吡啶胺基嘧啶衍生物甲磺酸盐的结晶形式及其制备和应用的制作方法

本发明涉及吡啶胺基嘧啶衍生物甲磺酸盐的结晶形式，具体的说，本发明涉及n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺甲磺酸盐的结晶形式、其制备方法、包含该结晶形式的药物组合物及该结晶形式在治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症中的应用。
背景技术：
：表皮生长因子受体(egfr)被确认为是在细胞生长和增值过程中至关重要的驱动因素。表皮生长因子受体家族由egfr(erb-b1)、erb-b2(her-2/neu)、erb-b3和erb-b4组成。表皮生长因子受体与大部分癌症的疾病进程有关，如肺癌、结肠癌、乳腺癌等。egfr的过度表达和突变已被明确证实是预后不好的乳腺癌的主要危险因素。目前，研究前沿的已经是不可逆的第三代egfr抑制剂。专利申请cn201410365911.4公开如下式(i)结构化合物，该化合物对egfr激活型突变(如19号外显子缺失激活突变、或l858r激活突变)和t790m耐药型突变的抑制活性显著高于对野生型egfr(wtegfr)的抑制活性，有很好的选择性，并且毒副作用较低，安全性好。晶型对化合物的物理性质有一定影响，对于具有多种晶型的药用化合物，因其晶格结构不同，除可能导致具有不同的外观如颜色、形状外，也会引起某些物理性质如熔点、溶解性、密度、稳定性、吸湿性等不同，进而导致其在体内呈现出不同的溶出和吸收行为，在一定程度上会影响药用化合物的临床疗效和安全性。特定的晶型可产生与无定型物质或者另一种晶型不同的热力学行为。在实验室中用诸如熔点仪、热重分析(tga)或差示扫描量热(dsc)技术测量热性质可将某特定晶型与无定型或者另一晶型区别开来。而且特定的晶型可产生特定的光谱性质，如粉末x衍射图谱数据和红外光谱数据均可用于表征特定的晶型。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是提供式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式、其制备方法，包含该结晶形式的药物组合物及该结晶形式在治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症中的应用。本发明提供了式(i)所示n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的结晶形式i，本发明命名为晶型i，本发明提供的晶型i，其粉末x衍射图在衍射角2θ值为4.58°±0.2°、14.08°±0.2°、15.00°±0.2°、16.40°±0.2°、17.84°±0.2°、18.30°±0.2°、20.26°±0.2°、21.10°±0.2°、21.88°±0.2°、22.66°±0.2°、25.58°±0.2°、26.78°±0.2°处具有特征峰。更进一步的，本发明提供的晶型i，其x射线粉末衍射图(xrpd)如图1所示。更进一步的，本发明提供的晶型i，在加热至212.6℃开始出现吸热峰，其差示扫描热分析谱图(dsc)如图3所示。更进一步的，本发明提供的晶型i，在加热至230℃时，重量损失约为1％，其热重分析图(tga)如图5所示。本发明提供了化合物(i)的甲磺酸盐的晶型i的制备方法，包括：a)将式(i)化合物悬浮于第一溶剂中，b)升温至20～70℃，滴加事先溶于第二溶剂中的甲磺酸溶液，c)析晶、过滤得到晶型i。更进一步的，所述第一溶剂为水、酮、环醚或腈类溶剂或它们的混合溶剂；第二溶剂为水、酮、环醚或腈类溶剂或它们的混合溶剂。更进一步的所述第一溶剂为水与酮、环醚或腈类溶剂的混合溶剂；所述第二溶剂为酮、环醚或腈类溶剂，或水与酮、环醚或腈类溶剂的混合溶剂。更进一步的所述酮类溶剂包括但不限于丙酮，环醚类溶剂包括但不限于四氢呋哺或1，4-二氧六环，腈类溶剂包括但不限于乙腈。更进一步的，所述酮、环醚或腈类溶剂与水的混合溶剂，其中酮、环醚或腈类溶剂与水 的体积比是10∶1～25∶1，更进一步的酮、环醚或腈类溶剂与水的体积比是15∶1～19∶1。更进一步的，在b)步骤中升温至35～55℃。本发明提供了化合物(i)的甲磺酸盐的晶型i的制备方法，包括：a)将式(i)化合物悬浮于第一溶剂中，b)升温至20～70℃，滴加事先溶于第二溶剂中的甲磺酸溶液，c)滴加第三溶剂d)析晶完过滤得到晶型i。更进一步的，所述第一溶剂为水、酮、环醚或腈类溶剂或它们的混合溶剂；第二溶剂为水、酮、环醚或腈类溶剂或它们的混合溶剂。更进一步的所述第一溶剂为水与酮、环醚或腈类溶剂的混合溶剂；所述第二溶剂为酮、环醚或腈类溶剂，或水与酮、环醚或腈类溶剂的混合溶剂。更进一步的所述酮类溶剂包括但不限于丙酮，环醚类溶剂包括但不限于四氢呋喃或1，4-二氧六环，腈类溶剂包括但不限于乙腈。更进一步的，所述酮、环醚或腈类溶剂与水的混合溶剂，其中酮、环醚或腈类溶剂与水的体积比是10∶1～25∶1，更进一步的酮、环醚或腈类溶剂与水的体积比是15∶1～19∶1。更进一步的，在b)步骤中升温至35～55℃。更进一步的，所述第三溶剂为c6-7烷烃、醚或酯类溶剂。更进一步的所述c6-7烷烃类溶剂包括但不限于正庚烷；醚类溶剂包括但不限于甲基叔丁基醚；酯类溶剂包括但不限于甲酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯。本发明提供了式(i)所示n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的结晶形式ii，本发明命名为晶型ii，本发明提供的晶型ii，其粉末x衍射图在衍射角2θ值为6.94°±0.2°、11.24°±0.2°、11.94°±0.2°、14.72°±0.2°、18.74°±0.2°、19.38°±0.2°、20.22°±0.2°、22.10°±0.2°、22.92°±0.2°、24.48°±0.2°、25.14°±0.2°、26.42°±0.2°处具有特征峰。更进一步的，本发明提供的晶型ii，其x射线粉末衍射图(xrpd)如图2所示。更进一步的，本发明提供的晶型ii，在加热至206.8℃开始出现吸热峰，其差示扫描热分 析谱图(dsc)如图4所示。更进一步的，本发明提供的晶型ii，在加热至220℃时，重量损失约为0.95％，其热重分析图(tga)如图6所示。本发明提供了化合物(ii)的甲磺酸盐的晶型ii的制备方法，包括将式(i)化合物的甲磺酸盐的晶型i在加热条件下溶解于醇类溶剂中，冷却析晶过滤得到晶型ii。更进一步的，所述的醇类溶剂包括但不限于甲醇或乙醇。本发明提供的式(i)化合物的甲磺酸盐的结晶形式中，式(i)化合物与甲磺酸的摩尔比是1∶1。本发明提供了药物组合物，包括式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i。本发明提供了药物组合物，包括式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式ii。本发明提供了药物组合物，包括式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i和结晶形式ii的混合物。本发明进一步提供药物组合物，包括式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。本发明进一步提供药物组合物，包括式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式ii，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。本发明进一步提供药物组合物，包括式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i和结晶形式ii的混合物，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。本发明还提供了药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途，所述药物组合物包括式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii或结晶形式i与结晶形式ii的混合物。本发明提供了用作抗肿瘤药物的式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i。本发明提供了用作抗肿瘤药物的式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式ii。本发明提供了用作抗肿瘤药物的式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i和结晶形式ii的混合物。本发明还提供式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i在制备治疗癌症的药物中的用途。本发明还提供式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i在制备治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症的药物中的用途。本发明还提供式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式ii在制备治疗癌症的药物中的用途。本发明还提供式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式ii在制备治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症的药物中的用途。本发明还提供式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i和结晶形式ii的混合物在制备治疗癌 症的药物中的用途。本发明还提供式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i和结晶形式ii的混合物在制备治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症的药物中的用途。本发明还提供式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i在治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症方面的应用。本发明还提供式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式ii在治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症方面的应用。本发明还提供式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i和结晶形式ii的混合物在治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症方面的应用。本发明还提供一种治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症的方法，所述方法包括对患者施用式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i、或包括治疗有效量的式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i和药物可接受载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。本发明还提供一种治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症的方法，所述方法包括对患者施用式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式ii、或包括治疗有效量的式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式ii和药物可接受载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。本发明还提供一种治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症的方法，所述方法包括对患者施用式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i和结晶形式ii的混合物、或包括治疗有效量的式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i和结晶形式ii的混合物及药物可接受载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。本发明所提及癌症包括但不限于，例如肺癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、肝细胞癌、胃肠道基质瘤(gist)、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病(aml)、多发性骨髓瘤、间皮瘤，尤其对于表皮生长因子受体790位苏氨酸突变为蛋氨酸(egfrt790m)的肿瘤类型有更好的应用。举例来说，本发明式(i)化合物的甲磺酸盐的结晶形式可作为和用于治疗非小细胞癌(egfrt790m)的药物。本发明式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii或结晶形式i与结晶形式ii的混合物可给药于哺乳动物包括人，可以口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、局部给药(粉剂、软膏剂或滴剂)、或瘤内给药。本发明式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii或结晶形式i与结晶形式ii的混合物的给药剂量可以大0.05～50mg/kg体重/天，例如0.1～45mg/kg体重/天，更例如0.5～35mg/kg体重/天本发明式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii或结晶形式i与结晶形式ii的混合物可以配制为用于口服给药的固体剂型，包括，但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂等。在这些固体剂型中，本发明式(i)化合物的甲磺酸盐作为活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，例如与柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(1)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸等；(2)粘合剂，例如羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶等；(3)保湿剂，例如，甘油等；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠等；(5)缓溶剂，例如石蜡等；(6)吸收加速剂，例如，季铵化合物等；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯等；(8)吸附剂，例如，高岭土等；和(9)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠等，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中也可包含缓冲剂。所述固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材料例如肠溶衣和其他本领域公知的材料进行包衣或微囊化。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性成分也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。本发明式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii或结晶形式i与结晶形式ii的混合物可以配制为用于口服给药的液体剂型，包括，但不限于药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酊剂等。除了作为活性成分的式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii或结晶形式i与结晶形式ii的混合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水和其他溶剂，增溶剂和乳化剂，例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油类，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油等或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，本发明液体剂型也可包含常规助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料等。所述悬浮剂包括，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇只、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂等或这些物质的混合物。本发明式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii或结晶形式i与结晶形式ii的混合物可以配制为用于肠胃外注射的剂型，包括，但不限于生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。 适宜的载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。本发明化合物或其药学上可接受的盐也可以配制为用于局部给药的剂型，包括如软膏剂、散剂、栓剂、滴剂、喷射剂和吸入剂等。作为活性成分的本发明式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii或结晶形式i与结晶形式ii的混合物在无菌条件下和生理上可接受的载体及任选的防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。本发明还提供药物组合物，它含有本发明式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii或结晶形式i与结晶形式ii的混合物，以及药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂。在制备药物组合物时，通常是将本发明式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii或结晶形式i与结晶形式ii的混合物与药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂混合。可以按常规制备方法将所述本发明组合物配制为常规药物制剂。例如片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、乳液剂、混浮剂、分散液、溶液剂、糖浆剂、酏剂、软膏剂、滴剂、栓剂、吸入剂、喷射剂等。本发明所述的式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii或结晶形式i与结晶形式ii的混合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的治疗剂联合给药，特别是与其他抗肿瘤药物组合。所述治疗剂包括但不限于：作用于dna化学结构的药物抗肿瘤药如顺铂，影响核苷酸合成的抗肿瘤药物如甲氨蝶呤(mtx)、5-氟尿嘧啶(5fu)等，影响核酸转录的抗肿瘤药物如阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、光辉霉素等，作用于微管蛋白合成的抗肿瘤药物如紫杉醇、长春瑞滨等，芳香化酶抑制剂如氨鲁米特、兰特隆、来曲唑、瑞宁德等，细胞信号通路抑制剂如表皮生长因子受体抑制剂伊马替尼(imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)等。待组合的各成分可同时或顺序的给予，以单一制剂形式或以不用制剂的形式给予。所述组合不仅包括本发明化合物和一种其他活性剂的组合，而且也包括本发明化合物和两种或更多种其他活性剂的组合。本发明式(i)化合物的甲磺酸盐的结晶形式灌胃给药的绝对生物利用度的测定方法如下：静脉给药：健康sd大鼠，随机分组。测试物质按一定剂量d静脉给药，于给药前及给药后5min、15min、0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、8.0h、12h和24h经眼球后静脉丛取血，分离制备血浆，采用液相色谱/串联质谱法测定血浆中药物的浓度，得到药物浓度-时间曲线。灌胃给药：健康sd大鼠，随机分组。测试物质按一定剂量d灌胃给药，于给药前和给药后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10、12和24h经大鼠眼球后静脉丛取静脉血，分离制备血浆，采用液相色谱/串联质谱法测定血浆中药物的浓度，得到药物浓度-时间曲线。经剂量校正，按药时曲线下面积(auc0-t)计算，得到绝对生物利用度f，计算公式f＝(auc灌胃×d静脉)/(auc静脉×d灌胃)×100％。本发明式(i)化合物的甲磺酸盐的结晶形式溶解度的测定方法如下：称取各物质适量置于棕色量瓶中，加入不同溶剂，超声20s，使其分散均匀后于25℃，200rpm震摇24h，取出，在12000rpm下离心10min，吸取上清液并用相应溶剂稀释一定倍数后使用hplc测定浓度，并测定ph值。本发明的有益效果为：本发明提供的式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii经试验证明在动物体内具有优异的生物利用度。本发明提供的式(i)化合物甲磺酸盐的结晶形式i或结晶形式ii相对于式(i)化合物在不同ph值的溶剂中具有更好的溶解度。附图说明附图1是式(i)化合物甲磺酸盐的晶型i的xrpd图附图2是式(i)化合物甲磺酸盐的晶型ii的xrpd图附图3是式(i)化合物甲磺酸盐的晶型i的dsc图附图4是式(i)化合物甲磺酸盐的晶型ii的dsc图附图5是式(i)化合物甲磺酸盐的晶型i的tga图附图6是式(i)化合物甲磺酸盐的晶型ii的tga图下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于举例说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比分别为重量份和重量百分比。具体实施方式本发明所述的x射线粉末衍射图在panalyticalempyreanx射线粉末衍射仪上采集。本发明所述的x射线粉末衍的方法参数如下：x射线反射参数：cu，kα1.540598；1.544426kα2/kα1强度比例：0.50电压：45千伏特(kv)电流：40毫安培(ma)扫描范围：自3.0至50.0度本发明所述的差示扫描量热分析(dsc)图在perkinelmerdsc8500上采集。本发明所述的差示扫描量热分析的方法参数如下：温度控制：起始温度为50℃，50℃维持1min，以10℃/min的速度升温至250℃保护气体：氮气本发明所述的热重分析(tga)图在netzschtg209f3上采集。本发明所述的热重分析的方法参数如下：温度控制：30℃维持5min，以10℃/min的速度升温至400℃保护气体：氮气i.制备实施例实施例1：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺中间体1c：n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-3-硝基吡啶-2，5-二胺，制备方法引用专利申请cn201410365911.4实施例中间体2a：3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1h-吲哚，制备方法引用专利申请cn201410365911.4实施例化合物(ii)：n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-3-硝基吡啶-2，5-二胺的合成在圆底烧瓶中加入3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1h-吲哚(73mg，0.3mmol)、n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-3-硝基吡啶-2，5-二胺(100mg，0.3mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(14mg，0.015mmol)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(14mg，0.03mmol)，磷酸钾(127mg，0.6mmol)和8ml二氧六环，氩气保护下，95℃反应5h。过滤，滤液减压蒸干，硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)，得到140mg产物。收率为86％。msm/z：545[m+1]。化合物(iii)：n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]吡啶-2，3，5-三胺的合成在圆底烧瓶中加入n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-3-硝基吡啶-2，5-二胺(150mg，0.27mmol)、二氧化铂(60mg)和10ml甲醇，通入氢气，室温反应1h。过滤，制备板分离(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，得到80mg目标化合物。收率为56％。msm/z：515[m+1]。化合物(i)：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的合成向圆底烧瓶中加入n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]吡啶-2，3，5-三胺(80mg，0.16mmol)和5ml二氯甲烷，冰水浴冷却，加入0.5n丙烯酰氯的二氯甲烷溶液(0.5ml，0.25mmol)。冰水浴下反应1.5小时，反应液用50ml乙酸乙酯稀释，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，制备板分离纯化(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，得到20mg目标产物。收率为23％。msm/z：569[m+1]。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ10.41(s，1h)，10.27(s，1h)，8.68(s，1h)，8.44(s，1h)，8.28(t，j＝8.5hz，2h)，8.18(s，1h)，7.52(d，j＝8.0hz，1h)，7.29-7.14(m，3h)，6.98(s，1h)，6.28(d，j＝ 17.1hz，1h)，5.76(d，j＝10.4hz，1h)，5.00(q，j＝9.0hz，2h)，3.89(s，3h)，3.61(s，2h)，3.28(s，2h)，2.80(s，3h)，2.73(s，6h)。其中化合物(ii)、(iii)、(i)的制备方法参考专利申请cn201410365911.4实施例1。实施例2：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型i的制备将n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺(451.5g，0.77mol)加至10l反应釜中，加入丙酮水溶液(5.42l，二者体积比15∶1)，搅拌，氮气置换，升温至35-40℃。滴加甲磺酸(74.2g，0.76mol)的丙酮溶液(1.35l)。滴加完毕，控温35-40℃搅拌15-18小时。滴加乙酸乙酯(3.39l)，滴加完毕，缓慢降温至20-25℃，过滤，乙酸乙酯(0.45l)洗滤饼。50℃真空干燥40-48小时，得晶型i(409.9g)，收率80.09％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ9.80(s，1h)，9.23(s，1h)，8.53(s，1h)，8.42(s，1h)，8.30(d，j＝5.4hz，2h)，8.23(s，1h)，7.52(d，j＝8.2hz，1h)，7.25(t，j＝7.2hz，1h)，7.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.15(t，j＝7.4hz，1h)，6.70(dd，j＝17.0，10.2hz，1h)，6.34(dd，j＝17.0，1.7hz，1h)，5.83(dd，j＝10.3，1.6hz，1h)，5.02(q，j＝9.1hz，2h)，3.88(s，3h)，3.65(t，j＝6.0hz，2h)，3.33(t，j＝6.0hz，2h)，2.86(s，6h)，2.81(s，3h)，2.44(s，3h)。经检测，本实施例得到晶型i粉末x衍射图在衍射角2θ值为4.58°±0.2°、14.08°±0.2°、15.00°±0.2°、16.40°±0.2°、17.84°±0.2°、18.30°±0.2°、20.26°±0.2°、21.10°±0.2°、21.88°±0.2°、22.66°±0.2°、25.58°±0.2°、26.78°±0.2°处具有特征峰；其xrpd图谱如图1，dsc图如图3，tga图如图5。实施例3：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型i的制备将n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺(5g，8.8mmol)加至100ml反应瓶中，加入四氢呋喃水溶液(42.5ml，二者体积比19∶1)，搅拌，氮气置换，升温至40-45℃。滴加甲磺酸(0.84g，8.7mmol)的四氢呋喃水溶液(7.5ml，二者体积比19∶1)。滴加完毕，控温40-45℃搅拌15-18小时。缓慢降温至20-25℃，过滤。50℃真空干燥40-48小时，得晶型i(3.4g)，收率57.95％。实施例4：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型i的制备将n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺(5g，8.8mmol)加至100ml反应瓶中，加入乙腈水溶液(42.5ml，二者体积比19∶1)，搅拌，氮气置换，升温至40-45℃。滴加甲磺酸(0.84g，8.7mmol)的乙腈水溶液(7.5ml，二者体积比19∶1)。滴加完毕，控温40-45℃搅拌15-18小时。滴加乙酸乙酯(25ml)，滴加完毕，缓慢降温至20-25℃，过滤。50℃真空干燥40-48小时，得晶型i(4.3g)，收率73.29％。实施例5：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型i的制备将n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺(5g，8.8mmol)加至100ml反应瓶中，加入四氢呋喃水溶液(42.5ml，二者体积比19∶1)，搅拌，氮气置换，升温至40-45℃。滴加甲磺酸(0.84g，8.7mmol)的四氢呋喃水溶液(7.5ml，二者体积比19∶1)。滴加完毕，控温40-45℃搅拌15-18小时。滴加乙酸乙酯(25ml)，滴加完毕，缓慢降温至20-25℃，过滤。50℃真空干燥40-48小时，晶型i(4.75g)，收率80.96％。实施例6：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型i的制备将n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺(5g，8.8mmol)加至100ml反应瓶中，加入丙酮水溶液(42.5ml，二者体积比19∶1)，搅拌，氮气置换，升温至40-45℃。滴加甲磺酸(0.84g，8.7mmol)的四氢呋喃水溶液(7.5ml，二者体积比19∶1)。滴加完毕，控温40-45℃，滴加乙酸乙酯(25ml)，滴加完毕，缓慢降温至20-25℃，过滤。50℃真空干燥40-48小时，得晶型i(5.1g)，收率86.93％。实施例7：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型i的制备将n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺(5g，8.8mmol)加至100ml反应瓶中，加 入四氢呋喃水溶液(42.5ml，二者体积比19∶1)，搅拌，氮气置换，升温至40-45℃。滴加甲磺酸(0.84g，8.7mmol)的四氢呋喃水溶液(7.5ml，二者体积比19∶1)。滴加完毕，控温40-45℃搅拌15-18小时。滴加乙酸异丙酯(37.5ml)，滴加完毕，缓慢降温至20-25℃，过滤，乙酸异丙酯(5ml)洗滤饼。缓慢降温至20-25℃，过滤。50℃真空干燥40-48小时，得晶型i(4.4g)，收率75.00％。实施例8：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型i的制备将n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺(5g，8.8mmol)加至100ml反应瓶中，加入丙酮水溶液(42.5ml，二者体积比19∶1)，搅拌，氮气置换，升温至40-45℃。滴加甲磺酸(0.84g，8.7mmol)的四氢呋喃水溶液(7.5ml，二者体积比19∶1)。滴加完毕，控温40-45℃，滴加甲酸乙酯(25ml)，滴加完毕，缓慢降温至20-25℃，过滤。50℃真空干燥40-48小时，得晶型i(5.1g)，收率86.93％。实施例9：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型i的制备将n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺(5g，8.8mmol)加至100ml反应瓶中，加入丙酮水溶液(42.5ml，二者体积比19∶1)，搅拌，氮气置换，升温至40-45℃。滴加甲磺酸(0.84g，8.7mmol)的四氢呋喃水溶液(7.5ml，二者体积比19∶1)。滴加完毕，控温40-45℃，滴加正庚烷(25ml)，滴加完毕，缓慢降温至20-25℃，过滤。50℃真空干燥40-48小时，得晶型i(4.8g)，收率81.82％。实施例10：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型i的制备将n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺(5g，8.8mmol)加至100ml反应瓶中，加入乙腈水溶液(42.5ml，二者体积比19∶1)，搅拌，氮气置换，升温至40-45℃。滴加甲磺酸(0.84g，8.7mmol)的乙腈水溶液(7.5ml，二者体积比19∶1)。滴加完毕，控温40-45℃搅拌15-18小时。缓慢降温至20-25℃，过滤。50℃真空干燥40-48小时，得晶型i(4.0g)，收 率68.18％。实施例11：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型i的制备将n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺(5g，8.8mmol)加至100ml反应瓶中，加入乙腈水溶液(42.5ml，二者体积比19∶1)，搅拌，氮气置换，升温至40-45℃。滴加甲磺酸(0.84g，8.7mmol)的乙腈溶液(7.5ml)。滴加完毕，控温40-45℃，滴加甲酸甲酯(355ml)，滴加完毕，缓慢降温至20-25℃，过滤。50℃真空干燥40-48小时，得晶型i(4.5g)，收率76.70％。实施例12：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型ii的制备将按照实施例2所得的晶型i(5g，7.5mmol)加至100ml反应瓶中，加入甲醇(50.0ml)，搅拌，升温至50-55℃。控温50-55℃搅拌15-18小时。缓慢降温至20-25℃，过滤。50℃真空干燥40-48小时，得晶型ii(3.1g)，收率62.0％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ9.80(s，1h)，9.23(s，1h)，8.53(s，1h)，8.42(s，1h)，8.30(d，j＝5.4hz，2h)，8.23(s，1h)，7.52(d，j＝8.2hz，1h)，7.25(t，j＝7.2hz，1h)，7.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.15(t，j＝7.4hz，1h)，6.70(dd，j＝17.0，10.2hz，1h)，6.34(dd，j＝17.0，1.7hz，1h)，5.83(dd，j＝10.3，1.6hz，1h)，5.02(q，j＝9.1hz，2h)，3.88(s，3h)，3.65(t，j＝6.0hz，2h)，3.33(t，j＝6.0hz，2h)，2.86(s，6h)，2.81(s，3h)，2.44(s，3h)。经检测，本实施例得到晶型ii粉末x衍射图在衍射角2θ值为6.94°±0.2°、11.24°±0.2°、11.94°±0.2°、14.72°±0.2°、18.74°±0.2°、19.38°±0.2°、20.22°±0.2°、22.10°±0.2°、22.92°±0.2°、24.48°±0.2°、25.14°±0.2°、26.42°±0.2°处具有特征峰；其xrpd图谱如图2，dsc图如图4，tga图如图6。实施例13：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐的晶型ii的制备将按照实施例2所得的晶型i(5g，7.5mmol)加至100ml反应瓶中，加入乙醇(50.0ml)，搅拌，升温至50-55℃。控温50-55℃搅拌15-18小时。缓慢降温至20-25℃，过滤。50℃真空干燥40-48小时，得晶型ii(3.1g)，收率62.0％。ii.活性测试实施例测试实施例1：sd大鼠(spraguedawley大鼠)药物吸收实验静脉给药：健康sd大鼠，雌雄各半共20只，体重200～280g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，随机分成五组。分别按下表所列剂量静脉给予式(i)化合物甲磺酸盐晶型i、晶型ii、实施例1的式(i)化合物、对照例1和对照例2，于给药前及给药后5min、15min、0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、8.0h、12h和24h经大鼠眼球后静脉丛取静脉血0.2ml，分离制备血浆，采用液相色谱/串联质谱法测定血浆中药物的浓度，得到药物浓度-时间曲线。其主要的药物动力学参数如下表1所示：参数晶型i晶型ii实施例1对照例1对照例2剂量d(mg/kg)2.52.52.53.04.0cmax(ng/ml)104.7125.481.3327.5630.2auc0-t(ng·h/ml)307.9362.0307.3437.8810.7t1/2(h)4.734.833.962.721.71表1表1中，对照例1物质结构如下，按专利申请cn201410365911.4实施例2方法制备得到，对照例2物质结构如下，按专利申请cn201410365911.4实施例16方法制备得到，t1/2：消除半衰期；cmax：血浆中药物的最高浓度；auc0-t：药时曲线下面积灌胃给药：健康sd大鼠，雌雄各半共20只，体重200～280g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，随机分成五组。分别按下表所列剂量灌胃给予式(i)化合物甲磺酸盐晶型i、晶型ii、实施例1的式(i)化合物、对照例1和对照例2，于给药前和给药后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10、12和24h经大鼠眼球后静脉丛取静脉血0.2ml，分离制备血浆，采用液相色谱/串联质谱法测定血浆中药物的浓度，得到药物浓度-时间曲线。其主要的药物动力学参数如下表2所示：参数晶型i晶型ii实施例1对照例1对照例2剂量d(mg/kg)101010610cmax(ng/ml)45.336.717.612.6328.3auc0-t(ng·h/ml)613.2566.3231.777.66172.2t1/2(h)7.985.794.148.605.76.f(％)49.839.118.858.98.5表2，其中对照例1、2的结构与制备方法同表1经剂量校正后，按auc0-t计算，得到绝对生物利用度f，计算公式f＝(auc灌胃×d静脉)/(auc静脉×d灌胃)×100％，得到的绝对生物利用度f见上表2。结论：式(i)化合物的甲磺酸盐的晶型i、晶型ii灌胃给药的绝对生物利用度明显优于实施例1式(i)化合物、对照例1和对照例2灌胃给药的绝对生物利用度。测试实施例2：溶解度试验考察实施例1的式(i)化合物、式(i)化合物的甲磺酸盐的晶型i、式(i)化合物的甲磺酸盐的晶型ii在不同ph缓冲液下的溶解度。测定方法：称取各物质适量置于棕色量瓶中，加入不同溶剂，超声20s，使其分散均匀后于25℃，200rpm震摇24h，取出，在12000rpm下离心10min，吸取上清液并用相应溶剂稀释一定倍数后使用hplc测定浓度，并测定ph值。结果见表。结论：式(i)化合物的甲磺酸盐的晶型i及晶型ii在溶剂ph值为1.0、4.5、6.8时的溶解度均明显优于实施例1的式(i)化合物。在本文中提及的所有文献均通过引用被并入本申请中。此外还应指明的是，在阅读了本申请的上述公开内容之后，本领域技术人员可以无需背离本发明的精神和范围，对本发明作出各种修饰、改动或修改，但这些变化形式同样都应落于本申请所附权利要求书所记载的范围。当前第1页12