温度在15-40℃之间，溶剂为DMF；
产物2d可通过甲醇∶二氯甲烷＝1∶10为淋洗剂进行硅胶柱层析分离纯化。
12、如权利要求5或6所述的苄基哌啶类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤
3a在30％三氟乙酸的二氯甲烷酸性溶液条件下脱去Boc得3b，反应温度在15-40℃之间；
3b在以DMF为溶剂，EDCI为缩合剂，以DIPEA为碱的条件下与相应的酸反应得3c，反应温度在15-40℃之间；
3c在1N氢氧化锂的碱性条件下开环，反应温度在15-40℃之间，产物用10％柠檬酸溶液调节pH值到3左右，以乙酸乙酯萃取，有机相水洗，无水硫酸钠干燥，减压移除溶剂得3d；
3d在咪唑为碱，DMF为溶剂的条件下与叔丁基二甲基氯硅烷反应得到初产物，反应温度在15-40℃之间；得到的初产物在以甲醇∶二氯甲烷＝1∶20为洗脱剂的条件下硅胶柱层析纯化得产物3e；
3e在EDCI、HOBt为缩合剂，DIPEA为有机碱的条件下与胺反应得3f，反应温度在15-40℃之间，溶剂为DMF；
3f在以四氢呋喃为溶剂，四丁基氟化胺条件下，脱去叔丁基二甲基硅烷基团，得到的初产物在以甲醇∶二氯甲烷＝1∶10为淋洗剂的条件下硅胶柱层析纯化得产物得3g。
13、如权利要求7或8所述的苄基哌啶类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤
4a与胺反应得4b，反应温度在60-120℃之间，溶剂为异丙醇，所得初产物在甲醇∶二氯甲烷＝1∶15为洗脱剂的条件下进行硅胶柱层析纯化得4b；
4b在4N HCl/1，4-二氧六环的酸性条件下脱去Boc得4c，反应温度在15-40℃之间；
4c在EDCI、HOBt为缩合剂，DIPEA为有机碱的条件下与酸反应，反应温度在15-40℃之间，溶剂为DMF，所得初产物在甲醇∶二氯甲烷＝1∶10为洗脱剂的条件下硅胶柱层析纯化得4d。
14、如权利要求1所述的苄基哌啶类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗早老性痴呆疾病药物中的应用。
15、根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述的苄基哌啶类化合物或其生理可接受的盐为β-分泌酶和乙酰胆碱酯酶双重抑制剂。
全文摘要
本发明公开了结构式如下的苄基哌啶类化合物及其制备方法和用途。通过生物活性测试证明，该类化合物具有明显的抑制β-分泌酶的活性，同时证实对乙酰胆碱酯酶也有明显的抑制作用。因此，本发明的苄基哌啶类化合物可作为对β-分泌酶和乙酰胆碱酯酶有双重抑制作用的抑制剂而用于预防或对症治疗老年性痴呆。
文档编号C07D211/58GK101348456SQ200710043910
公开日2009年1月21日 申请日期2007年7月17日 优先权日2007年7月17日
发明者沈竞康, 佳 李, 章海燕, 朱义平, 坤 肖, 马兰萍, 虞海平, 维 王, 昕 王 申请人:中国科学院上海药物研究所