乳化法制备硫酸软骨素的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种硫酸软骨素的制备方法，软骨本发明公开了一种硫酸软骨素的制备方法，软骨加水浸没，加碱调pH，加入碱性蛋白酶搅拌，升温至沸腾，过滤得硫酸软骨素溶液；向硫酸软骨素溶液中加入氯化钠，再加入酒精，静止，过滤得硫酸软骨素沉淀；将硫酸软骨素沉淀加入水中溶解，同时向水中加入氯化钠，调pH，加入双氧水氧化，过滤得滤液；调节硫酸软骨素滤液pH，加入酒精二次沉淀，得硫酸软骨素沉淀；将二次硫酸软骨素沉淀倒入装有乳化机的脱水罐中，将酒精泵入脱水罐，抽滤，收集沉淀，干燥，得硫酸软骨素成品。本发明获得的硫酸软骨素质地疏松、颗粒细小、容易脱水和烘干，能耗低，有机溶剂残留极低，生产周期短。
【专利说明】乳化法制备硫酸软骨素
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，具体涉及一种硫酸软骨素的制备方法。
【背景技术】
[0002]硫酸软骨素是以动物(猪、牛、马、羊、鸡、鲨鱼等)的软骨为原料的一种高分子酸性粘多糖，其分子结构为β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通过β I — 3糖苷键形成的重复二糖单位所组成的多糖链。它是一种白色或微黄色粉末，吸水性强，易溶于水而成粘稠液体，不溶于酒精、丙酮、乙醚和氯仿等有机溶剂，其盐类对热较稳定。
[0003]目前，硫酸软骨素通常采用碱-酶解提取法，主要包括以下步骤:
1)碱提酶解:原料软骨加水浸没，用氢氧化钠调ΡΗ8.5，升温至55-60°C，保温4-6小时，然后加入2%的碱性蛋白酶，保持pH8.5，保温55-60°C搅拌6_8小时，升温至沸腾15分钟左右，过滤，得滤液；
2)酒精沉淀:滤液中加入3%重量的氯化钠，降温至室温，按体积的2.5倍加入95%酒精，静止8小时，取沉淀；
3)氧化:按沉淀:水的重量比为1:10的比例混合水，同时加入3%重量的氯化钠，调ρΗΙΟ-12，加入2%重量双氧水氧化8小时，过滤，取滤液；
4)酒精沉淀干燥:滤液调pH6，加入体积的2.5倍量酒精第二次沉淀，沉淀再用95%酒精脱水两次，干燥粉碎得到硫酸软骨素成品。
[0004]由于硫酸软骨素溶液比较粘稠，在醇沉时传统的做法是将酒精加入到硫酸软骨素溶液中使硫酸软骨素结晶析出沉淀下来，这样产生的硫酸软骨素沉淀结晶体容易结块而且粘稠，结晶体中包含的有机溶剂在脱水干燥过程中由于颗粒形状较大且坚硬致密，不容易挥发，致使产品的溶剂残留偏高，多2%，影响产品质量，满足不了客户要求。其次由于沉淀结块粘稠，使得脱水、烘干、粉碎等操作变得困难，浪费能耗。
[0005]本 申请人:以前提交的一个发明专利申请，公开了一种反向沉淀生产硫酸软骨素的方法，经沉淀得到的硫酸软骨素质地酥松，容易脱水、烘干，不需要粉碎，且产品的色泽好，质量稳定，硫酸软骨素的含量在98%以上，有机溶剂残留低于0.2%，但该方法沉淀时间长，影响了产品的生产效率。
[0006]
【发明内容】
本发明的目的是:提供一种硫酸软骨素的制备方法，采用该制备方法不仅获得的硫酸软骨素沉淀质地疏松、颗粒细小、容易脱水和烘干，产品不需要粉碎，能耗低，产品中有机溶剂残留极低，产品质量好，而且生产周期短、生产效率高。
[0007]本发明的技术解决方案是该制备方法包括下列步骤:
(1)碱提酶解:首先，软骨原料加水浸没，用碱调PH至7-10，升温至50-70°C，保温4_6小时；然后，按软骨原料重量1-3%加入2709碱性蛋白酶，保持PH7-10，保温50-70°C搅拌6-8小时，升温至沸腾12-18分钟，过滤得到硫酸软骨素溶液；
(2)酒精沉淀:将步骤(I)得到的硫酸软骨素溶液降至室温，在搅拌状态下，向溶液中加入氯化钠，使溶液含氯化钠重量浓度为1_4%，再加入溶液体积2-3倍的重量浓度为90%以上的酒精，静止6小时以上，过滤得到硫酸软骨素沉淀；
(3)氧化:将步骤(2)得到的硫酸软骨素沉淀加入水中溶解，同时向水中加入氯化钠，使溶液含氯化钠重量浓度为1_4%、含硫酸软骨素重量浓度为3-5%，调pH至9-13，加入溶液重量的1-3%双氧水或过锰酸钾氧化6小时以上，过滤得滤液；
(4)沉淀干燥:调节步骤(3)得到的硫酸软骨素滤液pH至4-6，加入滤液体积4-6倍的、重量浓度为90%以上的酒精，进行第二次沉淀，弃去上层酒精，得到硫酸软骨素沉淀；
(5)乳化脱水:将步骤(4)的硫酸软骨素沉淀倒入装有乳化机的脱水罐中，开启乳化机，将硫酸软骨素沉淀体积的3-5倍的重量浓度为85%以上的酒精缓慢泵入脱水罐，加料完毕后继续乳化0.5-1.5小时，静止沉淀2-3小时；抽滤弃去酒精，收集沉淀，干燥，即得硫酸软骨素成品。
[0008]本发明取得的效果是:1、本发明将经过氧化、酒精第二次沉淀得到的硫酸软骨素沉淀物直接加入乳化机中，再缓慢向乳化机中加入酒精进行乳化，乳化结束后仅需静止沉淀2-3小时，即可进行脱水烘干，乳化作用使粘稠的硫酸软骨素沉淀在脱水过程中不容易结块，质地疏松；2、生产周期短，效率高，得到的硫酸软骨素质地酥松、颗粒细小，容易脱水、烘干，不需要粉碎，节约能源、生产成本低；3、产品的色泽好，质量稳定，硫酸软骨素的含量在98%以上；4、产品的有机溶剂残留极少，低于0.2%。
【具体实施方式】
[0009]下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术解决方案，这些实施例不能理解为是对技术解决方案的限制。
[0010]实施例1:依以下步骤制备硫酸软骨素
(1)碱提酶解:首先，软骨原料10Kg加水浸没，用碱调pH至8，升温至55°C，保温6小时；然后，加入lKg2709碱性蛋白酶，保持pH8，保温55°C搅拌8小时，升温至沸腾12分钟，过滤得到硫酸软骨素溶液500L ；
(2)酒精沉淀:将步骤(I)得到的硫酸软骨素溶液降至室温，在搅拌状态下，向溶液中加入5Kg氯化钠，使溶液含氯化钠重量浓度为1%，再加入溶液体积2倍的重量浓度为90%以上的酒精1000L，静止6小时以上，过滤得到硫酸软骨素沉淀；
(3)氧化:将步骤(2)得到的硫酸软骨素沉淀加入200L水中溶解，同时向水中加入2Kg氯化钠，使溶液含氯化钠重量浓度为1%、含硫酸软骨素重量浓度为3%，调pH至10，加入溶液重量的1%双氧水2Kg氧化6小时以上，过滤得滤液；
(4)沉淀干燥:调节步骤(3)得到的硫酸软骨素滤液pH至5，加入滤液体积4倍的、重量浓度为90%以上的酒精，进行第二次沉淀，弃去上层酒精，得到硫酸软骨素沉淀；
(5)乳化脱水:将步骤(4)的硫酸软骨素沉淀倒入装有乳化机的脱水罐中，开启乳化机，将硫酸软骨素沉淀体积的3倍的重量浓度为90%以上的酒精缓慢泵入脱水罐，使乳浊液的酒精重量浓度达到85%，加料完毕后继续乳化0.5小时，静止沉淀2小时；抽滤弃去酒精，收集沉淀，干燥，即得硫酸软骨素成品。
[0011]实施例2:依以下步骤制备硫酸软骨素
(I)碱提酶解:首先，软骨原料10Kg加水浸没，用碱调pH至8.5，升温至58°0，保温5小时；然后，加入2Kg2709碱性蛋白酶，保持pH8.5，保温58°C搅拌7小时，升温至沸腾15分钟，过滤得到硫酸软骨素溶液500L ；
(2)酒精沉淀:将步骤(I)得到的硫酸软骨素溶液降至室温，在搅拌状态下，向溶液中加入13Kg氯化钠，使溶液含氯化钠重量浓度为2.5%，再加入溶液体积2.5倍的重量浓度为90%以上的酒精1250L，静止6小时以上，过滤得到硫酸软骨素沉淀；
(3)氧化:将步骤(2)得到的硫酸软骨素沉淀加入200L水中溶解，同时向水中加入5Kg氯化钠，使溶液含氯化钠重量浓度为2.5%、含硫酸软骨素重量浓度为4%，调pH至11，加入溶液重量的2%过锰酸钾4Kg氧化6小时以上，过滤得滤液；
(4)沉淀干燥:调节步骤(3)得到的硫酸软骨素滤液pH至5.5，加入滤液体积5倍的、重量浓度为90%以上的酒精，进行第二次沉淀，弃去上层酒精，得到硫酸软骨素沉淀；
(5)乳化脱水:将步骤(4)的硫酸软骨素沉淀倒入装有乳化机的脱水罐中，开启乳化机，将硫酸软骨素沉淀体积的4倍的重量浓度为90%以上的酒精缓慢泵入脱水罐，使乳浊液的酒精重量浓度达到85%，加料完毕后继续乳化I小时，静止沉淀2.5小时；抽滤弃去酒精，收集沉淀，干燥，即得硫酸软骨素成品。
【权利要求】
1.硫酸软骨素的制备方法，其特征在于包括下列步骤: (1)软骨原料加水浸没，用碱调升温，保温4-6小时，按软骨原料重量1%-3%加入2709碱性蛋白酶，搅拌6-8小时，升温至沸腾12-18分钟，过滤得到硫酸软骨素溶液； (2)将步骤(1)得到的硫酸软骨素溶液降至室温，在搅拌状态下，向溶液中加入氯化钠，再加入溶液体积2-3倍重量的酒精，静止6小时以上，过滤得到硫酸软骨素沉淀； (3)将步骤(2)得到的硫酸软骨素沉淀加入水中溶解，同时向水中加入氯化钠，使溶液含氯化钠重量浓度为1-4%、含硫酸软骨素重量浓度为3-5%，调加入溶液重量的1-3%双氧水或过锰酸钾氧化6小时以上，过滤得滤液； (4)调节步骤(3)得到的硫酸软骨素滤液加入滤液体积4-6倍的、重量浓度为90%以上的酒精，进行第二次沉淀，弃去上层酒精，得到硫酸软骨素沉淀； (5)将步骤(4)的硫酸软骨素沉淀倒入装有乳化机的脱水罐中，开启乳化机，将酒精缓慢泵入脱水罐，加料完毕后继续乳化0.5-1.5小时，静止沉淀2-3小时；抽滤弃去酒精，收集沉淀，干燥，即得硫酸软骨素成品。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，加碱调邱至7—10。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，溶液升温至50—701。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，邱调节至9一13。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，调节邱至4一6。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)的乳浊液含酒精的重量浓度始终保持在85%、或85%以上。
【文档编号】C08B37/08GK104497169SQ201410792521
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月19日 优先权日:2014年12月19日
【发明者】刘乃山, 安迪, 刘翠珍 申请人:青岛康原药业有限公司