免疫刺激性6-芳基-5，6-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑衍生物的制备方法

专利名称：免疫刺激性6-芳基-5，6-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑衍生物的制备方法
美国专利3，274，209中描述了作为驱肠虫剂的6-芳基-2，3，5，6-四氢咪唑并〔2，1-b〕噻唑衍生物。美国专利4，584，305中描述了2，3，5，6-四氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑在帮助治愈肿瘤疾病中的应用。在Immunopharmacology，1，245-254(1979)、Clin.exp.Immunol.，22，486-496(1975)及其其中所引文献中描述了通常称为左旋咪唑的(S)-(-)-2，3，5，6-四氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑的免疫刺激性质(Immunostimulating properties)。在Gazz.Chim.Ital.，114，201-204(1984)〔CA.，101211027f〕中描述了化合物5，6-二氢-3，5，6-三苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑，而在J.Heterocycl.Chem.，19，343-348(1982)中描述了化合物5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑-3-乙酸乙酯二盐酸盐。看来没有化合物具有任何有用的药理或其它性质。
本发明化合物与先有技术中的化合物的区别在于其2，3-键是不饱和的，并且或其2位和/或其3位是取代的。此外，出人意料，本发明化合物是比先有技术化合物左旋咪唑强得多的免疫刺激药物。
本发明涉及具有下式结构的新的6-芳基-5，6-二氢咪唑并〔2，1-b〕噻唑衍生物及其可药用的酸加成盐和立体化学异构形式，
其中Ar为可被1-3个分别独立地选自下列基团的取代基任意取代的苯基，所述取代基为卤素、羟基、C1-6烷氧基、巯基、C1-6烷硫基、C1-6烷基、硝基、氨基、一和二(C1-6烷基)氨基、C1-6烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、C1-6烷基磺酰基氨基、三氟甲基、氰基、氨基羰基、一和二(C1-6烷基)氨基羰基、羟基羰基、C1-6烷氧羰基、甲醛基和羟甲基;吡啶基;噻吩基;呋喃基;或被C1-6烷基或卤素取代的呋喃基;
R1和R2分别独立地为C1-20烷基、(C3-7环烷基)C1-6烷基、C3-7环烷基、芳基或(芳基)C1-6烷基;并且R1和R2中之一也可以为氢;或者R1和R2也可以一起形成C3-6烷二基;每个芳基独立地为可被1-3个分别独立地选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、硝基、氨基、三氟甲基或氰基的取代基任意取代的苯基。
在上述定义中，“C1-6烷基”指具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基，如甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、丁基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1，1-二甲基乙基、戊基、己基等;“C1-20烷基”指C1-6烷基和其具有7-20个碳原子的高级同系物如庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基等和其分支异构体;“C3-7环烷基”指环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基;“C3-6烷二基”指具有3-6个碳原子的直链或支链二价烃基如1，3-丙二基、1，4-丁二基、1，5-戊二基、1，6-己二基等;“卤素”指氟、氯、溴和碘。
上述定义的式(Ⅰ)化合物中的一小类特别的化合物是其中R2为氢的那些化合物。
另一小类特别的化合物包括其中R2不是氢的那些式(Ⅰ)化合物。
上述各小类中令人感兴趣的式(Ⅰ)化合物是那些化合物，其中Ar为可被1-2个独立地选自卤素、硝基、羟基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6烷基羰基氨基和芳基羰基氨基的取代基任意取代的苯基;噻吩基;呋喃基或吡啶基。
特别令人感兴趣的化合物是令人感兴趣的化合物中R1为C4-10烷基、Ar为可被一个卤素原子、硝基、甲氧基或甲基任意取代的苯基的那些化合物。
最令人感兴趣的化合物为6-(4-溴苯基)-2-己基-5，6-二氢咪唑并〔2，1-b〕噻唑;6-(4-溴苯基)-2-戊基-5，6-二氢咪唑并〔2，1-b〕噻唑;5，6-二氢-2-戊基-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;2-己基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;2-庚基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;和5，6-二氢-2-辛基-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑，以及它们的可药用的酸加成盐和各种立体异构形式。
优选的化合物为2-己基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;(S)-(-)-2-己基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;(R)-(+)-2-己基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;所述对映异构形式的所有混合物及其可药用的酸加成盐。
根据各种取代基的性质，式(Ⅰ)化合物可以具有几个不对称碳原子。除非另外述及或指明，化合物的化学名称指所有可能立体化学异构形式的混合物，所述混合物包含基本分子结构的所有非对映异构体和对映异构体。每个手性中心的绝对构型可用立体化学描述符R和S指明。显然，式(Ⅰ)化合物的各种立体异构形式都包括在本发明的范围内。
式(Ⅰ)化合物具有碱性，所以，用适当的酸处理可将式(Ⅰ)化合物转化成其有治疗活性的无毒的酸加成盐。所述的酸有，例如，无机酸如氢卤酸如盐酸、氢溴酸等，硫酸、硝酸，磷酸等;或有机酸如乙酸，丙酸，羟乙酸，2-羟丙酸，2-氧丙酸，乙二酸，丙二酸，丁二酸，(Z)-2-丁烯二酸，(E)-2-丁烯二酸，2-羟基丁二酸，2，3-二羟基丁二酸，2-羟基-1，2，3-丙三酸，甲磺酸，乙磺酸，苯磺酸，4-甲苯磺酸，环己烷氨基磺酸，2-羟苯甲酸，4-氨基-2-羟苯甲酸等。反过来，用碱处理可将所述盐形式转化成游离碱形式。
术语“可药用的酸加成盐”也包括式(Ⅰ)化合物可形成的溶剂合物，并且所述溶剂合物包括在本发明的范围内。这样的溶剂合物的例子有，例如，水合物、醇化物等。
式(Ⅰ)化合物可方便地在适当的活化剂存在下、任意地在合适的反应惰性溶剂中通过式(Ⅱ)中间体环化来制备。
适当的活化剂包括可将羟基转化成活性离去基团W的试剂，例如，无机或有机酸如氢卤酸、硫酸、磷酸、多磷酸、多磷酸乙酯、乙酸等;卤化试剂如亚硫酰氯、三氯化磷、磷酸氯、氯化锌等;磺酰化试剂如甲磺酰氯、甲苯磺酰氯等;酰化试剂如乙酐、丙酐、苯甲酸酐、乙酰氯、丙酰氯、苯甲酰氯;脱水剂如二环己基碳化二亚胺等。中间体(Ⅲ)中的所述离去基团W表示，例如，水合氢离子;卤素如氯或溴;酰基如乙酰基、丙酰基、苯甲酰基等;或磺酰氧基如甲磺酰氧基、甲苯磺酰氧基等。合适的反应惰性溶剂有，例如，芳烃类如苯、甲苯、二甲苯等;卤代烃类如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳等;醚类如四氢呋喃、乙醚、1，4-二噁烷等;乙酐等;或这些溶剂的混合物。在一些情况下，在碱存在下进行中间体(Ⅲ)的环化反应可能是适当的，所述碱的例子有碱金属或碱土金属的碳酸盐或碳酸氢盐如碳酸钠、碳酸钾等或有机碱如三级胺(如三乙胺、N，N-二(1-甲基乙基)乙胺等。所述环化反应可以方便地在室温下进行，虽然在特殊的情况下轻微地加热反应混合物可能是有利的。
式(Ⅰ)化合物也可以由式(Ⅳ)咪唑啉或其等价的互变异构的硫醇形式与式R1-CH(W1)-C(＝O)-R2(Ⅴ)试剂反应制备。
在式(Ⅴ)和下文中，W1表示活性离去基团，例如，卤素如氯或溴;磺酰氧基如甲磺酰氧基、苯磺酰氧基、4-甲苯磺酰氧基等。所述环化反应可以在反应惰性溶剂中、任意地在适当的碱存在下、通过搅拌和，需要时，加热反应混合物来进行。适当的溶剂有，例如，醇类如甲醇、乙醇等;酮类如丙酮、4-甲基-2-戊酮等;羧酸类如乙酸、丙酸等;芳烃类如苯、甲苯等;卤代烃类如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳等;醚类如乙醚、四氢呋喃、1，4-二噁烷等;偶极非质子性溶剂如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、吡啶等;或这些溶剂的混合物。适当的碱有，例如，无机碱类如碱金属或碱土金属的碳酸盐、碳酸氢盐、氧化物或氢氧化物(如碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾等);氢化钠;或有机碱类如碱金属烷氧化物(如甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾等);胺类如N-(1-甲基乙基)-2-丙胺、三乙胺、1，8-二氮杂双环〔5.4.0〕十一-7-烯等。为了加快反应速率，加热反应物、特别是在回流温度下加热反应混合物，这样做可能是有利的。
在一些情况下，由咪唑啉(Ⅳ)与式(Ⅴ)试剂的被保护的衍生物、特别是缩醛(Ⅶ)如二甲基缩醛、二乙基缩醛、乙二基缩醛或丙二基缩醛反应，可以方便地得到式(Ⅵ)中间体。
随后可在如上定义的反应惰性溶剂中用适当的酸如盐酸、硫酸等酸、羧酸如乙酸、丙酸、三氯乙酸、三氟乙酸等处理，将所述中间体(Ⅵ)环化成式(Ⅰ)化合物。
上述的中间体和起始原料中，有些是已知的，它们可以按照技术上已知的制备所述或相似的中间体和起始原料的方法制备，而有些中间体是新的。下面更详细地描述一些这样的制备方法。
式(Ⅱ)中间体是新的，通常它们可通过还原式(Ⅷ)的中间体酮制备。
所述还原反应可方便地在适当的反应惰性溶剂中通过用还原剂处理中间体醛(Ⅷ)来进行。所述还原剂的例子有碱金属硼氢化物如硼氢化锂、硼氢化钾、或最好是硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三(1-甲基丙基)硼氢化钠、三乙基硼氢化钠、三甲氧基硼氢化钠、氢化二(2-甲氧基乙氧基)铝钠、氢化铝锂、三烷氧基铝烷基锂等。适当的溶剂有，例如，水;醇类如甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇等;醚类如乙醚、四氢呋喃、1，4-二噁烷、2-甲氧基乙醇、异丙醚、1，2-二甲氧基乙烷、1，1′-氧双(2-甲氧基乙烷)等;芳烃类如苯、甲苯、二甲苯等;或这些溶剂的混合物。
或者，式(Ⅱ)中间体也可以由式(Ⅸ)环氧化物与式(Ⅹ)的噻唑胺反应得到。
所述反应可方便地在反应惰性溶剂中，任意地在适当的酸存在下通过搅拌和任意地加热反应混合物来进行。合适的反应惰性溶剂有芳烃类如苯、甲苯等;卤代烃类如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳等;醚类如乙醚、四氢呋喃、1，4-二噁烷等;偶极非质子性溶剂如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、乙腈等;或这些溶剂的混合物。适当的酸有有机酸如4-甲苯磺酸、甲磺酸等。
式(Ⅷ)中间体可以通过用其中W为如上定义的活性离去基团的式(Ⅺ)试剂对式(Ⅹ)噻唑胺进行N-烷基化得到。
所述N-烷基化反应可以在反应惰性溶剂中通过搅拌和任意地加热反应混合物来进行。作为反应惰性溶剂的例子，可提及的有醇类如甲醇、乙醇、2-丙醇、1-丁醇等;酮类如丙酮、4-甲基-2-戊酮等;芳烃类如苯、甲苯等;卤代烃类如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳等;醚类如乙醚、四氢呋喃、1，4-二噁烷等;酯类如乙酸乙酯等;偶极非质子性溶剂如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、乙腈等;或这些溶剂的混合物。在一些情况下，加入碱金属碘化物如碘化钾等可能是适当的。
式(Ⅳ)中间体可以由式(Ⅻ)二胺与其中L表示适当的离去基团的式L-C(＝S)-L(ⅩⅢ)试剂进行环化反应得到。
作为式(ⅩⅢ)试剂的典型实例，可提及的有硫脲、硫代碳酰二氯、二硫化碳、1，1′-硫代羰基二〔1H-咪唑〕等。所述环化反应可方便地在反应惰性溶剂中通过搅拌和任意地加热反应混合物来进行。反应惰性溶剂有，例如，芳烃类如苯、甲苯、二甲苯等;卤代烃类如三氯甲烷、四氯化碳、氯苯等;醚类如乙醚、四氢呋喃、1，4-二噁烷等;偶极非质子性溶剂如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、1-甲基-2-吡咯烷酮、吡啶、甲基吡啶、二甲基吡啶、四氢噻吩1，1-二氧化物等;或这些溶剂的混合物。然而，在一些情况下，最好不用溶剂加热反应混合物。此外，向反应混合物中加入碱如胺类如三乙胺、N-(1-甲基乙基)-2-丙胺、4-甲基吗啉等，这样做可能是适当的。当所述式(ⅩⅢ)试剂是二硫化碳时，所述反应也可方便地在水或醇如甲醇、乙醇、丙醇等中在碱如氢氧化钠、氢氧化钾等存在下进行。或者，后一反应也可以在碱性溶剂如吡啶等中在亚磷酸酯如亚磷酸二苯酯存在下进行。
式(Ⅻ)中间体通常可以按照Ann.Chem.，494，143(1932)中所述的方法制备和拆分，所述文献在此引入作为参考。或者，式(Ⅻ)二胺也可以在氨或其酸加成盐如氯化铵等存在下由适当取代的醛ArCHO与碱金属氰化物如氰化钾或氰化钾等反应制备。可以按照技术上已知的还原方法将如此得到的氨基腈还原成二胺(Ⅻ)，例如，在合适的溶剂如醇(如甲醇、乙醇、2-丙醇等)、醚(如乙醚、异丙醚、四氢呋喃、1，4-二噁烷)、芳烃(如苯、甲苯等)中，在合适的酸如盐酸、氢溴酸、乙酸等存在下，用Pd/C、Pt/C、阮内镍等进行催化氢化反应。
式(Ⅹ)中间体可由式(Ⅴ)中间体与硫脲(ⅪⅤ)反应得到。
所述反应可方便地按照上述从中间体(Ⅳ)和(Ⅴ)制备式(Ⅰ)化合物的方法进行。
或者，式(Ⅹ)中间体也可如上由中间体(Ⅳ)和(Ⅶ)制备式(Ⅰ)化合物时所述的那样由中间体(Ⅶ)与硫脲(ⅪⅤ)反应、然后用适当的酸使所制得的中间体(ⅩⅤ)环化得到。
式(Ⅰ)化合物的纯的立体异构形式可通过技术上已知的方法得到。非对映异构体可以通过物理分离方法如选择结晶法和层析法(如逆流分配法、液相层析法等分离;而对映异构体可以通过选择结晶其与光学活性的酸的非对映异构的盐而彼此分离，或者最好通过层析技术如用手性固定相如适当衍生化的纤维素(如三(二甲基氨甲酰基)纤维素，即Chiracel OD )等进行液相层析来分离。纯的立体化学异构形式也可以由相应的适应起始原料的纯的立体化学异构形式衍生，条件是反应立体有择地发生。
特别出人意料的是，本发明化合物是比先有技术化合物(S)-(-)-2，3，5，6-四氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑强得多的免疫刺激剂，后者公开在美国专利3，274，209和4，584，305中，通常被称为左旋咪唑。通过在微摩尔量的本发明化合物存在下测定在刀豆球A刺激的鼠胸腺细胞中3H-胸腺嘧啶核甙结合的增加可以清楚地说明本发明化合物的优越的免疫刺激性质。而(S)-(-)-2，3，5，6-四氢-6-苯基咪唑〔2，1-b〕噻唑(左旋咪唑)仅在约100μM浓度时表现出其最大共刺激(Costimulatory)作用(Immunopharmacology，1，246(1979)“在50μg/ml(～200μM)浓度下3H-胸腺嘧啶核甙的结合是最大的”，本发明的化合物在约0.1至约1μM浓度时就显示出最大共刺激作用。这样就发现，当本发明化合物的浓度比先有技术化合物的浓度低100～1000倍时，本发明化合物还具有活性。
令人惊奇的是，式(Ⅱ)和(Ⅷ)中间体也具有免疫刺激性质，这可以由上述试验方法证明。
由于式(Ⅰ)化合物和式(Ⅱ)和(Ⅷ)中间体具有改进的免疫刺激性质，所以可用它们来治疗患有其中免疫系统被损害或抑制的失调和/或疾病的人和温血动物。这些失调和/或疾病的典型实例包括，例如，细菌感染、病毒感染(如疣、单纯性疱疹、病毒性肝炎、AIDS等)、结核病、风湿性疾病等。本发明化合物的一个特别有意义的用途是把它们用作抗肿瘤治疗的辅药。所述用途可以包括对病人进行抗肿瘤治疗的同时，对所述病人用式(Ⅰ)化合物或式(Ⅱ)或(Ⅷ)中间体进行治疗，以及治疗经受抗肿瘤治疗后病人的复发疾病。术语“抗肿瘤治疗”是指通常用于治疗患有恶性疾病的对象的方法，例如，外科手术、放射疗法以及特别是化学疗法。
考虑到目的化合物和中间体的有用的药理学性质，可把它们配制成各种适于服用的药物形式。为制备本发明的药物组合物，可把有效量的呈酸加成盐形式或碱形式的具体化合物作为活性成分，与可药用载体做成紧密混合物，可以根据给药所需的制剂形式采用各种载体形式。希望把这些药物组合物做成特别适于口服、直肠给药、经皮给药或非肠道注射用的单一剂型。例如，在制备口服剂型时，在口服液体制剂如悬浮液、糖浆、酏剂及溶液的情况下，可以使用任何常用的药物介质如水、二醇类、油、醇类等;或在粉剂、丸剂、胶囊剂和片剂情况下，可以使用固体载体如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘结剂、崩解剂等。由于易于服用，所以片剂和胶囊剂是最有利的口服单位剂型，在此种情况下，很显然使用的是固体药物载体。对于非肠道组合物，载体通常包括无菌水(至少大部分)，虽然也包括其它成分(如提高溶解度的成分)。例如，可以制备注射液，其中的载体包括盐溶液，葡萄糖液或两者混合液。也可以制备可注射悬浮液，在此情况下，可以使用适当的液体载体和助悬剂等。在适于经皮给药的组合物中，载体可随意地包括提高穿透性的试剂和/或合适的润湿剂，还可随意地与少量比例任何性质的合适的添加剂结合，所述添加剂不对皮肤产生任何明显的有害影响。所述添加剂可以有利于皮肤给药和/或有助于制备所需的组合物。这些组合物可以多种方式给药，如作为皮用膏药(斑贴)、点剂(spot-on)或软膏给药。由于式(Ⅰ)化合物和中间体(Ⅱ)和(Ⅷ)的酸加成盐比相应的碱的溶解度大，显然上述盐更适于制备水溶液组合物。
由于易于服用和剂量均一，所以把药物组合物配制成剂量单位形式是特别有利的。本说明书和权利要求书中所用的“剂量单位形式”是指适于作为一个单位剂量的分散单位，每一单位含有与所需的药物载体结合的预定量的活性成分，该量是根据产生所需治疗效果计算的。这种剂量单位形式的例子有片剂(包括片核和包衣片)、胶囊、丸剂、散剂、糯米纸囊剂、注射液或注射悬浮液、茶匙、汤匙等，及其分隔开来的多室剂型。每一剂量单位中的活性成分的量可以为0.1～500mg，特别是0.5～100mg，而最好是2～40mg。
鉴于目的化合物和中间体作为免疫刺激剂的有用性，本发明还提供了治疗患有其中免疫系统被损害的失调和/或疾病的人和温血动物的方法，所述方法包括给所述人或温血动物服用免疫刺激有效量的与可药用载体混合的式(Ⅰ)化合物或式(Ⅱ)或(Ⅷ)中间体、它们的可药用酸加成盐或它们的立体异构形式。治疗患有其中免疫系统被损害的失调和/或疾病的对象的技术上熟练人员可容易地从下面给出的试验结果确定式(Ⅰ)化合物和中间体(Ⅱ)和(Ⅷ)的免疫刺激有效量。通常，预期式(Ⅰ)化合物或式(Ⅱ)或(Ⅷ)中间体的有效日剂量为0.01-5mg/kg体重/天，优选为0.04-2.5mg/kg体重/天。将所需剂量作为单剂量或分成二、三、四或更多个分剂量在一天内以适当的间隔给药，这样做可能是合适的。可将所述分剂量配制成单位剂量形式。显然，所述的有效日剂量取决于所治疗对象的状况和反应、失调和/或疾病的严重程度以及医生对所开处方中的本发明化合物的评价，并且所述有效量可以相应地减少或增加。因此，上述的有效量范围仅是指南性的，并不限制本发明的范围和应用。
本发明方法的另一方面提供了一种治疗患有肿瘤疾病的对象的方法，所述方法包括，在进行抗肿瘤治疗如外科手术、放射治疗以及特别是化学治疗的同时，给予免疫刺激有效量的式(Ⅰ)化合物或式(Ⅱ)或(Ⅷ)中间体。作为可用于本方法的化学治疗中的抗肿瘤药物的实例，可提及的有环胞苷、硫唑嘌呤、争光霉素、白消安、二甲睾酮、卡巴醌、双氧乙基亚硝脲、苯丁酸氮芥、氯氨铂、磷酰胺、阿糖胞苷、甲氮咪胺、更生霉素、阿霉素、丙酸甲氢睾酮、环硫雄醇、磷雌醇芥、鬼臼乙叉甙、5-氟尿嘧啶、磷酸己烯雌酚、羟基脲、环己亚硝脲、甲烯雌醇、苯丙氨酸氮芥、6-巯基嘌呤、甲氨蝶呤、二溴甘露醇、丝裂霉素C、鬼臼酰乙肼、邻对滴滴滴、霉酚酸、尼氮芥、溴丙哌嗪、嗪消安、松龙苯芥、甲基苄肼、丙亚胺、呋氟尿嘧啶、鬼臼噻吩甙、睾内酯、噻替派、硫鸟嘌呤、三亚胺醌、氯乙环磷酰胺、尿噻啶氮芥、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺等抗肿瘤药物。
根据本发明的方法，将抗肿瘤有效量的抗肿瘤药物，特别是上述具体提及的一种或多种抗肿瘤药物，与免疫刺激有效量的式(Ⅰ)化合物或式(Ⅱ)或(Ⅷ)中间体同时地、分别地或先后地给予所治疗的对象。通常，预期抗肿瘤药物的有效剂量为通常在抗肿瘤治疗中所用的剂量，式(Ⅰ)化合物或式(Ⅱ)或(Ⅷ)中间体的免疫刺激有效量为0.01-5mg/kg体重/天，优选为0.04-2.5mg/kg体重/天。所述方法进一步包括用免疫刺激有效量的式(Ⅰ)化合物或式(Ⅱ)或(Ⅷ)中间体治疗已经受抗肿瘤治疗后病人的复发疾病。
下述实例是用来说明本发明，而不是限制本发明的范围。除非另有说明，其中所有份数均以重量计。
实验部分A.中间体的制备实例1a)在搅拌下，向21份十八碳醛在65份二氯甲烷和50份1，4-二噁烷中的溶液中滴加34.1份溴。在室温下搅拌4小时后，将反应混合物倒入250份水中。用二氯甲烷提取产物，提取液经干燥、过滤并蒸发，得到28份(95%)的2-溴十八碳醛(中间体1)。
b)将6.7份硫脲、28份中间体1和80份乙醇的混合物在回流温度下搅拌1小时。蒸发反应混合物，残留物用NaOH水溶液洗涤。用二氯甲烷提取产物，提取液经干燥、过滤并蒸发，得到11.8份(45%)5-十六烷基-2-噻唑胺(中间体2)。
实例2
将6份5-庚基-2-噻唑胺(如中间体2那样制备)、6份2-溴-1-苯乙酮和120份乙腈的混合物在室温下搅拌过夜。滤出沉淀，用异丙醚洗涤并干燥，得到10份2-(5-庚基-2，3-二氢-2-亚氨基-3-噻唑基)-1-苯乙酮氢溴酸盐(中间体3)。
实例3在搅拌和冷却(冰浴)下，向10份中间体3在120份甲醇中的混合物中分批加入1份硼氢化钠。在室温下搅拌2小时后，用100份水稀释反应混合物，然后蒸发。残留物在水中研制，过滤并溶于三氯甲烷中。将该溶液干燥、过滤并蒸发。残留物用2-丙醇结晶，得到5.3份5-庚基-2，3-二氢-2-亚氨基-α-苯基-3-噻唑乙醇，m.p.123.5℃(中间体4)。
按相似的方法制得了表1和2中所列的中间体。
表1
(＊)用乙醇代替甲醇作为溶剂
实例4a)在水浴上加热的同时，将51份2-溴-1-(2-噻吩基)乙酮、28.5份5-甲基-2-噻唑胺和240份乙腈的混合物搅拌1小时。冷却后，滤出沉淀，用乙醇洗涤，并真空干燥，得到54份2-(2，3-二氢-2-亚氨基-5-甲基-3-噻唑基)-1-(2-噻唑基)乙酮氢溴酸盐;m.p.207.5-208℃(中间体56)。
b)在蒸汽浴上将38份中间体56、19份乙酐、19份吡啶和300份三氯甲烷的混合物加热6小时。冷却后，反应混合物用氨水洗涤。分出有机层，干燥、过滤并蒸发。残留物用甲苯重结晶，得到20份N-〔2，3-二氢-3-〔2-氧代-2-(2-噻吩基)乙基〕-5-甲基-2-噻唑亚基〕乙酰胺;m.p.187-188.5℃(中间体57)。
c)在搅拌下，向7份中间体57在100份甲醇中的悬浮液中滴加0.95份硼氢化钠。在室温下搅拌1小时后，蒸发溶剂。残留物溶于水中，用三氯甲烷提取。将提取液干燥、过滤并蒸发。残留物用热甲苯重结晶，得到6份N-〔2，3-二氢-3-〔2-羟基-2-(2-噻吩基)乙基〕-5-甲基-2-噻唑亚基〕乙酰胺;m.p.114-115℃(中间体58)。
按相似的方法，还制得N-〔2，3-二氢-3-〔2-羟基-2-(2-噻唑基)乙基〕-4-甲基-2-噻唑亚基〕乙酰胺;m.p.105.5-107℃(中间体59)。
B.最终化合物的制备实例5将4份中间体4和36份硫酸的混合物在0℃搅拌0.5小时，然后在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物倒入碎冰中，用氨水碱化。用二氯甲烷提取产物，将提取液干燥、过滤并蒸发。将残留物在2-丙醇中转化成乙二醇盐。滤出产物并干燥，得到3份2-庚基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑乙二醇盐，m.p.108.7℃(化合物34)。
实例6在搅拌下，向9.8份中间体6在75份三氯甲烷中的溶液中滴加5份亚硫酰氯。在50℃搅拌1小时后，蒸发反应混合物，残留物溶于100份Na2CO3水溶液(2N)中。将该溶液在90℃搅拌1小时，冷却，用三氯甲烷提取。将提取液干燥、过滤并蒸发。残留物用甲苯和石油醚的混合物结晶，得到3.5份6-(4-溴苯基)-2-乙基-5，6-二氢咪唑并〔2，1-b〕噻唑;m.p.74.8℃(化合物2)。
实例7在搅拌和冷却(0℃)下，向16份亚硫酰氯中分批加入5.5份中间体58，同时保持温度低于10℃。在室温下搅拌2小时后，在低于20℃的温度下加入50份乙酐。蒸馏掉形成的乙酰氯(136℃)，蒸发残留物。将残留物的油状物溶于水和盐酸的混合物中。过滤后，用氨水碱化该溶液，用甲苯提取。将提取液干燥、过滤并蒸发。残留物在2-丙醇中转化成乙二醇盐。滤出所述盐，用丙酮洗涤后干燥，得到1.5份(±)-5，6-二氢-2-甲基-6-(2-噻吩基)咪唑并〔2，1-b〕噻唑乙二醇盐;m.p.170-171.5℃(化合物56)。
实例8向5.3份(S)-(+)-2-巯基-4-苯基-2-咪唑啉(U.S.-3，274，209)在63份乙酸中的溶液中加入6.2份2-溴辛醛。在回流温度下搅拌1.5小时后，蒸发溶剂。残留物溶于水中，用氨水碱化。用甲苯提取游离碱，将提取液干燥、过滤并蒸发。残留物在2-丙醇中转化成乙二醇盐。滤出所述盐并干燥，得到3.1份(27.4%)产物;m.p.132.7℃。蒸发母液，残留物用氨水处理。用二氯甲烷提取产物，提取液干燥、过滤并蒸发。残留物用柱层析(硅胶;CH2Cl2/CH3OH(NH3)97.5∶2.5)纯化。蒸发所需部分中的洗脱剂，将残留物如前所述转化成乙二醇盐，得到1.6份(14.2%)产物;m.p.136.3℃。总产量4.7份(41.6%)(S)-(-)-2-己基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑乙二醇盐(1∶1)(化合物50)。
〔α〕20D(馏分2)＝-32.40°(c＝1%，甲醇中)。
按相似的方法，用甲醇代替乙醇作为溶剂，并用回流15小时代替1.5小时，制得化合物51。
相似地，通过先在甲醇中回流17小时，然后以乙酸为溶剂继续回流15小时，制得化合物52。
实例9将1.78份2-巯基-4-苯基-2-咪唑啉、44.5份四氢呋喃和0.92份氢化钠在矿物油中的分散液(50%)的混合物在室温下搅拌45分钟。加入1.5份2-氯环己酮，继续搅拌2小时。用水稀释反应混合物，然后蒸发。将残留物在2N HCl中搅拌15分钟，然后用氨水碱化。用二氯甲烷提取产物，提取液干燥、过滤并蒸发。残留物用柱层析(硅胶;CH2Cl2/CH3OH 955;CH2Cl2/CH3OH/CH3OH(NH3)97∶2∶1)纯化两次。蒸发所需部分中的洗脱剂，将残留物在四氢呋喃中转化成乙二醇盐。滤出该盐，干燥，得到1.6份(46.2%)2，3，5，6，7，8-六氢-2-苯基咪唑并〔2，1-b〕苯并噻唑乙二醇盐(1∶1);m.p.146.2℃(化合物53)。
实例10用制备柱层析(Chiracel OD
;己醇/2-C3H7OH90∶1)将3.8份化合物33分成R和S异构体。蒸发(R)-(+)部分的洗脱剂，将残留物在2-丙醇中转化成乙二醇盐。滤出产物并干燥，得到1.2份(24.0%)(R)-(+)-2-己基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑乙二醇盐(1∶1);m.p.135.1℃;〔α〕20D＝+32.3℃(c＝1%，在CH3OH中)(化合物54)。蒸发(S)-(-)部分中的洗脱剂，如对(R)-(+)那样进行相似的处理，得到1.1份(22.0%)的(S)-(-)-2-己基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑乙二醇盐(1∶1);m.p.142.2℃;〔α〕20D＝-30.34°(c＝1%，在CH3OH中)(化合物50)。
按照“实例编号”栏中实例的方法制得了表3和表4中所列的所有其它化合物。
C.药理学实例本发明化合物的免疫刺激性质可由下述试验方法说明。
实例11对由刀豆球A刺激的鼠胸腺细胞中3H-胸腺嘧啶核甙结合的共刺激作用(描述在Int.J.Immunopharm.，1，233-237(1979)培养基由补充有100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和2mM L-谷酰胺(GIBCO，Grand Island，New York)的Earle氏最小必需培养基(MEM)和5%胎牛血清(FCS)组成。
培养方法在无菌条件下取出小鼠胸腺，在冷的培养基中用钳状物挑开，并通过尼龙纱布过滤。然后用培养基洗涤细胞。用诺伊博尔血细胞计数器进行细胞计数和活力试验。将培养物分成一式三份装在16×25mm的轻轻盖住的塑料管(Faleon no.3033)中。培养物含有106个有活力的胸腺细胞、刀豆球A(2μg)和试验化合物，其总体积为1.0ml。将塑料管在5%CO2气氛中于37℃进行培养。培养64小时后，加入1μCi的3H-胸腺嘧啶核甙使细胞脉冲4小时，然后将培养物用2ml0.9%NaCl洗涤一次，用1ml5%三氯乙酸洗涤两次。将所得沉淀物溶于0.3ml0.5N的氢氧化钠中，转移到计数瓶中，加入10ml Instagel。用Packard Tri-Carb液体闪烁光谱计测量结合情况。
如下测定试验化合物的共刺激作用。对不同浓度的式(Ⅰ)试验化合物测定在刀豆球A(2μg/ml)和试验化合物存在下每毫升培养物中的细胞数与在单独的刀豆球A(2μg/ml)存在下每毫升培养物中的细胞数之比。表5给出了当观察到对3H-胸腺嘧啶核甙结合的共刺激作用最大(即计算的最大比率)时试验化合物的浓度(μM)。
参考化合物左旋咪唑100μMD.组合物实例下述配方列举的是按照本发明适于对温血动物进行全身给药的剂量单位形式的典型的药物组合物。
在所有实例中所用的“活性成分”(A.I.)是指式(Ⅰ)化合物、其可药用的酸加成盐或其立体化学异构形式。
实例12口腔滴剂在60-80℃下，将500g活性成分(A.I.)溶于0.5l2-羟基丙酸和1.5l聚乙二醇中。冷却至30-40℃后，加入35l聚乙二醇，并将混合物充分搅拌。然后加入1750g糖精钠在2.5l纯水中的溶液，并在搅拌下加入2.5l可可调味香料和足量的聚乙二醇至体积50l，由此提供了含10mg/ml A.I.的口腔滴剂。将得到的溶液装入合适的容器中。
实例13口服液将9g4-羟基苯甲酸甲酯和1g4-羟基苯甲酸丙酯溶于4l煮沸的纯水中。在3l该溶液中先溶解10g2，3-二羟基丁二酸，然后溶解20gA.I.。将后一种溶液与前一种溶液的剩余部分合并，于其中加入12l1，2，3-丙三醇和3l山梨醇70%溶液。将40g糖精钠溶于0.5l水中，加入2ml树莓和2ml醋粟香精。将后一种溶液与前一种溶液合并，加入足量的水至体积20l，由此提供了每茶匙(5ml)含5mgA.I.的口服液，将得到的溶液装入合适的容器中。
实例14胶囊将20gA.I.、6g月桂基硫酸钠、56g淀粉、56g乳糖、0.8g胶态二氧化硅和1.2g硬脂酸镁一起剧烈搅拌。然后把得到的混合物装入1000个合适的硬明胶胶囊中，每个胶囊含有20mgA.I.。
实例15薄膜包衣片片核的制备将100gA.I.、570g乳糖和200g淀粉的混合物充分混合，然后用5g十二烷基硫酸酯钠和10g聚乙烯吡咯烷酮(Kollidon-K90 )在约200ml水中的溶液润湿。将湿粉状混合物过筛，干燥，再过筛，然后加入100g微晶纤维素(Avicel )和15g氢化植物油(Sterotex )。将整个混合物充分混合并压成片，得到10，000片，每片含10mg A.I.。
包衣于10g甲基纤维素(Methocel 60HG )在75ml变性酒精中的溶液中加入5g乙基纤维素(Ethocel 22 cps )在150ml二氯甲烷中的溶液。然后加入75ml二氯甲烷和2.5ml1，2，3-丙三醇。将10g聚乙二醇熔化并溶解于75ml二氯甲烷中。将后一种溶液加到前一种溶液中，然后加入2.5g硬脂酸镁、5g聚乙烯吡咯烷酮和30ml浓缩的着色悬浮液(Opaspray K-1-2109 )将整个混合物均化。在包衣装置中用得到的这种混合物对片核进行包衣。
实例16注射液将1.8g4-羟基苯甲酸甲酯和0.2g4-羟基苯甲酸丙酯溶于约0.5l煮沸的注射用水中。冷却至约50℃后，搅拌下加入4g乳酸、0.05g丙二醇和4g A.I.。将该溶液冷却至室温，用足量的注射用水补足1l，得到每毫升含4mgA.I.的溶液。将该溶液过滤灭菌(U.S.P.ⅩⅦ P.811)并装入无菌容器中。
实例17栓剂将3gA.I.溶于3g2，3-二羟基丁二酸在25ml聚乙二醇400中的溶液中。将12g表面活性剂(SPAN )和足量的甘油三酸酯(Witepsol 555 )(加至300g)一起溶化，并将后面的混合物与前一种溶液很好混合。将由此得到的混合物倒入37-38℃的模子中，形成100粒栓剂，每粒含30mgA.I.。
权利要求
1.制备式(Ⅰ)化合物、其可药用的酸加成盐或其立体异构形式的方法，
式中Ar为可被1-3个分别独立地选自下列基团的取代基任意取代的苯基，所述取代基为卤素、羟基、C1-6烷氧基、巯基、C1-6烷硫基、C1-6烷基、硝基、氨基、一和二(C1-6烷基)氨基、C1-6烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、C1-6烷基磺酰基氨基、三氟甲基、氰基、氨基羰基、一和二(C1-6烷基)氨基羰基、羟基羰基、C1-6烷氧羰基、甲醛基和羟甲基；吡啶基；噻吩基；呋喃基；或被C1-6烷基或卤素取代的呋喃基；R1和R2分别独立地为C1-20烷基、(C3-7环烷基)C1-6烷基、C3-7环烷基、芳基或(芳基)C1-6烷基；并且R1和R2中之一也可以为氢；或者R1和R2也可以一起形成C3-6烷二基；每个芳基独立地为可被1-3个分别独立地选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、硝基、氨基、三氟甲基或氰基的取代基任意取代的苯基，其特征在于a)在活化剂存在下，任意地在反应惰性溶剂中，使式(Ⅱ)中间体环化，
式中R1、R2和A如在式(Ⅰ)中所定义；b)在反应惰性溶剂中，任意地在碱存在下，使式(Ⅳ)的咪唑啉与其中R1和R2如在式(Ⅰ)中所定义而W1为活性离去基团的式R1-CH(W1)-C(=O)-R2(Ⅴ)试剂进行环化反应，
式中Ar如在式(Ⅰ)中所定义；c)先使式(Ⅳ)的咪唑啉与式(Ⅶ)的缩醛进行反应，然后用适当的酸处理使所得的式(Ⅵ)中间体进行环化反应，
式中R1和R2如在式(Ⅰ)中所定义，W1为活性离去基团，R为甲基或乙基，或者两个R一起形成乙二基或丙二基，
d)通过在手性固定相上洗脱式(Ⅰ)化合物的外消旋混合物的溶液分离其对映异构体形式；并且若进一步需要的话，用药学上可接受的酸处理式(Ⅰ)化合物将其转化成盐形式；或者反过来，用碱处理其盐形式将盐形式转化成游离碱形式；和/或制备其立体化学异构形式。
2.根据权利要求1的方法，其中，在起始原料和所制得的化合物中，R2为氢。
3.根据权利要求2的方法，其中，在起始原料和所制得的化合物中，Ar为可任意地被1-3个独立地选自下述基团的取代基取代的苯基，所述基团是卤素、硝基、羟基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6烷羰基氨基或芳羰基氨基;噻吩基;呋喃基或吡啶基。
4.根据权利要求3的方法，其中，在起始原料和所制得的化合物中，R1为C1-4烷基，Ar为可任意地被一个卤素、硝基、甲氧基或甲基取代的苯基。
5.根据权利要求4的方法，其中，在起始原料中，R1为戊基、己基、庚基或辛基，Ar为苯基或4-溴苯基;所制得的化合物为6-(4-溴苯基)-2-己基-5，6-二氢咪唑并〔2，1-b〕噻唑;6-(4-溴苯基)-2-戊基-5，6-二氢咪唑并〔2，1-b〕噻唑;5，6-二氢-2-戊基-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;2-己基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;2-庚基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;和5，6-二氢-2-辛基-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑，以及它们的可药用的酸加成盐或各种立体异构形式。
6.根据权利要求5的方法，其中，在起始原料中，R1为己基，Ar为苯基;所制得的化合物为2-己基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;(S)-(-)-2-己基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;(R)-(+)-2-己基-5，6-二氢-6-苯基咪唑并〔2，1-b〕噻唑;所述对映异构形式的混合物或其可药用的酸加成盐。
7.根据权利要求1a)的方法，其中包括制备式(Ⅱ)化合物、其可药用的酸加成盐或其立体异构形式的方法，
式中Ar、R1和R2如在权利要求1中所定义，其特征在于a)在反应惰性溶剂中用还原剂还原式(Ⅷ)化合物，
式中R1、R2和Ar如在式(Ⅱ)中所定义;b)在反应惰性溶剂中，任意地在酸存在下，使式(Ⅸ)的环氧化物与式(Ⅹ)的噻唑胺反应，
式中Ar如在式(Ⅱ)中所定义，
式中R1和R2如在式(Ⅱ)中所定义;c)通过在手性固定相上洗脱式(Ⅱ)化合物的外消旋混合物的溶液分离其对映异构体形式;并且若进一步需要的话，用药学上可接受的酸处理式(Ⅱ)化合物将其转化成盐形式;或者反过来，用碱处理其盐形式将盐形式转化成游离碱形式;和/或制备其立体化学异构形式。
8.根据权利要求7a)的方法，其中包括制备式(Ⅷ)化合物、其可药用的酸加成盐或其立体化学异构形式的方法，
式中Ar、R1、R2如在权利要求1中所定义，其特征在于a)在反应惰性溶剂中，用式(Ⅺ)试剂对式(Ⅹ)噻唑胺进行N-烷基化反应，
式中Ar如在式(Ⅷ)中所定义，W为活性离去基团，
式中R1和R2如在式(Ⅷ)中所定义;b)通过在手性固定相上洗脱式(Ⅷ)化合物的外消旋混合物的溶液分离其对映异构体形式;并且若进一步需要的话，用药学上可接受的酸处理式(Ⅷ)化合物将其转化成盐形式;或者反过来，用碱处理其盐形式将盐形式转化成游离碱形式;和/或制备其立体化学异构形式。
9.一种制备免疫刺激性组合物的方法，所述组合物包括作为活性成分的免疫刺激有效量的权利要求1-6中任一项所定义的式(Ⅰ)化合物和惰性载体，所述方法包括混合所述化合物和载体。
全文摘要
本发明涉及具有免疫刺激活性的、可用于治疗患有其中免疫系统被损害或抑制的失调和/或疾病的人和温血动物的、新的6-芳基-5，6-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑衍生物；制备所述新化合物的方法以及含有所述化合物作为活性成分的组合物。
文档编号C07D277/20GK1052117SQ9010940
公开日1991年6月12日 申请日期1990年11月24日 优先权日1989年11月24日
发明者阿尔方斯·H·M·雷梅卡斯, 利奥波德·F·C·罗芬斯, 维利·J·C·范拉霍芬, 让·P·F·范沃韦 申请人:詹森药业有限公司