一种酶解制备锁阳多糖的方法
【专利摘要】本发明公开了一种酶解制备锁阳多糖的方法。本发明公开的一种制备锁阳多糖的方法，包括如下步骤：在脱脂的锁阳粉末中加入占脱脂的锁阳粉末质量百分含量0.5％-3％的胃蛋白酶，得混合粉末；在混合粉末中加入盐酸水溶液，酶解，得酶解液；将酶解液微沸回流，使酶解液中的胃蛋白酶失活，冷却，离心得上清液；将上清液用Sevage法脱除蛋白，弃去下层有机相，得上层水溶液；将上层水溶液加入无水乙醇醇沉，即得所述的锁阳多糖。本发明公开的方法工艺简单，提取成本低，适合于工业化大量生产，同时由于本制备方法得到的锁阳多糖相较于传统工艺脱色效果良好，颜色呈浅粉色，为开发观感要求高的新产品奠定了基础。
【专利说明】一种酶解制备锁阳多糖的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种锁阳多糖的制备方法；特别涉及一种酶解制备锁阳多糖的方法，属于中药制备领域。
【背景技术】
[0002]锁阳是一种根寄生肉质草本种子植物，俗称不老药，其干燥肉质茎可作为传统中医、蒙医、维吾尔医药材。中华人民共和国药典2010年版一部记载，锁阳用作补肾阳，益精血，润肠通便，主治肾阳不足，精血亏虚，腰膝痿软，阳痿滑精，肠燥便秘。近代研究发现锁阳水提液具有抗氧化、抗缺氧、抗癫痫、提高免疫、延缓衰老、增强耐力、延长抗应激存活时间等方面的重要医疗价值。
[0003]多糖是许多中草药的重要成分，在传统热水煎服途径，水煎液中必然含有大量的多糖类组分。近年研究表明锁阳多糖具有多种生物活性，包括抗氧化、增强免疫、抗衰老、抗疲劳、抗急性胃溃疡、促进小肠推进功能等，具备了锁阳水提液大部分重要的生物活性。因此，提高锁阳多糖的提取率，对充分利用锁阳资源、开发锁阳多糖产品很有价值。
[0004]锁阳多糖的提取制备方法一般采用水提醇沉法，按照料液比、提取时间、提取次数三个因素的最佳工艺条件进行提取制备，经减压烘干后所得锁阳多糖样品溶于蒸馏水中，经苯酚-硫酸法测定其中所含多糖质量，并计算出锁阳(产地:甘肃张掖市)多糖得率为43.46mg/g;不同产地的锁阳，其多糖得率也有差别，经测量甘肃地区不同产地锁阳多糖得率为37.05mg/g-68.50mg/g(罗光宏等，2011，甘肃河西沙区锁阳多糖提取工艺优化及含量测定，食品科学，32(10):79-83 J近年已公布的相关专利中锁阳多糖提取率较高的方法为:采用酶辅助提取法，相对于传统方法可使锁阳多糖提取率提高10-65%，锁阳多糖含量提高
5-40%。(甘肃凯源生物技术开发中心，2013，酶处理提取锁阳多糖的方法及锁阳多糖抗肿瘤制剂的制备，CN103145863A。)
[0005]锁阳是全寄生植物，采收后干燥肉质茎全部入药，味微苦涩。市售锁阳多糖多为棕色或棕红色粉末，含有大量鞣质花青素类成分，其颜色严重影响锁阳多糖剂型的应用，需要发明一种多糖提取率高、多糖得率也高，并具有脱色效果好、利于多种剂型应用的锁阳多糖制备方法。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种酶解制备锁阳多糖的方法，本发明提供的制备方法有效提高了锁阳多糖提取率和得率，分别比传统方法提高了 114%-242%和95%-273% ;并通过胃蛋白酶酶解作用 ，分解了部分细胞间蛋白质，大大改善了锁阳多糖的溶出和提取，制备的锁阳多糖纯度高，颜色浅，水溶性好，可用于直接制备锁阳多糖制剂，或用于高品质锁阳多糖药品保健品的原料。
[0007]本发明提供一种制备锁阳多糖的方法，包括如下步骤:在脱脂的锁阳粉末中加入占脱脂的锁阳粉末质量百分含量0.5% -3%的胃蛋白酶，得混合粉末；在混合粉末中加入盐酸水溶液，酶解，得酶解液；将酶解液微沸回流，使酶解液中的胃蛋白酶失活，冷却，离心得上清液；将上清液用Sevage法脱除蛋白，弃去下层有机相，得上层水溶液；将上层水溶液加入无水乙醇醇沉，即得所述的锁阳多糖。
[0008]上述方法中，所述脱脂的锁阳粉末按照如下方法制备:将锁阳的肉质茎自然干燥，粉碎，过筛，得粉末；将粉末脱脂干燥，得脱脂的锁阳粉末。
[0009]上述方法中，所述筛为30目-80目筛，具体为30目筛。
[0010]上述 任一所述的方法中，所述脱脂干燥的步骤如下:采用脱脂有机溶剂按(5ml-20ml):lg的比例加入所述粉末，浸泡，抽滤，得滤饼，并将滤饼重复上述操作，将滤饼烘干；
[0011]所述脱脂有机溶剂具体按IOml:lg的比例加入所述粉末；
[0012]所述脱脂有机溶剂按照如下方法制备:将二氯甲烷和甲醇按照体积比(1-3):1混匀；
[0013]所述二氯甲烷和甲醇的体积比具体为2:1 ;
[0014]所述浸泡的时间为4-24小时,具体为12小时；
[0015]所述重复的次数为2-4次,具体为3次。
[0016]上述任一所述的方法中，所述胃蛋白酶占所述脱脂的锁阳粉末质量百分含量为1% -3%。
[0017]上述任一所述的方法中，所述混合粉末与所述盐酸水溶液的比例为Ig:(40ml-140ml)；
[0018]所述盐酸水溶液的pH为1.3-2.0，具体为1.3-1.5 ；
[0019]所述酶解的温度为30°C -45°C ；
[0020]所述酶解的时间为3h_7h，具体为4h_7h ；
[0021]所述回流的时间为0.5h_2h，具体为lh_2h。
[0022]上述任一所述的方法中，所述胃蛋白酶占所述脱脂的锁阳粉末质量百分含量为2 % ；
[0023]所述混合粉末与所述盐酸水溶液的比例为Ig:80ml ；
[0024]所述盐酸水溶液的pH为1.5 ;
[0025]所述酶解的温度为40°C ；
[0026]所述酶解的时间为5h ；
[0027]所述回流的时间为lh。
[0028]上述任一所述的方法中，所述离心的条件为3000-10000r/min，10_30min，2_25°C，具体为 5000r/min，20min, 4°C。
[0029]上述任一所述的方法中，所述用Sevage法脱除蛋白的次数为2_4次，具体为3次；
[0030]所述Sevage法中氯仿:正丁醇体积比为4:1 ;
[0031]所述上层水溶液加入无水乙醇醇沉之前还包括如下步骤:将上层水溶液减压旋转蒸发浓缩，得浓缩液；
[0032]所述无水乙醇醇沉时浓缩液与无水乙醇的体积比为1:4;
[0033]所述醇沉的条件为4°C静置过夜，离心，得沉淀；
[0034]所述醇沉之后还包括如下步骤:用无水乙醇洗涤沉淀，离心得沉淀，将其冷冻干燥，即得所述的锁阳多糖；
[0035]所述离心的条件为3000-10000r/min，10_30min，2-25 °C，具体为 5000r/min，20min，4。。。
[0036]上述任一所述的方法在制备锁阳多糖中的应用也属于本发明的保护范围。
[0037]本发明提供的方法工艺简单，提取成本低，适合于工业化大量生产，同时由于本制备方法得到的锁阳多糖相较于传统工艺脱色效果良好，颜色呈浅粉色，为开发观感要求高的新产品奠定了基础。
【专利附图】
【附图说明】
[0038]图1为实施例15制备的锁阳多糖红外吸收光谱图。
【具体实施方式】
[0039]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0040]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0041]下述实施例中选用的材料锁阳(Cynomorium songaricum Rupr.),为自然干燥肉质茎(购自当地福瑞大药房，产地内蒙古鄂尔多斯市杭锦旗)，将其粉碎，过30目筛，备用。
[0042]下述实施例中锁阳多糖得率参照文献“罗光宏等，2011，甘肃河西沙区锁阳多糖提取工艺优化及含量测定，食品科学，32(10):79-83”、锁阳多糖提取率参照文献“J.Prakash Maran,et al.2013, Box - Behnken design based statistical modelingfor ultrasound-assisted extraction of corn silk polysaccharide, CarbohydratePolymers, 2013(92): 604-611.”进行计算，计算公式如下:
[0043]
【权利要求】
1.一种制备锁阳多糖的方法，包括如下步骤:在脱脂的锁阳粉末中加入占脱脂的锁阳粉末质量百分含量0.5% -3%的胃蛋白酶，得混合粉末；在混合粉末中加入盐酸水溶液，酶解，得酶解液；将酶解液微沸回流，使酶解液中的胃蛋白酶失活，冷却，离心得上清液；将上清液用Sevage法脱除蛋白，弃去下层有机相，得上层水溶液；将上层水溶液加入无水乙醇醇沉，即得所述的锁阳多糖。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述脱脂的锁阳粉末按照如下方法制备:将锁阳的肉质茎自然干燥，粉碎，过筛，得粉末；将粉末脱脂干燥，得脱脂的锁阳粉末。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:所述筛为30目-80目筛，具体为30目筛。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于:所述脱脂干燥的步骤如下:采用脱脂有机溶剂按(5ml-20ml):1g的比例加入所述粉末，浸泡，抽滤，得滤饼，并将滤饼重复上述操作，将滤饼烘干； 所述脱脂有机溶剂具体按IOml:lg的比例加入所述粉末； 所述脱脂有机溶剂按照如下方法制备:将二氯甲烷和甲醇按照体积比(1-3):1混匀； 所述二氯甲烷和甲醇的体积比具体为2:1 ; 所述浸泡的时间为4-24小时,具体为12小时； 所述重复的次数为2-4次,具体为3次。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于:所述胃蛋白酶占所述脱脂的锁阳粉末质量百分含量为
6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于:所述混合粉末与所述盐酸水溶液的比例为 Ig: (40ml-140ml)； 所述盐酸水溶液的PH为1.3-2.0,具体为1.3-1.5 ； 所述酶解的温度为30°C -45°C ； 所述酶解的时间为3h-7h，具体为4h-7h ； 所述回流的时间为0.5h-2h，具体为lh-2h。
7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于:所述胃蛋白酶占所述脱脂的锁阳粉末质量百分含量为2% ； 所述混合粉末与所述盐酸水溶液的比例为Ig:80ml ； 所述盐酸水溶液的pH为1.5; 所述酶解的温度为40°C ； 所述酶解的时间为5h ； 所述回流的时间为lh。
8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于:所述离心的条件为3000-100001./min, 10-30min, 2-25°C，具体为 5000r/min, 20min, 4°C。
9.根据权利要求1-8任一所述的方法，其特征在于:所述用Sevage法脱除蛋白的次数为2-4次，具体为3次； 所述Sevage法中氯仿:正丁醇体积比为4:1; 所述上层水溶液加入无水乙醇醇沉之前还包括如下步骤:将上层水溶液减压旋转蒸发浓缩，得浓缩液； 所述无水乙醇醇沉时浓缩液与无水乙醇的体积比为1:4 ；所述醇沉的条件为4°C静置过夜，离心，得沉淀； 所述醇沉之后还包括如下步骤:用无水乙醇洗涤沉淀，离心得沉淀，将其冷冻干燥，即得所述的锁阳多糖； 所述离心的条件为 3000-10000r/min，10-30min，2-25°C，具体为 5000r/min，20min，4。。。
10.权利要 求1-9任一所述的方法在制备锁阳多糖中的应用。
【文档编号】C08B37/00GK104004108SQ201410244149
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年6月4日 优先权日:2014年6月4日
【发明者】陈贵林, 樊海燕, 于春洋 申请人:内蒙古大学