专利名称：从头花蓼全草中提取制备水飞蓟素的方法
技术领域：
本发明涉及一种从头花寥全草中提取制备水飞蓟素的方法，属医药技术领域。
背景技术：
水飞蓟marianum(L. ) Gaertn.),为菊科(CbffijDo1Sitee)水飞蓟属 植物，又名水飞雉、奶蓟、老鼠筋，一年生或二年生草本，原产分布于欧洲、地中
海地区、北非及亚洲中部，我国为引种栽培。瘦果入药，性味苦凉，有清热解毒、保肝利胆作 用，主要用来治疗肝胆疾病，已有二千多年的历史[中国科学院中国植物志编辑委员会编，中国植物志，第78卷第I分册.北京科学出版社，1987 :161-162.国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部).2005年版.北京化学工业出版社，2005 :56-56]。二十世纪六十年代末，德国学者Wagner H等对水飞蓟的保肝活性成分进行了研究，引起了人们的广泛重视。其主要活性成分为从果实中提取分离得到的一类黄酮木脂素化合物，称为水飞蓟素(siIymarin),由水飞蓟宾(silibinin)、异水飞蓟宾(isosilybin)、水飞蓟亭(silychristin)和水飞蓟宁(silydianin)等四种同分异构体构成,其中水飞蓟宾含量最高，活性最好[Kvasnicka F,BIba B,SevcIk R. Analysis of the active components ofsilymarin. Journal of Chromatography A,2003,990 (1-2),239-245]。现代药理研究表明，水飞蓟宾和水飞蓟素具有明显的保护和稳定肝细胞的作用，用于治疗急慢性肝炎、肝硬化、肝中毒等病，对肝炎患者症状、肝功能均有明显的改善，具有稳定细胞及细胞内生物膜的作用，还具有一定的抗辐射的作用[K en V, Walterovd D.Silybin and silymarin-new effects and applications. Biomedical papers ofthe Medical Faculty of the University Palacky, Olomouc, Czechoslovakia, 2005,149(1) :29-41]。由于水飞蓟宾和水飞蓟素在抗肝病毒及肝保护作用方面被认为是活性好、药效高、无副作用的最好抗肝病毒剂，被广泛应用于医药、保健品、食品和化妆品等产品中，显示出很好的开发潜力。近年来，纵观水飞蓟产品市场，国外水飞蓟的种植面积在减少，对中国水飞蓟素粗品的依赖在加强[徐德峰，张卫明，史劲松，等.国内水飞蓟资源利用现状与展望.食品研究与开发，2007，28 (2) :157-161]。随着国内外水飞蓟相关产品的广泛应用，水飞蓟素和水飞蓟宾产品供不应求,而获得水飞蓟素主要有两种方法，一种为化学合成水飞蓟宾法，另一种为提取制备水飞蓟素法。目前，文献报道的水飞蓟素和水飞蓟宾的提取制备方法均为从水飞蓟中得到例如，专利[王琳，范淦彬.一种水飞蓟素的制备方法.CN 101759687A,2010. 06. 30.邸凤阁.在水飞蓟种皮中提取水飞蓟素的方法.CN 102219781A. 2011. 10. 19.张彦龙，赵洪柱，曾伟民，等.一种从水飞蓟秸杆中提取水飞蓟素的方法.CN 102225085A,2011. 10. 26]为从水飞蓟果实、种皮或秸杆等不同部位中提取制备水飞蓟素的方法；专利[朱占元，李斌，王春建.一种水飞蓟宾的提取方法.CN 101260105. 2008. 09. 10]为从水飞蓟素中提取纯化水飞蓟宾的方法。然而，仅从水飞蓟这一种植物中提取制备水飞蓟素和水飞蓟宾很难满足实际需要，因此，急需扩大和开发水飞蓟素提取制备的新资源。目前尚无文献报道从其它植物中提取制备水飞蓟素的方法。H暮XPoIygonum capitaturn Buch. -Ham. ex D. Don),为寥科(/WjgrOflaceae)寥属{Polygonum、植物，又名四季红、石莽草、红酸杆、太阳草、水绣球，多年生草本，主要产自我国江西、湖南、湖北、四川、贵州等地，多生于海拔60(T3500米的山坡、山谷、湿地[中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志，第25卷第I分册.北京科学出版社，1998:57-58]。头花寥为贵州特有的苗药，全草入药，味苦、辛，性凉，归肾、膀胱经，具有清热利湿、解毒止痛、和血散瘀、利尿通淋的功效；民间常用全草或地上部位治疗泌尿系统感染、血尿、湿疹、肾盂肾炎、膀胱炎、尿路结石、风湿痛、跌打损伤、痄腮、疮疡、腹泻、痢疾等症[江苏新医学院.中药大辞典，上册.上海上海科学技术出版社，1986 :611-611.贵州省医药监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准，第I版.贵州贵州科技出版社，2003:147-147]。 头花寥主要化学成分为挥发油，酚酸类，黄酮类化合物等。实验表明头花寥具有抗氧化活性，解热，镇痛，抗炎，抗菌作用。临床可用于治疗肾盂肾炎，促进排石等。以头花寥为原料制成的中成药制剂“热淋清胶囊”、“热淋清颗粒”，已被遴选为国家中药保护品种，2002年进入国家基本药物目录，2004年进入国家基本医疗保险目录，临床应用广泛。本发明人的硕士学位论文[杨阳.甘西鼠尾草及头花寥化学成分研究.上海第二军医大学，2009]首次报道了头花寥中含有水飞蓟宾等黄酮木素类化合物，但未阐明水飞蓟素具体的提取制备方法。
发明内容
本发明提供了一种从头花寥全草中提取制备水飞蓟素的方法。本发明是以如下技术方案实现的一种从头花寥全草中提取制备水飞蓟素的方法，具体步骤如下
(1)制备头花寥流浸膏按常规将头花寥干燥全草药材粗粉先用5倍体积的石油醚加热回流提取1-3次后，弃去提取液；再用80% -90%体积浓度的乙醇水溶液2倍体积浸泡，20倍体积渗漉或5倍体积加热回流提取1-3次，提取液减压浓缩至无醇味得头花寥流浸膏，得率为25. 0% 30. 0% ；
(2)制备水飞蓟素将上述制得的头花寥流浸膏加3-4倍体积的水混悬，用10倍体积的乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩蒸干后进行硅胶柱色谱，使用的柱色谱硅胶为100-200目，硅胶用量为上柱样品的7-10倍质量。先用石油醚乙酸乙酯=2:1的洗脱液洗脱，除去弱极性杂质，再用石油醚乙酸乙酯=1:1的洗脱液洗脱，石油醚乙酸乙酯的洗脱液其体积均不少于6倍的硅胶量。洗脱液减压浓缩蒸干后即得浅绿色水飞蓟素粉末，得率为0. 490). 6%。化学成分研究表明此水飞蓟素粉末主要含有水飞蓟宾，以及异水飞蓟宾、2，3-脱氢水飞蓟宾、水飞蓟亭、2，3-脱氢水飞蓟亭等黄酮木质素类化合物，还含有少量没食子酸乙酯、槲皮素等杂质。上述的提取液、萃取液或洗脱液减压浓缩时，温度均不超过65°C。以水飞蓟宾标准品为对照，采用紫外分光光度法对该水飞蓟素粉末进行纯度检测，测得黄酮木质素类化合物纯度大于80% ;采用高效液相色谱法对该水飞蓟素粉末进行含量测定，测得水飞蓟宾含量为60-70%。
本发明的有益效果是1、首次发现了从水飞蓟以外的植物，即头花寥中得到水飞蓟素的方法，开发了提取制备水飞蓟素的新资源；2、提取制备过程中仅使用石油醚、乙酸乙酯、乙醇三种有机溶剂，无毒环保，不污染环境；3、仅进行一次硅胶柱色谱，操作简便、成本低廉，水飞蓟素的得率和纯度均较高，方法易于推广。
图I是 本发明提取制备的水飞蓟素以及水飞蓟宾标准品的紫外吸收光谱图。图2是本发明提取制备的水飞蓟素的高效液相色谱图。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的实施并不仅限于此。实施例I :
头花寥干燥全草药材2000g，切段，粉碎后过筛，粗粉用5倍体积的石油醚加热回流提取3次，每次I小时，滤去石油醚提取液。余下的粗粉干燥后，用浓度80%体积浓度的乙醇水溶液2倍体积浸泡24小时，20倍体积渗漉提取。将渗漉提取液60°C减压浓缩至无醇味，得头花寥流浸膏524g，得率为26. 2%。将上述制得的头花寥流浸膏加3-4倍体积的水混悬后使总体积为IOOOml，用10倍体积的乙酸乙酯萃取，萃取液60°C减压浓缩回收溶剂，蒸干后得乙酸乙酯萃取部位21. 4g。乙酸乙酯萃取部位进行100-200目硅胶柱色谱，硅胶用量200g，先用1200ml石油醚乙酸乙酯=2:1的洗脱液洗脱，再用1200ml石油醚乙酸乙酯=1:1的洗脱液洗脱，洗脱液60°C减压浓缩蒸干后即得浅绿色水飞蓟素粉末9. 4g，得率为0. 47%。纯度检测及含量测定以水飞蓟宾标准品(自制，经高效液相色谱仪采用面积归一化法检测纯度为98. 83%)为对照，使用岛津UV-2550紫外分光光度仪在287nm处对该水飞蓟素粉末进行纯度检测，测得其黄酮木质素类化合物纯度为82. 44%。水飞蓟素以及水飞蓟宾标准品的紫外吸收光谱图见图1，图中，Sa为水飞蓟素，Sb为水飞蓟宾标准品。使用Agilent 1100高效液相色谱仪对该水飞蓟素粉末进行含量测定，色谱分析条件为色谱柱，迪马公司diamonsil C18柱(5 y , 250mmX4. 6mm);流动相，甲醇-水-冰醋酸=48:52:1 ;检测波长，287nm ;柱温，35°C;流速，I. Oml/min。测得水飞蓟宾含量为67. 35%。高效液相色谱图见图2，图中，峰A、B分别为水飞蓟宾的一对非对映异构体。实施例2:
头花寥干燥全草药材2000g，切段，粉碎后过筛，粗粉用5倍体积的石油醚加热回流提取3次，每次I小时，滤去石油醚提取液。余下的粗粉干燥后，用浓度85%体积浓度的乙醇水溶液2倍体积浸泡24小时，5倍体积加热回流提取3次，每次I小时，合并提取液60°C减压浓缩至无醇味，得头花寥流浸膏582g，得率为29. 1%。将上述制得的头花寥流浸膏加3-4倍体积的水混悬后使总体积为IOOOml，用10倍体积的乙酸乙酯萃取，萃取液60°C减压浓缩回收溶剂，蒸干后得乙酸乙酯萃取部位26. 0g。乙酸乙酯萃取部位进行100-200目硅胶柱色谱，硅胶用量200g，先用1300ml石油醚乙酸乙酯=2:1的洗脱液洗脱，再用1300ml石油醚乙酸乙酯=1:1的洗脱液洗脱，洗脱液60°C减压浓缩蒸干后即得浅绿色水飞蓟素粉末10. 2g，得率为0. 51%。
纯度检测及含量测定采用实施例I中的紫外分光光度法对该水飞蓟素粉末进行纯度检测，测得其黄酮木质素类化合物纯度为81. 36%。采用实施例I中的 高效液相色谱法对该粉末进行纯度检测(峰面积归一化法)，测得水飞蓟宾纯度为66. 28%。
权利要求
1.一种从头花寥全草中提取制备水飞蓟素的方法，包括如下步骤 (O制备头花寥流浸膏按常规将头花寥干燥全草药材粗粉先用5倍体积的石油醚加热回流提取1-3次后，弃去提取液；再用80% -90%体积浓度的こ醇水溶液2倍体积浸泡，20倍体积渗漉或5倍体积加热回流提取1-3次，提取液减压浓缩至无醇味得头花寥流浸膏； (2)制备水飞蓟素将上述制得的头花寥流浸膏加3-4倍体积的水混悬，用10倍体积的こ酸こ酯萃取，萃取液减压浓缩蒸干后进行硅胶柱色谱，先用石油醚こ酸こ酷=2:1的洗脱液洗脱，除去弱极性杂质，再用石油醚こ酸こ酷=I: I的洗脱液洗脱，洗脱液减压浓缩蒸干后即得浅緑色水飞蓟素粉末； 上述提取液、萃取液或洗脱液减压浓缩时，温度均不超过65°C。
2.根据权利要求I所述的从头花寥全草中提取制备水飞蓟素的方法，其特征在于制备水飞蓟素时，使用的柱色谱娃胶为100-200目，娃胶用量为上柱样品的7-10倍质量。
3.根据权利要求I或4所述的从头花寥全草中提取制备水飞蓟素的方法，其特征在于制备水飞蓟素时，使用石油醚こ酸こ酯的洗脱液其体积均不少于6倍的硅胶量。
全文摘要
本发明公开了一种从头花蓼全草中提取制备水飞蓟素的方法，属医药技术领域。具体方法是头花蓼全草药材先用石油醚加热回流提取，弃去提取液；再用高浓度的乙醇水溶液浸泡，渗漉或加热回流提取后，减压浓缩制得流浸膏；流浸膏加水混悬，用乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩蒸干后进行硅胶柱色谱，先用石油醚:乙酸乙酯=2:1的洗脱液洗脱除去杂质，再用石油醚:乙酸乙酯=1:1的洗脱液洗脱，洗脱液减压浓缩蒸干后即得浅绿色水飞蓟素粉末。本发明首次发现并优化了从头花蓼全草中提取制备水飞蓟素的方法，无毒环保、不污染环境，操作简便、成本低廉，水飞蓟素的得率和纯度均较高，方法易于推广。
文档编号C07D407/04GK102675298SQ20121015312
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月17日 优先权日2012年5月17日
发明者刘军权, 吕建峰, 周忠海, 朱斌, 杨阳 申请人:中国人民解放军第九七医院