专利名称：：多肽水合盐类化合物及其在抗抑郁方面的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及新型多肽水合盐类化合物以及在抗抑郁方面的应用，属于抗抑郁药品领域。
背景技术：
：随着人类社会的发展和不断加快的生活节奏，随着多种应激因素的加剧，抑郁症已成为现代社会的常见病、高发病，抑郁患者的人数越来越呈上升趋势，一般认为内源性抑郁是遗传决定的生物化学失调，它使人们不能应付紧张压力。经典的抗抑郁药物尽管疗效肯定，但毒副作用大，尤其是抗胆碱能和心血管系统的副反应等，常使病人难以耐受长期治疗，且约30%的重性抑郁患者和约5oy。的非典型抑郁患者无效。单胺氧化酶抑制剂由于缺乏选择性以及对酶的不可逆性抑制，导致治疗时肝脏的毒性和高血压危象而使临床应用受限。因此研究开发毒副作用小，耐受性好的抗抑郁新药成为近几十年来的热点。但是，多肽水合盐类化合物以及其在抗抑郁方面的应用及其相关研究还没有才艮道，此方向的研究没有被广泛开展。
发明内容本发明在于提供了新的抗抑郁多肽水合盐类化合物以及这些化合物用于抗抑郁。本发明第一方面涉及通式为x-AAl-AA2-AA3-AA4-AA5-ymH20z的多肽水合盐类化合物。其中x表示1-3个碳原子的酰基；AA1为Trp、Tyr、Ala、Phe、Phe衍生物、Pro、脱氬Pro氨基酸基团；AA2为Trp、0rn、Lys、Leu、Arg、Ile、Pro、脱氪-Pro、Tyr、Phe、Phe衍生物的氨基酸基团；AA3为Gly、Ala、Tyr、Trp、Leu、Ile、Arg、Pro、脱氢-Pro氨基酸基团；AA4为不存在或Trp、Tyr、Gly、Leu、Ile氨基酸基团；AA5为不存在或Gly、Trp;y表示羧基、羟基烷基、氨基甲酰基、烷基氨基曱酰基和烷氧基羰基。m表示水分子的个数，m的取值范围为1《m《4;z表示盐酸、疏酸、磷酸、曱酸、乙酸、三氟醋酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、曱石黄酸、草酸。根据该发明，多肽水合盐类化合物包括下面化合物Ac-Pro-Trp-Gly-NH2mH20z(1)Ac-顺-或反-4-0H-Pro-Ile-Gly-NH2mH20z(2)Ac-顺-或反-4-0H-Pro-Arg-Gly-NH2mH20z(3)Ac-Pro-Arg-Ala-NH2mH20z(4)Ac-顺-或反-4-0H-Pro-Arg-Ala-NH2mH20z(5)Ac-Pro-Arg-Tyr-NH2mH20z(6)Ac-顺-或反-4-0H-Pro_Arg-Tyr-NH2mH20z(7)Ac-3，4-脱氬-Pro-D-Arg-Gly-Trp-NH2mH20z(8)Ac-顺-或反-4-OH-Pro-D-Arg-Gly-Trp-NH2mH20z(9)Ac-顺-或反-4-0H-Pro-Leu-Gly-Trp-亂mH20z(10)Ac-顺-或反-4-OH-Pro-Ile-Gly-Trp-NH2mH20z(11)Ac扁-Pro--lie-Gly-Trp-NH2mH20z(12)Ac--4-F--Phe-顺-或反-陽4-0H-Pro-Leu--Gly-NH2mH20z(13)Ac-.4-F--Phe--顺-或反-4-OH-Pro-Ile-Gly-NH2mH20z(14)Ac-4-F--Phe--Pro—Leu-Gly-NH2mH20-z(15)Ac-.Tyr--Tyr--Pro-Leu-Gly-NH2mH20z(16)Ac-Phe--Tyr--Pro-Leu-Gly-NH2mH20z(17)Ac-.4—F--Phe--顺-或反+0H—Pro-Arg一Gly-Trp-NH2mH20z5顺-或反-4-0H-Pro-Leu-Gly-Trp-NHmH20z2顺-或反-4-OH-Pro-Ile-Gly-Trp-NH2mH20z-Trp-Gly-Trp-NH2mH20z(21).顺-或反-4-OH-Pro-11e-Gly-Trp-NH2mH20z顺-或反+OH-Pro-Leu-Gly-Trp-NH2mH20z-顺-或反+0H-Pro-Arg-Gly-Trp-NH2mH20z-顺一或反_4—OH-Pro-Arg-Gly—Trp—NH2mH20z(18)Ac-4-F-Phe-(19)Ac-4-F-Phe-(20)Ac-Tyr—Pro-Ac+F-Phe-(22)Ac-4-F-PheH(23)Ac-3-F-Phe-J(24)Ac-2-F-PheH(25)Ac-4-n-Phe-顺-或反-4-0H-Pro-Arg-Gly-Trp-NH2mH20z(26)Ac+F-Phe-顺-或反-4-0H-Pro-His-Gly-Trp-NH2mH20z(27)Ac-4-F-Phe-3，4-脱氢-Pro-Ile-Gly-Trp-NH2mH20z(28)Ac-4-F-Phe-3，4-脱氪-Pro-Arg-G1y-Trp-NH2mH20z(29)这些多肽以水合盐的形式存在，无机盐选自盐酸、硫酸、磷酸；有机盐选自曱酸、乙酸、三氟醋酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、曱磺酸、草酸。这些新型的多肽水合盐类化合物具有很好的抗忧郁药效作用，可用于抑郁病人的治疗。现有领域抗抑郁方面还没有多肽类化合物的应用。本发明开发了多肽水合盐以及其在抗抑郁方面的应用，本发明产品药用效价比较高，有特异性，毒性反应比较弱，在体内不容易积聚，和其他药物的相互作用比较少，与身体的亲和性比较好，具有分子的认知性。6具体实施方法""F面歹,'j举的买^例对本发明力口以进——一步明，Y旦这些实施例并不意味着对本发明加以任何限制。实施例1Ac-反-4-0H-Pro-Arg-Tyr-NH2(7)的制备方法。(a)称取Fmoc-Rink-MBHA树月旨(负载量0.65mmol/g)1.Og,置于装有砂心板硅烷化的玻璃反应器中，加入15mlDMF溶胀树脂30min。(b)抽滤掉DMF,在树脂中加入15ml浓度为20。/。的哌啶/DMF,轻《敖震荡下反应5min,抽滤掉反应液后，再加入15ml浓度为20y。的咪p定/DMF,轻孩t震荡下反应15min,抽去反应液。(c)用DMFx2、MeOHx2、DMFx2-洗-条树月旨，取出少量树月旨》文人小玻璃试管中，加入茚三酮检测试剂各一滴，ll(TC下反应5min,溶液和树脂呈深兰色，说明脱除Fmoc完全。(d)称取Fmoc-Tyr(But)-OH氨基酸0.90g，,t0.27g，溶于10mlDMF中，加入到反应器中，然后加入0.304ml的DIC,震荡反应40min。(e)用DMFx2、MeOHx2、DMFx2^^条#月旨，，出少J:^月旨;^入小玻璃试管中，加入茚三酮4企测试剂各一滴，110。C下反应5min,溶液和树脂呈淡黄色，说明反应完全。(f)重复上述(b)-(e)步骤，将Arg和反-4-OH-Pro偶联到树脂上，称重分别为1.27g和0.69g。(g)加入15ml浓度为2(^的哌啶/DMF脱除最后一个氨基酸的Fmoc,用DMFx2、MeOHx2、DMFx2i先;条树月旨，力口入15111115%的乙酸酐/DMF,将末端氨基乙酰化。(h)加入15ml的裂解液(TIS:H20:TFA=2.5:2.5:95)，将多肽从树脂上裂解下来，用乙醚萃取，放置干燥，获得粗品。(i)将粗品上柱纯化，22x250mmC18柱，流速10ml/min，流动相为0.1%TFA/H20和0.UTFA/乙睛，冷冻干燥获得纯度>98%的三肽水合三氟醋酸盐。质谱分析结果为m/z为491.49。实施例2Ac-反-4-0H-Pro-Arg-Gly-NH2(3)的制备方法以Fmoc-Gly-OH,Arg，反-4-0H-Pro为原料，依据与实施例1相同方法制备.质谱分析结果为m/z为385.36。实施例3Ac-反-4-0H-Pro-"u-Gly-Trp-NH2(10)的制备方法(a)称取Fmoc-Rink-MBHA树月旨(负载量0.65mmol/g)1.Og，置于装有砂心板硅烷化的玻璃反应器中，加入15mlDMF溶胀树脂30min。(b)抽滤掉DMF,在树脂中加入15ml浓度为20。/。的哌啶/DMF,轻微震荡下反应5min，抽滤掉反应液后，再加入15ml浓度为20y。的哌咬/DMF,轻孩史震荡下反应15min,抽去反应液。(c)用DMFx2、MeOHx2、DMFx2S先、*#月旨，出少1:#月旨》文入小玻璃试管中，加入茚三酮才企测试剂^^一滴，ll(TC下反应5min,溶液和树脂呈深兰色，说明脱除Fmoc完全。(d)称取Fmoc-Trp(Boc)-OH氨基酸1.03g,HOBtO.27g，溶于10mlDMF中，加入到反应器中，然后加入0.304ml的DIC,震荡反应40min。(e)用DMFx2、MeOHx2、DMFx2、A、*#月旨，&出少1:#月旨》文入小玻璃试管中，加入茚三酮4企测试剂各一滴，ll(TC下反应5min,溶液和树脂呈淡黄色，说明反应完全。(f)重复上述(b)-(e)步骤，将Gly，Leu,反-4-OH-Pro偶联到树脂上，称重分别为1.27g和0.69g。(g)加入15ml浓度为2(P/。的哌啶/DMF脱除最后一个氨基酸的Fmoc,用DMFx2、MeOHx2、DMFx2'洗、涂积于月旨，力口入1501115%的乙酸酐/DMF,将末端氨基乙酰化。(h)加入15ml的裂解液(TIS:H20:TFA=2.5:2.5:95),将多肽从树脂上裂解下来，用乙醚萃取，放置干燥，获得粗品。(i)将粗品上柱纯化，22x250mmC18柱，流速10ml/min，流动相为0.1%TFA/H20和0.P/。TFA/乙睛，冷冻干燥获得纯度>98%的三肽水合三氟醋酸盐。质谱分析结果为m/z为528.55。实施例4Ac-4-F-Phe-反-4-0H-Pro-Arg-Gly-Trp-NH2(18)的制备方法(a)称取Fmoc-Rink-MBHA树月旨l.Og，置于装有砂心板硅烷化的玻璃反应器中，加入15mlDMF溶胀树脂30min。(b)抽滤掉DMF，在树脂中加入15ml浓度为20。/。的哌啶/DMF，轻微震荡下反应5min，抽滤掉反应液后，再加入15ml浓度为20y。的派咬/DMF,轻樣支震荡下反应15min，抽去反应液。(c)用DMFx2、MeOHx2、DMFx2;先涂树月旨，取出少量树月旨》文人小玻璃试管中，加入茚三酮检测试剂各一滴，ll(TC下反应5min,溶液和树脂呈;罙兰色，i兑明脱除Fmoc完全。(d)称取Fmoc-Trp(Boc)-OH氨基酸1.03g，,t0.27g,溶于10mlDMF中，加入到反应器中，然后加入0.304ml的DIC，震荡反应40min。(e)用DMFx2、MeOHx2、DMFx2f先、/|:^月旨，*出少f初于月旨》文入小玻璃试管中，加入茚三酮检测试剂各一滴，ll(TC下反应5min，溶液和树脂呈淡黄色，说明反应完全。(f)重复上述(b)-(e)步骤，将Gly、Arg、4-0H-Pro、4-F-Phe依次偶联到树脂上，称重分别为0.58g、1.27g、0.69g、0.79g。(g)加入15ml浓度为20y。的哌啶/DMF脱除最后一个氨基酸的Fmoc，用DMFx2、MeOHx2、DMFx2、洗、涂初于月旨，力口入1501115%的乙酸酐/DMF,将末端氨基乙酰化。(h)力口入15ml的裂解液(TIS:H20:TFA=2.5:2.5:95),将多肽从树脂上裂解下来，用乙醚萃取，放置干燥，获得粗品。(i)将粗品上柱纯化，22x250mmC18柱，流速10ml/min,流动相为0.1%TFA/H20和0.P/。TFA/乙睛，冷冻干燥获得纯度>98%的五肽水合三氟醋酸盐。质谱分析结果为m/z为736.739依据实施例4相同的方法制备了以下化合物Ac-Pro-Trp-Gly-NH2z(1)Ac-顺-或反-4-0H-Pro-Ile-Gly-NH2z(2)Ac-Pro-Arg-Ala-NH2z(4)Ac-顺-或反-4-0H-Pro-Arg-Ala-NH2z(5)Ac-Pro-Arg-Tyr-NH2z(6)Ac-3，4-脱氬-Pro-D-Arg-Gly-Trp-NH2z(8)Ac-顺-或反-4-0H-Pro-D-Arg-Gly-Trp-NH2z(9)Ac-顺-或反-4-0H-Pro-Ile-Gly-Trp-NH2z(11)Ac-Pro-Ile-Gly-Trp_NH2z(12)Ac-4-F-Phe-顺-或反-4-0H-Pro-Uu-Gly-NH2z(13)Ac-4-F-Phe-顺-或反-4-0H-Pro-lie-Gly-NH2z(14)Ac+F-Phe-Pro-Uu-Gly-NH2z(15)Ac-Tyr-Tyr-Pro-Uu-Gly-NH2z(16)Ac-Phe-Tyr-Pro-Leu-Gly-NH2z(17)Ac-4-F-Phe-顺-或反_4-OH-Pro-Leu-Gly-Trp-NHmH20z(19)Ac-4-F-Phe-顺-或反-4-OH-Pro-Ile-Gly-Trp-NH2z(20)Ac-Tyr-Pro-Trp-Gly-Trp-NH2z(21)Ac-4-F-Phe-顺-或反-4-0H-Pro-Ile-G1y-Trp-NH2z(22)-F-Phe-顺-或反-4-0H-Pro-Leu-Gly-Trp-NH2z(23)F—Phe-顺—或反一4一0H-Pro-Arg—Gly-Trp-NHAc-4-Ac-3-(24)Ac-2-Ac-4-(26)Ac-4-Ac-4-Ac-4-F-Phe-顺-或反-4-0H-Pro-Arg-Gly-Trp-NH2Cl一Phe-顺一或反—4—OH-Pro-Arg-Gly-Trp-NH:mH20zz(25)mH20zF-Phe-顺-或反-4-0H-Pro-His-Gly-Trp-NH2z(27)F-Phe-3,4-脱氬-Pro-Ile-Gly-Trp-NH2z(28)'F-Phe-3，4-脱氬-Pro-Arg-Gly-Trp-NH2z(29)。上述化合物在小鼠强迫性游泳模型和小鼠悬尾抑郁模型上均发现有抗抑郁样作用，自发活动测试表明其在抗抑郁剂量范围内没有中枢兴奋或抑制作用，大鼠强迫游泳试验初步结果也支持其具有抗抑郁效应。本发明以Ac-4-F-Phe-反-4-OH-Pro-Arg—Gly-Trp-NH2(18)为例i兌明4元才卬省卩活'I"生i式马会。1.小鼠悬尾实验参考文献方法[1],悬尾箱(25x25x25cm)顶板中心固定一塑料夹子，试验时用夹子夹住鼠尾尖约lcm处，将小鼠倒悬，使头部离箱底4—5cm。》见察6min,并用电子秒表记录后4min内累计不动时间。化学式(18)组和空白对照组于试验前15minsc,阳性对照药IMI于试'睑前30minip。2.小鼠强迫性游泳实验参考文献方法[2],将小鼠放入高20cm，直径10cm的圆柱型玻璃缸中，每缸一只，缸中水深10cm，水温25°C。观察6min，并用电子秒表记录后4min内累计不动时间，即小鼠在水中停止挣扎，或呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面的持续时间。化学式(18)组和空白对照组于实-验前15minsc，阳性对照药IMI于实验前30minip。3.大鼠强迫性游泳试验参考文献方法[3]，玻璃游泳缸，直径18cm,高40cm,水深23cm，水温28°C。试一睑前24h,将大鼠置游泳缸内预游15min,然后取出用布擦拭后用红外电暖炉烤干。试验时，将大鼠置游泳缸内，并立即开始计时，观察并记录5min内累计不动时间(四肢不游动时间)。实验观察采用盲法。WN-7-6于试验前120min单次口服灌胃，丙咪噪于试验前30min单次腹腔注射。4.小鼠5-HTP甩头试验参考文献[4'5',5-HTP100mg/kg腹腔注射可引起小鼠少量甩头行为，计数给予5-HTP后20min内出现的甩头次数。分别于注射5-HTP前10minsc不同剂量化学式(18)，于注射5-HTP前30minipIMI。5.数据统计处理ii结果用5土S表示，进行单因素方差分析，组间比较用t检验。6.试验结果(1)小鼠皮下注射化学式(18)对悬尾不动时间的影响与对照组比较，阳性对照药IMI(15mg/kg，ip)可显著缩短小鼠悬尾不动时间(户〈0.001);化学式(18)6.7、10、15、22.5mg/kg,与对照组比较，22.5mg/kg组显著减少悬尾不动时间(户<0.05)。(见表1)表1.小鼠皮下注射化学式(18)对悬尾不动时间的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>5主x土s。*户<0.05，***户<0.001，与对照、纟且t匕较。(2)小鼠皮下注射化学式(18)对小鼠强迫性游泳的影响与对照组比较，阳性对照药IMI15mg/kg可显著缩短小鼠游泳不动时间(尸<0.01);化学式(18)sc2.5、5、10、20mg/kg,与对照组比较，20mg/kg组显著减少不动时间(户<0.05)。(见表2)表2小鼠皮下注射化学式(18)对小鼠强迫性游泳的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注孓土s。*户<0.05，**<0.01,与对照纟且比4交。(3)大鼠强迫性游泳试验与对照组比较，ipIMI15mg/kg可明显缩短大鼠强迫性游泳的不动时间(户<0.05);sc化学式(18)1mg/kg可显著缩短不动时间(户<0.05)。(见表3)表3.大鼠皮下注射化学式(18)对强迫性游泳不动时间的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注x土s。*户<0.05,与对照纟且比專交。(4)小鼠5-羟色氨酸(5-HTP)甩头试验小鼠ip给予5-HTP100mg/kg可引起甩头行为，与对照组比较，阳性对照药FLU(15mg/kg,ip)明显增加小鼠甩头次数(<0.001),sc化学式(18)在1、3、10、30mg/kg剂量下对甩头次数没有明显影响。(见表4)表4.小鼠皮下注射化学式(18)对5-HTP诱导的甩头行为的影<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注5-HTP100mg/kg,ip。x±s;***<0.001，与对照组比较。参考文献SteruL，Che簡tR,ThierryB,SimonP(1985)Tailsuspensiontest:Anewmethodforscreeningantidepressantsinmice.Psychopharmaool85:367-370PorsoltRD,BertinA,JalfreM(1977)Behaviouraldespairinmicc:Aprimaryscreeningtestforantidepressants.ArchIntPharmacodyn229:327—336PorsoltRD,AntonG，BlavetN，JalfreM(1978)Behaviouraldespairinrats:amewmodelsensitivetoantidepressivetreatments.EurJPharmacol47:378—391徐叔云，卞如濂，药理实验方法学，人民卫生出版社，第三版，2002，810-813CorneSJ，PickeringRW，WarnerBT(1963)Amethodforassessingtheeffectsofdrugsonthecentralactionsof5-hydroxy-tryptamine.BrJPharmacol20:106—120文中列出的术语定义如下Ac:乙酸根；Pro:L-脯氨酸；Leu:L-亮氨酸；Gly:L-甘氨酸；Tyr:卜酪氨酸；Ala:L-丙氨酸；Arg:L-精氨酸；Lys:L-赖氨酸；Phe:L-苯丙氨酸；Trp:L-色氨酸；lie:L-异亮氨酸；Fmoc:药甲氧羰基；,N，N二曱基曱酰胺；MeOH:曱醇；HOBt:N-羟基苯丙三唑；DIC:N,N-二异丙基碳二酰亚胺；TIS:三异丙基硅烷；TFA:三氟醋酸；But:-k丁基；Boc:叔丁氧羰基；IMI:丙咪，秦；5-HTP:5-羟色氨酸。1权利要求1.一种多肽水合盐类化合物，其特征在于通式为x-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-y·mH2O·z其中x表示1-3个碳原子的酰基；AA1为Trp、Tyr、Ala、Phe、Phe衍生物、Pro、脱氢Pro氨基酸基团；AA2为Trp、Orn、Lys、Leu、Arg、Ile、Pro、脱氢-Pro、Tyr、Phe、Phe衍生物的氨基酸基团；AA3为Gly、Ala、Tyr、Trp、Leu、Ile、Arg、Pro、脱氢-Pro氨基酸基团；AA4为不存在或Trp、Tyr、Gly、Leu、Ile氨基酸基团；AA5为不存在或Gly、Trp；y表示羧基、羟基烷基、氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基和烷氧基羰基。m表示水的含量，m的取值范围为1≤m≤4；z表示盐酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙酸、三氟醋酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、甲磺酸、草酸；2.根据权利要求1所述的多肽水合盐类化合物，其特征在于包括下列化合物Ac-顺-或反-4-0H-Pro-Leu-Gly-Trp-NH2mH20zAc-顺一或反一4-0H—Pro—11e-Gly-Trp-NH2mH20zAc--4-F--Phe--顺-或反-4-OH--Pro-丄eu-G1y-NH2mH20zAc-+F--Phe--顺-或反-4-OH-网Pro-Ile-Gly-NH2mH20zAc--4-F--Phe--顺-或反-4-OH--Pro-Arg-Gly-'Trp-NH2mH20zAc--4-F--Phe--顺-或反-4-OH--Pro-丄eu-G1y-Trp-NHmH20zAc-+F--Phe--顺-或反-4-OH--Pro-Ile-Gly-■Trp-NH2mH20zAc--Tyr--Pro'-Trp-Gly-Trp-NH2mH20zAc--4-F--Phe--顺-或反-4-OH-Pro-Ile-Gly'一Trp-NH2mH20.Ac--4-F--Phe--顺-或反-4-OH--Pro-丄eu-G1y-.Trp-NH2mH20zAc.-3-F--Phe'-顺-或反—4-OH--Pro—Arg-Gly-.Trp-NH2mH20zAc-2-F-Phe-顺-或反-4-0H-Pro-Arg-Gly-Trp-NH2mH20zAc-4-C卜Phe-顺-或反-4-0H-Pro-Arg-Gly-Trp-NH2mH20zAc-4-F-Phe-顺-或反-4-0H-Pro-His-Gly-Trp-NH2mH20zAc-4-F-Phe-3，4-脱氬-Pro-Ile-Gly-Trp-NH2mH20zAc-4-F-Phe-3，4-脱氬-Pro-Arg-Gly-Trp-NH2mH20z3.权利要求1所述的多肽水合盐类化合物的应用，其特征在于应用在抗抑郁方面。全文摘要本发明涉及多肽水合盐类化合物以及在抗抑郁方面的应用，属于抗抑郁药品领域。解决了现有技术中抗抑郁药物副作用大，在体内容易积聚，和其他药物的相互作用比较多，与身体的亲和性差等问题，提供一种通式为x-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-y·mH<sub>2</sub>O·z的多肽水合盐类化合物，其中x表示1-3个碳原子的酰基；本发明化合物具有分子的认知性这些化合物包括氨基末端和羧基末端的修饰，以及不同氨基酸残基的替代。这些化合物可以单独或合并用于抗抑郁领域，药用效价比较高，有特异性，毒性反应比较弱，在体内不容易积聚，和其他药物的相互作用比较少，与身体的亲和性比较好，具有分子的认知性。文档编号C07K5/08GK101497655SQ20091000949公开日2009年8月5日申请日期2009年2月26日优先权日2008年5月21日发明者刚刘申请人:刚刘