嘧啶酰胺衍生物及其盐的制作方法
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，具体涉及通式(Ⅰ)所示的嘧啶酰胺衍生物或其药学上可接受的盐，这些化合物的制备方法，含有这些化合物的药物制剂及药物组合物，以及这些化合物在制备治疗和/或预防病毒感染的药物中的用途。X如说明书中所定义。
【专利说明】
嘧啶酰胺衍生物及其盐
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及嘧啶酰胺衍生物或其药学上可接受的盐，这 些化合物的制备方法，含有这些化合物的药物制剂及药物组合物，以及这些化合物在制备 治疗和/或预防病毒感染的药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 流感是一种由流感病毒引起的急性病毒性呼吸道传染病，严重危害人类健康。历 史上流感有过几次大规模流行，以1918年的流感流行最为严重，其死亡人数达到2000多万， 且死亡者多数为15~45岁的青壮年。目前，流感的威胁依然存在，据统计，全世界平均每年 有50~100万人死于流感。
[0003] 目前针对流感的治疗药物主要有两大类:一类是20世纪60年代发现的M2型离子通 道抑制剂，以金刚烷胺为代表，只对甲型流感病毒有预防和治疗作用;一类是神经氨酸酶抑 制剂，对甲型和乙型流感病毒均有效，包括扎那米韦、奥司他韦、帕拉米韦和辛酸拉尼米韦。 然而耐药菌株的大量出现限制了这两类药物的广泛应用。因此，亟需寻找具有新的作用机 制的抗流感药物。
[0004] 流感病毒RNA聚合酶在流感病毒生命周期中发挥重要的作用，且高度保守，具有复 制酶活性及核酸内切酶活性，成为抗流感病毒药物的理想靶点。法匹拉韦是由日本富山化 学工业株式会社研究的流感病毒RNA聚合酶抑制剂，用于治疗流感，临床上效果显著，于 2014年4月在日本获批上市。
[0005] 除了流感病毒，法匹拉韦对其它病毒也可以发挥作用，比如沙粒病毒、白蛉热病 毒、汉坦病毒、黄病毒、肠道病毒、甲病毒、西方马脑炎病毒、副粘病毒、呼吸道合胞病毒和诺 和病毒等。埃博拉病毒也和流感病毒类似，都是RNA病毒，所以法匹拉韦有可能阻碍埃博拉 病毒在细胞内增殖，从而遏制感染。埃博拉今年爆发以来，已经致西非2500人感染，1000多 人已经死亡，目前尚无有效应对埃博拉病毒的药物。所以，美国卫生部门正准备加速审批是 否用法匹拉韦开展抗埃博拉病毒临床试验。
[0006] 法匹拉韦水溶性较低，对于制剂和给药造成了很大的局限性，严重影响临床使用 效果。再者，较差的水溶性会使制剂在存储和/或运输过程中有结晶析出，从而导致药物临 床应用的安全性存在隐患。目前报道了很多改善法匹拉韦水溶性的方法，例如成盐后制成 无定型冻干制剂，但是工艺繁琐、耗时长，非常不便利。
[0007] 本发明人对法匹拉韦进行了研究，发现了法匹拉韦的前体药物，即法匹拉韦磷酸 酯以及磷酸酯盐，成功解决了法匹拉韦的水溶性低的技术难题。而且，法匹拉韦磷酸酯以及 磷酸酯盐具有良好的药代动力学性质，更有利于临床的使用。
【发明内容】
[0008] 本发明将法匹拉韦与磷酸形成磷酸酯或磷酸酯盐，能够有效改善法匹拉韦的溶解 度低的弊端，具有良好的药代动力学，经肠胃或肠胃外给药，到达人体之后，经过酶或非酶 作用，迅速转化为活性化合物法匹拉韦从而发挥抗病毒功效。
[0009] 本发明提供的技术方案如下：
[0010] 方案1.式（I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[0012] 父选自-卩〇(〇!1)2、-?0(01〇(0-]\11+)、-?0(0-]\11+)(0-]\12 +)或-?0(0-)2.02+，]\11+和]\12+分别 是药学上可接受的一价阳离子，D 2+是药学可接受的二价阳离子。
[0013] 方案2.方案1中式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[0014] 父选自-卩0(0!〇2、-?0(01〇(0-]\11+)、-?0(0-]\11+)(0-]\12 +)或-?0(0-)2.02+，]\11+和]\12+分别 独立的选自Li+、Na+、K+或(4R)N+，每个R独立的选自氢或&―4烷基;D 2+选自Mg2+、Ca2+、Ba2+。
[0015] 方案3.方案2中式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[0016] X选自-P0(0H)2、-P0(0H)(0-Mi+h-PCKO-Mi+KO-Μ/)』，和 M2+分别独立的选自 Li+、 Na+、K+。
[0017] 方案4.方案3中式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[0018] X选自-P0(OH) 2、-P0(0H) (0-Mi+)、-P0(0-Μι+) (0-M2+)，Μι+和M2+分别为Na+。
[0019] 方案5.如下所述的化合物：
[0022] 本发明式（I)化合物的"药学上可接受的盐"是指式（I)化合物中存在的酸性官能 团（例如-C00H、-OH、-P03等)与适当的无机或者有机阳离子(碱)形成的盐，包括与碱金属或 碱土金属形成的盐、铵盐，以及与含氮有机碱形成的盐；以及式（I)化合物中存在的碱性官 能团（例如-NH 2等）与适当的无机或者有机阴离子(酸)形成的盐，包括与无机酸、有机酸形 成的盐。
[0023] 本发明式（I)化合物或其药学上可接受的盐，可以与一种或多种药用载体制成药 学上可接受的药物制剂，以口服、肠胃外等方式施用于需要这种治疗的患者。口服给药时， 可以与常规的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、稀释剂等制成常规的固体制剂，如片剂、胶 囊剂、丸剂、颗粒剂等；用于肠胃外给药时，可制成注射剂，包括注射液、注射用无菌粉末与 注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配制注射剂时，可 以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂。
[0024] 本发明化合物的施用量和施用频率可以根据临床医生或药师的判断考虑例如以 下的一些因素而作出调整:患者的年龄、体重、待治疗病征的严重性。一般而言，以单次剂量 或分剂量给予患者的本发明化合物的日剂量可为50mg~5000mg，优选100~2000mg，更优选 500~1000mg 〇
[0025] 本发明式（I)化合物或其药学上可接受的盐，可以与一种或多种其他抗病毒药物 制成药物组合物，所述的其他抗病毒药物包括阿昔洛韦、奥司他韦、扎那米韦、培拉米韦、拉 尼米韦、更昔洛韦、阿糖腺苷、膦甲酸、干扰素、金刚烷胺、利巴韦林。
[0026] 本发明式（I)化合物或其药学上可接受的盐，在制备治疗和/或预防病毒感染的药 物中的用途，所述的病毒感染包括病毒性呼吸道感染、流行性感冒、流行性腮腺炎、脊髓灰 质炎、病毒性胃肠炎、病毒性肝炎、麻疹、风疹、幼儿急疹、水痘、带状疱疹、天花、狂犬病、口 蹄疫、病毒性结膜炎、病毒性角膜炎、病毒性脑炎、病毒性出血热，优选流行性感冒和病毒性 出血热。
[0027] 本发明式(I)化合物或其药学上可接受的盐的优点：
[0028] 法匹拉韦因为溶解度差导致制剂难度大，进一步导致动物体内药代动力学性质 差，而本发明化合物具有非常好的溶解性，方便给药以及制剂的配置，可以保证制剂在存储 和/或运输过程的稳定性，降低临床应用的安全隐患。本发明化合物具有良好的药代动力学 特征，进入体内之后，迅速转化为原药，发挥药理活性。
[0029] 以下进一步阐述本发明化合物的有益效果，本发明其它化合物与试验中所列举的 部分本发明化合物具有相同的有益效果，但不应将此理解为本发明化合物仅具有下列有益 效果。
[0030] 实验例1本发明化合物的溶解性实验
[0031] 目的根据中国药典2010年版二部凡例，用目测法观察本发明化合物及对照药的溶 解情况，并计算溶解度。
[0032] 测试物本发明化合物1，按照实施例方法1制备所得;对照药法匹拉韦(北京澳合研 究院有限公司）
[0033]方法及结果
[0034] 1、ρΗ=9·0缓冲液配置
[0035] 称取氯化钾1.5g与硼酸1.24g，加入0.2mol/L氢氧化钠溶液41.6mL和适量水，溶解 后再加水稀释至400mL，摇匀，即得。
[0036] 2、对照药法匹拉韦溶解度测定
[0037] 取对照药法匹拉韦样品4.90mg，加 pH= 9.0缓冲液30ul，振摇，不溶，再加50ul，振 摇，不溶，再加50ul，振摇，不溶，再加100ul，振摇，不溶，再加100ul，振摇，不溶，再加100ul， 振摇，不溶，再加1 〇〇u 1，振摇，不溶，再加100u 1，振摇，不溶，再加100ul，振摇，粉末溶解，颗 粒不溶，再加1 〇〇u 1，振摇，不溶，再加100u 1，振摇，不溶，再加50u 1，振摇，不溶，再加40u 1，振 摇，不溶，再加30ul，振摇，不溶，再加20ul，振摇，不溶，再加20ul，振摇，目测溶液澄清，样品 已溶解，计算得到法匹拉韦的溶解度为4.6mg/ml。
[0038] 3、本发明化合物1溶解度测定
[0039] 取本发明化合物1样品5 . Olmg，加 pH = 9.0缓冲液20μ1，振摇，不溶，再加20μ1，振 摇，不溶，再加20μ1，振摇，溶解，目测溶液澄清，样品已溶解，计算得到本发明化合物1的溶 解度为 83.5mg/mL。
[0040] 4、实验结果
[0041] 药典2010年版二部关于溶解度的规定，上述方法所测得溶解度换算之后结果如 下：
[0043] 极易溶解系指溶质lg(ml)能在溶剂不到lml中溶解；
[0044] 易溶系指溶质lg(ml)能在溶剂1~不到10ml中溶解；
[0045] 溶解系指溶质lg(ml)能在溶剂10~不至Ij30ml中溶解；
[0046] 略溶系指溶质lg(ml)能在溶剂30~不到100ml中溶解；
[0047] 微溶系指溶质lg(ml)能在溶剂100~不至IjlOOOml中溶解；
[0048] 极微溶解系指溶质lg(ml)能在溶剂1000~不到10000ml中溶解；
[0049] 几乎不溶或不溶系指溶质lg(ml)在溶剂10000ml中不能完全溶解。
[0050]实验结论
[0051] 根据上述标准，本发明化合物1的溶解度属于溶解，而对照药属于微溶，本发明化 合物溶解度是对照药的约18倍。由此可见，本发明化合物1比对照药具有良好的溶解度，差 异显著。
[0052] 实验例2本发明化合物的大鼠药代动力学实验
[0053] 供试品:本发明化合物1，自制，其化学名称和制备方法见制备实施例。
[0054]受试动物:雄性SD大鼠，3只/给药剂量/供试品，体重220-240g/只。
[0055]供试品溶液制备：
[0056] 0.2mol/LNa0H配制:称取氢氧化钠400mg，加入50ml纯化水，超声溶解，涡旋混匀。 [0057] pH9 · 0的缓冲盐溶液：称取0 · 75g氯化钾与0 · 62g硼酸，加入20 · 8ml 0 · 2mol/LNa0H 液和适量纯化水，溶解后加水稀释至200ml，摇匀。
[0058]本发明化合物1静脉注射（iv)给药配制：称取化合物75.13mg加入1.094ml pH9.0 的缓冲盐溶液溶解，过0.22μπι滤膜后成澄清透明的溶液。
[0059]对照药法匹拉韦静脉注射（iv)给药配制:称取化合物30.02mg加入2ml ρΗ9.0的缓 冲盐溶液，振摇，不溶，过0.22μπι滤膜后成澄清透明的溶液。
[0060]实验方法
[0061 ]将供试品药液按照下表方法进行给药：
[0062]
[0063] 采血：
[0064] 采集时间点：药后0.083h，0.25h，0.5h，lh，2h，4h，6h，8h，24h，30h.
[0065]每个时间点通过尾静脉采取100yL左右全血，加入到肝素钠抗凝管里，高速离心机 中8000转/分钟离心6min分离血浆，血浆于-80 °C冰箱冻存。
[0066] 血浆样品分析：
[0067] 采用蛋白沉淀法，取20μυ??衆，加入300yL内标(含Tobutamide 100ng/ml的乙腈溶 液），1000转/分钟涡旋5min，加入300yL的水，祸旋5分钟后，12000转/分钟离心5min，取上清 液50yL，再加入150yL水，涡旋混匀，LC-MS/MS分析。
[0068] 表1 SD大鼠 PK评价结果（iv)
[0069]
[0070] AUCiast代表药时曲线下面积0-t;
[0071] 由上述结果可以看出，本发明化合物具有较好的溶解度，利于给药和代谢，在大鼠 体内转化成原药法匹拉韦后，暴露量比直接给药法匹拉韦显著提高，可以有效的避开溶解 度差、PK性质不好的缺点，成药性更好。
【具体实施方式】
[0072] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
[0073] 实施例1 3-氨基甲酰基-5-氟吡嗪-2-基磷酸二钠(化合物1)的制备
[0074] 1.二苄基(3-氨基甲酰基-5-氟吡嗪-2-基)磷酸酯的制备
[0076] 在10mL的两口瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺（5mL)和6-氟-3-羟基吡嗪-2-甲酰胺 (200mg，1 .27mmol)，在氮气保护下，室温向反应体系中分批加入NaH(60%，203mg， 5.08mmol)，然后搅拌1小时，分批加入四苄基二磷酸酯(820mg，1.52mmol)。加毕继续室温搅 拌3小时。过滤得固体，粗产物通过中压制备纯化(流动相:CH 3CN，H20，1 %NH4HC03)，收集组 分并冷冻干燥，得到产物192mg(产率为36 % )，为黄色的固体。
[0077] 2.3-氨基甲酰基-5-氟吡嗪-2-基磷酸二钠的制备
[0079] 在50mL的茄型瓶中加入二苄基（3-氨基甲酰基-5-氟吡嗪-2-基）磷酸酯（192mg， 0.46mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温搅拌滴加三甲基溴硅烷(280mg，1.84mmol)，然后室温搅 拌4小时。反应混合物减压浓缩，得到的残余物溶于乙醚(50mL)，并搅拌10分钟，滤除不溶固 体，有机相转移到另一只lOOmL的三口瓶中降温至0°C，向混合物中滴加氢氧化钠(40mg)的 水(30mL)溶液，分去有机相，水相冷冻干燥得104mg(产率为80 % )黄色的固体。
[0080] LC-M: (ES，m/z): [M-44] - = 236.0
[0081 ] H-NMR: (300MHz，D20，ppm): δ7 · 860-7 · 887 (d，J = 8 · 1Hz，1H) ·
【主权项】
1. 式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：其中， X选自-PO(OH) 2、-PO(OH) (0-Mi+)、-PO(0-Mi+) (0-M2+)或-PO(0-) 2 · D2+，Mi+和M2+分别是药 学上可接受的一价阳离子，D2+是药学可接受的二价阳离子。2. 权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐： 父选自-卩0(011)2、-?0(011)(0-]\11+)、-?0(0-]\11+)(0-]\12 +)或-?0(0-)2.02+，]\11+和]\12+分别独立 的选自Li+、Na+、K+或(4R) N+，每个R独立的选自氢或&―4烷基;D2+选自Mg2+、Ca 2+、Ba2+。3. 权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐： X选自-PO (OH) 2、-PO (OH) (0-Mi+)、-PO (0-Mi+) (0-M2+)，Mi+和M2+分别独立的选自 Li+、Na+、K + O4. 权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐： X选自-PO(OH)2、-PO(OH) (0-Ml+)、-PO(0-Mi+) (0-M2+)，Mi+和M2+分别为Na+〇5. 如下所述的化合物：6. 药物制剂，含有权利要求1~5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及一种 或多种药用载体。7. 药物组合物，含有权利要求1~5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及一 种或多种其他抗病毒药物，所述的其他抗病毒药物包括阿昔洛韦、奥司他韦、扎那米韦、培 拉米韦、拉尼米韦、更昔洛韦、阿糖腺苷、膦甲酸、干扰素、金刚烷胺、利巴韦林。8. 权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防病毒感染的 药物中的用途，所述的病毒感染包括病毒性呼吸道感染、流行性感冒、流行性腮腺炎、脊髓 灰质炎、病毒性胃肠炎、病毒性肝炎、麻疹、风疹、幼儿急疹、水痘、带状疱疹、天花、狂犬病、 口蹄疫、病毒性结膜炎、病毒性角膜炎、病毒性脑炎、病毒性出血热。9. 权利要求8所述的病毒性感染为流行性感冒和病毒性出血热。
【文档编号】A61P31/22GK105884827SQ201510990316
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2015年12月24日
【发明人】吴永谦
【申请人】山东轩竹医药科技有限公司