专利名称：一种喜树碱的提取方法
技术领域：
本发明涉及中药有效成分的提取方法，具体涉及从喜树的中提取喜树碱的提取方法。
背景技术：
喜树碱英文名Camptothecin，化学名IH-Pyrano[34 :6，7] indolizino [1，2-6] puinoline-3,14(4H, 12H-)-dione,4-ethyl-4-hydroxy-(s)分子式C20H16N204 分子 量348.34来源珙桐科植物喜树Camptotheca acuminata Decne的果实、根、叶。喜树碱(camptothecin，CPT)，是我国特有树种喜树中所含的一种生物碱。最近 研究指出喜树碱及其化合物具有抑制细胞增殖、诱导凋亡和促进分化的作用，喜树碱类药 物能抑制血管内皮细胞的增殖，诱导凋亡，从而阻止新生血管的形成，具有显著的抗肿瘤活 性，是迄今为止发现的唯一一种专门通过抑制拓扑异构酶I发挥细胞毒性的抗癌药物。喜 树碱作为一种原料药具有相当重要的生产及研究价值。喜树碱的化学结构很独特，化学性质也与一般生物碱不同，它对常见的生物碱检 测试剂如苯酚(三氯化铁)及Dragendorff试剂等，均呈负反应，不与各种酸形成结晶性 盐，但其可在遇到碱的情况下打开内酯环，遇到酸后可还原得到喜树碱，喜树碱不溶于水和 普通的有机溶剂，对光、热敏感易分解。现有技术中对喜树碱的提取基本采取下述几个方式，如索氏回流提取法，超声波 回流提取法，勻浆法，碱法；这几种提取方法均有各自的不同，索氏回流提取法操作较繁琐， 提取时间长，提取效率低，超声波回流提取法在提取过程中由于超声波产生的强烈震荡，不 仅会破坏喜树碱的结构，而且会加大喜树碱与其它物质接触并发生反应的概率，勻浆法也 有类似的缺陷；碱法提取操作较繁琐，提取时间长，提取率低。
发明内容
本发明的一个目的是为解决上述现有技术提取时间长，转化率低，技术操作复杂等问题，提供一种操作便捷、转化的可靠性、产品回收率高，可达到工业化生产要求的喜树 碱的提取方法。本方法包括如下步骤步骤1.用醇提取法进行提取；步骤2.将上步提取的物质用碱提法进行进一步提取；步骤3.过柱纯化。进一步的，本发明一种喜树碱的提取方法按照如下步骤进行1.醇提取法将洗净晾干后的喜树根或果实，经粉碎，按质量计，在加入3-8倍量 的质量百分浓度40-70%的乙醇，常温浸泡0. 5-2小时。然后将混合物加热至60-80°C，保 温1. 5-2小时，提取两遍，提取液过滤，减压浓缩成浸膏；2.碱提法在浸膏中加入10倍量的质量百分浓度0. 3% -5%的稀氢氧化钠，加热 至70°C保持温度0. 2-2小时，然后过滤。滤液用酸酸化至pH2-5，静置，过滤干燥，得喜树碱 成品。3.纯化过柱层析，用0.5-10%乙醇洗脱，得喜树碱纯品。在步骤1.用醇提取法进行提取过程中提取液浓缩成浸膏后将浸膏用40-70%的 乙醇静置6-14小时，再减压浓缩成浸膏，回收乙醇。更进一步的，本发明一种喜树碱的提取方法按照如下步骤进行1.醇提取法将洗净晾干后的喜树根或果实，经粉碎，按质量计，在加入5-7倍量 的质量百分浓度50-55%的乙醇常温浸泡0. 5-2小时。然后将混合物加热至70°C，保温 1. 5-2小时，提取两遍，提取液过滤，减压浓缩成浸膏。将浸膏用40-70%的乙醇静置12小 时，再减压浓缩成浸膏，回收乙醇。2.碱提法在浸膏中加入10倍量的质量百分浓度0. 3% -5%的稀氢氧化钠，加热 至70°C 0.5小时，然后过滤。滤液用盐酸酸化至pH3-4，静置，过滤干燥，得喜树碱成品。3.纯化氧化铝柱层析，用30%乙醇洗脱，得喜树碱纯品。在醇法提的过程中可以加入原料质量的0-1%的植酸或抗坏血酸做抗氧化剂，避 免活性反应物的氧化，提高收率。植酸或抗坏血酸的量优选0.01% -0.2，更优选0.05-0. 1 %，最优选0. 08%。植酸，化学名肌醇六磷酸是从植物种籽中提取的一种有机磷酸类化合物。分子 式C6H18024P6 分子量660. 04。抗坏血酸是抗坏血酸生物活性的化合物的通称，是一种水溶性维生素，又名维生 素C，水果和蔬菜中含量丰富。在氧化还原代谢反应中起调节作用，缺乏它可引起坏血病。本发明中的百分含量，份或倍数均为质量百分含量，质量份或质量倍数。本发明的有益效果在于由于喜树碱不溶于水和普通的有机溶剂，对光、热敏感易分解。本发明在总结前人 的工作和自己探索的基础上，经反复的研究改进，在控温、加入抗氧化剂的情况下，采用醇 提法与碱法结合，有效的提高了提取效率和纯度。在长时间的碱液浸提过程中，由于喜树碱在钠盐中十分不稳定，很容易与其他物 质结合生成更稳定的物质，所以缩短碱液浸提的时间无疑会使最终产物的产率增加，而如 何缩短提取时间，是现有技术中还无法解决的难题，本发明通过先进行醇提的方法，在不破坏原料中有效成分的前提下，进行初步提取，使得后面的减法提取能够通过很短暂的时间 就能完成，由于在制备过程中加入了植酸或抗坏血酸做抗氧化剂，避免了活性反应物的氧 化，提高收率。喜树碱的不稳定性是众所周知的，但是如何加强其稳定性是一个亟待解决的 问题，发明人经过大量实验，通过不同途径的尝试，最终发现了加入了植酸或抗坏血酸这样 的方法可以避免活性反应物的氧化，提高收率，虽然避免活性反应物的氧化是植酸或抗坏 血酸的特有性能，但是用在中药制备上还未有报道，在最初发明人提出此思路并准备进行 试验时，也有相关领域人员提出加入植酸或抗坏血酸可能会与原料中的物质发生反应，产 生沉淀或渣滓，从而影响喜树碱的提取；但是发明人通过大量实验证明了这是一种思维误 区。本发明工艺简单、生产成本低，产品纯度高98%以上，产品收率高，并能达到工业 化生产。通过本发明的方法极大地地提高了生产效率和转化率，促使原料中的有效物质更 多的转化为反式喜树碱，使得产品质量更进一步提高，且产品纯度高，适合工业化生产。
具体实施例方式下面结合实施例来进一步说明本发明，但并不作为对本发明的限定。实施例1按照如下工艺进行1.醇提取法将洗净晾干后的喜树根10kg，经粉碎，到80目按质量计，在加入 60kg质量百分浓度50%的乙醇常温浸泡1小时。然后将混合物加热至70°C，保温1. 5小 时，提取两遍，提取液过滤，减压浓缩成浸膏。将浸膏用40%的乙醇静置12小时，再减压浓 缩成浸膏，回收乙醇。2.碱提法在浸膏中加入10倍量的质量百分浓度0.3%的稀氢氧化钠，加热至 700C 0. 5小时，然后过滤。滤液用盐酸酸化至pH3，静置，过滤干燥，得喜树碱成品。3.纯化氧化铝柱层析，用30%乙醇洗脱，得喜树碱纯品。实施例21.醇提取法将洗净晾干后的喜树根或果实，经粉碎，按质量计，在加入7倍量的 质量百分浓度55%的乙醇常温浸泡2小时。加入原料质量的0. 的植酸做抗氧化剂，避 免活性反应物的氧化，提高收率。然后将混合物加热至70°C，保温2小时，提取两遍，提取液 过滤，减压浓缩成浸膏。将浸膏用70%的乙醇静置12小时，再减压浓缩成浸膏，回收乙醇。2.碱提法在浸膏中加入10倍量的质量百分浓度5%的稀氢氧化钠，加热至 700C 0. 5小时，然后过滤。滤液用盐酸酸化至pH4，静置，过滤干燥，得喜树碱成品。3.纯化氧化铝柱层析，用30%乙醇洗脱，得喜树碱纯品。实施例3-10植酸或抗坏血酸的量如下表所示，其余同实施例权利要求
1.一种喜树碱的提取方法，其特征在于所述工艺如下 步骤1.用醇提取法进行提取；步骤2.将上步提取的物质用碱提法进行进一步提取； 步骤3.过柱纯化。
2.如权利要求1所述的一种喜树碱的提取方法，其特征在于所述工艺如下步骤1.醇提取法将洗净晾干后的喜树根或果实，经粉碎，按质量计，在加入3-8倍量 的质量百分浓度40-70%的乙醇，常温浸泡0. 5-2小时，然后将混合物加热至60-80°C，保温 1. 5-2小时，提取两遍，提取液过滤，减压浓缩成浸膏；步骤2.碱提法在浸膏中加入10倍量的质量百分浓度0. 3% -5%的稀氢氧化钠溶液， 加热至70°C保持温度0. 2-2小时，然后过滤，滤液用酸酸化至PH2-5，静置，过滤干燥，得喜 树碱成品；步骤3.纯化过柱层析，用0. 5-10%乙醇洗脱，得喜树碱纯品。
3.如权利要求2所述的一种喜树碱的提取方法，其特征在于所述工艺如下步骤 1.醇提取法中，可以在制得浸膏后，将浸膏用40-70%的乙醇静置6-14小时，再次减压浓缩 成浸膏，回收乙醇。
4.如权利要求3所述的一种喜树碱的提取方法，其特征在于所述工艺如下步骤 1.醇提取法将洗净晾干后的喜树根或果实，经粉碎，按质量计，在加入5-7倍量的质量百 分浓度50-55%的乙醇常温浸泡0. 5-2小时，然后将混合物加热至70°C，保温1. 5-2小时， 提取两遍，提取液过滤，减压浓缩成浸膏，将浸膏用40-70 %的乙醇静置12小时，再次减压 浓缩成浸膏，回收乙醇；步骤2.碱提法在浸膏中加入10倍量的质量百分浓度0. 3% -5%的稀氢氧化钠，加 热至70°C保温0. 5小时，然后过滤，滤液用盐酸酸化至pH3-4，静置，过滤干燥，得喜树碱成品 ；步骤3.纯化氧化铝柱层析，用30%乙醇洗脱，得喜树碱纯品。
5.如权利要求1-4任一所述的一种喜树碱的提取方法，其特征在于在醇法提的过程 中加入原料质量的0-1%的植酸或抗坏血酸。
6.如权利要求5所述的一种喜树碱的提取方法，其特征在于在常温浸泡时或经过常 温浸泡后加热提取之前加入植酸或抗坏血酸。
7.如权利要求6所述的一种喜树碱的提取方法，其特征在于植酸或抗坏血酸的量为 原料质量的0.01% -0.2%。
8.如权利要求7所述的一种喜树碱的提取方法，其特征在于植酸或抗坏血酸的量为 原料质量的0. 05-0. 1%0
9.如权利要求8所述的一种喜树碱的提取方法，其特征在于植酸或抗坏血酸的量为 原料质量的0. 08%。
全文摘要
本发明涉及药物制备领域，是一种喜树碱的提取方法，解决了现有技术喜树碱的制备转化率低，产量低，产品品质不好的问题，工艺如下步骤1.用醇提取法进行提取；步骤2.将上步提取的物质用碱提法进行进一步提取；步骤3.过柱纯化。通过本发明的方法极大地提高了生产效率和转化率，促使原料中的有效物质更多的转化为喜树碱，使得产品质量更进一步提高，且产品纯度高，适合工业化生产。
文档编号C07D491/22GK102127089SQ20101052944
公开日2011年7月20日 申请日期2010年11月3日 优先权日2010年11月3日
发明者张守力 申请人:张守力