专利名称：一种提高甜菊糖总甙的新方法
技术领域：
本发明属于生物工程和新型甜味剂领域，特别涉及甜菊糖总甙含量的方法。
背景技术：
甜菊糖是从菊科草本植物甜叶菊中精提的新型天然甜味剂。它具有高甜度、低热能的特点，其甜度是蔗糖的200— 350倍，热值仅为蔗糖的I / 300。是继甘蔗、甜菜之外第三种最具有开价值和健康推崇的天然蔗糖替代品，被誉为“世界第三糖源”。甜菊糖在一般着色性，安全无毒，被广泛应用于食品、酿酒、医药、日用化工等行业。甜菊糖的九种甜味成分中，甜菊甙、莱鲍迪甙A(RA)和莱鲍迪甙C(RC)的相对含量较高，共占90%以上，是决定甜菊糖味质的主要成分。RA甜度最高，相当于蔗糖的450倍，甜味特性也与蔗糖相接近；甜菊甙甜味相当于蔗糖的300倍，具有一定的苦味和不愉快的后味，影响了甜菊糖的味质，限制了其更为广泛的应用。现在中国市场上的甜菊糖产品有相当一部分产品的总甙含量较低，不能满足客户的需求，需要再次精制以提高产品总甙。本发明提供一种简单易行的方法能将总甙含量较低的产品总甙提高到95%以上。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供ー种将总甙含量较低的产品总甙提高到95%以上的エ艺。エ艺流程为将甜菊糖原料溶于有机溶剂中，保持温度为25-45°C，保持2-8小时进行结晶；结晶过程中进行搅拌，搅拌转速为30_100rpm ;上述结晶溶液进行固液分离，烘干获得精制甜菊糖；结晶溶液的固液分离选择抽滤或离心分离；
所述甜菊糖原料的质量与溶剂的体积比为I : 2-10;上述甜菊糖原料总甙含量不得低于70%。所述有机溶剂为こ醇和丙酮的混合溶剂；所述こ醇纯度为90-100%，丙酮纯度为100% ；所述こ醇纯度优选为98-100% ；丙酮与こ醇的比例为I : 2-6;丙酮与こ醇的比例优选I : 3-5;所述结晶温度优选30_35°C，结晶时间优选4-6小时；所述结晶过程中搅拌转速优选40_60rpm ；所述离心机转速为1500-3000rpm ；所述精制样品的烘干温度为50_80°C。
有益效果本发明可将甜菊糖原料的总甙由70%提高至95%以上；本发明产品的收率较高，一般在35%_70%之间。
具体实施例方式下面通过具体的实施方案叙述本发明方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的结晶条件进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。本发明提高甜菊糖总甙含量的エ艺如下将甜菊糖原料溶于有机溶剂中，
保持温度为25-450C，保持2-8小时进行结晶；结晶过程中进行搅拌，搅拌转速为30_100rpm ;上述结晶溶液进行固液分离，烘干获得精制甜菊糖；结晶溶液的固液分离选择抽滤或离心分离；所述甜菊糖原料的质量与溶剂的体积比为I : 2-10;上述甜菊糖原料总式含量不得低于70%。所述有机溶剂为こ醇和丙酮的混合溶剂；所述こ醇纯度为90-100%，丙酮纯度为100% ；所述こ醇纯度优选为98-100% ；丙酮与こ醇的比例为I : 2-6;丙酮与こ醇的比例优选I : 3-5;所述结晶温度优选30_35°C，结晶时间优选4-6小时；所述结晶过程中搅拌转速优选40_60rpm ；所述离心机转速为1500_3000rpm ；所述精制样品的烘干温度为50_80°C。甜菊糖总甙的测定法法如下HPLC定量测定方法(JECFA 2010会议标准)检测步骤按照以下液相色谱条件检测每种糖甙的含量。试剂こ腈，在210nm下检测透光度>95%.标准品规格甜菊甙标准品干重纯度>99% 莱鲍迪式A标准品干重纯度>99%含有9种甜菊糖甙的基准溶液鲍含甜菊甙、莱鲍迪甙A、莱鲍迪甙B、莱鲍迪甙C、莱鲍迪甙D、莱鲍迪甙F、杜尔克甙A、悬钩子甙和甜菊双糖甙。用7 3的水こ腈溶液将含有9种甜菊糖甙的标准溶液进行稀释，以便用来确定各个糖甙的出峰时间。标准品可在日本Wako公司和美国ChromaDex公司买到。标准品溶液的配制精确称取50毫克甜菊甙标准品和50毫克莱鲍迪甙A标准品，分别放入50毫升的容量瓶中，然后加入7 3的水こ腈溶液进行溶解至50毫升刻度。样品溶液的配制精确称取50 — 100毫克甜菊甙样品，放入50毫升的容量瓶中，然后加入7 3的水こ腈溶液进行溶解至50毫升刻度。
检测步骤在以下条件下注入5 μ I的样品溶液。色谱柱Shiseido公司的Capcell pak C18MGII型色谱柱或者Phenomenex公司的Luna5 μ C18 (2) IOOA型色谱柱或者相当规格的色谱柱(长度250毫米；内径4. 6毫米，填料粒度5 μ m)。；流动相比例为32 68的こ腈和磷酸钠缓冲液(规格10mmol/L，pH值2. 6)的混合液。磷酸钠缓冲液的配置方法将2. 76克磷酸ニ氢钠溶解到2升水中，加入磷酸将pH值调整到2. 6流速I毫升/毎分钟。 检测器210nm紫外检测。色谱柱温度40°C记录大约30分钟的检测图谱。峰值识别和计算将样品溶液的出峰与含有9种甜菊糖甙的基准溶液的出峰时间(见附后图谱)相对比，确定样品溶液中各个出峰对应的糖甙。算出样品溶液中9种糖甙对应的峰面积，算出甜菊甙标准品溶液和莱鲍迪甙A标准品溶液的峰面积。按照以下公式，计算样品中莱鲍迪甙A之外的8种糖甙中每ー种糖甙的百分比%X= [ffs/ff] X [fxAx/As] x 100按照以下公式，计算样品中莱鲍迪甙A的百分比% 莱鲍迪式 A= [WR/ff] X [Ax/AR] X 100公式中X代表每种糖甙Ws是甜菊甙标准品溶液中甜菊甙的干重(mg)WR是莱鲍迪甙A标准品溶液中莱鲍迪甙A的干重(mg)W是样品溶液中样品的干重(mg)As是甜菊甙标准品溶液的峰面积AR是莱鲍迪甙A标准品溶液的峰面积Ax是样品溶液每种糖甙的峰面积fx是每种糖甙的分子量与甜菊甙分子量的比值I. 00 (甜菊甙)，I. 20 (莱鲍迪甙A), 1.00(莱鲍迪甙B)，I. 18 (莱鲍迪甙C)，1.40(莱鲍迪甙D)，I. 16(莱鲍迪甙F)，0. 98 (杜尔克甙A) ,0.80(悬钩子甙),0.80(甜菊双糖甙)。计算甜菊糖甙总量的百分比(将9种糖甙的百分比相加)实施例I取甜菊糖原料100g，加入200ml溶剂，こ醇纯度为98%，丙酮纯度为100%，丙酮乙醇=1 3，充分溶解后置于三ロ烧瓶中，水浴控制温度30摄氏度，搅拌速度为90rpm，时间为8小吋，将结晶混合液用布氏漏斗进行抽滤，所得晶体50°C过夜烘干，得干样42. 3g。液相測定结果为
权利要求
1.一种提高甜菊糖总甙的新方法，步骤如下 将甜菊糖原料溶于有机溶剂中，保持温度为25-45°C，保持2-8小时进行结晶；结晶过程中进行搅拌，搅拌转速为30-100rpm ;上述结晶溶液进行固液分离，烘干获得精制甜菊糖，所述甜菊糖原料的质量与溶剂的体积比为I : 2-10，所述有机溶剂为こ醇和丙酮的混合溶剤。
2.根据权利要求I所述ー种提高甜菊糖总甙的新方法，其特征在于所述结晶溶液的固液分离为抽滤或离心分离。
3.根据权利要求I所述ー种提高甜菊糖总甙的新方法，其特征在于所述こ醇纯度为.90-100%,丙酮纯度为100%。
4.根据权利要求3所述ー种提高甜菊糖总甙的新方法，其特征在于所述こ醇纯度优选为 98-I00%ο
5.根据权利要求I所述ー种提高甜菊糖总甙的新方法，其特征在于所述丙酮与こ醇的比例为I : 2-6。
6.根据权利要求5所述ー种提高甜菊糖总甙的新方法，其特征在于所述丙酮与こ醇的比例优选I 3-5。
7.根据权利要求I所述ー种提高甜菊糖总甙的新方法，其特征在于所述结晶温度优选.30-35 0C，结晶时间优选4-6小时。
8.根据权利要求I所述ー种提高甜菊糖总甙的新方法，其特征在于所述离心机转速为.1500-3000rpm,所述精制样品的烘干温度为50_80°C。
全文摘要
本发明公开了一种提高甜菊糖总甙的新方法，本发明属于生物工程和新型甜味剂领域，特别涉及甜菊糖总甙含量的方法。一种提高甜菊糖总甙的新方法，步骤如下将甜菊糖原料溶于有机溶剂中，保持温度为25-45℃，保持2-8小时进行结晶；结晶过程中进行搅拌，搅拌转速为30-100rpm；上述结晶溶液进行固液分离，烘干获得精制甜菊糖，所述甜菊糖原料的质量与溶剂的体积比为1∶2-10，所述有机溶剂为乙醇和丙酮的混合溶剂。本发明可将甜菊糖原料的总甙由70%提高至95%以上。
文档编号C07H1/08GK102690305SQ20121018487
公开日2012年9月26日 申请日期2012年6月6日 优先权日2012年6月6日
发明者乔长晟, 李利宁, 李振海, 楼鹏, 王彦飞 申请人:天津北洋百川生物技术有限公司