烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物及其制备方法及应用
【专利摘要】本发明公开了一种烷氧基嘧啶拼接3?吡咯螺环氧化吲哚衍生物，本发明以各种取代的烷氧基嘧啶拼接3?烯键氧化吲哚衍生物与肌氨酸，多聚甲醛，在有机溶剂中回流，进行1,3?偶极子3+2环加成反应，获得烷氧基嘧啶拼接3?吡咯螺环氧化吲哚衍生物，该类骨架包含潜在的生物活性嘧啶骨架和3?吡咯螺环氧化吲哚骨架，是一类重要的医药中间体类似物和药物分子类似物，可以为生物活性筛选提供化合物源，对药物的筛选和制药行业具有重要的应用价值，本发明针对这些衍生物对三种肿瘤细胞株进行肿瘤生长抑制活性筛选，证明这些衍生物发现具有一定的抑制肿瘤细胞生长活性，可预期作为抗肿瘤药物用途。
【专利说明】
烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物及其制备方法及 应用
技术领域
[0001] 本发明涉及药物化学技术领域，尤其是一种烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚 衍生物及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 把具有生物活性基团拼接到一个分子骨架中在有机化学和医药化学中是极其重 要的研究领域。（1)多官能团氧化吲哚广泛存在天然产物和合成药物分子中，其中，尤其3-吡咯螺环氧化吲哚因为具有广泛的生物活性，吸引了许多化学工作者及医药化学团队的广 泛关注，例如，天然产物螺环氧化 11引噪horsfiline和elacomine具有多重生物活性;重要的 是，甚至非天然产物螺环氧化吲哚III和IV已被证明完全抑制tsFT210细胞，在阻断细胞分 裂的G2/M期，是一种重要的非肽p53-MDM2结合抑制剂。p53-MDM2结合抑制剂是一种治疗癌 症的新疗法。（2)目前上市或即将上市的抗肿瘤或抗病毒感染的药物相当多都是烷氧基嘧 啶衍生而成。例如：齐多夫定（zidovudine，AZT)、ddC(双脱氧胞苷)及Lamivudine(拉米夫 定)等是HIV逆转录酶抑制剂;烷氧基嘧啶化合物V-X为药物分子或具有广泛的生物活性分 子。鉴于3-烯键氧化吲哚骨架化合物和烷氧基嘧啶骨架化合物具有潜在的生物活性。因此， 把烷氧基嘧啶骨架拼接到3-烯键氧化吲哚骨架化合物上，合成一系列新的潜在多活性官能 团取代的嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物，可以为生物活性筛选提供化合物源，对药 物的筛选和制药行业具有重要的应用价值。（如附图7所示）。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是:提供一种烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物及其制备 方法与应用，它是一类重要的医药中间体类似物和药物分子类似物，对药物筛选和制药行 业具有重要的应用价值，且其合成方法非常经济简便。
[0004] 本发明是这样实现的：一种烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物，该化合 物具有如下通式(I)的结构：
[0005]
[0006] 式中，R1为烷基或氢或苯基;R2为烷基或卤素或H;R3为烷基;R 4为卤素或烷氧基或 H ;R5为卤素或烷氧基。
[0007] 烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物的制备方法，由各种取代的烷氧基嘧 啶拼接3-烯键氧化吲哚衍生物与肌氨酸及多聚甲醛，按摩尔比为2: 3:6的比例在有机溶剂 中回流，进行1，3_偶极子3+2环加成反应，获得烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生 物。
[0008] 所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物的制备方法，其特征在于:所 述的有机溶剂为乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙醚、四氢呋喃、苯、甲苯、二甲苯、三甲苯、 二氧六环、乙二醇二甲醚、异丙醚、氯仿、二氯甲烷或硝基苯。
[0009] 所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物的制备方法，其特征在于：各 种取代的烷氧基嘧啶拼接3-烯键氧化吲哚衍生物与肌氨酸，多聚甲醛，按摩尔比为2:3:6的 比例，在有机溶剂中的反应温度为50-100°C，反应时间为5-20小时。
[0010] 所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物，其特征在于:在制备防治肿 瘤疾病药物中的应用。
[0011]本发明的反应原理如下：
[0012]
[0013]式中，R1为烷基或氢或苯基;R2为烷基或卤素或Η;#为烷基;R 4为卤素或烷氧基或 H ;R5为卤素或烷氧基。
[0014]通过采用上述技术方案，以各种取代的烷氧基嘧啶拼接3-烯键氧化吲哚衍生物与 肌氨酸及多聚甲醛，按特定比例在有机溶剂中回流，进行1，3_偶极子3+2环加成反应，获得 烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物，该类骨架包含多重生物活性的3-吡咯螺环氧 化吲哚骨架拼接到烷氧基嘧啶骨架，可以为生物活性筛选提供化合物源，对多靶点多用途 药的筛选和制药行业具有重要的应用价值。本发明操作简单易行，原料合成便宜易得，可以 在各种有机溶剂中进行，也具有较好的空气稳定性，适用性广，对于各种取代基都有很好的 兼容性。
【附图说明】
[0015] 附图1及附图2为本发明的实施例1的化合物3a谱图数据；
[0016] 附图3及附图4为本发明的实施例1的化合物3b谱图数据；
[0017]附图5及附图6为本发明的实施例1的化合物3c谱图数据；
[0018] 附图7为本发明的化合物的合成应用；
[0019] 附图8为本发明的实施例1的化合物3g，3 j和3〇单晶图。
【具体实施方式】
[0020]本发明的实施例1:在反应管中依次加入89. lmg双甲氧基嘧啶拼接3-烯键氧化吲 噪la(0 · 3mmol)，53 · 4mg肌氛酸2(0 · 6mmol)和27 · Omg多聚甲酸(0 · 9mmol)和8 .OmL甲苯溶液， 加热回流反应12h，直接上样经柱层析（洗脱剂：V(石油醚）：V(乙酸乙酯）= 3:1)纯化得 94.5mg化合物3a，白色固体，恪点：107.5-109.3°C ;产率89%，>20: ldr。核磁共振和高分辨 质谱测试等结果如下：111匪1?(0)(：13,4001抱）5:2.48(8,3!〇,2.63((1，了 = 8.0抱，1!〇,3.08-3.10(m,lH),3.14-3.17(m,4H),3.69-6.70(m,lH),3.78(s,6H),4.14-4.18(m,lH),6.62(d, J = 8.0Hz,lH) ,6.76-6.79(m,lH) ,7.03-7.09(m,2H) ,8.04(s, 1H) ；13C NMR(CDC13,100MHz) 5:26.3,42.4,44.8,53.9,58.3,59.7,66.8,102.3,107.2,121.7,124.1,127.9,131.4, 143.4，154.7，168.3，168.4，180.4;HRMS(ESI-T0F)m/z:Calcd.for Ci9H22N4Na〇3[M+Na]+: 377.1590；Found:377.1591.
[0021] 化合物3b_3t的制备方法同化合物1，投料比与化合物3a相同，可得到化合物3b-3t，反应产率和dr值见表1和表2,但需强调的是本发明的化合物不限于表1和表2所表示的 内容。
[0022] 表1为烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物的化学结构及其体外活性测试 结果
[0023]
[0024] 表2为烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物的化学结构及其体外活性测试 结果
[0025]
[0026] 本实施例制备化合物3b:白色固体，产率79% ; 18: ldr;熔点:82.9-84.6°C ;核磁共 振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz )δ : 2.93-2.95(m，3H)，3.62-3.65 (m，2H)，3.84(s，7H) ,4.27-4.32(m，2H) ,6.76-6.79(m，lH) ,6.85-6.86(m，lH)，6.94((1, J = 8.0Hz，lH)，7.02-7.06(m，lH)，8.14(s，lH)，9.30(br s，1H);13C 匪R(CDC13，100MHz)S: 29.7.42.7.43.2.54.1.57.9.58.9.109.9.122.0. 124.2.128.7.130.9.141.0.155.5， 168· 1 ;HRMS(ESI-T0F)m/z:Calcd·for Ci8H2〇N4Na〇3[M+Na] +:363· 1433;Found:363· 1430·
[0027] 本实施例制备化合物3c:白色固体，产率90% ; >20: ldr;熔点：144.4-145.8°C。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.56( s，3H)，2.80(d，J = 9·6Ηζ，1Η)，3·11-3.19(m，lH)，3.25(d，J=9.6Hz，lH)，3.78(s，7H)，4·30-4.35(m，lH),4.74 (d，J=15.6Hz，lH)，5.04(d，J= 15 ·6Ηζ，1Η)，6.53(d，J = 7.9Hz，lH) ,6.78-6.81(m，lH)， 6.96-6.98(m，1H)，7.19-7.22(m，3H),7.23-7.30(m，3H)，8.12(s，1H); 13C 匪R(CDC13， 100MHz)δ：42.3,43.7,44.1,53.8,58.4,59.2,66.8,101.8,108.2,121.6,124.5,127.1, 127.5.127.8.128.7.136.0. 142.6.154.8.168.3.180.0；HRMS(ESI-T0F)m/z:Calcd.for C25H26N 4Na〇3 [M+Na]+: 453.1903 ； Found: 453.1907.
[0028] 本实施例制备化合物3d:黄色固体，产率87%;>20:1扣 ;熔点：133.3-134.5°(：。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.51 (s，3H)，2.89(d，J = 9·6Ηζ，1Η)，3· 11-3.14(m，lH)，3.32((1, J = 9.6Hz，lH) ,3.83-3.84(m，7H) ,4.30-4.35(m, lH),6.71(d,J=8.1Hz,lH),6.84-6.86(m,lH),7.01-7.02(m,lH),7.26-7.27(m,lH),7.38-7.41(m，3H)，7.48-7.52(m，2H)，8.13(s，1H) ;13C NMR(CDC13，100MHz)S:42.2,45.0,54.0， 58.9.59.2.66.8.101.8.108.6.122.0. 124.6.125.8.127.5.127.7.129.3.130.9.134.8, 142·9，154·8，168·3，179·1;HRMS(ESI-TOF)m/z:Calcd·for C24H24N4Na〇3[M+Na] +: 439.1746；Found :439.1747.
[0029] 本实施例制备化合物3e:黄色固体，产率86%;>20:1扣 ;熔点：152.5-154.0°(：。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.51 (s，3H)，2.73(d，J = 9·6Ηζ，1Η),2.95-2.99(m，lH),3.09-3.13(m，lH)，3.15(s，3H),3.74-3.77(m，lH)，3.85(s， 6H) ,4.22-4.26(m,lH) ,6.52(d ,J = 7.8Hz , 1H), 7.03-7.06(m, 1H), 7.27-7.31 (m, 1H), 8.10 (s,1H)；13C NMR(CDC13,100MHz)5：26.3,42.0,44.7,53.9,58.6,58.7,65.8,101.7,107.8, 125.0. 126.8.127.5.133.1.141.8.154.9.168.1，179.2;HRMS(ESI-T0F)m/z:Calcd.for Ci9H 2iClN4Na03[M+Na] +:411.1200 ；Found :411.1202.
[0030] 本实施例制备化合物3f:黄色固体，产率89% ; >20: ldr;熔点：146.5-148.4°C。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.47( s，3H)，2.70(d，J = 9·6Ηζ，1H),2.90-2.95(m，lH)，3.08(d，J=9.5Hz，lH)，3.12(s，3H)，3·71-3.74(m，lH),3.83 (s,6H),4.18-4.22(m,lH) ,6.46(d,J = 8.4Hz,lH) ,7.14-7.17(m,lH),7.42(d,J = 4.0Hz, 1H)，8.08(s，lH);13C 匪R(CDC13,100ΜΗζ)δ:26.4,42.2,44.8,54.1,58.7,58.8,65.9, 101.8,108.5，114.3,127.9,130.6,133.6,142.4,155.0,168.2,179.2;HRMS(ESI-T0F)m/z: Calcd.for Ci9H2iBrN4Na〇3[M+Na]+:455.0695；Found:455.0697.
[0031] 本实施例制备化合物3g:黄色固体，产率80% ; >20 : ldr;熔点：88.5-90.2°C。核磁 共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.47-2.49(m，3H)，2.73(d，J = 9.2Hz,lH) ,3.03-3.08(m,lH) ,3.17(d,J = 9.6Hz,lH) ,3.70-3.73(m,lH) ,3.75(s,6H), 4.25-4.30(m,lH),5.25(d,J=16.2Hz,1H),5.41(d,J=16.2Hz,1H),6.68-6.73(m,1H), 6.92-6.95(m，lH),7.12-7.17(m，2H)，7.22-7.26(m，4H),8.13(s，lH);13C 匪R(CDC13, 100MHz)δ：42.3,44.7,44.8,53.9,58.2,59.2,67.6,101.9,114.5,122.6,123.4,126.5, 127.1.128.6.130.4.134.3.138.0. 138.7.155.0.168.3.180.6;HRMS(ESI_T0F)m/z: Ca 1 cd. for C25H25CIN4O3 [M+Na ]+: 464.1615 ； Found: 464.1617.
[0032] 本实施例制备化合物3h:黄色固体，产率87 % ; 19:1 dr;熔点：69 · 5-71 · 2°C。核磁共 振和高分辨质谱测试等结果如下:? NMR(CDCl3,400MHz)S:2.91(s，3H)，2.80(d，J = 9.6Hz， lH)，2.93-2.96(m，lH)，3.14(d，J=9.4Hz，lH)，3.78-3.80(m，7H)，4.35-4.39(m，lH)，4.77-4.89(m，2H)，6.36(d，J=7.8Hz，lH),6.90-6.97(m，lH),7.07-7.10(m，2H),7.24-7.28(m， 4H)，7 ·42-7·43(ι?，1H)，8.13(s，lH) ;13C 匪R(CDC13，100MHz)S :42.2,43.9,44.2,54.0， 58.3.58.9.66.4.101.5.109.1.125.7.127.0. 127.1.127.7.128.9.129.0.133.1.135.6， 141·2，155·2，168·3，168·4，179·1;HRMS(ESI_T0F)m/z:Calcd·for C25H25ClN4Na〇3[M+Na] +: 487.1513；Found:487.1513.
[0033] 本实施例制备化合物3i :黄色固体，产率84% ; >20:1 dr;熔点：138.3-140.1°C。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.18(s，3H)，2.56(s，3H)， 2.81(d，J = 9.6Hz，lH) ,3.09-3.13(m，lH)，3.25(d，J = 9.6Hz，lH)，3.78-3.80(m，7H) ,4.30- 4.33(m,lH) ,4.74(d,J= 15.6Hz, 1H) ,4.99(d,J= 15.6Hz, 1H) ,6.40 (d,J = 7.9Ηζ,1Η), 6.75-6.78(m,lH),7.07(s,lH),7.17-7.19(m,2H),7.26-7.28(m,3H),8.12(s,lH)； 13C NMR (CDC13，100MHz)S:21.0,42.3,43.7,44.1,53.8,58.4,59.0,66.7,101.8,107.9,125.5， 127.0. 127.4.128.0.128.6.130.9.136.1.140.2.154.8.168.3，179.9;HRMS(ESI-TOF)m/z: Calcd · for C26H28N4Na〇3[M+Na] +: 467 · 2059;Found: 467 · 2057 ·
[0034] 本实施例制备化合物3 j :白色固体，产率90% ; >20: ldr;熔点：177.2-179.0°C。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.11 (s，3H)，2.51 (s，3H)， 2 · 75(d，J = 9.6Hz，1Η)，3.08-3 · 10(m，1Η)，3.23(d，J = 9.4Hz，lH)，3.73-3.76(m，lH) ,3.78 (s，6H)，4.28-4.32(m，lH)，5.02(d，J=16·8Ηζ，1Η)，5·26-5.33(m，lH)，6.68-6.71(m，2H), 7.02-7.04(m，2H),7.18-7.19(m，lH)，7.23-7.26(m，3H),8.11(s，1H);13C 匪R(CDC13, 100MHz)δ：18.8,42.4,44.6,45.0,53.9,57.8,59.4,67.8,102.1,118.8,121.7,122.7, 125.7.125.8.125.9.127.1.128.9.129.0. 131.8.131.9.138.2.140.7.154.8.168.4， 181 · 2 ;HRMS(ESI-T0F)m/z: C26H28N4Na〇3[M+Na] +: 467 · 2059 ;Found: 467 · 2062 ·
[0035] 本实施例制备化合物3k:白色固体，产率80% ; >20: ldr;熔点：139.1-140.9°C。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ: 1.29-1.34(m，6H)，2.50(s， 3H),2.76(dJ = 9.2Hz,lH),3.01-3.02(m,lH),3.19-3.21(m,lH),3.79-3.84(m,lH),4.10-4.26(m,4H),4.35-4.39(m,lH),4.73(d,J=15.6Hz,1H),5.01(d,J=15.6Hz,1H),6.45(d,J =8.0Hz,lH),6.75-6.78(m,lH),6.91-6.95(m,lH),7.13-7.15(m,2H),7.22-7.26(m,3H), 7.34(d，J=11·2Hz，1H)，8.05(s，lH) ;13C 匪R(CDC13，100MHz)S:14.6,42.2,43.7,44.2, 58.6.59.0. 62.7.67.2.101.8.102.9.108.4.121.6.124.8.127.0.127.1.127.5.127.8， 128·8，131·4，136·1，142·7，154·9，168·1，180·0;HRMS(ESI-T0F)m/z:C27H3〇N4Na〇3[M+Na] +: 481.2216；Found:481.2218.
[0036] 本实施例制备化合物31:黄色固体，产率82%;>20:1乜;熔点：216.5-217.9°(：。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下： 111匪1?(〇)(：13,40010^)6:0.96-0.99(111，6!1)，1.73-1.80(m，4H)，2.48(s，3H)，2.63-2.66(m，lH)，3.13-3.15(m，lH)，3.19-3.22(m，lH)，3.74-3.76(m,lH),4.10-4.19(m,4H),4.24-4.26(m,1H),6.73-6.77(m,2H),6.96-6.99(m,1H), 7.12(d,J = 7.8Hz,lH),8.02(s,lH),9.16(br s,1H)；13C NMR(CDC13,100ΜΗζ)δ： 10.8,22.3, 34.0. 42.2.44.4.51.9.58.7.68.6.103.0.109.4.121.6.124.4.127.9.131.5.141.0， 154.7,168.2,183.5；HRMS(ESI-T0F)m/z:C22H28N4Na03[M+Na] + :419.2059；Found:419.2060.
[0037] 本实施例制备化合物3m:白色固体，产率80%;>20:ldr;熔点：175.2-177.0°C。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 〇. 90-0.93(m，6H)，1. Μι .46(m，4H)， 1.70-1.75(m，4H) ，2.48(s ，3H)，2.64(d， J=8.4Hz，lH) ,3.09-3.14(m，lH)， 3·17-3·21(m，1H),3.71-3.74(m，lH),4.11-4.18(m，3H),4.21-4.26(m，2H)，6·72-6·75(ι?， 2H)，6 ·96-7·02(ι?，1H)，7.12(d，J = 8.1Hz，lH)，8.03(s，lH)，8.72(br s，lH) ;13C 匪R (CDC13，100MHz)S:13.9,19.4,31.0,34.0,42.2,44.5,51.9,58.7,66.8,103.0,109.2， 121.7，124.5，127.9，140.8，154.7，168.2，183.2;HRMS(ESI-TOF)m/z:C24H 32N4Na〇3[M+Na]+: 447.2372；Found :447.2375.
[0038] 本实施例制备化合物3n:白色固体，产率76% ; >20: ldr;熔点：182.7-184.7°C。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 〇. 88-0.90(m，12H)，1.60- 1.68(m，4H),1.70-1.77(m，2H)，2.47(s，3H)，2.63(d，J=8.4Hz，lH),3.08-3.12(m，lH)， 3.18(d，J=8.1Hz，lH),3.69-3.72(m，lH)，4.13-4.18(m，2H)，4.23-4.31(m，3H),6.73-6.78 (m，2H)，6.97-6.99(m，lH),7.10-7.11(m，lH)，8.03(s，lH)，9.21(br s，1H);13C NMR(CDC13， 100MHz)δ：22.4,22.7,25.1,37.6,42.2,44.5,58.8,65.5,102.1,109.4,121.6,124.4, 127.9,131.7,141·0,154.7,168.2,183.6;HRMS(ESI-TOF)m/z:C26H 36N4Na〇3[M+Na] + : 475.2685；Found :475.2687.
[0039] 本实施例制备化合物3o:黄色固体，产率88 % ; 14: ldr;熔点：134 · 2-136 · 1°C。核磁 共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.48(s，3H)，2.79(d，J = 12·4Ηζ，1Η)，2.88-2.92(m，lH)，3.01(d，J=12.4Hz，lH)，3.53(s，3H)，3.77-3.82(m，lH)， 3.92(s，3H),4.36-4.40(m，lH),6.68-6.72(m，lH),6.97-7.00(m，lH),7.21-7.25(m，lH)， 8.19(s，1H); 13C 匪R(CDC13，100MHz)S:30.0,41.9,48.4,54.7,58.4,58.6,66.6，115.1， 117.7,122.5,123.1,130.6,133.5,139.3,155.4,160.1,168.5,179.7;HRMS(ESI-T0F)m/z: Calcd. for Ci8Hi8Cl2N4Na〇2[M+Na] +: 415.0705 ；Found:415.0707.
[0040] 本实施例制备化合物3p:黄色固体，产率81 % ; 17: ldr;熔点：148.2-150.1°C。核磁 共振和高分辨质谱测试等结果如下匪R(CDCl3,400MHz)S:1.46-1.50(m，3H)，2.43(s， 3H),2.77-2.80(m,2H),2.91-2.93(m,lH),3.09(s,3H),3.75-3.79(m,lH),4.34-4.45(m, 3H)，6.47-6.51(m，lH)，6.70-6.75(m，lH)，7.15-7.21(m，lH)，8.11(s，lH); 13C NMR(CDC13， 100MHz)δ：14.3,26.7,41.6,48.2,58.2,59.2,63.8,65.9,107.9,112.6,112.9,114.2, 114.4,117.5,132.5,132.6,139.4,155.4,155.5,157.5,159.9,160.5,167.9,178.8；HRMS (ESI-TOF)m/z:Ci9H2〇ClFN4Na02[M+Na] +:413.1157 ；Found :413.1157.
[0041 ] 本实施例制备化合物3q:黄色固体，产率79% ; >20: ldr;熔点：117.1-118.7°C。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ: 1.49-1.53(m，3H)，2.49(S， 3H),2.85-2.89(m，2H)，3.02-3.03(m，lH)，3.81-3.84(m，lH)，4.37-4.40(m，lH),4.46-4.53 (m,2H),4.68(d,J=15.8Hz,1H),4.98(d,J=16.0Hz,1H),6.41-6.43(m,lH),6.63-6.66(m, 1H),7.2卜7.24(m，6H),8.19(s，lH); 13C 匪R(CDC13，100MHz)S:14.3,41.7,44.4,47.9, 58.2,59·3,63·8,66·5,100.0,109.1,109.2,113.1,114.2,114.5,117.4,127.4,127.8， 128.8.128.9.132.5.135.4.138.6.155.5.157.4.159.8.160.7.167.9.168.0. 178.8;HRMS (ESI-T0F)m/z: C25H24ClFN4Na〇2[M+Na] +: 489 · 1470 ;Found: 489 · 1474 ·
[0042] 本实施例制备化合物3r:黄色固体，产率81 % ; 18:1 dr;熔点：163.5-165.2 °C。核磁 共振和高分辨质谱测试等结果如下匪R(CDCl3,400MHz)S:1.49-1.53(m，3H)，2.52(s， 3H),2.93-3.00(m,2H),3.14(d,J=9.2Hz,lH),3.87-3.91(m,lH),4.39-4.54(m,3H),6.63 (d J = 7.8Hz,lH),6.82-6.86(m,lH),6.98-7.02(m,lH),7.35-7.49(m,6H),8.19(s,lH)； 13C 匪R(CDC13，100MHz)S:14.3,41.9,48.6,58.6,59.1,63.8,66.9,109.1,117.9,122.2, 124.8.126.4.128.0. 128.2.129.6.134.6.143.4.155.4.160.6.168.2.178.7；HRMS(ESI-T0F)m/z: C24H23ClN4Na〇2[M+Na] +: 457.1407 ；Found: 457.1409.
[0043] 本实施例制备化合物3s:黄色固体，产率80% ; >20: ldr;熔点：114.5-116.2°C。核 磁共振和高分辨质谱测试等结果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ: 2.49(s，3H)，2.73-2.75(m， 1H),3.01-3.08(m，lH)，3·19-3.23(m，lH),3.67-3.72(m，lH)，3.73(s，6H),3.80(s，3H)， 4.22-4.25(m，lH)，4.75(d，J= 15.8Hz，1H)，4.96((1, J= 15.2Hz，1H)，6.49((1, J = 7.8Hz， 1H),6.78-6.80(m，lH),6.93-6.95(m，lH)，7·15-7.19(m，3H),7.21-7.26(m，4H); 13C NMR (CDCI3,100ΜΗζ)δ:42·5,43·8,44·1，53·8,54·5,58·5,59·3,67·0,94·2,108.3,121.7， 124.8,127.1,127.2,127.3,127.5,127.8,128.8,136.2,142.7,162.5,169.9,180.3；HRMS (ESI-TOF)m/z: C26H28N4Na〇4[M+Na] +: 483 · 2008 ;Found: 483 · 2008 ·
[0044] 本实施例制备化合物3t:黄色固体，产率75% ; 17: ldr;熔点：88.3-89.8°C。核磁共 振和高分辨质谱测试等结果如下:4 NMR(CDC13，400MHz)δ: 2.52(s，3H)，2.81 (d，J = 7.8Hz， 1H)，2.93-2.96(m，lH)，3·17(d，J=7.8Hz，lH),3.73-3.77(m，lH),3.81(s，6H)，3.86(s， 3H)，4.34-4.38(m，lH)，4.82-4.89(m，2H)，6.38(d，J=7.2Hz，lH)，6.93-6.94(m，lH)，7.10-7.12(m,2H),7.24-7.28(m,3H),7.47-7.48(m,lH)； 13C NMR(CDC13,100ΜΗζ)δ：42.1,43.6, 43.9,53.8,54.4,58.1,58.8,66.2,93.7,108.9,125.7,126.7,126.8,126.9,127.4,127.5, 128 · 6，128·7，133·2，135·5，141·1，162·5，169·7，179·1;HRMS(ESI-T0F)m/z:C26H27ClN4Na〇4 [M+Na] +:517.1619；Found:517.1621.
[0045] 本发明的式（1)化合物具有重要的生物活性，人前列腺癌细胞(PC-3)，人肺癌细胞 (A549)以及人白血病细胞(K562)共三株肿瘤细胞的细胞毒性试验表明：此类式（1)所示的 结构的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物对肿瘤细胞生长具有抑制作用，有可能 发展成为新的防治肿瘤药物。但需强调的是本发明的化合物不限于人肺癌细胞(A549)，人 前列腺癌细胞(PC-3)和人白血病细胞(K562)表示的细胞毒性。
[0046]药理实施例1:化合物3a_3t对PC-3细胞的细胞毒性，但需强调的是本发明的化合 物不限于化合物3a-3t对PC-3 (人前列腺癌）的细胞毒性。
[0047] PC-3(人前列腺癌）细胞用RPMI-1640培养基培养，培养基中含10%的胎牛血清， 100U/mL青霉素及100U/mL的链霉素。细胞以每孔5000个细胞的浓度加入到96孔中，在37°C 含5 % C02潮湿空气的培养箱中培养24小时。
[0048]细胞存活率的测定用改良MTT法。细胞经过24小时的孵育后，分别将新配的化合物 3a-3t的二甲基亚砜溶液以浓度梯度加入到各孔中，使孔中化合物最终浓度分别为5μπι〇1/ 1^，104111〇1/1^，2(^1]1〇1/1^，4(^1]1〇1/1^和8(^1]1〇1/1^。48小时后，每孔加入1(^1^]\11'1'(511^/1111^)的憐 酸盐缓冲液，再继续在37°C培养4小时后，离心5分钟除去未转化的ΜΤΤ，每孔中加入150yL二 甲基亚砜。以溶解还原的MTT晶体甲臜(formazan)，用酶标仪在490nm波长测定0D值。其中化 合物3a-3t对PC-3细胞半抑制浓度IC 5Q由spss软件（19版本)分析得至I」。化合物3a-3t对PC-3 肿瘤细胞的IC5Q为见表1和表2;而阳性对照顺铂对PC-3肿瘤细胞的IC 5Q为24.4ymol/L。
[0049] 实验结论:PC-3细胞是测试化合物对肿瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指 标。本实验表明此类式（1)所示的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物对PC-3细胞 具有较强的细胞毒性，部分化合物和肿瘤治疗一线用药顺铂同一数量级，有可能发展成新 的具有抗肿瘤作用的药物。
[0050] 药理实施例2:化合物3a-3t对A549细胞的细胞毒性，但需强调的是本发明的化合 物不限于化合物3a-3t对A549细胞的细胞毒性。
[00511 A549(人非小细胞肺癌肺癌）用DMEM培养基培养，培养基中含10%的胎牛血清， 100U/mL的青霉素和100U/mL链霉素。细胞以每孔4000个细胞的浓度加入到96孔中，在37°C 含5 % C02潮湿空气的培养箱中培养24小时。
[0052] 细胞存活率的测定用改良MTT法。具体方法如药理实施例1。化合物3a-3t对A549月中 瘤细胞的IC5Q为见表1和表2;而阳性照顺铂对A549肿瘤细胞的IC5Q为28. ΙμL?ο?/L。
[0053]实验结论:A549细胞是测试化合物对肿瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指 标。本实验表明此类式（1)所示的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物对A549细胞 具有较强的细胞毒性，部分化合物和肿瘤治疗一线用药顺铂同一数量级，有可能发展成新 的具有抗肿瘤作用的药物。
[0054]药理实施例3:化合物3a_3t对K562细胞的细胞毒性，但需强调的是本发明的化合 物不限于化合物3a-3t对A549细胞的细胞毒性。
[0055] K562(人慢性髓系白血病细胞）用RPMI-1640培养基培养，培养基中含10%的胎牛 血清，100U/mL的青霉素和100U/mL链霉素。细胞以每孔5000个细胞的浓度加入到96孔中，在 37 °C含5 % C02潮湿空气的培养箱中培养24小时。
[0056] 细胞存活率的测定用改良MTT法。具体方法如药理实施例1。化合物3a_3t对K562细 胞的IC5Q为见表1和表2;而阳性对照顺铂对K562肿瘤细胞的IC5Q为26.8ymol/L。
[0057]实验结论:K562细胞是测试化合物对肿瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指 标。本实验表明此类式（1)所示的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物对K562细胞 具有较强的细胞毒性，部分化合物和肿瘤治疗一线用药顺铂同一数量级，有可能发展成新 的具有抗肿瘤作用的药物。
[0058]从以上药理实施例中我们可以看出这些化合物对这三株肿瘤细胞都显示有一定 的细胞毒性。但需强调的是本发明的化合物不限于人前列腺癌细胞(PC-3)，人肺癌细胞 (A549)以及人白血病细胞(K562)表示的细胞毒性。可见这些化合物具有开发成为抗肿瘤药 物的潜力，值得继续深入研究下去。
【主权项】
1. 一种烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物，其特征在于：该化合物具有如通 式(I)所示的结构：式中，R1为烷基或氢或苯基;R2为烷基或卤素或H; R3为烷基;R4为卤素或烷氧基或H; R5为 卤素或烷氧基。2. -种如权利要求1所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物的制备方法， 其特征在于:各种取代的烷氧基嘧啶拼接3-烯键氧化吲哚衍生物与肌氨酸及多聚甲醛，按 摩尔比为2:3:6的比例在有机溶剂中回流，进行1，3_偶极子3+2环加成反应，获得烷氧基嘧 啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物。3. 根据权利要求2所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物的制备方法，其 特征在于:所述的有机溶剂为乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙醚、四氢呋喃、苯、甲苯、二 甲苯、三甲苯、二氧六环、乙二醇二甲醚、异丙醚、氯仿、二氯甲烷或硝基苯。4. 根据权利要求2所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物的制备方法，其 特征在于:各种取代的烷氧基嘧啶拼接3-烯键氧化吲哚衍生物与肌氨酸，多聚甲醛，按摩尔 比为2:3:6的比例，在有机溶剂中的反应温度为50-100°C，反应时间为5-20小时。5. -种如权利要求1所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺环氧化吲哚衍生物在制备防治肿 瘤疾病药物中的应用。
【文档编号】A61P35/00GK106008532SQ201610573327
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月20日
【发明人】刘雄利, 刘欢欢, 王丹丹, 杨超, 陈智勇, 周英, 俸婷婷, 余章彪
【申请人】贵州大学