作为t790变异抑制剂的嘧啶衍生物的制作方法

作为t790变异抑制剂的嘧啶衍生物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种作为激酶抑制剂的嘧啶衍生物。本发明的嘧啶衍生物可用作激酶抑制剂，用于治疗由于T790M变异引起的耐药性肿瘤。
【专利说明】
作为T790变异抑制剂的嘧啶衍生物
技术领域
[0001] 本发明涉及激酶抑制剂，具体涉及作为由于T790M变异引起的耐药性抑制剂的一 种嘧啶衍生物。
【背景技术】
[0002] 蛋白激酶在细胞信号传导中具有重要作用。它能将磷酸基团从ATP或GTP转移到 功能蛋白的特定氨基酸残基上，从而引发一系列生化反应。表皮生长因子（EGFR)是一类研 究较多的酪氨酸激酶，它们在多种肿瘤中有高表达。它们的表达与癌细胞增殖，转移等现象 有关。因此以表皮生长因子（EGFR)为靶点的抑制剂是近年来抗肿瘤药物研究的重要方向 之一。
[0003] 现在市场上有两类EGFR酪氨酸激酶抑制剂，可逆型和不可逆型抑制剂。作为第一 代酪氨酸激酶抑制剂的吉非替尼（Gefitinib)和厄洛替尼（Erlotinib)是非常有效的治 疗非小型细胞肺癌的可逆型抑制剂，但它们在临床上的应用都逐渐地表现出耐药性。其中 约 50%包含由外显子 20 编码的 T790M 突变（Kosaka et al.CCR 2006;Balak et al.CCR 2006and Engelmanm et al.Science),其它突变（如 D761Y，L747S，T845A)只占不到 5% ; 另外，还有约20%包含MET肿瘤基因扩增导致的耐药，而且，其中一半也并存着T790M突 变。以上研究表明，T790M突变是对EGFR-TKIs耐药的主要原因。
[0004] 为了克服因 T790M突变导致EGFR对ATP的结合能力恢复所引起的突变，正在研 发非ATP竞争性的不可逆抑制剂如B2992, PF0299804等，虽然它们能与EGFR的ATP结合 口袋处的Cys797形成共价键，在体内和体外实验中均显示出强于吉非替尼和厄洛替尼的 抗T790M突变作用。但是临床试验表明，随即产生的放大或高表达T790M突变将导致对这 些不可逆抑制剂的耐药。另一方面，由于受限于药物代谢动力学性质，它们在临床上很难 达到可以抑制T790M突变所需的浓度。
[0005] 因此，尚需一种高药效、高选择性的药物来治疗T790M引起的耐药性肿瘤。

【发明内容】

[0006] 本发明的目的在于提供一种高药效、高选择性的药物，能够对抗T790M突变，其能 作为具有更好药效和选择性的不可逆抑制剂，能够对抗T790M突变引起的耐药性，同时降 低因抑制野生型EGFR而引起的毒副作用。
[0007] 本发明的第一方面，提供一种嘧啶衍生物及其药学上可接受的盐，所述嘧啶衍生 物的结构如下式I所示：
[0008]
[0009] 式中，
[0010] X 为 H、F、C1;
[0011] Y 为-N-或-CH-;
[0012] &为C fQj：链或支链烷基、或取代的C 直链或支链烷基；
[0013] 私为C 直链或支链烷基、C 直链或支链烷氧基、取代的C 直链或支链烷 基、或取代的Q-C；直链或支链烷氧基；
[0014] 私为H、F、Cl、Br、I、C fQj：链或支链烷基、或取代的C 直链或支链烷基；
[0015] 心为(：1-(：8直链或支链烷基、取代的(：1-(：8直链或支链烷基、或-(：(=0)1? 7，或1?4 为N (Rs) R9, ^为C ^心直链或支链烷基、取代的C fQj：链或支链烷基、或-C ( = 0) R 7,馬为 Q-QJ：链或支链烷基、取代的C fQj：链或支链烷基，其中R 7为C fQj：链或支链烷基、取 代的Q-C；直链或支链烷基；
[0016] 馬为C fQj：链或支链烷基、取代的C 直链或支链烷基；
[0017] &为C ^心直链或支链烷基、取代的C fQj：链或支链烷基、或-C ( = 0) R 7, R7如上 所述；
[0018] 或者1?5与1?6连接成环；
[0019] n 为 1、2、3、或 4;
[0020] 其中，各取代是指烷基上的一个或多个H被选自下组的取代基取代：F、Cl、Br、I、 羟基。
[0021] 在另一优选例中，当Y为-N-时，1?5与R6不连接成环。
[0022] 在另一优选例中，当Y为-N-时，1?5与R 6连接成环。
[0023] 在另一优选例中，当Y为-CH-时，1?5与R 6连接成环。
[0024] 在另一优选例中，当Y为-CH-时，心为N (R s) R9, ^为C厂心直链或支链烷基、取代 的Q-QJ：链或支链烷基、或-C( = 0)R7,馬为C fQj：链或支链烷基、取代的C 直链或 支链烷基，其中馬为C fQj：链或支链烷基、取代的C 直链或支链烷基。
[0025] 在另一优选例中，&为C ^(^直链或支链烷基、或取代的C 直链或支链烷基。
[0026] 在另一优选例中，心为C ^匕直链或支链烷基、或-C ( = 0) R 7,馬为C ^匕直链或支 链烷基、取代的CfC4直链或支链烷基。
[0027] 在另一优选例中，1?5为C 直链或支链烷基。
[0028] 在另一优选例中，&为C i-C4直链或支链烷基。
[0029] 在另一优选例中，n为2。
[0030] 在另一优选例中，X为F、或C1。
[0031] 在另一优选例中，私为C ^匕直链或支链烷基、或取代的C i-C4直链或支链烷基。
[0032] 在另一优选例中，私为F取代的C 直链或支链烷基。
[0033] 在另一优选例中，私为-CF 3。
[0034] 在另一优选例中，所述嘧啶衍生物选自：
[0035]


[0038] 在另一优选例中，所述药学上可接受的盐选自：氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸 盐、磷酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、苯磺酸盐、萘磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、苹果酸盐、 草酸盐、马来酸盐、水杨酸盐。
[0039] 本发明的第二方面，提供第一方面所述的嘧啶衍生物的制备方法，
[0041] 所述方法包括式VI化合物与式VII化合物反应生成式I化合物的步骤。
[0042] 在另一优选例中，所述式VII化合物的合成包括以下步骤：

[0045] (i)式A化合物与式B化合物反应生成式C化合物；
[0046] (ii)式C化合物脱保护后与丙烯酰氯反应生成式VII化合物。
[0047] 本发明的第三方面，提供了本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐 的用途，用于制备药物，所述药物：
[0048] (i)用作表皮生长因子受体（EGFR)抑制剂；和/或
[0049] (ii)用作T790M突变的抑制剂；和/或 [0050] (iii)用于预防和/或治疗肿瘤。
[0051] 在另一优选例中，所述肿瘤为T190M突变引起的耐药性肿瘤。
[0052] 在另一优选例中，所述EGFR为T190M突变的EGFR。
[0053] 所述肿瘤选自：肝癌、肺癌（包括纵隔癌）、口腔上皮癌、鼻咽癌、甲状腺癌、食道 癌、淋巴癌、胸腔癌、消化道癌、胰腺癌、肠癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、肾癌、胆囊癌、胆管 癌、中枢神经癌、睾丸癌、膀胱癌、前列腺癌、皮肤癌、黑色素瘤、肉癌、脑癌、血癌（白血病）、 宫颈癌、胶质瘤、胃癌、或腹水瘤。
[0054] 在另一优选例中，所述肿瘤为非小细胞肺癌。
[0055] 本发明的第四方面，提供了种药物组合物，所述药物组合物包含：
[0056] (i)本发明第一方面所述的嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐；和
[0057] (ii)药学上可接受的载体。
[0058] 在另一优选例中，所述药物组合物中还包括吉非替尼（Gefitinib)和/或厄洛替 尼（Erlotinib)〇
[0059] 本发明的第五方面，提供了一种体外非治疗性的抑制EGFR的方法，所述方法包括 步骤：将本发明第一方面所述的化合物与所述EGFR接触，从而抑制所述EGFR的活性。
[0060] 在另一优选例中，所述EGFR为T190M突变的EGFR。
[0061] 本发明的第六方面，提供了一种治疗或预防肿瘤的方法，所述方法包括步骤：给肿 瘤患者施用治疗或预防有效量的本发明第一方面所述的化合物或本发明第四方面所述的 药物组合物。
[0062] 在另一优选例中，所述肿瘤为T190M突变引起的耐药性肿瘤。
[0063] 本发明的嘧啶衍生物，用作激酶抑制剂，具有高药效、高选择性的特点，能够克服 T790突变引起的耐药性，对抗T790M突变。
[0064] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【具体实施方式】
[0065] 本申请的发明人经过广泛而深入地研究，首次意外研发出一种新型的结构如式I 所示的嘧啶衍生物，用作激酶抑制剂，具有高药效、高选择性的特点，能够克服T790突变引 起的耐药性，对抗T790M突变。在此基础上，完成了本发明。
[0066] 术语
[0067] 本发明的上下文中，术语"烷基"表示饱和的线性或支链烃部分，例如-CH3 或-ch(ch3)2。
[0068] 本发明的上下文中，术语"亚烷基"表示_CnH2n-的线性或支链有机二价官能团，其 中n为1 -8,也可以为1-6、或1-4,如亚甲基-CH2 -、亚乙基-CH2CH2-等。
[0069] 本发明的上下文中，术语"烷氧基"表示-0-(Cl-8烷基）基团，如-0CH3、-0CH 2CH3。
[0070] 本发明的上下文中，术语"亚烷氧基"表示-0_(Cl-8亚烷基）基团， 如-och 2-、-och2ch2-〇
[0071 ] 除非另外说明，本文所述的烷基、亚烷基、烷氧基和亚烷氧基同时包括取代的和未 取代的基团。烷基、亚烷基、烷氧基和亚烷氧基上可能的取代基包括，但不限于：C1-C10烧 基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C3-C20环烷基、C3-C20环烯基、C1-C20杂环烷基、C1-C20 杂环烯基、C1-C10烷氧基、芳基、杂芳基、杂芳氧基、氨基、C1-C10烷基氨基、C1-C20二烷基 氨基、芳基氨基、二芳基氨基、C1-C10烷基氨磺酰基、芳基氨磺酰基、C1-C10烷基亚氨基、 C1-C10烷基磺基亚氨基、芳基磺基亚氨基、羟基、卤素、巯基、C1-C10烷硫基、C1-C10烷基磺 酰基、芳基磺酰基、酰基氨基、氨酰基、氨基硫代酰基、胍基、脲基、氰基、硝基、酰基、硫代酰 基、酰氧基、羧基和羧酸酯基。另一方面，环烷基、杂环烷基、杂环烯基、芳基和杂芳基也可 互相稠合。
[0072] 本发明中，取代是指被一个或多个取代基取代。
[0073] 术语"烯基"表示包含至少一个双键的直链或支链烃基部分，例如-CH = CH_CH3。 术语"炔基"表示包含至少一个三键的直链或支链烃基部分，例如-c = c-ch3。术语"环烷 基"表示饱和的环状烃基部分，例如环己基。术语"杂环烷基"表示包含至少一个环杂原子 (例如N，0或S)的饱和的环状部分，例如4-四氢吡喃基。术语"芳基"表示包含一个或多 个芳环的烃基部分。芳基部分的例子包括苯基（Ph)、萘基、芘基、蒽基和菲基。术语"杂芳 基"表示包含一个或多个具有至少一个杂原子（例如N，0或S)的芳环的部分。杂芳基部分 的例子包括呋喃基、芴基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、嘧啶基、喹唑啉 基、喹啉基、异喹啉基和吲哚基。术语"氨基"表示-NHp-NH-^i 6烷基）或-N(C i 6烷基）2。
[0074] 本发明所述药学上可接受的盐可以是阴离子与式I化合物上带正电荷的基团形 成的盐。合适的阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲 基磺酸根、三氟乙酸根、乙酸根、苹果酸根、甲苯磺酸根、酒石酸根、富马酸根、谷氨酸根、葡 糖醛酸根、乳酸根、戊二酸根和马来酸根。类似地，可以由阳离子与式I化合物上的带负电 荷的基团（例如羧酸根）形成盐。合适的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵 离子，例如四甲基铵离子。在另一优选例中，"药学上可接受的盐"是指同选自下述酸形成的 盐类：氢氟酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、乙酸、草酸、硫酸、甲磺酸、水杨酸、三氟甲磺酸、萘磺酸、 马来酸、柠檬酸、醋酸、酒石酸、琥珀酸、酢浆草酸、苹果酸、谷氨酸。
[0075] 嘧啶衍生物及其药学上可接受的盐
[0076] 本发明提供的嘧啶衍生物及其药学上可接受的盐结构如下式I所示：
[0077]
[0078] 式中，
[0079] X 为 H、F、C1 ;
[0080] Y 为-N-或-CH-;
[0081 ] &为C fQj：链或支链烷基、或取代的C 直链或支链烷基；
[0082] 私为C 直链或支链烷基、C 直链或支链烷氧基、取代的C 直链或支链烷 基、或取代的Q-C；直链或支链烷氧基；
[0083] 私为H、F、Cl、Br、I、C fQj：链或支链烷基、或取代的C 直链或支链烷基；
[0084] 心为(：1-(：8直链或支链烷基、取代的(：1-(：8直链或支链烷基、或-(：(=0)1? 7，或1?4 为N (Rs) R9, ^为C ^心直链或支链烷基、取代的C fQj：链或支链烷基、或-C ( = 0) R 7,馬为 Q-QJ：链或支链烷基、取代的C fQj：链或支链烷基，其中R 7为C fQj：链或支链烷基、取 代的Q-C；直链或支链烷基；
[0085] 馬为C fQj：链或支链烷基、取代的C 直链或支链烷基；
[0086] &为C ^(^直链或支链烷基、取代的C fQj：链或支链烷基、或-C ( = 0) R 7, R7如上 所述；
[0087] 或者馬与R 6连接成环；
[0088] n 为 1、2、3、或 4;
[0089] 其中，各取代是指烷基上的一个或多个H被选自下组的取代基取代：F、Cl、Br、I、 羟基。
[0090] 在优选地实施方式中，所述嘧啶衍生物选自：
[0091]


[0094] 在另一优选例中，所述药学上可接受的盐选自：氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸 盐、磷酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、苯磺酸盐、萘磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、苹果酸盐、 草酸盐、马来酸盐、水杨酸盐。
[0095] 在另一优选例中，所述药学上可接受的盐选自：氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸 盐、磷酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、苯磺酸盐、萘磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、苹果酸盐、 草酸盐、马来酸盐、水杨酸盐。
[0096] 制备方法
[0097] 本发明还提供了上述嘧啶衍生物的制备方法：
[0099] 所述方法包括式VI化合物与式VII化合物反应生成式I化合物的步骤。
[0100] 在另一优选例中，所述式VII化合物的合成包括以下步骤：
[0101]
[0102] (i)式A化合物与式B化合物反应生成式C化合物；
[0103] (ii)式C化合物脱保护后形成式D化合物，式D化合物与丙烯酰氯反应生成式VII 化合物。
[0104] 用途
[0105] 本发明的嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐的（i)用作T790变异抑制剂；（ii) 用于制备预防和/或治疗肿瘤的药物；或（iii)用于制备T790变异抑制剂。
[0106] 在另一优选例中，所述肿瘤为非小细胞肺癌。
[0107] 在另一优选例中，所述嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐可用作激酶抑制剂，或 用于制备激酶抑制剂。在另一优选例中，所述激酶抑制剂是EGFR酪氨酸激酶抑制剂。
[0108] 药物组合物
[0109] 本发明提供包含本发明的嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的 载体的药物组合物。
[0110] 在另一优选例中，所述组合物中含有重量比为0.01% -99. 95%的嘧啶衍生物或 其药学上可接受的盐作为活性成分。
[0111] 该药物组合物优选含有重量比为〇. 1% -99. 9%的嘧啶衍生物或其药学上可接受 的盐作为活性成分，较佳地，含有重量比为〇. 1% -99. 5%的嘧啶衍生物或其药学上可接受 的盐作为活性成分，更优选含有重量比为〇. 5% -95%的活性成分。
[0112] 该药物组合物，含有治疗有效量的本发明嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐，可 作为一种高效、高选择性的预防和/或治疗肿瘤的药物，尤其是非小细胞肺癌，能够克服 T790M引起的耐药性，对抗T790M突变。
[0113] "药学上可接受的载体"指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质， 它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。"相容性"在此指的是组合 物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药 效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物（如羧甲基纤维素钠、乙基纤维 素钠、纤维素乙酸酯等）、明胶、滑石、固体润滑剂（如硬脂酸、硬脂酸镁）、硫酸钙、植物油 (如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等）、多元醇（如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等）、乳化剂 (如吐温蚁）、润湿剂（如十二烷基硫酸钠）、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无 热原水等。
[0114] 可将本发明嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐与可药用赋形剂、稀释剂等药学上 可接受的载体的混合物以片剂、胶囊、颗粒剂、散剂或糖浆剂的形式口服给药或以注射剂的 形式非口服给药。上述制剂可通过常规制药方法制备。可用的药学上可接受的载体的例子 包括赋形剂（例如糖类衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和山梨糖醇；淀粉衍生物如 玉米淀粉、土豆淀粉、糊精和羧甲基淀粉；纤维素衍生物如结晶纤维素、羟丙基纤维素、羧甲 基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠；阿拉伯胶；右旋糖酐；硅酸盐衍生物如偏硅 酸镁铝；磷酸盐衍生物如磷酸钙；碳酸盐衍生物如碳酸钙；硫酸盐衍生物如硫酸钙等）、粘 合剂（例如明胶、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇）、崩解剂（例如纤维素衍生物如羧甲基纤维 素钠、聚乙烯吡咯烷酮）、润滑剂（例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、鲸蜡、硼酸、苯甲酸钠、亮 氨酸）、稳定剂（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等）、矫味剂（例如常用的甜味剂、 酸味剂和香料等）、稀释剂和注射液用溶剂（例如水、乙醇和甘油等）。
[0115] 使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐 施用于哺乳动物，"安全有效量"指的是：活性成分的量足以明显改善病情，而不至于产生严 重的副作用。其中该安全有效量通常至少约1微克/天，而且在大多数情况下不超过约10 毫克/千克体重。较佳地，该剂量是约1微克/天-约3毫克/千克体重。当然，具体剂量 还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是在熟练医师技能范围之内的。通常，药 物组合物含有l-2000mg活性成分/剂，更佳地，含有10-200mg活性成分/剂。较佳地，所 述的"一剂"为一个药片。
[0116] 此外，本发明嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐可以单药使用，也可以与其它药 物联合使用。优选的联合使用包括：与外科手术联合使用，与一种或多种西药联合使用，与 中草药联合使用，与放射性治疗联合使用。
[0117] 本发明的药物组合物的给药途径没有特别限制，其中包括但并不限于：口服给药， 注射给药，瘤内给药，植入给药，腔内给药，肛门给药，透皮给药，内外敷；优选的注射给药包 括：静脉注射，肌肉注射，皮下注射，腔内注射、瘤内给药。
[0118] 本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示 的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以被任何提供相同、 均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特 征的一般性例子。
[0119] 本发明的有益之处在于：
[0120] (1)本发明提供了一种新型结构的嘧啶衍生物作为激酶抑制剂；
[0121] (2)本发明的嘧啶衍生物具有高药效、高选择性的特点；
[0122] (3)本发明的嘧啶衍生物能够克服T790M引起的耐药性。
[0123] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件如 Sambrook 等人，分子克隆：实验室手册（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和 份数按重量计算。
[0124] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意 义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文 中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0125] 实施例1化合物k的制备
[0126]
[0127] 步骤 A:
[0128]
[0129] 将3,4-二氟苯酸（5. 0g, 38mmol)和溴化四丁铵（1. 3g, 3. 8mmol)溶于在二氯乙烧 (30ml)中，再慢慢地滴加硝酸（7% ) (86g, 96mmol)。反应在室温下搅拌14h，加入50ml水 和50ml二氯甲烷。水相再用20ml二氯甲烷提取一次。合并后的有机相用饱和盐水洗涤， Na 2S04干燥和浓缩得粗产品。硅胶柱层析分离纯化（Et0Ac/HeXane，0-50%)得化合物2， 4、5-二氟-2-硝基苯酚（2. 02g, 30 % )。1HNMR (400MHz, CDC13) 10. 6 (s, 1H)，7. 9-8. 0 (m, 1H ),6. 9-7. 0 (m, 1H).
[0132] 将4、5-二氟-2-硝基苯酚（2.028，11.54臟〇1)和碳酸钾（2.398，17.3臟〇1)加到 DMF (10ml)和碘甲烷（1. lml，17. 3mmol)中，反应混合物在室温搅拌过夜.将混合物倒入水 中，搅拌 10 分钟，沉淀，过滤得化合物 3(1. 9g，87% ). lHNMR(400MHz，CDC13)7. 8-8. 0(m，1H
[0130] 步骤 B:
[0131] ),6. 8-7. 0 (m, 1H), 4. 0 (s, 3H).
[0133] 步骤 C:
[0134]
[0135] 将化合物 3 (2g, 10. 75mmol)溶在 DMF(20ml)中 1, 2-diamine (2. 2g, 21. 5mmol)和 K2C03 (3. 0g, 21. 5mmol)。然后此混合物在 110°C揽摔 24h, 倒入水中。固体被过滤，用水和醚冲洗，在50°C干燥得黄色固体化合物4 (2. 6g，90% )。1HN MR (400MHz，CDC13) 7. 8-7. 9 (m，1H)，6. 2-6. 4 (m，1H)，4. 0 (s，3H)，3. 5-3. 7 (m，2H)，3. 0-3. 2 (m ,3H), 2. 6-2. 7 (m, 2H), 2. 2-2. 4 (m, 6H). MS (ESI) m/z: 272. 0 (M+H) +〇
[0136] 步骤 D:
[0137]
[0138] Pd/C(200mg, 10% w)添加到化合物4(2g，7. 4mmol)在甲醇（20ml)的溶液中，在 15Psi H2搅拌12h。然后把混合物过滤，浓缩得紫色固体化合物5(1. 7g，95% )。
[0139] 1HNMR (400MHz，CDC13) ? 3-6. 6 (m，2H)，3. 6 (m，3H)，3. 0-3. 2 (m，2H)，2. 7 (m，3H)，2. 3 -2. 5 (m, 2H), 2. 2 (s, 6H). MS (ESI) m/z: 242. 0 (M+H) +〇
[0140] 步骤 E:
[0141]
[0142] 将化合物 5(1.6g，6.6mmol)，t-Bu0Na(1.9g，20mmol)，Pd2(dba)3(0.38g，0.66 mmol)和 Xantphos(0? 39g，0? 66mmol)加入到 N_(3-((2_chlor〇-5-(trifluoromethyl) pyrimidin-4-yl)氨基）苯基）丙稀酰胺（2.3g，6.6mmol)在甲苯（30ml)的溶液中。混合 物在N 2条件下回流2h。混合物冷却到室温后，过滤，滤液浓缩后得粗品，HPLC进一步纯化 得 TFA 盐，k。1HNMR (400MHz，DMS0) 10.2 (s，1H)，9.5 (s，1H)，9.0 (s，1H)，8.4 (s，1H)，8.3 (s, 1H)，7. 8 (m, 1H)，7. 5-7. 7 (m, 2H)，7. 2-7. 4 (m, 1H)，7. 1-7. 2 (m, 1H)，6. 7-6. 8 (m, 1H)，6. 4-6. 5 (m, 1H), 6. 2-6. 3 (m, 1H), 5. 7-5. 8 (m, 1H), 3. 8 (s, 3H), 3. 2-3. 3 (m, 4H), 2. 82 (s, 6H), 2. 81 (s, 3H). MS(ESI)m/z:548. 0(M+H)+〇
[0143] 实施例2化合物1的制备
[0144]
[0145] 步骤 A:
[0146]
[0147] 将3-氟-4-氯苯酚（5. 0g, 38. 4mmol)和溴化四丁铵（1. 3g, 3. 8mmol)溶解于在二 氯乙烷（30ml)中，再慢慢地滴加硝酸（7% ) (86g，96mmol)。反应在室温下搅拌14h，加入 50ml水和50ml二氯甲烷。水相再用20ml二氯甲烷提取一次。合并后的有机相用饱和盐水 洗涤，Na 2S04干燥和浓缩得粗品.硅胶柱层析分离纯化（Et0AC/HeXane，0-50% )得化合物 7,4_氯-5-氟-2-硝基苯酚（3. 0g, 41% )? lHNMR(400MHz, CDC13) 10. 7(s, 1H), 8. 2-8. 4(d，1 H), 6. 8-7. 0 (d, 1H).
[0148] 步骤 B:
[0149]
[0150] 将 4-氯-5-氟-2-硝基苯酚（2. 22g, 11. 54mmol)和1(20)3(2. 39g, 17. 3mmol)加到 DMF (10ml)和碘甲烷（1. lml，17. 3mmol)中，反应混合物在室温搅拌过夜.将混合物倒入水 中，搅拌 10 分钟，沉淀，过滤得化合物 8 (2. 3g，96 % ). 1HNMR (400MHz，CDC13) 8. 0-8. 1 (d，1 H), 6. 8-7. 0 (d, 1H), 4. 0 (s, 3H).
[0151] 步骤 C:
[0152]
[0153] 将化合物 8 (2. 2g, 10. 75mmol)溶在〇]\07(2〇1111)中，添加附，附，队-1：1'；[11161:117161:11已11 e~l, 2-diamine (2. 2g, 21. 5mmol)和 K2C03 (3. 0g, 21. 5mmol)。然后此混合物在 110°C揽摔 24 小时后，倒入水中。固体被过滤，用水和醚冲洗，在50°C干燥得黄色固体化合物9 (2. 8g, 9 1. 3 % ) ? 1HNMR (400MHz, CDC13) 8. 0 (s, 1H)，6. 5 (s, 1H)，3. 9 (s, 3H)，3. 3-3. 4 (m, 2H)，3. 0 (s, 3 H), 2. 5-2. 6 (m, 2H), 2. 2 (s, 6H). MS (ESI) m/z: 288. 0 (M+H) +0
[0154] 步骤 D:
[0155]
[0156] Pd/C(200mg, 10% w)添加到化合物9(2. lg, 7. 4mm〇U在甲脬的溶液中，在 15Psi H2搅拌12h。然后把混合物过滤，浓缩得紫色固体化合物10(1. 76g，94% )。1HNMR( 400MHz，CDC13) 6. 6-6. 7 (d，2H)，3. 8 (s，3H)，3. 0-3. 2 (m，2H)，2. 7 (s，3H)，2. 4-2. 6 (m，2H)，2. 2 (s，6H) ? MS (ESI) m/z: 258. 0 (M+H) +。
[0157] 步骤 E:
[0158]
[0159] 将化合物 10(1.7g，6.6mmol)，t-Bu0Na(1.9g，20mmol)，Pd2(dba)3(0.38g，0.66 mmol)和 Xantphos(0? 39g，0? 66mmol)加入到 N_(3-((2_chlor〇-5-(trifluoromethyl) pyrimidin-4-yl)氨基）苯基）丙稀酰胺（2.3g，6.6mmol)在甲苯（30ml)的溶液中。混 合物在N 2气氛下回流2h，混合物冷却到室温后，过滤，滤液浓缩后得粗品，HPLC进一步纯 化得 TFA 盐，1。1HNMR (400MHz，DMS0) 10. 2 (s，1H)，9. 5 (s，1H)，8. 9 (s，1H)，8. 3-8. 4 (m，2H) ，7. 8 (m，2H)，7. 5-7. 7 (m，1H)，7. 2-7. 4 (m，1H)，7. 1-7. 2 (m，1H)，6. 7-6. 8 (m，1H)，6. 4-6. 5 (m, 1H), 6. 2-6. 3 (m, 1H), 5. 7-5. 8 (m, 1H), 3. 8 (s, 3H), 3. 2-3. 3 (m, 4H), 2. 82 (m, 6H), 2. 7 (s, 3H). MS (ESI)m/z:564. 0(M+H)+〇
[0160] 实施例3化合物m的制备
[0161]
[0162] 步骤 A:
[0163]
[0164] 化合物 11 (4. 0g, 21. 5mmol)溶在 DMF (50ml)中，添加 Nl, Nl, N2-trimethylethan e_l, 2-diamine (8. 8g, 86mmol)和 K2C03 (12. 0g, 43mmol)。然后此混合物在 110°C揽摔 24h, 倒入水中。固体被过滤，用水和醚冲洗，在50°C干燥得黄色固体化合物12 (1. 3g，45% ). 1H NMR(400MHz，CDC13) 7. 8 (m，1H)，6. 5 (m，1H)，4. 0 (s，3H)，3. 2-3. 3 (m，2H)，2. 8 (s，3H)，2. 5-2. 6 (m, 2H), 2. 2-2. 3 (m, 9H). MS (ESI) m/z: 267. 9 (M+H) +〇
[0165] 步骤 B:
[0166]
[0167] Pd/C(200mg, 10% w)添加到化合物 12(1. 2g, 4. 5mmol)在甲醇（20ml)的溶液中， 在15Psi H2搅拌12h。然后把混合物过滤，浓缩得紫色固体化合物13(1. 0g，94% )? 1HNMR( 400MHz，CDC13) 6. 6 (s，1H)，6. 5 (s，1H)，3. 8 (s，3H)，2. 8-3. 0 (m，2H)，2. 5 (s，3H)，2. 4-2. 5 (m, 2H)，2. 2-2. 3 (s，6H)，2. 2 (s，3H) ? MS (ESI) m/z: 238. 0 (M+H) +。
[0168] 步骤 C:
[0169]
[0170] 将化合物 13(1.0g，4.2mmol)，t-Bu0Na(1.2g，13mmol)，Pd2(dba)3(0.24g，0.42 mmol)和 Xantphos(0? 25g，0? 42mmol)加入到 N-(3-((2_chlor〇-5-(trifluoromethyl) pyrimidin-4-yl)氨基）苯基）丙稀酰胺（1.5g，4.2mmol)在甲苯（30ml)的溶液中。混 合物在N 2气氛下回流2h，混合物冷却到室温后，过滤，滤液浓缩后得粗品，HPLC进一步 纯化得 TFA 盐，m. 1HNMR (400MHz，DMS0) 10. 2 (s，1H)，9. 5 (s，1H)，9. 1 (s，1H)，8. 4-8. 6 (m，2H ),7. 7-7. 8 (s, 1H), 7. 6-7. 7 (m, 1H), 7. 5 (s, 1H), 7. 25-7. 35 (m, 1H), 7. 1-7. 2 (m, 1H), 6. 8 (s, 1H), 6. 4-6. 5 (m, 1H), 6. 2-6. 3 (m, 1H), 5. 7-5. 8 (m, 1H), 3. 8 (s, 3H), 3. 2-3. 3 (m, 4H), 2. 82 (m, 6H), 2. 5(s, 3H), 1. 9-2. 0(s,3H).MS(ESI)m/z:543. 9(M+H)+〇
[0171] 实施例4化合物n的制备
[0172]
[0173] 步骤 A:
[0174]
[0175] 2-Fluor〇-4-hydroxyacetophenone (15. 14g，lOOmmol)和锌粉（19. 61g，300mmol) 悬浮在50ml的水中，浓HCI(37%，50ml，610mmol)被缓慢地添加到搅拌的混合物中，混合 物加热至回流六小时。反应冷却到室温，添加乙醚，和食盐。并通过硅藻土过滤，用乙醚洗 涤。滤液再用饱和盐水洗涤，MgS04干燥，过滤，浓缩得粗品。硅胶柱层析分离纯化得化合 物 19 (7. 24g，52% ) ? lHNMR(400MHz，CDC13) 7. 0-7. 1 (m，1H)，6. 5-6. 6 (m，2H)，2. 5-2. 6 (m，2H) ，1. 1-1. 2(m，3H) 〇
[0176] 步骤 B:
[0177]
[0178] 化合物19 (7. 24g，51. 6mmol)溶解在100ml的二氯甲烷中，加入溴化四丁铵 (1. 7g，5. 2mmol) 〇
[0179] 再慢慢地滴加硝酸（7 %，66ml)。反应在室温下搅拌14h，加入50ml水和50ml二氯 甲烷。水相再用20ml二氯甲烷提取一次。合并后的有机相用饱和盐水洗涤，NaACVf燥和浓 缩得粗品。硅胶柱层析分离纯化（EtOAc/Hexane，0-50 % )得化合物20，4-乙基-5-氟-2-硝 基苯酚（5. 76g，60 % )。1HNMR (400MHz，CDC13) 10. 7 (s，1H)，8. 0 (d，1H)，6. 8 (d，1H)，2. 5-2. 7 (m，2H), 1. 2-1. 3(m，3H) 〇
[0180] 步骤 C:
[0181]
[0182] 将 4-乙基-5-氟-2-硝基苯酚（5. 72g, 30. 9mmol)和 K2C03 (6. 4g, 46. 4mmol)加到 DMF (60ml)和碘甲烷（2.5ml，40mmol)中，反应混合物在室温搅拌过夜.将混合物倒入水 (60ml)和乙醚（200ml)中。有机相用饱和盐水洗涤，MgS04干燥，过滤，浓缩得粗品。硅胶 柱层析分尚纯化（二氯甲烧，100% )得化合物21，1-乙基-2-氣-4-甲氧基-5-硝基苯 (5. lg，83% ) ? lHNMR(400MHz，CDC13) 7. 8 (m，1H)，6. 7 (m，1H)，3. 9 (s，3H)，2. 6 (m，2H)，1. 2 (m, 3H).
[0183] 步骤 D:
[0184]
[0185] 1-乙基-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯（2. 5g, 12. 5mmol)在 DMF (25ml)中，添加 Nl, Nl, N2_trimethylethane-1, 2-diamine (25. Og, 50mmol)和 K2C03(7g, 50mmol)。然后混合 物在110°C下搅拌48h。倒入水中，固体过滤，用水和醚冲洗，在50°C干燥得黄色固体化合 物 22(1. 8g，52. 3 % )? lHNMR(400MHz，CDC13)7. 8(s，1H)，6. 6(s，1H)，3. 9(s，3H)，3. 1-3. 2(m ，2H)，2. 8 (s，3H)，2. 5-2. 6 (m，2H)，2. 4-2. 5 (m，2H)，2. 2 (s，6H)，1. 2-1. 3 (m，3H) ? MS (ESI) m/ z:282. 0(M+H)+〇
[0186] 步骤 E:
[0187]
[0188] Pd/C(200mg，10% w)添加到化合物 22(1. 8g，6. 6mol)在甲醇（30ml)的溶液中，在 15Psi H2搅拌12h，然后把混合物过滤，浓缩得紫色固体化合物23(1. 5g，95% )。1HNMR(40 0MHz，CDC13) 6. 6 (s，1H)，6. 5 (s，1H)，3. 8 (s，3H)，2. 8-3. 0 (m，5H)，2. 5-2. 6 (m，2H)，2. 3-2. 4 ( m，2H)，2. 2 (s，6H)，1. 1-1. 2 (m，3H) ? MS (ESI) m/z: 252. 0 (M+H) +。
[0189] 步骤 F:
[0190]
[0191] 将化合物 23(1.5g，6.0mmol)，t-Bu0Na(1.7g，18mmol)，Pd2(dba)3(0.43g，0.75 mmol)和 Xantphos(0? 44g，0? 75mmol)加入到 N-(3-((2_chlor〇-5-(trifluoromethyl) pyrimidin-4-yl)氨基）苯基）丙稀酰胺（2.2g，6.0mmol)在甲苯（30ml)的溶液中。混合 物在N 2气氛下回流2h，混合物冷却到室温后，过滤，滤液浓缩后得粗品，HPLC进一步纯化 得 TFA 盐，n。lHNMR(400MHz，DMS0)10.2(s，lH)，9.5(s，1H)，9. l(s，lH)，8.6(s，lH)，8.4(s ，1H)，7. 6-7. 7 (m，1H)，7. 5-7. 6 (m，1H)，7. 5 (s，1H)，7. 2-7. 3 (m，1H)，7. 1-7. 2 (m，1H)，6. 8 (s, 1H)，6. 3-6. 5 (m，1H)，6. 2-6. 3 (m，1H)，5. 7-5. 8 (m，1H)，3. 9 (s，3H)，3. 1-3. 2 (m，4H) 2. 6-2. 8 ( m，6H)，2. 54 (s，3H)，2. 3-2. 5 (m，2H)，0? 8-0. 9 (m，3H) ? MS (ESI) m/z: 557. 9 (M+H) +。
[0192] 本发明人采用实施例1中的方法，使用携带不同的札一 1?6取代基的中间体，分别 制备了化合物a-j，根据上述实施例中所披露的方法，结合具体的结构，本领域技术人员完 全能够实现上述化合物a-j的制备和结构确认。
[0193] 实施例5活性检测
[0194] 采用常规方法对上述实施例制备的化合物进行检测，结果表明本发明的嘧啶衍生 物（本发明的化合物）可用于抑制肝癌、肺癌、淋巴癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌等肿瘤细胞的 生长，尤其是可抑制非小细胞肺癌细胞的生长。
[0195] 经检测，结果表明本发明的化合物可作为一种高效、高选择性的预防和/或治疗 肿瘤的药物，尤其是非小细胞肺癌，能够克服T790M引起的耐药性，对抗T790M突变。
[0196] 实验方法简介如下。
[0197] 1实验材料
[0198] 1.1 试剂
[0199] 1.试剂的贮存：用DMS0将化合物配置成50mM的母液，溶解后保存于-20°C。
[0200] 2. RPMI-1640 液体培养基：GIBCO, Cat. C11875500BT
[0201] DMEM 液体培养基：GIBCO, Cat. Cl 1995500BT
[0202] 胎牛血清 FBS :Hyclone，Cat. C2027050
[0203] Penicillin-Streptomycin, GIBC0, Cat.15070063
[0204] Promega CellT.i teiHSio?:.检测试剂：Cat. G7573
[0205] PBS 磷酸盐缓冲液，Splarbio, 10*，PH7. 2-7. 4
[0206] Trypsin, GIBC0, Cat. 25200056
[0207] 1. 2仪器及耗材
[0208] 康宁96孔白色细胞培养板，Corning，Cat. 3917
[0209] 细胞培养瓶，25cm (Cat. 430639)，75cm (Cat. 430641)
[0210] RAININ 12 道排枪：Cat. 2-20 y 1 LTS，20-200 y 1 LTS
[0211] 15ml 尖底离心管，Corning，Cat. 430791
[0212] 10ml 移液管，Corning，Cat. 4488
[0213] Thermo 生物安全柜，1300Series A2, Class II，Type A2
[0214] Thermo二氧化碳培养箱
[0215] 多功能读板仪 PerkinElmer，Envision
[0216] Optec倒置显微镜
[0217] 1.3数据分析软件
[0218] GraphPad Prism 5. 0
[0219] 2实验方法
[0220] 2.1待测试剂的配制
[0221] 按照各化合物所标识的质量与分子量，将相应体积的DMS0加入到试剂瓶中，震荡 混匀配置成25mM的储液。
[0222] 2. 2采用Promega公司的CellTiter-Glo?检测试剂建立了贴壁细胞增殖抑制筛选 方法。
[0223] 人肺癌细胞株用 RP頂-1640 (NCI-H1975 细胞，ATCC)或 DMEM(A431 细胞，ATCC)液 体培养基加10%胎牛血清$83)及100皿1^/1111青霉素和0.11^/1111链霉素在细胞培养箱 (37°C，5% C02)中进行培养。
[0224] 在待测试剂的检测中，将细胞消化、计数并铺于96孔白板中，每孔195 y 1细胞悬 液，37°C过夜培养。第二天加入待测试剂，具体操作如下：待测试剂从原液或DMS0 10倍稀 释液用DMS0进行3倍梯度稀释，每个浓度取8 y 1稀释到92 y 1无血清培养基中，然后取 5 y 1加入到受试细胞中。处理3天后，弃掉培养基，加入25 y 1 OellTiter-Glo?试剂，室 温混勾2mins，静止lOmins后在Envisin上读取luminescence焚光信号，使用GraphPad Prism 5.0计算待测试剂对细胞增殖抑制的IC50值。实验所用细胞基因型、培养基及铺板 细胞数详见表1。
[0225] 表1.实验用细胞的详细信息
[0227] 表2生物活性检测结果
[0228]
[0229] 注：++++ 表不 IC50 低十 50nM ;+++ 表不 IC50 为 50nM ~200nM ;+ 表不 IC50 为 1500nM ~3000nM ; -表示 IC50 为 3000nM 以上。
[0230] 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独 引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可 以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范 围。
【主权项】
1. 一种喀晚衍生物及其药学上可接受的盐，所述喀晚衍生物的结构如下式I所示：式中， X 为 H、F、C1 ; Y 为-N-或-CH-; Ri为C I-Cs直链或支链烷基、或取代的C I-Cs直链或支链烷基； Rz为C I-Cs直链或支链烷基、C I-Cs直链或支链烷氧基、取代的C I-Cs直链或支链烷基、或 取代的Ci-Cs直链或支链烷氧基； Rj为H、F、C1、Br、I、C I-Cs直链或支链烷基、或取代的C I-Cs直链或支链烷基； Ra为C I-Cs直链或支链烷基、取代的C I-Cs直链或支链烷基、或-C ( = 0) R 7，或Ra为N (R S) Rg, Rs为C I-Cs直链或支链烷基、取代的C I-Cs直链或支链烷基、或-C ( = 0) R 7, Rg为C I-Cs直 链或支链烷基、取代的Ci-Cs直链或支链烷基，其中R 7为C I-Cs直链或支链烷基、取代的C I-Cs 直链或支链烷基； Rs为C I-Cs直链或支链烷基、取代的C I-Cs直链或支链烷基； Re为C I-Cs直链或支链烷基、取代的C I-Cs直链或支链烷基、或-C ( = 0) R 7，R,如上所述； 或者Rs与R 6连接成环； n 为 1、2、3、或 4 ; 其中，各取代是指烷基上的一个或多个H被选自下组的取代基取代：F、Cl、Br、I、径基。2. 如权利要求1所述的喀晚衍生物，其特征在于，当Y为-N-时，R 5与R e不连接成环。3. 如权利要求1所述的喀晚衍生物，其特征在于，当Y为-CH-时，R 4为N化S)尺9, Rs为 Ci-Cs直链或支链烷基、取代的C I-Cs直链或支链烷基、或-C ( = 0) R 7, Rg为C I-Cs直链或支链 烷基、取代的Ci-Cs直链或支链烷基，其中R 7为C I-Cs直链或支链烷基、取代的C I-Cs直链或 支链烷基。4. 如权利要求1所述的喀晚衍生物，其特征在于，R 1为C I-Ce直链或支链烷基、或取代 的Ci-Ce直链或支链烷基。5. 如权利要求1所述的喀晚衍生物，其特征在于，Ra为C1-C4直链或支链烷基、或-C (= 〇)咕，咕为C 1-C4直链或支链烷基、取代的C 1-C4直链或支链烷基。6. 如权利要求1所述的喀晚衍生物，其特征在于，所述喀晚衍生物选自：7.如权利要求1所述的喀晚衍生物的制备方法，其特征在于， Vl V 11I 所述方法包括式VI化合物与式vn化合物反应生成式I化合物的步骤。8. 如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于制备 药物，所述药物： a)用作表皮生长因子受体巧GFR)抑制剂讯/或 (ii) 用作T790M突变的抑制剂讯/或 (iii) 用于预防和/或治疗肿瘤。9. 一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含： (i) 权利要求1所述的喀晚衍生物或其药学上可接受的盐；和 (ii) 药学上可接受的载体。10. -种体外非治疗性的抑制EGFR的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将权利要 求1所述的化合物与所述EGFR接触，从而抑制所述EGFR的活性。
【文档编号】C07D239/48GK105985318SQ201510083925
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月15日
【发明人】王能辉
【申请人】宁波文达医药科技有限公司