含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物及制备和应用
【专利摘要】本发明公开了一种如式I所示的含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物或其对映异构体，主要是以芳胺嘧啶为母核，通过与吖丙啶甲酸一步缩合得到目标化合物。实验证明，在细胞水平上对与EGFR酪氨酸激酶活性相关的肿瘤细胞(过表达EGFR的人表皮癌细胞株A431、对Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株H1975)具有显著的增殖抑制作用，特别是对耐药细胞株H1975有较好的选择性，同时对EGFR激酶也有较好的抑制效果，可制备相应抗肿瘤细胞药物。结构通式：。
【专利说明】
含口丫丙暗环侧链的芳胺略暗衍生物及制备和应用
技术领域
[0001] 本发明属于制药领域，具体设及一种含叮丙晚环侧链的芳胺喀晚衍生物、制备方 法、中间体、及其应用。
【背景技术】
[0002] 表皮生长因子受体（邱idermal growth factor receptor,EGFR)是目前备受瞩目 的肿瘤治疗祀点。EGFR抑制剂更是晚期非小细胞肺癌(NSCLC)治疗的重要组成部分。在经历 了第一代EGFR抑制剂和第二代EGFR抑制剂之后，W喀晚为骨架的第Ξ代EGFR抑制剂横空出 世。该类抑制剂是高度选择性、有效对抗EGFR-TKI获得性T790M耐药的新一代抑制剂，毒副 反应相对较小，尤其不似W往EGFR-TKI治疗，该类抑制剂出现的皮肤副反应较低。
[0003] 叮丙晚是一类Ξ元杂环，由于高度的环张力，其可W接受多种亲核试剂的进攻从 而生成各种具有区域选择性和立体选择性的开环产物。有研究报道，在生理环境下，叮丙晚 环能与半脫氨酸残基发生溫和的共价加成反应。因此叮丙晚环相对丙締酷胺较弱的共价加 成能力既可W保持与EGFR激酶上的相关部位(切S797)发生作用，同时较低的反应活性可W 使药物在维持甚至增加药效的同时有效地降低其毒副作用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种含叮丙晚环侧链的芳胺喀晚衍生物及其对映异构体，该 化合物具有较佳的抗肿瘤活性，同时可W规避传统的双键不可逆片段的不良反应。具有W 下结构通式I:
[0005]
[0006] 其中：
[0007] Ri为Ξ氣甲基、氯、氨，
[000引R2为氨、甲基、甲氧基、氣、氯，
[0009] R3为乙酷赃嗦基、甲基赃嗦基、吗嘟基、赃晚基、二甲胺基。
[0010] 本发明所述的含叮丙晚环侧链的芳胺喀晚衍生物或其对应异构体为如下任一化 合物：
[0011] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基）喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物1);
[0012] (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)苯基)氨基)-5-(立氣甲基)喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物2);
[0013] (R)-N-(3-((2-((4-(4-吗嘟-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物3);
[0014] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基） 叮丙晚-2-甲酯胺(化合物4);
[0015] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物5);
[0016] (R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基赃嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基） 叮丙晚-2-甲酯胺(化合物6);
[0017] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-甲基赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物7);
[0018] (S)-N-(3-((2-((4-(4-赃晚-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物8);
[0019] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物9);
[0020] (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)苯基)氨基）喀晚-4-基)氨基)苯基）日丫丙 晚-2-甲酯胺(化合物10);
[0021] (S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基）喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物11);
[0022] (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物12);
[0023] (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基） 叮丙晚-2-甲酯胺(化合物13);
[0024] (S)-N-(3-( (2-((4-(4-甲基赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物14);
[0025] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物15);
[00%] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-氣苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物16);
[0027] (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物17);
[0028] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物18);
[0029] (R)-N-(3-((2-((4-(4-赃晚-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物19);
[0030] (S)-N-(3-((2-((4-(4-吗嘟-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物20);
[0031] (S)-N-(3-( (2-( (4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-氣苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物21);
[0032] (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物22);
[0033] (r)-n-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基)氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物23);
[0034] (s)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基)氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物24);
[0035] (s)-N-(3-( (2-((4-(4-吗嘟-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基)叮丙 晚-2-甲酯胺(化合物25);
[0036] (s)-N-(3-( (2-((4-(4-赃晚-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基)叮丙 晚-2-甲酯胺(化合物26)。
[0037] 本发明的另一个目的是提供所述的含叮丙晚环侧链的芳胺喀晚衍生物或其对应 异构体的制备方法，通过W下步骤实现：
[0038] W5-位取代尿喀晚1为起始原料，在N，N-二异丙基乙胺为碱Ξ氯氧憐作溶剂条件 1 l〇°C回流生成5-位取代2，4-二氯喀晚2，中间体2与单Boc保护的间苯二胺在正下醇中反应 生成4,5-位取代的2-氯喀晚3,中间体3与取代的苯胺在1N HC1催化下生成2,4,5-位取代的 喀晚4,中间体4在Ξ氣乙酸条件下脱保护得到中间体5,中间体5再与Ξ苯亚甲基保护的叮 丙晚-2-酸缩合生成化合物6，化合物6最后脱保护基得到目标产物I。反应式如下：
[0039]
[0040] 其中，各基团的定义同前通式I所述。
[0041] 本发明所设及的原料或中间体，可直接购买，或按照实施例部分提及的文献方法 制备。
[0042] 本发明制备方法中所述的式I化合物，可W用有机合成和药物化学领域及技术人 员熟知的多种方法制备，可W使用上面所描述的方法来制备本发明的化合物，将理解的是 当给出典型的或优选的工艺操作条件（即反应溫度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等 等），还可W使用其他工艺操作条件，除非另有说明。最佳反应条件可W随所用的具体反应 物或溶剂而变化，但运些条件可W由本领域技术人员通过常规最佳化过程加 W确定。通常， 可W使用如上所述的反应路线及工艺制备本发明化合物，但并不限于反应条件中的试剂和 溶剂。
[0043] 本发明的再一个目的是提供了所述的含叮丙晚环侧链的芳胺喀晚衍生物或其对 应异构体在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤细胞是指过表达EGi^R的人表皮癌细胞株 A431、对Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株H1975,所述EGFR激酶是指野生型EGFR激酶和 L858R/T790M双突变型EGFR激酶。其药效学实施例实验数据显示，其在分子水平对突变型的 EGFR酪氨酸激酶具有较好抑制作用，在细胞水平对EGFR突变型的肿瘤细胞也具有显著的增 殖抑制作用，可制备相应的抗肿瘤药物。
[0044] 本发明提供了一类全新的芳胺喀晚衍生物，其中的叮丙晚环可作为新型的非可逆 共价反应官能团，可W规避不饱和双键的脱祀标等副作用，其药效学实施例实验数据显示， 在细胞水平对与EGFR酪氨酸激酶活性相关的肿瘤细胞（过表达EGFR的人表皮癌细胞株 A431、对Gefitin化耐药的人肺腺癌细胞株H1975)具有显著的增殖抑制作用，特别是对耐药 细胞株化975有较好的抑制效果，在分子水平对突变型的EGFR酪氨酸激酶具有抑制作用，可 W为设计新型克服Gefitinib耐药的EGFR抑制剂提供可能。
【具体实施方式】
[0045] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0046] 实施例l(R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基)-5-氯喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺
[0047]
[004引原料1:3-[2-[ [2-甲氧基-4-(4-乙酷基-1-赃嗦基）苯基]氨基]-5-(氯)-4-喀晚 基]甲酸叔下醋氨基苯按照文献化ncer Discov. 2013,12,1404-1415的方法制备；
[00例步骤:将(R) -1-;苯甲基日丫丙晚-2-簇酸(0.38g，1.15mmol)溶于干燥的四氨巧喃 中（15mL)，在-10°C下，加入Ξ乙胺(0.3221^，2.31臟01)，揽拌15分钟后，滴加氯甲酸异下醋 (0.125血，0.98mmol)，继续-10°C反应45分钟。将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1基)-苯 基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚(0.27旨，0.57511111101)溶于干燥的四氨巧喃中 (lOmL)，冷至-10°C加入到上述反应体系中，由-10°C自然升溫至室溫反应过夜。待反应完 毕，加入乙酸乙醋，用饱和碳酸氨钢溶液洗涂Ξ次，有机层减压旋干，经柱层析纯化得到栋 色固体。将该固体溶解在二氯甲烧(2.5mL)和甲醇(4.7mL)中，冷却至0°C-2°C，滴入Ξ氣乙 酸(0.896mL，12mmo 1)的二氯甲烧溶液（2mL)，继续低溫反应约2小时。待反应完全，减压旋 蒸，然后加入乙酸乙醋，用冷的饱和碳酸氨钢中和Ξ次，合并有机相，减压旋干，硅胶柱层析 纯化(流动相为C此Cb:Me0H = 20:l)，回收、干燥即得固体产物，两步反应产率为41.6%。 m.p. :206-208°C;1h-NMR(500MHz，DMS0)S10.54(s，1H)，8.84(s，1H)，8.00(s，1H)，7.93(s, lH)，7.70(s，lH)，7.69(s，lH)，7.39(d，J = 7.7Hz，lH)，7.31(d，J = 7.甜z，lH)，7.24(t，J = 8.0Hz，lH)，6.65(d，J = 2.1Hz，lH)，6.34(d，J = 8.1Hz，lH)，3.80(s，3H)，3.59(m，4H)，3.07 (m，4H)，2.58(s，lH)，2.06(s，3H)，1.77(m，2H)，1.24(s，lH).HRMS化SI)calcd.for C26出9C1N803[M+H] + = 537.2129，found 537.2128。
[0050]按照实施例1相同方法，采用不同原料，制备W下化合物。
[0051 ] 实施例2(R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基)喀晚- 4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0052] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((4-(4-乙酷基赃嗦-1-基)-苯基)氨基)- 4(((3-氨基）苯基）氨基）-5-^氣甲基喀晚。产率为38.4%。111.9.:147-150°(：;1^應1? (500MHz，DMS0)Sl0.61(s，lH)，9.55(s，lH)，8.75(s，lH)，8.32(s，lH)，7.72(s，lH)，7.56(d, J=6.2Hz,lH),7.37(m,3H),7.12(m,lH),6.69(m,2H),3.57(m,4H),2.98(m,4H),2.55(s, lH)，1.78(s，lH)，1.67(s，lH)，1.24(s，2H).HRMS(ESI)calcd.for C2抽27F3N802[M+H] + = 541.2287,found 541.2286〇
[0053] 实施例3(R)-N-(3-( (2-( (4-(4-吗嘟-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0054] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((2-甲氧基-4-(4-吗嘟-1-基)-苯基)氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚。产率为45.4 %。111. P. : 138-14rC ; 1h-NMR( 500MHz， DMS0)Sl0.55(s，lH)，8.84(s，lH)，8.07(s，lH)，7.93(s，lH)，7.69(s，lH)，7.67(s，lH)，7.38 (d，J = 7.9Hz，lH)，7.31(m，lH)，7.25(m，lH)，6.62(d，J=1.8Hz，lH)，6.33(d，J = 8.2Hz, lH)，3.80(s，3H)，3.76-3.73(m，4H)，3.09-3.03(m，4H)，2.58(s，lH)，1.80(s，lH)，1.68(s， IH)，1.24(s，IH). HRMS(ESI)calcd. for C24H26CI化03[M+扣+ = 496.1864，found 496.1865。
[0055] 实施例4(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0056] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((4-(4-乙酷基赃嗦-1-基)-苯基)氨基)- 4(((3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。产率为39.4%。111.9.:145-147°(：;1护匪1?(50(^化， DMS0)Sl0.57(s，lH)，9.11(s，lH)，8.86(s，lH)，8.10(s，lH)，7.83(s，lH)，7.47(m，3H)，7.30 (m，2H)，6.77(d，J=8.7Hz，2H)，3.61-3.54(m，4H)，3.05-2.93(m，4H)，2.58(s，lH)，2.05(s, 3H)，1.79(s，lH)，1.68(s，lH)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C2出27C1N802[M+H] + = 507.2024,found 507.2025。
[0057] 实施例5(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣 甲基)喀晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[005引参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基)-苯 基)氨基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-Ξ氣甲基喀晚。产率为39.2% em.p. :155-156 NMR巧00MHz，DMS0)Sl0.55(s，lH)，8.64(s，lH)，8.29(s，lH)，8.11(s，lH)，7.73(s，lH)，7.50 (d，J = 8.6Hz，lH)，7.46(d，J = 7.7Hz，lH)，7.28-7.24(m，lH)，7.17(s，lH)，6.62(d，J = 1.9Hz，lH)，6.26(s，lH)，3.78(s，3H)，3.58(m，4H)，3.07(m，4H)，2.55(m，lH)，2.06(s，3H)， 1.80(dJ = 9.7Hz，lH)，1.68(s，lH)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C27出9F3N803[M+H] + = 571.2393,found 571.2395〇
[0059] 实施例6(R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基赃嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0060]参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((4-(4-甲基赃嗦-1-基)-苯基)氨基)-4 (((3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚。产率为45.4% em.p. :164-166°C;1h-NMR(500MHz，DMS0) 5l0.45(s，lH)，9.11(s，lH)，8.85(s，lH)，8.09(s，lH)，7.86(s，lH)，7.45(m，3H)，7.29(d，J = 4.5Hz，2H)，6.75(d，J = 8.6Hz，2H)，3.05(m，4H)，2.59(m，5H)，2.32(s，3H)，1.74(m，2H) ,HRMS(ESI)calcd.for C24出7C1N80[M+H] + = 479.2025,found 479.2027。
[0061 ] 实施例7(R)-N-(3-( (2-( (4-(4-甲基赃嗦-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基)-5-氯喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0062] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚替换成2-((2-甲氧基-4-(4-甲基赃嗦-1-基）-苯 基）氨基）-4(((3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。产率为46.5%。111.9.:140-142°(：;1护匪1? (500MHz，DMS0)Sl0.52(s，lH)，8.82(s，lH)，8.06(s，lH)，7.93(s，lH)，7.68(s，lH)，7.65(d, J = 8.細z，2H)，7.38(d，J = 8.0Hz，lH)，7.31(d，J = 7.7Hz，lH)，7.23(t，J = 8.0Hz，lH)，6.60 (d J = 2.5Hz,lH),6.32(d J = 7.9Hz,lH),3.79(s,3H),3.11-3.06(m,4H),2.58(s,2H), 2.48(m，4H)，2.24(s，3H)，1.76(m，2H)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C25出9C1Ns〇2[M+ H]" = 509.2180,found 509.2179〇
[0063] 实施例8(S)-N-(3-( (2-( (4-(4-赃晚-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0064] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((2-甲氧基-4-(4-赃晚-1-基)-苯基)氨 基)-4(( (3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚，只是将(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替换成 (S)-1-S苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。产率为48.7%em.p. :123-126°C;1h-NMR(500MHz，DMS0)S 10.54(s，lH)，8.83(s，lH)，8.06(s，lH)，7.93(s，lH)，7.64(m，2H)，7.39(d，J=7.7Hz，lH)， 7.32(d J = 7.3Hz，lH)，7.27-7.21(m，lH)，6.58(d J = 2.5Hz，lH)，6.32(d J = 7.細z，lH), 3.79(s，3H)，3.10-3.01(m，4H)，2.57(s，lH)，2.03(d，J = 74.8Hz，lH)，1.81(d，J = 9.5Hz， lH),1.68(s,lH),1.67-1.61(m,4H),1.53(m,2H),1.24(s,lH).HRMS(ESI)calcd.for 仿已出8C1N702[M+H] + = 494.2071，found 494.2074。
[0(?5] 实施例9(r)-n-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基）喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0066] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基)-苯 基）氨基）-4(((3-氨基）苯基）氨基）-喀晚。产率为31.3%。m.p.:161-163°C;lH-匪R (500MHz，DMS0)Sl0.49(s，lH)，9.37(s，lH)，7.96(s，lH)，7.95(s，lH)，7.91(d，J=8.7Hz, 1H) ,7.53( s，lH) ,7.43(m，lH) ,7.20 (m，2H) ,6.68 (d，J = 2.4Hz，1H), 6.47(dd，J = 8.8， 2.4Hz，lH)，6.19(d，J = 5.Wz，lH)，3.84(s，3H)，3.60(dd，J=10.3,6.1Hz，4H)，3.09(m， 4H)，2.59(s，lH)，2.06(s，3H)，1.78(m，2H)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C26出oN8〇3[M +H] + = 503.化 19，found 503.2521。
[0067] 实施例10(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)苯基)氨基)喀晚-4-基)氨基)苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[006引参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((4-(4-乙酷基赃嗦-1-基)-苯基)氨基)- 4(((3-氨基）苯基）氨基）-喀晚。产率为29.5%。111.9.:169-171°(：;1护醒1?(5001化，0150)5 10.51(s,lH),9.34(s,lH),8.92(s,lH),7.97(d J = 5.5Hz,2H),7.80(s,lH),7.59(m,3H), 7.23(m,2H),6.87(d J = 8.4Hz,2H),6.18(d J = 5.5Hz,lH),3.58(m,4H),3.02(m,4H),2.58 (s，lH)，2.05(s，3H)，1.75(m，2H)，1.27(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C2出28N802[M+H] + = 473.2413,found 473.2412〇
[0069] 实施例n(s)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣 甲基)喀晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0070] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基)-苯 基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-Ξ氣甲基喀晚，只是将(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇 酸替换成（S)-1-ミ苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。产率为37.8%。m.p.:145-146°C;lH-匪R (500MHz，DMS0)Sl0.58(s，lH)，8.68(s，lH)，8.29(s，lH)，8.13(s，lH)，7.73(s，lH)，7.50(d, J = 8.7Hz，lH)，7.47(d，J = 8.1Hz，lH)，7.22(m，2H)，6.63(d，J=1.9Hz，lH)，6.25(m，lH)， 3.79(s，3H)，3.62-3.55(m，4H)，3.07(m，4H)，2.56(m，lH)，1.80(m，lH)，1.69(m，lH)，1.25 (s, lH).HRMS(ESI)calcd.for C2 讯 29 的 N803[M+H] + = 571.2393, found 571.2394。
[0071] 实施例12(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0072] 参照实施例1的方法，只是将(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替换成(S)-1-S苯甲 基叮丙晚-2-簇酸。产率为42.8%。m.p.:149-150°C;lH-NMR(500MHz，DMS0)δl0.56(s，lH)， 8.87(s，lH)，8.08(s，lH)，7.93(s，lH)，7.69(d J = 8.細z，2H)，7.40(dJ = 7.甜z，lH)，7.31 (m，lH)，7.27-7.21(m，lH)，6.65(d，J = 2.3Hz，lH)，6.：M(d，J = 7.4Hz，lH)，3.80(s，3H)， 3.58(dd，J=10.2,5.7Hz，4H)，3.11-2.96(m，4H)，2.56(m，lH)，1.81(d，J = 8.9Hz，lH)，1.68 ,1.25(s,lH).HRMS(ESI)calcd.for C26H29C1N803[M+H] + = 537.2129, found 537.21230。
[0073] 实施例13(s)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0074] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((4-(4-乙酷基赃嗦-1-基)-苯基)氨基)- 4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是将(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替换成（S)-1- Ξ苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。产率为39.7 %。111. P. : 204-206°C ; 1h-醒R( 500MHz，DMS0) δ 10.58 (s，lH)，9.13(s，lH)，8.88(s，lH)，8.10(s，lH)，7.83(s，lH)，7.47(m，3H)，7.30(m，2H)，6.77 (d，J=8.4Hz，2H)，3.60-3.54(m，4H)，2.97(m，4H)，2.58(s，lH)，1.79(s，lH)，1.68(s，lH)， 1.24(s，IH).HRMS(ESI)calcd. for C25出7C1Ns〇2[M+扣+ = 507.2024，found 507.2026。
[0075] 实施例14(S)-N-(3-((2-((4-(4-甲基赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0076] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4( ((3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚替换成2-( (2-甲氧基-4-(4-甲基赃嗦-1-基）-苯 基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是将(Κ)-1-Ξ苯甲基叮丙晚-2-簇酸替换 成（S)-1-S苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。产率为44.5%em.p. :189-19rC;iH-NMR(500MHz，DMS0) 5l0.56(s，lH)，8.83(s，lH)，8.07(s，lH)，7.94(s，lH)，7.69(s，lH)，7.65(d，J=8.7Hz，lH)， 7.39(d J = 8.0Hz,lH),7.31(d J = 7.7Hz,lH),7.23(t J = 8.0Hz,lH),6.60(d J = 2.4Hz, lH),6.32(d J = 8.1Hz,lH),3.79(s,3H),3.13-3.02(m,4H),2.59(m,lH),2.48(m,4H),2.24 (s，3H)，1.76(m，2H)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C2出29C1N802[M+H] + = 509.2180, found 509.2185。
[0077] 实施例15(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[007引参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((3-氯-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基)-苯基） 氨基）-4(((3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。产率为39.4%。111.9.:220-221 °(：;1^應1? (500MHz，DMS0)Sl0.59(s，lH)，9.42(s，lH)，8.99(s，lH)，8.16(s，lH)，7.82(s，lH)，7.75(s, lH)，7.52(dd，J = 8.8,2.5Hz，lH)，7.48(d，J = 7.5Hz，lH)，7.32(m，2H)，6.92(d，J = 8.7Hz， lH),3.60-3.54(m,4H),2.89-2.76(m,4H),2.56(m,lH),2.04(s,3H),1.80-1.73(m,lH), 1.67(m，lH)，l. 23( s，IH) .HRMS(ESI)calcd. for C2 出 26Cl2N802[M+H] + = 541.16:34, found 541.1633。
[0079] 实施例16(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-氣苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0080] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((3-氣-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基)-苯基） 氨基）-4(( (3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。产率为38.5 % em.p. :215-216 °C;1h-應R (500MHz，DMS0)Sl0.58(s，lH)，9.40(s，lH)，8.98(s，lH)，8.15(s，lH)，7.84(s，lH)，7.58(d, J=14.8Hz，lH)，7.48(d，J = 7.3Hz，lH)，7.29(m，3H)，6.83(t J = 9.3Hz，lH)，3.62-3.52(m, 4H)，2.87(dt，J=31.2,4.5Hz，4H)，2.56(m，lH)，2.04(s，3H)，1.77(m，lH)，1.67(m，lH)， 1.23(s，IH).HRMS(ESI)calcd. for C25出6C1FNs〇2[M+扣+ = 525.1930，found 5化.1933。
[0081 ] 实施例17(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚- 4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0082] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚替换成2-((3-甲基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯 基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是将(Κ)-1-Ξ苯甲基叮丙晚-2-簇酸替换 成（5)-1-^苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。产率为43.6%。111.9.:189-190°(：;1护匪1?(5001化， Acetic)Sl0.55(s，lH)，9.15(s，lH)，8.88(s，lH)，8.11(s，lH)，7.80(s，lH)，7.48(s，lH), 7.38(m，2H)，7.30(m，2H)，6.79(d，J = 8.4Hz，lH)，3.56-3.51(m，5H)，2.76-2.65(m，W)， 2.54(m,lH),2.11(s,3H),2.04(s,3H),1.78(d,J=9.2Hz,lH),1.66(m,lH),1.23(s,lH) ,HRMS(ESI)calcd.for C26出9C1N802[M+H] + = 521.2180,found 521.2184。
[0083] 实施例18(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚- 4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0084]参照实施例1的方法，只是将2-( (2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚替换成2-((3-甲基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯 基）氨基）-4(((3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。产率为46.8%。111.9.:211-212°(：;1护匪1? (500MHz，DMS0)Sl0.56(s，lH)，9.16(s，lH)，8.89(s，lH)，8.11(s，lH)，7.81(s，lH)，7.49(s, lH),7.39(m,2H),7.31(m,2H),6.80(d J = 8.3Hz,lH),3.55(m,4H),2.71(m,4H),2.56(m, lH),2.12(s,3H),2.04(s,3H),1.78(m,lH),1.67(m,lH),1.24(s,lH).HRMS(ESI)calcd.for C26出9C1N802[M+H] + = 521.2180，found 521.2185。
[00化]实施例i9(r)-n-(3-((2-((4-(4-赃晚-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺
[0086] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((2-甲氧基-4-(4-赃晚-1-基)-苯基)氨 基)-4(((3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚。产率为43.7%。1护醒1?(5001化，0150)510.54(3， lH)，8.83(s，lH)，8.06(s，lH)，7.93(s，lH)，7.65(m，2H)，7.39(d，J=7.7Hz，lH)，7.32(d，J = 7.0Hz，lH)，7.24(t，J = 8.0Hz，lH)，6.58(d，J = 2.5Hz，lH)，6.32(d，J = 7.8Hz，lH)，3.79 (s，3H)，3.09-3.02(m，4H)，2.57(m，lH)，1.81(d，J=9.7Hz，lH)，1.68(m，lH)，1.67-1.60(m， 4H)，1.52(dt，J=ll.l，5.7Hz，2H)，1.23(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C2出28C1N702[M+H] + = 494.2071，found 494.2075。
[0087] 实施例20(S)-N-(3-((2-((4-(4-吗嘟-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[008引参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((2-甲氧基-4-(4-吗嘟-1-基)-苯基)氨 基)-4(( (3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚，只是将(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替换成 (S)-1-S 苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。产率为 43.7%</H-NMR(500MHz，DMS0)S10.53(s，1H)，8.83 (s，lH)，8.07(s，lH)，7.94(s，lH)，7.69(m，2H)，7.38(d，J = 7.9Hz，lH)，7.32(d，J = 7.細z， lH)，7.24(t J = 7.9Hz，lH)，6.62(d J = 2.5Hz，lH)，6.33(d J = 7.8Hz，lH)，3.80(s，3H), 3.77-3.73(m，4H)，3.08-3.04(m，4H)，2.58(m，lH)，1.80(m，lH)，1.69(m，lH)，1.24(s，lH) ,HRMS(ESI)calcd.for C24出6C1N703[M+H] + = 496.1864,found 496.1868。
[0089] 实施例21 (S)-N-(3-( (2-( (4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-氣苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0090] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((3-氣-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基)-苯基） 氨基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是将(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替换成 (S)-1-S 苯甲基叮丙晚-2-簇酸。产率为 37.4%d1h-NMR(500MHz，DMS0)S10.57(s，1H)，9.38 (s，lH)，8.92(m，lH)，8.14(s，lH)，7.89-7.78(m，lH)，7.59(m，2H)，7.46(m，2H)，7.：M-7.20 (m,3H),6.82(t J = 9.3Hz,lH),3.56(m,4H),2.92-2.81(m,4H),2.56(m,lH),2.06(s,3H), 1.77(m，lH)，1.66(m，lH)，1.23(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C25H26C1FN802[M+H]+= 525.1930,found 525.1934〇
[0091] 实施例22(S)-N-(3-( (2-( (4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0092] 参照实施例1的方法，只是将2-( (2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((3-氯-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基)-苯基） 氨基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是将(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替换成 (S)-1-S 苯甲基叮丙晚-2-簇酸。产率为 36.2%d1h-NMR(500MHz，DMS0)S10.56(s，1H)，9.38 (s，lH)，8.96(s，lH)，8.15(s，lH)，7.82(s，lH)，7.74(s，lH)，7.51(dd，J=8.8,2.5Hz，lH), 7.47(d，J = 7.7Hz，lH)，7.35-7.23(m，2H)，6.92(d，J = 8.8Hz，lH)，3.59-3.52(m，4H)，2.85 (m，4H)，2.54(m，lH)，2.04(s，3H)，1.77(d，J=10.0Hz，lH)，1.66(m，lH)，1.27(s，lH).HRMS 化SI)calcd.for C25出6Cl2N8〇2[M+H] + = 541.16：M，found 541.1636。
[0093] 实施例23(R)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0094] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((2-甲氧基-4-二甲氨基-苯基)氨基)-4 (((3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。产率为31.2%。lH-醒R(500MHz，DMS0)δl0.51(s，lH)， 8.76(s，lH)，8.04(s，lH)，7.94(s，lH)，7.65(s，lH)，7.55(d，J = 8.7Hz，lH)，7.36(d，J = 7.3Hz，2H)，7.22(t J = 8.0Hz，lH)，6.38(d J = 2.5Hz，lH)，6.16(d J = 7.7Hz，lH)，3.79(s, 3H)，2.87(s，6H)，2.57(m，lH)，1.81(d，J = 9.細z，lH)，1.68(m，lH)，1.24(s，lH).HRMS(ESI) calcd.for C22出4CI化02[M+H] + = 454.1758,found 454.1756。
[OOM] 实施例24(S)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0096] 参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((2-甲氧基-4-二甲氨基-苯基)氨基)-4 (((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是将(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替换成(S)-1-S 苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。产率为 29.3%</H-NMR(500MHz，DMS0)S10.51(s，1H)，8.76(s，1H), 8.04(s，lH)，7.94(s，lH)，7.65(s，lH)，7.55(d J = 8.7Hz，lH)，7.36(d J = 7.3Hz，2H)，7.22 (t，J = 8.0Hz，lH)，6.38(d，J = 2.5Hz，lH)，6.16(d，J = 7.7Hz，lH)，3.79(s，3H)，2.87(s, 6H)，2.57(m，lH)，1.81(d，J=9.8Hz，lH)，1.68(m，lH)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C22出4C1N702[M+H] + = 454.1758，found 454.1757。
[0097] 实施例25(S)-N-(3-((2-((4-(4-吗嘟-1-基）苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[009引参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((4-(4-吗嘟-1-基)-苯基)氨基)-4(( (3- 氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是将(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替换成(S)-1-S苯甲 基叮丙晚-2-簇酸。产率为40.7 %。1h-NMR( 500MHz，DMS0)δ 10.57 (S，1H)，9.09(S，1H)，8.86 (s，lH)，8.09(s，lH)，7.83(s，lH)，7.45(d，J = 8.細z，3H)，7.30(d，J = 3.6Hz，2H)，6.74(d，J = 8.7Hz，2H)，3.74-3.69(m，4H)，3.02-2.94(m，4H)，2.56(m，lH)，1.79(d，J = 9.7Hz，lH)， 1.67(m，lH) ,1.22( s，lH) .HRMS(ESI)calcd. for C2 油 24CI 化 02[M+H] + = 466.1758'found 466.1756。
[0099] 实施例26(S)-N-(3-((2-((4-(4-赃晚-1-基）苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0100]参照实施例1的方法，只是将2-( (2-甲氧基-4-(4-乙酷基赃嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替换成2-((4-(4-赃晚-1-基)-苯基)氨基)-4(( (3- 氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是将(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替换成(S)-1-S苯甲 基叮丙晚-2-簇酸。产率为47.7 %。1h-NMR( 500MHz，DMS0)δ 10.56(S，1H)，9.04(S，1H)，8.84 (s，lH)，8.08(s，lH)，7.83(s，lH)，7.45(d，J = 3.2Hz，lH)，7.42(d，J = 8.9Hz，2H)，7.29(m， lH)，6.72(d，J = 8.7Hz，2H)，3.00-2.95(m，4H)，2.56(s，lH)，1.79(d，J = 9.4Hz，lH)，1.67 (s，lH)，1.64-1.58(m，4H)，1.49(dt，J=11.2,5.7Hz，2H)，1.22(s，lH).HRMS化SI) calcd.for C24H26CI化02[M+H] + = 464.1966,found 464.1968。
[0101 ]实施例27:本发明部分化合物对EGH?酪氨酸激酶活性的抑制作用
[0102] 受试化合物对激酶的抑制活性用半抑制浓度IC50值来表示。该类试验采用均相时 间分辨巧光化TRF)技术进行测定，方法如下:将一系列梯度浓度的化合物，在室溫条件下与 特定浓度的酶溶液共同解育5分钟，之后加入适量的酶反应底物、ATP，启动酶反应过程，30 分钟后，向酶反应体系中加入适量的反应终止液和检测液，解育1小时后，在Mo 1 eCU1 ar device公司的Flexstation III多功能酶标仪上，测定特定化合物浓度下的酶活力，并计算 不同浓度的化合物对酶活力的抑制活性，之后根据四参数方程，对不同浓度化合物下酶活 力的抑制活性进行拟合，计算出ICso值。本实施例所采用的激酶EGFR购自Sigma A1化ich，检 测试剂盒HTRF KinEA沈-TK购自Cisbio Bioassays公司，ATP购自Sigma A1化ich公司。本发 明受试化合物的IC50数据见表1。
[0103] 表1
[0104]
[0105] 实施例28:化合物对A43UH1975细胞增殖抑制活性测定
[0106] 本例用于测定本发明化合物对于EGFR野生型高表达细胞株A431及T790M点突变细 胞株H1975的增殖抑制活性，化合物对细胞增殖的抑制活性用半数抑制浓度IC50来表示。试 验方案如下:EGFR野生型高表达细胞株A431及T790M点突变细胞株H1975细胞均购于ATCC， W适宜的细胞浓度(A431:20000个细胞/ml培养基;H1975:15000个细胞/ml培养基)将细胞 接种于白色不透明的384孔培养板上；之后将细胞放置于37°C，5%C02的环境中进行培养， 24小时后，向培养的细胞培养基中加入一系列浓度梯度的药物，一般选择10个浓度，之后将 细胞放回原培养环境中继续培养48小时，之后按照CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay的方法，测定受试化合物对A431及H1975细胞增殖的影响，并计算不同浓 度的化合物对细胞增殖的抑制活性，CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay 检测试剂购自Promega。之后对不同浓度的化合物下A431及H1975细胞增殖抑制活性进行四 参数拟合，本发明受试化合物的IC50数据如下表2。
[0107] 表2
[010 引
[0109]
[0110] 本发明化合物结构上具有新颖性，是首次提出的新型非可逆共价结合片段，同时 体外生物活性评价结果显示，本发明的化合物对过表达EGFR的人表皮癌细胞株A431、对 Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株化975及突变型EGFR激酶具有明显的抑制增殖活性。
【主权项】
1. 一种含叮丙晚环侧链的芳胺喀晚衍生物或其对映异构体，其特征在于，结构通式I如 下所示： 其中：化为Ξ氣甲基、氯、氨， 化为氨、甲基、甲氧基、氣、氯， 化为乙酷赃嗦基、甲基赃嗦基、吗嘟基、赃晚基、二甲胺基。2. 根据权利要求1所述的一种含叮丙晚环侧链的芳胺喀晚衍生物或其对应异构体，其 特征在于:所述的式I化合物为如下任一化合物： (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基）喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物1); (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基）苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基）喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物2); (R)-N-(3-( (2-((4-(4-吗嘟-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物3); (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基）叮丙 晚-2-甲酯胺(化合物4); (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物5); (R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基赃嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基）叮丙 晚-2-甲酯胺(化合物6); (R) -N-(3-((2-((4-(4-甲基赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物7); (S) -N-(3-( (2-((4-(4-赃晚-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物8); (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基)氨基)苯基） 叮丙晚-2-甲酯胺(化合物9); (R) -N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)苯基)氨基)喀晚-4-基)氨基)苯基）日丫丙晚-2- 甲酯胺(化合物10); (S) -N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基）喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物11); (S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物12); (S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基）叮丙 晚-2-甲酯胺(化合物13); (S)-N-(3-((2-((4-(4-甲基赃嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物14); (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基）-3-氯苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物15); (R) -N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基）-3-氣苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物16); (S) -N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物17); (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物18); (R) -N-(3-( (2-((4-(4-赃晚-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物19); (S) -N-(3-( (2-((4-(4-吗嘟-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物20); (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基）-3-氣苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物21); (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷赃嗦-1-基）-3-氯苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物22); (R) -N-(3-( (5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)喀晚-4-基)氨基)苯基）口丫 丙晚-2-甲酯胺(化合物23); (S) -N-(3-( (5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)喀晚-4-基)氨基)苯基）口丫 丙晚-2-甲酯胺(化合物24); (S)-N-(3-( (2-((4-(4-吗嘟-1-基)苯基）氨基)-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯基）叮丙晚- 2-甲酯胺(化合物25); (S)-N-(3-( (2-((4-(4-赃晚-1-基)苯基）氨基)-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯基）叮丙晚- 2-甲酯胺(化合物26)。3.根据权利要求1或2所述的一种含叮丙晚环侧链的芳胺喀晚衍生物或其对应异构体 的制备方法，其特征在于，通过W下步骤实现： W5-位取代尿喀晚1为起始原料，在N，N-二异丙基乙胺为碱，Ξ氯氧憐作溶剂条件下 ll〇°C回流生成5-位取代2,4-二氯喀晚2,中间体2与单侧Boc保护的间苯二胺在正下醇中反 应生成4，5-位取代的2-氯喀晚3，中间体3与取代的苯胺在1N HC1催化下生成2，4，5-位取代 的喀晚4,中间体4在Ξ氣乙酸条件下脱保护得到中间体5,中间体5再与Ξ苯亚甲基保护的 叮丙晚-2-酸缩合生成化合物6，化合物6最后脱保护基得到目标产物式I化合物;反应式如 下：其中取代基的定义同权利要求1。4.根据权利要求1或2所述的一种含叮丙晚环侧链的芳胺喀晚衍生物或其对应异构体 在制备抗肿瘤细胞和祀向EGFR激酶药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞是指过表达 EGFR的人表皮癌细胞株A431、对Gefitin化耐药的人肺腺癌细胞株H1975,所述EGFR激酶是 指野生型EGFR激酶、L858R/T790M双突变型EGFR激酶。
【文档编号】C07D403/12GK106083828SQ201610532950
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月30日
【发明人】陈文腾, 黄卫, 邵加安, 俞永平
【申请人】浙江大学