专利名称：垂盆草中垂盆草苷的提取纯化方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及垂盆草中垂盆草苷的提取纯化方法。
背景技术：
垂盆草为景天科植物垂盆草、Sedwn sarmentosum Bunge)的新鲜或干燥全草，又名石指甲《四川中药志》、半枝莲《药镜》、鼠牙半支《百草镜》等。收载于《中国药典》2010年版一部，具有清利湿热，解毒之功效。用于湿热黄疸，小便不利，痈肿疮疡。《本草纲目拾遗》 谓其“消痈疔，便毒，黄疸，喉癣”。化学研究表明，垂盆草主要含有蛋白质、氨基酸、糖类、黄酮类、三萜类及垂盆草苷类。据有关文献报道，垂盆草具有抑制炎性渗出，减少肝细胞损伤的作用，可使血清谷丙转氨酶降低，瞿世康等研究表明垂盆草苷可使小鼠胸腺内胸腺细胞数明显降低，小鼠溶血空斑试验证明，它能抑制T细胞依赖抗原-SRBC的抗体形成细胞数， 还能抑制T细胞介导的移植物抗宿主反应，实验中还发现，垂盆草苷使外周血中白细胞数和中性粒细胞比例增高。邵成雷等经对垂盆草各类成分进行药理及临床预试发现垂盆草总黄酮具有明显的抑菌、抗炎、祛痰等作用，对急慢性咽炎及扁桃体炎具有较好的治疗作用， 提示垂盆草在治疗咽喉疾病方面具有良好的开发前景。目前临床应用有垂盆草片，垂盆草冲剂以及垂盆草的复方制剂等，用于治疗急慢性肝炎。1979年方圣鼎等从垂盆草中分得一水溶性氰苷类成分垂盆草苷(2-氰基-4-0- β -D-葡萄糖反丁烯-2-醇)，并指出其为抗肝炎活性成分。诸国华等1999年以1，2，4- 丁三醇-1，2-丙缩酮为原料，首次完成了垂盆草苷的人工合成。现有提取分离方法一般用乙醇回流提取，浓缩后用乙酸乙酯、正丁醇等萃取，提取物用硅胶柱层析及HPLC等方法分离，常用的系统溶剂有乙酸乙酯-甲醇、乙酸乙酯-丙酮、 氯仿-甲醇等。这些方法较为复杂，药用有效成分利用率低，无法产业化。中国专利申请号 201010511372. 2公开了一种垂盆草苷的制备方法，该方法采用新鲜垂盆草，加水浸泡，压榨并滤过，滤液加入活性炭脱色，滤过，取滤液，通过大孔吸附树脂柱吸附，10-30%乙醇洗脱， 收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩干燥，加入甲醇溶解，滤过，取滤液，加入到硅胶柱层析柱上，以比例为1 1的甲醇-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，洗脱液按柱体积分份收集，合并洗脱液， 减压浓缩并低温干燥，得到垂盆草苷，该方法得率低，仅为0. 05%-0. 076%。
发明内容
本发明的目的在于提供垂盆草中垂盆草苷的提取纯化方法，该纯化方法采用水溶性溶剂从垂盆草中提取纯化垂盆草苷，不仅工艺简单、提取率高，而且成本低、产品纯度高， 易于工业化生产。本发明的目的是通过以下技术方案实现的
垂盆草中垂盆草苷的提取纯化方法，其特征在于其步骤如下 1)提取将垂盆草药材粉碎，装入渗漉柱中，向渗漉柱中加入0. 5-1倍量的水溶性溶剂，50-70°C条件下浸泡30-45分钟，保温状态下，进行渗漉操作，收集的同时连续补加提取溶剂，直至收集到的渗漉液体积为药材体积的4-6倍量；
2)聚酰胺柱纯化上述渗漉液浓缩后加入沉降剂沉降，静置、离心，离心液上聚酰胺柱纯化，10-50%乙醇或丙酮洗脱，洗脱流速为2-6BV/h，洗脱用量为3-4BV ；
3)氧化铝除杂将上述洗脱液过氧化铝柱，收集下柱液；
4)结晶将上述下柱液减压回收乙醇，得粗品，再以乙醚-乙醇混合溶剂溶解，低温结晶，过滤干燥后得到垂盆草苷。所述步骤1)中渗漉柱为单柱或多柱串联。所述步骤1)中水溶性溶剂为水、乙醇、甲醇或丙酮中的一种或几种混合溶剂。所述步骤2 )中所述沉降剂为ZTC- II澄清剂或CTS中药澄清剂，加入量为
I-2. 5%οο所述步骤4)中所述乙醚-乙醇体积比为1-3:1。本发明中使用的渗漉柱可选单柱或多柱串联，通过简单处理回收后，可循环使用， 降低了能耗；采用澄清剂和氧化铝柱除杂，提高了产品纯度。
具体实施例方式为了更好地理解本发明的技术方案，以下通过具体的实施例进一步详细描述。实施例1
将垂盆草药材粉碎成粗粉，过40目筛，称取5kg装入渗漉桶中，再向渗漉柱内加入5L 的20%乙醇水溶液，在50°C条件下浸泡30min，保温状态下开启渗漉柱出口阀，同时自渗漉柱顶部连续加入体积百分比为20%的乙醇水溶液，控制流速为lOml/min，直至收集到30L 渗漉提取液，减压浓缩至无醇味，再加水至3L，搅拌均勻，搅拌下加入45mlZTC- II型中药澄清剂，静置，离心滤过液上聚酰胺柱，取2BV10%丙酮洗脱杂质，再用50%丙酮洗脱有效成分， 洗脱流速为4BV/h，收集垂盆草苷流分，通过氧化铝柱，收集下柱液，减压浓缩，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(1 1)混合溶剂溶解，低温结晶，反复结晶4次，过滤干燥得到垂盆草苷 12. 8g，经HPLC法测定其含量为94. 8%。实施例2:
将垂盆草药材粉碎成粗粉，过40目筛，称取5kg装入渗漉桶中，再向渗漉柱内加入3L 的40%丙酮水溶液，在55°C条件下浸泡40min，保温状态下开启渗漉柱出口阀，同时自渗漉柱顶部连续加入体积百分比为40%的丙酮水溶液，控制流速为15ml/min，直至收集到20L 渗漉提取液，减压浓缩至无丙酮，再加水至5L，搅拌均勻，搅拌下加入20mlZTC- II型中药澄清剂，静置，离心滤过液上聚酰胺柱，取2BV15%丙酮洗脱杂质，再用35%丙酮洗脱有效成分， 洗脱流速为2BV/h，收集垂盆草苷流分，通过氧化铝柱，收集下柱液，减压浓缩，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(3:1)混合溶剂溶解，低温结晶，反复结晶3次，过滤干燥得到垂盆草苷 14. Og,经HPLC法测定其含量为94. 0%。实施例3:
将垂盆草药材粉碎成粗粉，过20目筛，称取5kg装入渗漉桶中，再向渗漉柱内加入4L 的30%乙醇水溶液，在65°C条件下浸泡45min，保温状态下开启渗漉柱出口阀，同时自渗漉柱顶部连续加入体积百分比为30%的乙醇水溶液，控制流速为lOml/min，直至收集到25L渗漉提取液，减压浓缩至无醇味，再加水至4L，搅拌均勻，搅拌下加入55mlCTS中药澄清剂，静置，离心滤过液上聚酰胺柱，取1. 0BV10%乙醇洗脱杂质，再用50%乙醇洗脱有效成分，洗脱流速为6BV/h，收集垂盆草苷流分，通过氧化铝柱，收集下柱液，减压浓缩，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(1:1)混合溶剂溶解，低温结晶，反复结晶3次，过滤干燥得到垂盆草苷13. 2g， 经HPLC法测定其含量为93. 3%。实施例4:
将垂盆草药材粉碎成粗粉，过40目筛，称取IOkg装入渗漉桶中，再向渗漉柱内加入5L 水，在50°C条件下浸泡35min，保温状态下开启渗漉柱出口阀，同时自渗漉柱顶部连续加入水，控制流速为lOml/min，直至收集到40L渗漉提取液，减压浓缩至浓度为2g/ml，搅拌下加入52mlZTC- II型中药澄清剂，静置，离心滤过液上聚酰胺柱，取1. 5BV20%乙醇洗脱杂质，再用40%乙醇洗脱有效成分，洗脱流速为5BV/h，收集垂盆草苷流分，通过氧化铝柱，收集下柱液，减压浓缩，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(2 1)混合溶剂溶解，低温结晶，反复结晶5次， 过滤干燥得到垂盆草苷27. Sg,经HPLC法测定其含量为94. 1%。实施例5:
将垂盆草药材粉碎成粗粉，过20目筛，称取IOkg装入渗漉桶中，再向渗漉柱内加入7L 的30%丙酮水溶液，在70°C条件下浸泡40min，保温状态下开启渗漉柱出口阀，同时自渗漉柱顶部连续加入体积百分比为30%丙酮水溶液，控制流速为15ml/min，直至收集到60L渗漉提取液，减压浓缩至无丙酮，再加水至8L，搅拌均勻，搅拌下加入90mlCTS中药澄清剂，静置，离心滤过液上聚酰胺柱，取2BV20%丙酮洗脱杂质，再用50%丙酮洗脱有效成分，洗脱流速为4BV/h，收集垂盆草苷流分，通过氧化铝柱，收集下柱液，减压浓缩，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(2:1)混合溶剂溶解，低温结晶，反复结晶2次，过滤干燥得到垂盆草苷26. 7g，经 HPLC法测定其含量为92. 6%。实施例6:
将垂盆草药材粉碎成粗粉，过50目筛，称取20kg装入渗漉桶中，再向渗漉柱内加入20L 的50%乙醇水溶液，在60°C条件下浸泡45min，保温状态下开启渗漉柱出口阀，同时自渗漉柱顶部连续加入体积百分比为50%的乙醇水溶液，控制流速为15ml/min，直至收集到IOOL 渗漉提取液，减压浓缩至无醇味，再加水至15L，搅拌均勻，搅拌下加入250mlCTS中药澄清剂，静置，离心滤过液上聚酰胺柱，取2. 5BV10%乙醇洗脱杂质，再用40%乙醇洗脱有效成分， 洗脱流速为3BV/h，收集垂盆草苷流分，通过氧化铝柱，收集下柱液，减压浓缩，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(1 1)混合溶剂溶解，低温结晶，反复结晶5次，过滤干燥得到垂盆草苷 56. 6g，经HPLC法测定其含量为95. 3%。实施例7:
将垂盆草药材粉碎成粗粉，过80目筛，称取20kg装入渗漉桶中，再向渗漉柱内加入12L 的10%甲醇水溶液，在55°C条件下浸泡35min，保温状态下开启渗漉柱出口阀，同时自渗漉柱顶部连续加入体积百分比为10%甲醇水溶液，控制流速为13ml/min，直至收集到80L渗漉提取液，减压浓缩至无醇味，再加水至12L，搅拌均勻，搅拌下加入160mlCTS中药澄清剂，静置，离心滤过液上聚酰胺柱，取2BV去离子水洗脱杂质，再用30%乙醇洗脱有效成分，洗脱流速为5BV/h，收集垂盆草苷流分，通过氧化铝柱，收集下柱液，减压浓缩，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(3:1)混合溶剂溶解，低温结晶，反复结晶4次，过滤干燥得到垂盆草苷55. 7g，经 HPLC法测定其含量为93. 4%。
权利要求
1.垂盆草中垂盆草苷的提取纯化方法，其特征在于其步骤如下1)提取将垂盆草药材粉碎，装入渗漉柱中，向渗漉柱中加入0.5-1倍量的水溶性溶剂，50-70°C条件下浸泡30-45分钟，保温状态下，进行渗漉操作，收集的同时连续补加提取溶剂，直至收集到的渗漉液体积为药材体积的4-6倍量；2)聚酰胺柱纯化上述渗漉液浓缩后加入沉降剂沉降，静置、离心，离心液上聚酰胺柱纯化，10-50%乙醇或丙酮洗脱，洗脱流速为2-6BV/h，洗脱用量为3-4BV ；3)氧化铝除杂将上述洗脱液过氧化铝柱，收集下柱液；4)结晶将上述下柱液减压回收乙醇，得粗品，再以乙醚-乙醇混合溶剂溶解，低温结晶，过滤干燥后得到垂盆草苷。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤1)中渗漉柱为单柱或多柱串联。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤1)中水溶性溶剂为水、乙醇、甲醇或丙酮中的一种或几种混合溶剂。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤2)中所述沉降剂为ZTC-II澄清剂或CTS中药澄清剂，加入量为1-2. 5%。。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤4)中所述乙醚-乙醇体积比为 1-3:1。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，涉及一种垂盆草中垂盆草苷的提取纯化方法，方法采用水溶性溶剂提取—沉降剂沉降—聚酰胺柱纯化—氧化铝柱除杂—结晶的方法获得垂盆草苷，含量大于90%，较现有方法简便、有机溶剂用量少、产品纯度高。本发明适合工业化生产。
文档编号C07H15/10GK102329345SQ20111021003
公开日2012年1月25日 申请日期2011年7月26日 优先权日2011年7月26日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司