凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物的制作方法

文档序号:11109447阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于制备液体凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物的方法,其中所述方法包括以下步骤:

(a):获得纯化的液体凝乳天冬氨酸蛋白酶样品,所述样品包括:

(i):25IMCU/g所述样品-30000IMCU/g所述样品的强度;和

(ii):其中所述纯化的样品中通过SDS-PAGE测定的具有大于10kDa大小的蛋白的总量的至少70%是凝乳天冬氨酸蛋白酶;以及

(b):向步骤(a)的所述样品中添加合适量的多肽制剂以获得液体凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物,所述多肽制剂包含长于10个氨基酸的多肽,其中所述多肽不是凝乳天冬氨酸蛋白酶也不是降解所述天冬氨酸蛋白酶的酶,其中所述组合物包含:

(I):强度为26IMCU/g所述组合物-30100IMCU/g所述组合物的凝乳天冬氨酸蛋白酶;和

(II):浓度是所述组合物的0.01%-10%(w/w)的步骤(b)中添加的长于10个氨基酸的不是凝乳天冬氨酸蛋白酶的多肽;并且

其中,在5℃存储一周之后检测,(I)中的强度(IMCU/g所述组合物)比(i)中的强度(IMCU/g所述样品)高至少1%。

2.如权利要求1所述的方法,其中所述凝乳天冬氨酸蛋白酶是凝乳酶(EC 3.4.23.4)。

3.如权利要求2所述的方法,

其中所述凝乳天冬氨酸蛋白酶是包含本文图5所示的多肽氨基酸序列(称为“Camel_chymosin”)的单峰骆驼(Camelius dromedarius)凝乳酶或单峰骆驼凝乳酶的变体,其中所述变体包含与本文图5所示的骆驼凝乳酶多肽氨基酸序列具有至少90%(优选至少95%,更优选至少99%)序列一致性的多肽序列;或者

其中凝乳天冬氨酸蛋白酶是包含本文图5所示的多肽氨基酸序列(称为“Cow_pepsin”)的牛胃蛋白酶或牛胃蛋白酶的变体,其中所述变体包含与本文图5所示的牛胃蛋白酶多肽氨基酸序列具有至少90%(优选至少95%,更优选至少99%)序列一致性的多肽序列。

4.如前述任一权利要求所述的方法,其中所述长于10个氨基酸的多肽是长于75个氨基酸的蛋白。

5.如前述任一权利要求所述的方法,其中所述长于10个氨基酸的多肽是选自由如下组成的多肽组中的至少一种多肽:乳清蛋白、α乳白蛋白、β-乳球蛋白、转铁蛋白、乳过氧化物酶、酪蛋白、α-s1-酪蛋白、α-s2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、卵清蛋白、明胶、牛血清白蛋白、大豆蛋白、豌豆蛋白、玉米蛋白、马铃薯蛋白、大麻蛋白、稻蛋白、螺旋藻蛋白、小麦蛋白、花生蛋白、向日葵蛋白、油菜籽蛋白、血蛋白和藻类蛋白。

6.如权利要求5所述的方法,其中所述长于10个氨基酸的多肽是选自由如下组成的多肽组中的至少一种多肽:乳清蛋白、α乳白蛋白、β-乳球蛋白、转铁蛋白、乳过氧化物酶、酪蛋白、α-s1-酪蛋白、α-s2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、卵清蛋白、明胶和牛血清白蛋白。

7.如前述任一权利要求所述的方法,其中在5℃存储一周之后检测,(I)中的强度(IMCU/g所述组合物)比(i)中的强度(IMCU/g所述组合物)高至少10%。

8.如前述任一权利要求所述的方法,其中在第(II)项中添加的不是凝乳天冬氨酸蛋白酶的多肽的浓度是所述组合物的0.5%-4%(w/w)。

9.一种液体凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物,所述组合物通过前述任一权利要求所述的方法能够获得。

10.一种用于制备干燥的凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物的方法,其中所述方法包括以下步骤:

(1):首先根据权利要求1-8任一所述的方法制备液体凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物;

(2):使步骤(1)的液体组合物干燥并粒化以获得干燥的粒状凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物。

11.一种干燥的粒状凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物,所述组合物通过权利要求10所述的方法能够获得。

12.一种液体凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物,包含:

(I):强度为25IMCU/g所述组合物-30000IMCU/g所述组合物的凝乳天冬氨酸蛋白酶;

(II):浓度为所述组合物的0.01%-10%(w/w)的长于10个氨基酸的不是凝乳天冬氨酸蛋白酶的多肽;以及

(III):浓度为1-350g/kg的盐,并且其中所述组合物的pH为2-8;以及

(x):其中第(II)项的所述长于10个氨基酸的多肽是选自由如下所组成的多肽组中的至少一种多肽:乳清蛋白、α乳白蛋白、β-乳球蛋白、转铁蛋白、乳过氧化物酶、酪蛋白、α-s1-酪蛋白、α-s2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、卵清蛋白、明胶、牛血清白蛋白、大豆蛋白、豌豆蛋白、玉米蛋白、马铃薯蛋白、大麻蛋白、稻蛋白、螺旋藻蛋白、小麦蛋白、花生蛋白、向日葵蛋白、油菜籽蛋白、血蛋白和藻类蛋白。

13.一种干燥的粒状凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物,包含:

(I):强度为25IMCU/g所述组合物-30000IMCU/g所述组合物的凝乳天冬氨酸蛋白酶;

(II):浓度为所述组合物的0.01%-10%(w/w)的长于10个氨基酸的不是凝乳天冬氨酸蛋白酶的多肽;以及

(III):盐,并且其中悬浮于水中的所述组合物的pH为2-8;以及

(x):其中第(II)项的所述长于10个氨基酸的多肽是选自由如下组成的多肽组中的至少一种多肽:乳清蛋白、α乳白蛋白、β-乳球蛋白、转铁蛋白、乳过氧化物酶、酪蛋白、α-s1-酪蛋白、α-s2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、卵清蛋白、明胶、牛血清白蛋白、大豆蛋白、豌豆蛋白、玉米蛋白、马铃薯蛋白、大麻蛋白、稻蛋白、螺旋藻蛋白、小麦蛋白、花生蛋白、向日葵蛋白、油菜籽蛋白、血蛋白和藻类蛋白。

14.如权利要求12所述的液体凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物或如权利要求13所述的干燥的粒状凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物,其中所述凝乳天冬氨酸蛋白酶是凝乳酶(EC 3.4.23.4)。

15.如权利要求12或14所述的液体凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物或如权利要求13或14所述的干燥的粒状凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物,其中

其中第(II)项中添加的不是凝乳天冬氨酸蛋白酶的多肽的浓度是所述组合物的0.5%-4%(w/w);以及

其中如果所述组合物是液体组合物,则所述液体组合物具有100g-3000kg的总重量,或者如果所述组合物是干燥的组合物,则干燥的粒状组合物具有0.5g-50kg的总重量;并且

(y):其中通过SDS-PAGE测定的第(I)项的天冬氨酸蛋白酶和第(II)项的长于10个氨基酸的多肽的含量的总和高于所述组合物中长于10个氨基酸的蛋白和/或多肽的总量的50%(w/w);并且

其中所述长于10个氨基酸的多肽是选自由如下组成的多肽组中的至少一种多肽:乳清蛋白、α乳白蛋白、β-乳球蛋白、转铁蛋白、乳过氧化物酶、酪蛋白、α-s1-酪蛋白、α-s2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、卵清蛋白、明胶和牛血清白蛋白。

16.一种用于制备食品或饲料产品的方法,包括向食品或饲料组分中添加有效量的权利要求9或权利要求11-15中任一所述的凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物并进行进一步的制备步骤以获得所述食品或饲料产品。

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