专利名称：对苯醌二肟工业品中对苯醌二肟和对亚硝基苯酚的高效液相色谱分析法的制作方法
技术领域：
本发明涉及对苯醌二肟和对亚硝基酚的分析。
背景技术：
对苯醌二肟是一种交联剂，具有在胶料中易分散，硫化速度快，胶料定伸强度高，耐热耐候，耐臭氧及电绝缘性能好等特点，可用作丙烯酸的阻聚剂，金属玻璃热熔的粘合剂，烯烃共聚物交联的调节剂，有机单体稳定剂和自硫化型粘合剂。对氧化剂(如Pb3O4，PbO2)有活化作用，改善聚酯纤维轮胎帘布的热阻力[参见Russak AleksandrVladimirovich，Borejko Natalya Pavlovna，Tabaev Rakhim Garifovich，Melnikov GennadijNikolaevich，Salyakhov Danis Ravilovich(Nizhnekamskoe proizvodstvennoe Ob’edinenie“Nizhnekamskneftekhim”，Estonia)Russ，RU 2,039,757(Cl.C08F2/42)，20 Jul 1995，SUAppl.5,042,180，15 May 1992(Russ)；Gogotov A.F.，Parilova M.V.，Amosov V.V.，Khaliullin A.K.(OAO“Angarskaya Neftekhicheskaya Kompaniya”.Russia).ProizvodstvoiIspol’zovanie Elastomerov 2001，(3)，7-10(Russ).]。特别适用于定伸强度高、硫化速度快的丁基橡胶、天然胶、丁苯胶、聚硫橡胶、乙丙橡胶以及防止核辐射的橡胶制品等[参见Eto Akiko，Hirata Yasushi(Bridgestone Corp.)Jpn.Kokai Tokkyo Koho JP 03 37,240[9137,240](Cl.C08L7/00)，18 Feb1991，Appl.89/171,232,04 Jul 1989；6pp.]。
工业上对苯醌二肟由对苯醌与羟氨作用得到，在反应过程中易形成对苯醌单肟(单肟) 对苯醌单肟与由苯酚起亚硝化反应所得的对亚硝基酚已经证明是同一化合物，这两种结构可以彼此互变，即它们为互变异构体
日本工业标准[参见JIS K 6203，1979.]规定了对苯醌二肟的质量控制方法，但没有含量测定的项目，只是用分解点控制质量。关于对苯醌二肟含量及其杂质对亚硝基酚的测定，未见有文献报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种同时定量测定苯醌二肟和对亚硝基酚的高效液相色谱法。
本发明的技术方案如下一种对苯醌二肟和其杂质对亚硝基酚的高效液相色谱分析法，其高效液相色谱的条件为色谱柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流动相CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3缓冲溶液(pH＝7.0～8.0，50mM)，它们的体积百分组成为CH3OH30％；H2O50％～0％；NH4Ac-NH3缓冲溶液20％～70％；流动相流速1.0mL/min柱温30℃；进样量10μL；检测波长305nm。
上述的高效液相色谱分析法，最佳的流动相条件为CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3缓冲溶液(pH＝7.0，50mM)，它们的体积百分组成为CH3OH30％，H2O50％，NH4Ac-NH3缓冲溶液20％。
本发明的分析方法测定对亚硝基苯酚和对苯醌二肟的保留时间分别为2.27分和4.76分，两者的出峰能相当清晰地分离，当信噪比S/N＝3时，测得对亚硝基酚的检出限为0.00001mg/mL，测得对苯醌二肟的检出限为0.00001mg/mL。
本发明的高效液相色谱分析法能方便、快捷、准确、定量地分析出对亚硝基苯酚和对苯醌二肟含量。
图1为流动相中缓冲液pH的选择；图2为流动相中缓冲液离子强度的选择；图3为流动相中甲醇比例的选择；图4为紫外-可见光谱图，a对苯醌二肟，b对亚硝基酚；图5为对亚硝基酚(A)标样的色谱图；图6为对苯醌二肟(B)标样的色谱图；图7为对亚硝基酚的标准曲线；图8为对苯醌二肟的标准曲线；图9为对苯醌二肟样品中主含量测定的色谱图，A对亚硝基酚；B对苯醌二肟；图10为对苯醌二肟样品中对亚硝基酚测定的色谱图，A对亚硝基酚；B对苯醌二肟。
具体实施例方式
1仪器和试剂1.1仪器Varian 5060型高效液相色谱仪，配有Rheodyne 7725i六通进样阀，Waters 486型紫外-可见分光光度检测器；大连江申分离科学技术公司JS-3050色谱工作站；四川仪表四厂Type 3066笔式记录仪。Waters Alliance 2695型高效液相色谱仪，配有真空脱气机、数码四元泵，120位自动进样器、996型紫外-可见二极管阵列(PDA)检测器和Millinium32色谱管理系统。
1.2试剂对苯醌二肟对照品(95％)；对亚硝基酚对照品(99％)；甲醇(色谱纯)；流动相和溶液用水均为娃哈哈纯净水(浙江娃哈哈公司生产)。其它试剂均为分析纯。
2高效液相色谱条件选择2.1流动相pH的选择实验中我们首先尝试了甲醇-水，以及甲醇-水-乙酸和甲醇-水-高氯酸体系，从色谱图上看出，对苯醌二肟和对亚硝基酚无法分开，且对亚硝基酚的峰形不好。针对于这个情况，我们固定流动相比例30％甲醇-50％水-20％缓冲液(50mM)，选择NH4Ac作为缓冲液，分别用乙酸和氨水调节不同pH的缓冲液进行实验，实验结果显示(见图1所示)，当缓冲液pH值到达7.0以上的时候，对苯醌二肟和对亚硝基酚能够实现很好的分离，另一方面，碱性条件下有利于对亚硝基酚转为醌式(单肟)，具有较大的紫外吸收，有利于提高测定灵敏度，因此我们选择pH＝7.0～8.0的NH4Ac-NH3调节流动相pH值。
2.2流动相离子强度的选择根据前面的实验结果，固定流动相中甲醇比例为30％，固定pH＝7.0，浓度为50mM的NH4Ac-NH3缓冲溶液，考察缓冲溶液浓度对色谱保留行为的影响(见图2)，当流动相中NH4Ac-NH3浓度从1.0mM增加到5.0mM时，对苯醌二肟和对亚硝基酚的保留值均有所减小，然后均趋于平稳，对苯醌二肟和对亚硝基酚能够实现很好的分离，因此我们选择流动相中缓冲溶液的浓度10～35mM，即流动相中缓冲液比例为20％～70％。
2.3流动相中甲醇浓度的选择固定流动相中缓冲液比例为20％NH4Ac-NH3(pH＝7.0，50mM)，考察甲醇浓度变化对分析物保留行为的影响(见图3)。试验中甲醇的体积分数在20％～50％之间变化时。分析物的保留时间明显缩短，说明甲醇比例对对苯醌二肟及对亚硝基酚的保留有明显的影响，改变甲醇比例可以有效调节分离的时间，综合考虑分离的效果与时间，选择流动相中甲醇比例为30％作为实验条件。
2.4检测波长的选择对苯醌二肟的最大紫外吸收波长为315nm，对亚硝基酚在304nm和400nm都有吸收(见图4)。考虑到要同时测定对亚硝基酚和对苯醌二肟含量，选择400nm作为测定波长不利于对苯醌二肟的测定，此时对苯醌二肟的吸收太小。另一方面，由于对亚硝基酚含量比较低，故选择波长305nm作为检测波长。
2.5色谱条件色谱柱选用的是Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)。流动相CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3缓冲溶液(pH＝7.0～8.0，50mM)，它们的体积百分组成为CH3OH30％，H2O50％～0％，NH4Ac-NH3缓冲溶液20％～70％。流动相流速1.0mL/min。柱温30℃。进样量10μL。检测波长305nm。其中，最佳流动相条件为CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3缓冲溶液(pH＝7.0，50mM)，它们的体积百分组成为CH3OH30％，H2O50％，NH4Ac-NH3缓冲溶液20％，本发明提供的图4～图10为在最佳流动相条件下获得。
2.6样品浓度的选择本实验必须兼顾对苯醌二肟主成分含量与其中杂质对亚硝基酚含量的测定，在测定杂质时，样品的浓度必须较大(0.6mg/mL)，足以使对亚硝基酚能够出峰并准确测定；而测定主成分含量时，溶液浓度太大会导致对苯醌二肟主峰超线性畸变，使定量不准，故将样品稀释10倍后测定(0.06mg/mL)，试验准确度令人满意。
3标准曲线精确称量10.00mg对亚硝基酚标准品，置于10-mL容量瓶中，用甲醇定容，配成对亚硝基酚浓度为1.0mg/mL的标准储备液。精确称量25.00mg对苯醌二肟标准品，置于25-mL容量瓶中，用甲醇定容，配成对苯醌二肟浓度为1.0mg/mL的标准溶液储备液。使用时用甲醇分别逐级稀释到所需浓度。
在对亚硝基酚标准溶液浓度0.00001～0.04mg/mL范围进行实验，取10μL进样，色谱图见图5，对亚硝基酚的保留时间为2.27min。以峰面积对浓度作图(图7)，在浓度0.00004～0.04mg/mL的范围内成线性，回归方程为A(area)＝1743.86931+1.51074E7·C，相关系数r＝0.99983。当信噪比S/N＝3时，测得对亚硝基酚的检出限为0.00001mg/mL；在对苯醌二肟标准溶液浓度0.00001～0.2mg/mL范围进行实验，取10μL进样，色谱图见图6，对苯醌二肟的保留时间为4.76min，以峰面积对浓度作图(图8)，在溶液浓度0.00002～0.2mg/mL的范围内成线性，回归方程为A(area)＝-60055.92457+9.65026E7·C，相关系数r＝0.99926，当信噪比S/N＝3时，测得对苯醌二肟的检出限为0.00001mg/mL。
4样品测定4.1对苯醌二肟主含量的测定准确称取约6.00mg对苯醌二肟试样，置于10-mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。再移取1.0mL上述溶液置于另一10-mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。平行配制5份1#样品溶液，每份溶液进样2针，进样量为10μL(见图9)，取两次面积平均值，用外标法计算单份样品中对苯醌二肟含量，5份样品中对苯醌二肟的平均含量为91.34％，相对标准偏差(RSD)为1.00％。再取不同批号的样品4份(2#～4#)，同法处理，每一份样品溶液重复进样3次，测定其峰面积，用外标法计算含量，结果见表1。
4.2对亚硝基酚杂质测定称取约6.00mg对苯醌二肟试样，置于10-mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。同一份样品溶液重复进样3次，每次进样量为10μL。平行配制5份1#样品溶液，每份溶液进样2针，进样量为10μL(见图10)，取两次面积平均值，用外标法计算单份样品中对亚硝基酚含量，5份样品中对亚硝基酚的平均含量为6.24％，RSD为1.10％。再取不同批号的样品4份(2#～4#)，同法处理，每一份样品溶液重复进样3次，测定其峰面积，用外标法计算含量，结果见表1。
表1样品主含量及杂质测定结果对苯醌二肟 对亚硝基酚批号含量(％) RSD(％，n＝3) 含量(％) RSD(％，n＝3)191.34 1.00*6.24 1.10*294.81 0.35 5.20 0.31391.85 0.26 5.27 0.28476.05 0.55 4.04 0.65576.48 0.29 0.54 0.61*5份平行样品测定值
权利要求
1.一种对苯醌二肟和其杂质对亚硝基酚的高效液相色谱分析法，其特征是高效液相色谱的条件为色谱柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流动相CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3缓冲溶液(pH＝7.0～8.0，50mM)，它们的体积百分组成为CH3OH30％；H2O50％～0％；NH4Ac-NH3缓冲溶液20％～70％；流动相流速1.0mL/min；柱温30℃；进样量10μL；检测波长305nm。
2.根据权利要求所述的高效液相色谱分析法，其特征是所述的流动相为CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3缓冲溶液(pH＝7.0，50mM)，它们的体积百分组成为CH3OH30％，H2O50％，NH4Ac-NH3缓冲溶液20％。
全文摘要
一种对苯醌二肟和其杂质对亚硝基酚的高效液相色谱分析法，其高效液相色谱的条件为色谱柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流动相CH
文档编号G01N30/00GK1648654SQ200410065978
公开日2005年8月3日 申请日期2004年12月29日 优先权日2004年12月29日
发明者练鸿振, 李丹妮, 刘雯雯 申请人:南京大学