专利名称：交联葡聚糖磁性复合微粒及其制备方法及其使用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种磁导靶向载体材料及其制备方法及其使用，具体涉及一种交联葡
聚糖磁性复合微粒及其制备方法及其使用。
背景技术：
磁性高分子微球是广泛应用于生物医学领域的一种多功能材料。这一类材料不 但具有高分子微粒的诸多特性，同时被赋予磁特性，能在外加磁场的作用下，使其与其它组 分迅速分离，或通过磁场诱导进行定向或运动。所需实验条件简单，操作简便，费用低廉， 因此在细胞分离、分类、免疫测定、固定化酶、耙向药物、DNA的分离、核酸杂交等诸多领域 具有广泛的应用前景。这些磁性微粒以氧化铁为核心，外包葡聚糖、白蛋白、壳聚糖、聚乙 二醇、环糊精、聚乳酸等高分子，其中葡聚糖磁性复合微粒在医学领域中有着广阔的应用前 景。葡聚糖(dextran)，又名右旋糖苷，是具有线状主链的一类多糖，主要由1，6-a-D-吡 喃糖苷连接在一起。作为一种水溶性多糖，葡聚糖具有良好的生物相容性，在体内可被降解 成葡萄糖单体，无毒，无害；同时葡聚糖具有较高的反应活性，易于和多种生物活性物质反 应，且价格低廉容易获得。经葡聚糖包被的磁性纳米颗粒，既可以通过羟基基团连接具有生 物活性的物质，又能通过布朗运动保持其在溶液中的稳定性。目前，葡聚糖磁性复合微粒 的研究已有不少报道，如华中科技大学的王国斌等人利用化学共沉淀法合成了葡聚糖磁性 复合微粒(中国专利公开号CN101062416A)，但从该专利的SEM图可看出，该磁性微粒以 椭圆形居多，且有一些不规则形状的微粒存在，同时磁性微粒的饱和磁化强度较低，这表明 它的磁响应性不好；Tao，K.等利用共沉淀法(2006， 290， 70-76， Colloidsand Surfaces A: Physicochem. Eng. Aspects)，在通氮的条件下，合成了葡聚糖_四氧化三铁簇，并且给出了 理论结构模型，但是所得到的微粒的磁响应性较低，限制该微粒的应用；军事医学科学院的 谌志强等人也是利用化学共沉淀法合成了葡聚糖磁性微粒，饱和磁化强度也很低；上海工 业研究院的徐伟等人制备了葡聚糖凝胶(中国专利公开号CN1868577A)，该专利是以无机 固体微粒为致孔剂，并结合了常规的油水两相法，加入交联剂，使葡聚糖发生交联，再加入 酸，溶解掉其中的无机固体微粒，所得即为葡聚糖凝胶。该专利中制备葡聚糖凝胶的方法对 本发明中葡聚糖的交联有一定参考意义。Xia，Z.F.等人(2005， 293， 182-186， Journal of Magnetism and Magnetic Materials)利用超声共沉淀法合成了葡聚糖_四氧化三铁复合 微粒，并且给出了葡聚糖与四氧化三铁的用量对磁性的影响，这对本发明也有一定的参考 意义，但是所得磁粒的磁性也较差。目前所报道的葡聚糖磁性复合微粒的制备方法不能得 到磁响应性强、包载量大、对药物可进行缓释作用的磁性复合微粒。
发明内容
本发明的目的 为了解决背景技术中存在的上述技术问题，本发明提供了一种具有载药量大、磁 响应性强的交联葡聚糖磁性复合微粒及其制备方法及其使用，并将其应用在肿瘤靶向治疗
4中。本发明在超声法所制得的葡聚糖磁性复合微粒的基础上，加入交联剂，使复合微粒表面 的葡聚糖发生交联，因而形成了交联葡聚糖磁性复合微粒，具有强的磁响应性，载药量大， 能够高度浓集抗癌药物的特点，能够通过磁场的定位和药物的缓释作用于靶向细胞。
本发明的技术方案 交联葡聚糖磁性复合微粒，其特殊之处在于该复合微粒包括磁性纳米颗粒和具
有交联结构的葡聚糖，所述的磁性纳米颗粒分散在具有交联结构的葡聚糖中。 上述交联葡聚糖磁性复合微粒的粒径范围为0. 3 - 5 ii m ，其中优选粒径范围为
1_3 ii m。 上述磁性纳米颗粒的成分是(Fe203) jFe304)h或1^6204，其中r为0 l，M为Zn、 Mn或Co，磁性纳米颗粒的粒径范围为5-30nm ;所述的葡聚糖是具有线状主链的一类多糖， 主要由1，6-a-D-吡喃糖苷连接在一起，其化学式为(CeHA)n，其分子量为5000-140000。 当分子量确定时n值即可确定。 制备该交联葡聚糖磁性复合微粒的方法，其特殊之处在于包括以下步骤
步骤1)配制葡聚糖溶液 取超纯水和碱溶液加入到葡聚糖中，配制成浓度为20 100mg/ml的葡聚糖溶液。
步骤2)合成葡聚糖磁性复合微粒 将磁性纳米颗粒和碱溶液加入到步骤1)制得的葡聚糖溶液中得到混合体系，并 保持体系中的碱浓度同步骤1)所得葡聚糖溶液的碱浓度一致，将该混合体系边反应边搅 拌，合成葡聚糖磁性复合微粒。
步骤3)合成交联葡聚糖磁性复合微粒 在步骤2)制得的葡聚糖磁性复合微粒中加入碱溶液制得混合液，使该混合液的 碱浓度达到1 4M，充分搅拌，加入交联剂，水浴反应，边反应边搅拌，反应结束后，磁性分 离或离心，得到中性的交联葡聚糖磁性复合微粒。 上述步骤3)中交联剂的加入方式为将交联剂分成多次加入；或使用恒压滴液漏 斗使其在不小于一小时内加完。 上述交联剂可以是用异丙醇或乙醇以体积比1 : 1 3 : l稀释的。
上述步骤1) 、2)中碱溶液的浓度为0. 5-5M，步骤1)中可通过超声加速溶解，超声 时间为2 15min为宜；步骤2)中的磁性纳米颗粒的质量按照与步骤1)中葡聚糖的质量 比l : 0. 5 1 : 10加入，搅拌速度为200 500rpm，通过超声反应，反应温度为2(TC 4(TC，反应时间为3 8h为宜，步骤3)中所加碱溶液的浓度大于该混合液的碱浓度，使混 合液的碱浓度调节到1.5-3M，交联剂的用量按照葡聚糖和交联剂的质量比1 : 20 1 : 40 加入，水浴温度为50°C 8(TC，水浴反应时间为8 30h，搅拌速度为600 1200rpm。
上述葡聚糖是具有线状主链的一类多糖，主要由1，6-a-D-吡喃糖苷连接在一 起，其分子量为5000-140000，磁性纳米颗粒是具有以下化学组成(Fe203)jFe304)h或 MFe204的粒径范围在5 30nm的颗粒，其中r为0 1， M为Zn、Mn或Co，磁性纳米颗粒是 通过化学共沉淀法或微乳液法等方法合成的，分散在水或与水互溶体系中。交联剂为环氧 氯丙烷，碱溶液是氨水、NaOH或KOH水溶液。 该交联葡聚糖磁性复合微粒的使用方法，其特殊之处在于包括以下步骤
步骤l)载药
①取交联葡聚糖磁性复合微粒悬液于离心管中，磁性分离，去上清；
②加入交联葡聚糖磁性复合微粒用量的10 25%抗癌药物溶液，混匀，置于摇 床，在2(TC 4(TC条件下恒温振荡，制得载抗癌药物的交联葡聚糖磁性复合微粒；
③将制得的载抗癌药物的交联葡聚糖磁性复合微粒在4°C的条件下保存；
步骤2)释药 ①取载抗癌药物的交联葡聚糖磁性复合微粒于离心管中，磁性分离，弃去上清； ②加入缓释液，在36°C 3『C条件下恒温振荡，在特定的时间点，分别取出适量
溶有抗癌药物的缓释液，再用与取出量相同的缓释液补充，继续进行缓释。 上述步骤1)中交联葡聚糖磁性复合微粒的用量是按照抗癌药物与交联葡聚糖磁
性复合微粒的质量比为1 : 4 1 : IO，振荡转速为180 220rpm，紫外-可见吸收光谱
监测溶液中抗癌药物的浓度不在发生变化，即达到载药平衡；步骤2)中载抗癌药物的交联
葡聚糖磁性复合微粒与缓释液的质量比为i : 3 1 : 10，振荡温度为37t:，振荡转速为
180 220rpm，振荡时间为7 10天。 上述抗癌药物为阿霉素、柔红霉素、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、洛铂、博莱霉素多西他 赛、吉西他宾、异长春花碱、羟基喜树碱等。 上述缓释液是生理盐水、超纯水、磷酸缓冲液、血清、细胞培养液等。
本发明的优点 1、该交联葡聚糖磁性复合微粒由于把磁性复合微粒表面的葡聚糖交联，故实现了 对药物的缓释作用，是一种包载量大，稳定性好的靶向制剂。 2、该交联葡聚糖磁性复合微粒磁响应性好，可以在磁场的作用下，固定到特定的 部位，进行肿瘤靶向治疗； 3、该交联葡聚糖磁性复合微粒的粒径分布均匀，大小可控，并且具有交联结构，在 空气和各种溶剂中长期保持了稳定性； 4、该交联葡聚糖磁性复合微粒制备方法简单，成本低廉，有利于推广。 5、该交联葡聚糖磁性复合微粒可作为磁性纳米药物载体应用在肿瘤的靶向治疗中。
图1是交联葡聚糖磁性复合微粒结构示意图 图2是交联葡聚糖磁性复合微粒合成路线的示意图 图3是交联葡聚糖磁性复合微粒的粒径分布图 图4是交联葡聚糖磁性复合微粒的磁滞回线图 图5是交联葡聚糖磁性复合微粒载药量与载药时间关系图 图6是载阿霉素交联葡聚糖磁性复合微粒的体外释药曲线图
具体实施例方式
本发明交联葡聚糖磁性复合微粒包括磁性纳米颗粒和具有交联结构的葡聚糖，磁 性纳米颗粒分散在交联结构的葡聚糖中。 交联葡聚糖磁性复合微粒的粒径范围为0. 3-5iim，其中优选粒径范围为1-3 y m
磁性纳米颗粒的成分是(Fe203)r(Fe304) &或MFe204，其中r为0 1， M为Zn、 Mn 或Co，磁性纳米颗粒的粒径范围为5-30nm ;所述的葡聚糖是具有线状主链的一类多糖，主 要由1，6-a-D-吡喃糖苷连接在一起，其化学式为(Qft05)n，其分子量为5000-140000。当 分子量确定时n值即确定。 该交联葡聚糖磁性复合微粒的制备方法的化学反应式为
<formula>formula see original document page 7</formula> 该交联葡聚糖磁性复合微粒的制备方法，包括以下步骤
步骤1)配制葡聚糖溶液 取超纯水和碱溶液加入到葡聚糖中，配制成浓度范围为20 100mg/ml的葡聚糖 溶液。 步骤2)合成葡聚糖磁性复合微粒 将磁性纳米颗粒和碱溶液加入到上述步骤1)制得的葡聚糖溶液中得到混合体 系，并保持体系中的碱浓度同步骤1)所得葡聚糖溶液的碱浓度一致，将该混合体系边反应 边搅拌，合成葡聚糖磁性复合微粒。
步骤3)合成交联葡聚糖磁性复合微粒 在步骤2)制得的葡聚糖磁性复合微粒中加入碱溶液制得混合液，使该混合液的 碱浓度达到1 4M，充分搅拌，加入交联剂，水浴反应，边反应边搅拌，反应结束后，磁性分 离或离心，得到中性的交联葡聚糖磁性复合微粒。 其中步骤3)中交联剂的加入方式为将交联剂分多次加入，或使用恒压滴液漏斗 使其在不小于一小时内加完。 交联剂可以是用异丙醇或乙醇以体积比1 : l至3 : l稀释的。
步骤1) 、2)中碱溶液的浓度为0. 5-5M，步骤1)中可通过超声加速溶解，超声时 间以2 15min为宜；步骤2)中的磁性纳米颗粒的质量按照与步骤1)中葡聚糖的质量比 1 : 0. 5 1 : 10加入，搅拌速度为200 500rpm，通过超声反应，反应温度为20。C 4(rC， 反应时间为3 8h为宜，步骤3)中所加碱溶液的浓度大于该混合液的碱浓度，使混合液的 碱浓度调节到1.5-3M，交联剂的用量按照葡聚糖和交联剂的质量比1 : 20 1 : 40加入， 水浴温度为50°C 80。C，水浴反应时间为8 30h，搅拌速度为600 1200rpm为宜。
其中葡聚糖是具有线状主链的一类多糖，主要由1，6-a-D-吡喃糖苷连接在一 起，其分子量为5000-140000 ，磁性纳米颗粒是具有以下化学组成(Fe203) r (Fe304) ^或 MFe204的粒径范围在5 30nm的颗粒，其中r为0 1， M为Zn、Mn或Co，该磁性纳米颗粒 表面含有羟基，能够分散在水中或与水互溶体系中，磁性纳米颗粒是通过化学共沉淀法或 微乳液法等方法合成的，交联剂为环氧氯丙烷，碱溶液可以是氨水、NaOH或KOH水溶液。
该交联葡聚糖磁性复合微粒的使用方法，包括以下步骤
步骤1)载药 ①取交联葡聚糖磁性复合微粒悬液于离心管中，磁性分离，去上清； ②加入交联葡聚糖磁性复合微粒用量的10 25%抗癌药物溶液，混匀，置于摇床，在20°C 4(TC条件下恒温振荡，制得载抗癌药物的交联葡聚糖磁性复合微粒；
③将制得的载抗癌药物的交联葡聚糖磁性复合微粒在4°C的条件下保存；
步骤2)释药 ①取载抗癌药物的交联葡聚糖磁性复合微粒于离心管中，磁性分离，弃去上清； ②加入缓释液，在36°C 3『C条件下恒温振荡，在特定的时间点，分别取出适量
溶有抗癌药物的缓释液，再用与取出量相同的缓释液补充，继续进行缓释。 上述步骤1)中交联葡聚糖磁性复合微粒的用量是按照抗癌药物与交联葡聚糖磁
性复合微粒的质量比为1 : 4 1 : 10加入的，振荡转速为180 220rpm，紫外-可见吸
收光谱监测溶液中抗癌药物的浓度不在发生变化，即达到载药平衡；步骤2)中载抗癌药物
的交联葡聚糖磁性复合微粒与缓释液的质量比为i : 3 1 : 10，振荡温度为37t:，振荡
转速为180 220rpm，振荡时间为7 IO天为宜。 抗癌药物可以用阿霉素、柔红霉素、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、洛铂、博莱霉素多西他 赛、吉西他宾、异长春花碱、羟基喜树碱。 缓释液是生理盐水、超纯水、磷酸缓冲液、血清、细胞培养液。
本发明交联葡聚糖磁性复合微粒的制备方法实施例
具体实施例1 将2g葡聚糖-40加入250ml圆底烧瓶中，再加入10ml的超纯水和10ml 1M NaOH， 超声溶解。再加入磁性纳米颗粒400mg(固体物含量约20mg/ml)于250ml圆底烧瓶中，加 入等体积的1M NaOH，控制搅拌速度400rpm，反应温度26°C ，超声反应4h。加入NaOH调节 体系中碱浓度为3M，再加入用异丙醇1 : l稀释的环氧氯丙烷，环氧氯丙烷的量为24ml，采 用恒压滴液漏斗在lh内加完。升温至6(TC，控制搅拌速度为900rpm，继续反应12h。反应 结束后，通过磁性分离、离心等使体系达到中性，得到交联葡聚糖磁性复合微粒。经激光粒 度散射仪检测其粒径为1-3 ii m左右，参见图3 ;饱和磁化强度大于40emu/g，参见图4。
具体实施例2 加入10ml的超纯水和10ml 1. 3M NaOH，在将2g葡聚糖-20加入250ml圆底烧瓶 中，超声溶解。再加入磁性纳米颗粒400mg(固体物含量约20mg/ml)于250ml圆底烧瓶中， 加入等体积的1. 3M NaOH，控制搅拌速度300rpm，反应温度28°C ，超声反应6h。加入NaOH调 节体系中碱浓度为2M。再加入用异丙醇2 : l稀释的环氧氯丙烷，环氧氯丙烷的量为48ml， 采用恒压滴液漏斗在1. 5h内加完。升温至7(TC，控制搅拌速度为1200rpm，继续反应28h。 反应结束后，通过磁性分离、离心等使体系达到中性，得到交联葡聚糖磁性复合微粒。经激 光粒度散射仪检测其粒径为1-3 y m左右，参见图3 ;饱和磁化强度大于40emu/g，参见图4。
具体实施例3 将2g葡聚糖-30加入250ml圆底烧瓶中，在加入10ml的超纯水和10mllM NaOH， 超声溶解。再加入磁性纳米颗粒400mg(固体物含量约20mg/ml)于250ml圆底烧瓶中，加 入等体积的1M NaOH，控制搅拌速度500rpm，反应温度27°C ，超声反应8h。加入NaOH调节 体系中碱浓度为3M，再加入用乙醇3 : l稀释的环氧氯丙烷，环氧氯丙烷的量为60ml，将交 联剂平均分成三份加入。升温至6(TC，控制搅拌速度为1000rpm，继续反应20h，反应结束 后，通过磁性分离、离心等使体系达到中性，得到交联葡聚糖磁性复合微粒。经激光粒度散 射仪检测其粒径为1-3 ii m左右，参见图3 ;饱和磁化强度大于40emu/g，参见图4。
具体实施例4 将2g葡聚糖-70加入250ml圆底烧瓶中，在加入10ml的超纯水和10ml 1. 5M NaOH，超声溶解。再加入磁性纳米颗粒400mg(固体物含量约20mg/ml)于250ml圆底烧瓶 中，加入等体积的1.5M Na0H，控制搅拌速度300rpm，反应温度25t:，超声反应8h。加入 NaOH调节体系中碱浓度为1.5M，再加入用乙醇l : 1稀释的环氧氯丙烷，环氧氯丙烷的量 为40ml。将交联剂平均分成三份加入。升温至6(TC，控制搅拌速度为1000rpm，继续反应 15h。反应结束后，通过磁性分离、离心等使体系达到中性，得到交联葡聚糖磁性复合微粒。 经激光粒度散射仪检测其粒径为1-3 ii m左右，参见图3 ;饱和磁化强度大于40emu/g，参见 图4。 具体实施例5 将2g葡聚糖-40加入250ml圆底烧瓶中，在加入10ml的超纯水和10ml氨水，超 声溶解，再加入磁性纳米颗粒400mg(固体物含量约20mg/ml)于250ml圆底烧瓶中，加入等 体积的氨水，控制搅拌速度400rpm，反应温度25°C ，超声反应6h。加入氨水使溶液中的碱浓 度为1. 5M，再加入体积为36ml的环氧氯丙烷，将交联剂平均分成两份加入。升温至60°C， 控制搅拌速度为1000rpm，继续反应20h。反应结束后，通过磁性分离、离心等使体系达到中 性，得到交联葡聚糖磁性复合微粒。经激光粒度散射仪检测其粒径为l-3ym左右，参见图 3 ;饱和磁化强度大于40emu/g，参见图4。 本发明交联葡聚糖磁性复合微粒的使用方法，以所用药物为阿霉素为例。 取5mg交联葡聚糖磁性复合微粒(固体物含量约为15mg/ml)于5ml离心管中，
在磁性分离器上移取上清弃去，加入lmg阿霉素溶液(阿霉素浓度为lmg/ml)，在25t:下，
180rpm振荡72h，达到载药平衡，4t:保存。所得为载阿霉素的交联葡聚糖磁性复合微粒。通
过紫外分光光度计测的溶液中剩余的阿霉素，再利用下面两个公式计算得出载药量，包封
率，所得载药量为11%，参见图5 ;包封率为82%。
载药量=飾o叆-幼字飾o遠x 载药复合磁粒总量
包封率=总的DO)(量-游离的IX))(量 。 总的DOX量 将载阿霉素的交联葡聚糖磁性复合微粒放置于内置有15ml pH为7. 4的PBS缓冲 溶液的50ml的离心管中，放入37t:的恒温振荡器上以180rpm的转速持续振荡8天。在特 定时间内取出0. 5ml溶有阿霉素的缓释液，用0. 5ml新鲜的PBS缓冲溶液补充。利用荧光 分光光度计测定阿霉素在PBS中释放的累积量，所得累积释药百分率为91%，没有突释现 象，缓释效果好，参见图6。其累计百分比计算公式如下
一 iCiVi+cnv 累积释药百分率(％) =^±~^~~^~xioo%
W.D 式中Ci、Cn为释放介质中药物浓度，Vi为取出介质体积，V为溶出介质的总体积， W为微粒重量，D为微粒中药物含量。
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权利要求
交联葡聚糖磁性复合微粒，其特征在于该复合微粒包括磁性纳米颗粒和具有交联结构的葡聚糖，所述的磁性纳米颗粒分散在具有交联结构的葡聚糖中。
2. 根据权利要求1所述的交联葡聚糖磁性复合微粒，其特征在于所述的交联葡聚糖磁性复合微粒的粒径范围为0. 3-5 m。
3. 根据权利要求2所述的交联葡聚糖磁性复合微粒，其特征在于所述的交联葡聚糖磁性复合微粒的粒径范围l-3iim。
4. 根据权利要求1或2或3所述的交联葡聚糖磁性复合微粒，其特征在于所述的磁性 纳米颗粒的成分是(Fe203) r (Fe304)卜r或MFe204 ，其中r为0 l，M为Zn、Mn或Co，磁性纳米颗 粒的粒径范围为5-30nm;所述的葡聚糖是具有线状主链的一类多糖，主要由l，6_a-D-吡 喃糖苷连接在一起，其化学式为(CeHsO》n，其分子量为5000-140000。
5. —种制备如权利要求1所述的交联葡聚糖磁性复合微粒的方法，其特征在于包括 以下步骤步骤1)配制葡聚糖溶液取超纯水和碱溶液加入到葡聚糖中，配制成浓度为20-100mg/ml的葡聚糖溶液； 步骤2)合成葡聚糖磁性复合微粒取磁性纳米颗粒溶液和碱溶液加入到步骤1)制得的葡聚糖溶液中得到混合体系，并 保持体系中的碱浓度同步骤1)所得葡聚糖溶液的碱浓度一致，将该混合体系边反应边搅 拌，合成葡聚糖磁性复合微粒；步骤3)合成交联葡聚糖磁性复合微粒在步骤2)制得的葡聚糖磁性复合微粒中加入碱溶液制得混合液，使该混合液的碱浓 度达到1 4M，充分搅拌，加入交联剂，水浴反应，边反应边搅拌，反应结束后，磁性分离或 离心，得到中性的交联葡聚糖磁性复合微粒。
6. 根据权利要求5所述的交联葡聚糖磁性复合微粒的制备方法，其特征在于步骤3) 中交联剂的加入方式为将交联剂多次加入，或使用恒压滴液漏斗使其在不小于一小时内 加完。
7. 根据权利要求5或6所述的交联葡聚糖磁性复合微粒的制备方法，其特征在于所 述的交联剂可以是用异丙醇或乙醇以体积比1:1 3:l稀释的。
8. 根据权利要求7所述的交联葡聚糖磁性复合微粒的制备方法，其特征在于步骤l)、 2)中碱溶液的浓度为0. 5-5M，步骤1)中可通过超声加速溶解，超声时间为2 15min ;步骤2)中的磁性纳米颗粒与步骤i)的葡聚糖的质量比为i : o.5 i : 10，搅拌速度为200 500rpm，通过超声反应，反应温度为20°C 40°C ，反应时间为3 8h，步骤3)中所加碱溶 液的浓度大于该混合液的碱浓度，使混合液的碱浓度调节到1. 5-3M，交联剂的用量按照葡 聚糖和交联剂的质量比l : 20 1 : 40加入，水浴温度为5(TC 8(TC，水浴反应时间为 8 30h，搅拌速度为600 1200rpm。
9. 根据权利要求8所述的交联葡聚糖磁性复合微粒的制备方法，其特征在于所述的 葡聚糖是具有线状主链的一类多糖，主要由1， 6- a -D-吡喃糖苷连接在一起，其分子量为 5000-140000 ;所述的磁性纳米颗粒是具有以下化学组成(Fe203)r(Fe304)h或MFeA的粒 径范围在5 30nm的颗粒，其中r为0 l，M为Zn、Mn或Co，所述的磁性纳米颗粒表面含 有羟基，能够分散在水中或与水互溶体系中，所述的磁性纳米颗粒是通过化学共沉淀法或微乳液法等方法合成的；所述的交联剂为环氧氯丙烷；所述的碱溶液是氨水、NaOH或KOH水溶液。
10. —种如权利要求1所述的交联葡聚糖磁性复合微粒的使用方法，其特征在于包括 以下步骤步骤1)载药① 取交联葡聚糖磁性复合微粒悬液于离心管中，磁性分离，去上清；② 加入交联葡聚糖磁性复合微粒用量的10 25%抗癌药物溶液，混匀，置于摇床，在 20°C 4(TC条件下恒温振荡，制得载抗癌药物的交联葡聚糖磁性复合微粒；③ 将制得的载抗癌药物的交联葡聚糖磁性复合微粒在4t:的条件下保存；步骤2)释药① 取载抗癌药物的交联葡聚糖磁性复合微粒于离心管中，磁性分离，弃去上清；② 加入缓释液，在36t: 38t:条件下恒温振荡，在特定的时间点，分别取出适量溶有抗癌药物的缓释液，再用与取出量相同的缓释液补充，继续进行缓释。
11. 根据权利要求IO所述的交联葡聚糖磁性复合微粒的使用方法，其特征在于所述 的步骤1)中交联葡聚糖磁性复合微粒的用量是按照抗癌药物与交联葡聚糖磁性复合微粒 的质量比为1 : 4 1 : IO加入的，振荡转速为180 220rpm，紫外-可见吸收光谱监测 溶液中抗癌药物的浓度不再发生变化，即达到载药平衡；步骤2)中载抗癌药物的交联葡聚糖磁性复合微粒与缓释液的质量比为i : 3 i : 10，振荡温度为37t:，振荡转速为i80 220rpm，振荡时间为7 10天。
12. 根据权利要求11所述的交联葡聚糖磁性复合微粒的使用方法，其特征在于所述 的抗癌药物为阿霉素、柔红霉素、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、洛铂、博莱霉素、多西他赛、吉西他 宾、异长春花碱、羟基喜树碱。
13. 根据权利要求12所述的交联葡聚糖磁性复合微粒的使用方法，其特征在于所述 缓释液是生理盐水、超纯水、磷酸缓冲液、血清、细胞培养液。
全文摘要
本发明涉及一种交联葡聚糖磁性复合微粒及其制备方法及其使用，该复合微粒包括磁性纳米颗粒和具有交联结构的葡聚糖，其中磁性纳米颗粒分散在具有交联结构的葡聚糖中。该复合微粒的制备方法为配制葡聚糖溶液、合成葡聚糖磁性复合微粒、合成交联葡聚糖磁性复合微粒。该复合微粒的使用步骤制载抗癌药物的交联葡聚糖磁性复合微粒、在其中加入缓释液释药。本发明解决了现有葡聚糖磁性复合微粒的磁响应性弱、包载量小的技术问题，所制备的交联葡聚糖磁性复合微粒具有强的磁响应性，载药量大，能够高度浓集抗癌药物的特点，能够通过磁场的定位和药物的缓释作用于靶向细胞。
文档编号C08K3/24GK101759882SQ20081023646
公开日2010年6月30日 申请日期2008年12月25日 优先权日2008年12月25日
发明者刘艳红, 崔亚丽, 彭明丽, 李珂, 陈超 申请人:陕西北美基因股份有限公司