一种具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其应用的制作方法
【专利摘要】一种具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其应用。本发明涉及一种MERS-CoV合成肽疫苗及其应用，所述肽段选自下述氨基酸序列：SEQ?ID?NO：1，肽段的氨基酸序列为：CALPDTPSTLTPRSVR。含有该肽段的疫苗或药物组合物，含该肽段和生理学上可接受的载体组合物、非特异性免疫反应增强剂或上述肽段的变体，所述肽段“变体”是与所述肽段区别仅在于保守性替代和／或修饰、而仍保留了肽段的抗原性和／或免疫原性特性的肽段，肽段变体与已鉴定的肽段优选有大于70％同一性。用含有该肽段作为疫苗或药物组合物可以诱导出特异性的中和抗体对中东呼吸窘迫症冠状病毒(MERS-CoV)进行中和，从而保护机体抵御MERS-CoV的感染，该MERS-CoV多肽可能成为理想的MERS-CoV预防／治疗性候选疫苗的关键组分。
【专利说明】—种具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其应用
[0001]【技术领域】本发明涉及一种具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其应用，该疫苗可进行免疫和疫苗接种，属于生物【技术领域】。
[0002]【背景技术】目前已知的能感染人的冠状病毒共有六种，分别为20世纪60年代发现的人冠状病毒 HCoV-229E和 HCoV-0C43，2003 年新出现的 SARS (Severe acute respiratorysyndrome)冠状病毒SARS_CoV，2004年发现的人冠状病毒HCoV_NL63，2005年新发现的人冠状病毒HCoV-HKUI以及2012年7月在中东地区出现的新型人冠状病毒:中东呼吸系统综合症冠状病毒(MERS-CoV，曾称 HCoV-EMC)[1]。
[0003]MERS-CoV是2012年在中东地区从一个患有急性呼吸道疾病的病人中发现的一种新SARS样冠状病毒，病人的临床表现为急性呼吸道感染和肾功能衰竭。英国科学家通过对该病毒基因组测序及系统发生分析，发现该病毒为一种新的人冠状病毒(GenBank:JX869059) [1]。该病毒基因组全长30118bp，基因组结构从5’端到3’端依次为:5’ -UTR-ORFlab-S-0RF3-0RF4a-0RF4b-0RF5-E-M-N-3’UTR，从系统发生学分析认为该病毒属于β类冠状病毒的2c亚群，而与SARS基因组相似性为54.9% [2]。美国CDC的监测数据显示，MERS-CoV病毒具有较高的致死率，从2012年4月至今全球已确诊的114例患者中已死亡54例,死亡率达54% [3]。可见该病毒具有极高的危险性，很可能像SARS-CoV —样造成严重的呼吸感染疫情暴发。对于该病毒的疫苗和治疗药物的研发储备不容忽视。
[0004]在机体限制病毒进入和传播的适应性免疫防御中，中和抗体发挥着十分关键的保护作用。研究显示，冠状病毒的S蛋白不仅是其亲嗜性的主要决定因素，同时也是诱导机体产生中和抗体的主要抗原靶标，因此冠状病毒疫苗的研发通常以S蛋白作为主要免疫原。然而到目前为止，尚缺乏对 于新发MERS-CoV病毒S蛋白的免疫原性以及中和抗原表位的详细资料。
[0005]我们通过生物信息学分析分析了 MERS-CoV病毒S蛋白可能B细胞表位，从中筛选了部分得分较高的合成肽进行动物免疫后发现，采用MERS-CoV病毒S蛋白的抗原结合区(RBD，aa367-606)以及736-761位氨基酸多肽(aa736_761)免疫的实验动物血清中均能检测到有效的MERS-CoV中和抗体。其中RBD为传统的受体结合区域，已有数个研究小组的研究证明和提示其能诱导产生中和抗体[4_8]。而aa736-761的中和抗体诱导能力此前未见报道，为本研究小组最新发现和证明的MERS-CoV特异性中和抗体诱导抗原，同时也说明其为MERS-CoV侵入细胞的潜在受体结合相关位点。
[0006]这一发现具有重要的意义，不仅可以帮助理解该新发病毒感染的过程和机制，也能为阻断MERS-CoV感染提供新的疫苗设计思路。有望成为研发理想的MERS-CoV预防/治疗性候选疫苗的关键组分。
【发明内容】
:
[0007]本发明解决的问题在于提供一种MERS-CoV合成肽疫苗及其应用，将MERS-CoV合成肽免疫动物可以诱导出特异性的中和抗体。
[0008]本发明是通过以下技术方案来实现:[0009]—种中东呼吸系统综合症冠状病毒的合成肽，其氨基酸残基序列如SEQ.1D.N0.1所示。
[0010]所述的中东呼吸系统综合症冠状病毒的合成肽在制备针对中东呼吸系统综合症冠状病毒的预防性/治疗性疫苗的应用。
[0011]所述的中东呼吸系统综合症冠状病毒的合成肽在制备抗中东呼吸系统综合症冠状病毒的药物的应用。
[0012]所述的药物为诱发针对中东呼吸系统综合症冠状病毒中和抗体的体液免疫应答的药物。
[0013]与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果:
[0014]本发明提供的中东呼吸系统综合症冠状病毒的合成肽，为全新的抗原表位区段，单独免疫即能诱导产生病毒特异的中和抗体，表现出良好的免疫原性和免疫效果。因此，该MERS-CoV合成肽疫苗可能成为MERS-CoV预防/治疗性候选疫苗的关键组分。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1:MERS_CoVS蛋白结构及所用抗原所在位置示意图。
[0016]图2:免疫血清中抗原特异性IgG的滴度测定。
[0017]图3:所诱导抗体血清对体外抗原的特异性识别。
[0018]图4:不同合成肽所诱导产生的抗体中和能力比较。
图5:RBD和SP3(aa736-761)均能诱导产生MERS-CoV特异性中和抗体。
[0019]下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。以下实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如《分子克隆实验指南》(第三版，科学出版社，2005)等本领域常用工具书中所述的条件，或按试剂生产厂家所建议的条件进行。
[0020]在MERS-CoV的表位中筛选部分合成肽作为疫苗进行免疫，以达到针对MERS-CoV的免疫效果，从而达到预防/治疗中东呼吸系统综合症的目的，该免疫效果主要为诱导产生针对MERS-CoV特异的中和抗体。
[0021]实施例1:鉴于上述目的，首先进行表位肽的筛选与合成:
[0022]具体的MERS-CoV S蛋白表位肽选择依据生物信息学软件分析进行优选，如下表所示
[0023]
【权利要求】
1.一种中东呼吸窘迫症冠状病毒的合成肽疫苗，其特征在于，其氨基酸残基序列如SEQ.1D.N0.1 所示。
2.权利要求1所述的中东呼吸窘迫症冠状病毒合成肽在制备针对中东呼吸窘迫症冠状病毒的预防性/治疗性疫苗的应用。
3.权利要求1所述的中东呼吸窘迫症冠状病毒合成肽在制备抗中东呼吸窘迫症冠状病毒的药物的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的药物为诱发针对丙型肝炎病毒中和抗体 的体液免疫应答的药物。
【文档编号】C07K14/165GK103724406SQ201310581981
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年11月20日 优先权日:2013年11月20日
【发明者】谭文杰, 文波, 邓瑶, 杨扬, 耿合员, 孟昕, 王惠娟 申请人:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所