用于治疗便秘的嘧啶衍生物和脂肪酸源的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种用于治疗便秘，具体是治疗患有GI失调、神经系统紊乱、或精神障碍的患者的便秘的嘧啶衍生物和脂肪酸源的组合。有利地，该组合包含一种或多种维生素或纤维。
【专利说明】
用于治疗便秘的嘧啶衍生物和脂肪酸源
技术领域
[0001] 本发明涉及用于治疗便秘，尤其是治疗患有GI失调、神经系统紊乱（神经性紊乱， neurological disorder)、或精神障碍的患者的便秘的啼啶衍生物和脂肪酸源的组合。
【背景技术】
[0002] 术语GI-失调覆盖宽泛的一组不同的紊乱，从阑尾炎、肠梗阻、结肠炎、克罗恩氏病 (Crohn's disease)、消化性溃疡发展至肛痿，包括胃肠道(GIT)增强或削弱的运动性(腹泻 时太快，慢传输型便秘时太慢），以及直肠括约肌的伸缩力变化(导致大便失禁或大便嵌塞/ 顽固性便秘）。
[0003] 便秘是排便疼痛的普遍原因。严重的便秘包括顽固性便秘(无法通过大便或气体） 和大便嵌塞，其可以发展成肠梗阻并危及生命。
[0004] 便秘是由许多原因引起的症状。这些原因有两类:在至少一部分胃肠道中排便受 阻和慢传输型（或运动少）。慢传输型便秘的已知原因包括饮食、激素失调如甲状腺机能减 退、药物治疗的副作用、低级炎症(也称为慢性炎症）、食物过敏、和很少见的重金属中毒。治 疗包括饮食习惯的变化、轻泻剂、灌肠剂、生物反馈，以及在特殊情形下可能需要手术。
[0005] -般而言，用于治疗胃肠道失调(GI-失调）的包含核苷酸或脂肪酸的组合物是本 领域已知的。
[0006] 关于功能性GI失调，US 2007/0218112涉及使用谷氨酸或核苷酸。提到了多种紊 乱，包括腹泻和便秘。没有提到用于治疗便秘的包含核苷酸的具体组合物。该实施例将精力 集中在谷氨酸在胃肠道中的作用上。
[0007] US 2012/0189597A1涉及改变细胞能荷的方法，该方法包括给予需要其的哺乳动 物包含有效量的外源核苷酸的营养组合物，例如以保持哺乳动物的胃肠功能。可选地，存在 鱼油。该文献没有提及治疗便秘。
[0008] US2012/270830A1涉及用于治疗哺乳动物的功能性肠道紊乱的包含茶氨酸和核苷 酸的营养组合物。可选地，该组合物包含鱼油。给出了肠道紊乱的多种实例，包括消化不良、 肠易激综合症、功能性大便失禁、功能性肛门直肠疼痛和慢结肠传输。这些紊乱在本质上不 同，并且甚至可以认为某些是对立的（如腹泻与慢传输）。该文献没有描述用于治疗便秘的 确切的嘧啶衍生物和多不饱和脂肪酸的组合。
[0009] US 5,709,888 Bl涉及脂肪酸混合物并涉及脂肪酸混合物与核苷酸和/或核苷的 混合物。陈述了后者混合物作为用于治疗患有腹泻的婴儿的奶粉添加剂是有用的。
[0010] 因此，尽管本领域已经承认了脂肪酸和核苷酸在胃肠系统中的作用，但是由引用 的现有技术不清楚怎样配制确切用于治疗便秘的包含脂肪酸源和核酸的组合物，更不用说 治疗慢传输型便秘。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的是提供用于治疗便秘，具体是用于治疗慢传输型便秘的具体组分的 组合。
[0012] 术语慢传输型便秘于1986年在一组除多种其他系统性症状之外在正常口径的结 肠情况下都表现出缓慢的总肠道传输时间的女性中提出(Preston Gut 1986)。
[0013] 现在已经发现与多不饱和脂肪酸(PUFA)组合的嘧啶或其衍生物对于治疗便秘是 有效的，具体是因为通过胃肠道的传输时间改善。本发明人发现与多不饱和脂肪酸(PUFA) 组合的嘧啶或其衍生物增强通过全长消化道(从胃部到直肠)的传输，极大地缓解便秘。
[0014] 此外，发现嘧啶（衍生物）和PUFA的这种组合可以显著减少GIT中蛋白质α-突触核 蛋白聚集体(alpha-synuclein aggregate)的形成（通过乙状结肠活检可以在人类中检 测），可能通过TLR4作用。
[0015] TLR4,是指Toll样受体4,是结合至来自革兰氏(GRAM)阴性细菌的LPS(脂多糖）的 受体，也存在于神经原膜上，并涉及在α-突触核蛋白向细胞的运输中。
[0016] 尽管本文没有示出，但是存在经受相同的鱼藤酮处理的TLR4K0小鼠未能示出α-突 触核蛋白沉积并具有正常的传输时间的实验证据，强有力地指出α-突触核蛋白到肠肌丛的 神经原的胞吞需要TLR4，并且该沉积是传输时间损伤的原因。
[0017] 蛋白质α-突触核蛋白聚集体的这种减少可以潜在地用作神经退行性疾病进展的 替代标志。
[0018] 发明人发现包含嘧啶衍生物和多不饱和脂肪酸(PUFA)的组合物对于减少大便通 过肠道系统的传输时间是有效的。具体地，本发明人发现嘧啶衍生物和PUFA的组合对于治 疗慢传输型便秘是有用的。这通过使用了小鼠模型的实施例得到证明。
[0019] 具体认为本发明对于治疗人，优选至少18岁的人，具体是至少50岁的人，更具体是 老年人(至少65岁）是有用的。
[0020] 进一步设想了具体是患有神经系统紊乱的人受益于根据本发明使用的组合的治 疗。
[0021] 因此，本发明涉及用于预防或治疗便秘，优选慢传输型便秘的嘧啶衍生物和具有 18-24个碳原子的多不饱和脂肪酸的组合。
[0022] 本发明还涉及使用嘧啶衍生物和具有18-24个碳原子的多不饱和脂肪酸来制造用 于预防或治疗便秘，优选慢传输型便秘的药物或组合。
[0023] 优选地，便秘与胃肠失调有关。具体地，所述胃肠失调是胃肠道粘膜的慢性炎症， 优选地选自由肠梗阻、结肠炎、炎症性肠病、和消化性溃疡组成的组。
[0024] 可替换地，便秘可与神经系统紊乱或精神障碍有关。神经系统紊乱优选地是周围 神经病、自主神经病、或肠神经系统神经病，优选地是自主神经病、或肠神经系统神经病。 [0025]优选地，神经系统紊乱是神经退行性疾病。
[0026]优选地，神经系统紊乱选自由突触核蛋白病（synucleopathies)、糖尿病性神经 病、杜兴肌营养不良（Duchenne ' s dystrophy )、脑血管疾病（更具体地是中风）、多发性硬 化、单纯性自主神经衰竭、和脊髓损伤组成的组，优选地选自由脑血管疾病（更具体地是中 风）、多发性硬化、单纯性自主神经衰竭、脊髓损伤和帕金森病组成的组。
[0027] 优选地，精神障碍是广泛性发育障碍，优选地是自闭症。
[0028] 优选地，精神障碍是抑郁症，具体是抑郁情绪障碍。
[0029] 在一个具体的实施方式中，治疗或预防患有大脑性麻痹的受试者的便秘。
[0030]根据一个优选的实施方式，根据本发明使用的组合中，多不饱和脂肪酸选自ω-3 多不饱和脂肪酸的组，优选地作为鱼油提供。更优选地，ω-3多不饱和脂肪酸选自由二十二 碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)、和二十碳五烯酸(EPA)组成的组。
[0031] 优选地，通过该组合给予的DHA的日剂量在300mg至4000mg的范围内，更优选地在 500mg至2500mg的范围内。
[0032] 优选地，通过该组合给予的DHA加 EPA的日剂量在400mg至5000mg的范围内，更优选 地在500mg至3000mg的范围内，具体在1000 mg至3000mg的范围内，更具体地在1000 mg至 2500mg的范围内。
[0033] 优选地，根据本发明使用的组合包含提供具有18-24个碳原子的多不饱和脂肪酸 的鱼油。
[0034] 优选地，在根据本发明使用的组合中，嘧啶衍生物是碱基、核苷或核苷酸;优选地 选自尿苷、脱氧尿苷、衍生的（脱氧)尿苷、胞苷、脱氧胞苷和衍生的（脱氧)胞苷的组;更优选 地选自 UMP、UDP、UTP、CMP、CDP、CTP dUMP、dUDP、dUTP、dCMP、dCDP和dCTP的组，其中，可选地 所述核苷酸的(脱氧)核糖的一个或多个羟基部分被酰化。
[0035] 在一个特别优选的实施方式中，核苷酸是UMP或酰化的UMP。
[0036] 在一个特别优选的实施方式中，核苷是尿苷或酰化尿苷。
[0037]酰基可以是任何生理学上可接受的有机酸残基，具体是C2-C24有机酸残基。优选 的酰化形式的嘧啶来源是其中（脱氧）核糖已经被乙酸、正己酸、辛酸、或正癸酸酰化的那 些，因为这些增加尿苷源的生物利用率。用于将这些中链脂肪酸反应至尿苷，例如反应至尿 苷的5'位的方法与其他脂肪酸相同是本领域已知的并包括常规的酰化方法。在进一步的实 施方式中，尿苷源被PUFA，例如ω -3PUFA酰化。
[0038]可以作为营养组合物的一部分给予根据本发明使用的组合。优选地，根据本发明 的营养组合物包含胆碱。
[0039]优选地，根据本发明的营养组合物进一步包含磷脂、维生素 Ε、维生素 C、硒、维生素 Β12、维生素 Β6和叶酸中的至少一种；更优选地，包含磷脂、维生素 E、维生素 C、硒、维生素 Β12、维生素 Β6和叶酸中的至少2、3、4、5、或6种，更加优选地包含磷脂、维生素 E、维生素 C、 硒、维生素 Β12、维生素 Β6和叶酸。
[0040]本发明进一步涉及用于监测便秘、优选慢传输型便秘的治疗的方法，所述方法包 括给予根据本发明使用的组合，以及测量结肠中的突触核蛋白聚集体的水平。
[0041 ]本发明进一步涉及用于监测突触核蛋白病，优选地PD、路易体痴呆（dementia with Lewy bodies)、或多系统萎缩症的治疗的方法，更优选地涉及用于监测F1D的治疗的方 法，所述方法包括给予根据本发明使用的组合，以及测量结肠中的突触核蛋白聚集体的 水平。
【附图说明】
[0042] 图1示出了实施例1的结果:纹状体内注射载体(Veh)或鱼藤酮(Rot)之后不同时间 (天)下转棒(旋转，rotarod)上的平均时间（秒）。如表1所解释的，示出了四组小鼠。
[0043] 图2示出了实施例1的结果:死亡之前一小时胃内给予2.5%伊文思蓝溶液(Evans Blue solution)时蓝色肠管的长度。给出了四个实验组各自的平均长度和标准误差(表1)。
[0044] 图3示出了实施例1的结果：四个实验组中结肠的平均长度(cm)(表1)。
[0045] 图4示出了实施例1的结果:检测四个小鼠实验组的结肠中的α-突触核蛋白的抗体 的组织免疫染色的强度。给出了包含5根长茸毛(villi)的区域的平均光密度(O.D.)。
[0046] 图5示出了检测小鼠实验组的结肠中的α-突触核蛋白的抗体的组织免疫染色(棕 色）（实施例1，表1)。
[0047] 图6示出了实施例5的结果，与疗法设定中小鼠在转棒上消耗的时间有关。
[0048] 图7示出了饮食1和2对肠道传输的影响。
[0049] 图8示出了饮食1和2对结肠长度的影响。
【具体实施方式】
[0050] 例如，由图4和5可以推断，UMP和含有18-24个碳原子的多不饱和脂肪酸(可以鱼油 的形式提供)的组合可以显著减少胃肠道中的毒害神经的蛋白质α-突触核蛋白聚集体的形 成。用杀虫剂鱼藤酮处理的野生小鼠在肠壁的肠肌丛细胞中具有细胞质的α-突触核蛋白沉 积，其阻碍肠运动。用根据本发明的组合治疗这些小鼠减少α-突触核蛋白染色并改善传输 时间。
[0051] 进一步发现使用根据本发明的组合对用于帕金森病的小鼠模型中的肌肉运动功 能具有积极影响。
[0052]除非另外指出，否则将本文使用的术语"一个"或"一种"定义为"至少一种"。
[0053] 当涉及单数名词(例如，化合物、添加剂等)时，旨在包括复数。
[0054] 除非另外指出，否则应当将本文使用的术语"或"理解为"和/或"。
[0055] 为了清楚，在本文中作为相同或单独的实施方式描述了简要描述特征，然而，将要 了解的是本发明的范围可以包括具有描述的所有或一些特征的组合的实施方式。
[0056] 术语"便秘"具体涉及其最常用的定义，即，对于人来说，少于正常的，优选地少于 一周三次的排便。
[0057] 研究便秘患者的最广泛使用的和接受的方法是不透射线（固体标记)方法(参见例 如Preston and Lennard-Jones,Gut,1986，27,41_48)〇
[0058] 以现有技术常见的方式在本文中使用术语"脂肪酸"。因此，可以作为游离脂肪酸 或其盐或以适用于营养性药物产品的衍生物形式提供脂肪酸-衍生物形式在体内降解释放 脂肪酸。合适的衍生物形式包括本领域已知的酯和醚，包括甘油一酸酯、甘油二酸酯、甘油 三酯、和磷脂形式。具体地，通过甘油三酯已经实现了良好的结果。
[0059] 当计算量时，可以假设与纯脂肪酸相同的生物利用率和类似于完整分子中的脂肪 酸的摩尔量的脂肪酸的贡献，并校正完整分子的重量。
[0060] 优选地，根据本发明使用的组合包含至少一种c〇3-PUFA，更优选地包含至少一种 选自二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)和二十碳五烯酸(EPA)的组的PUFA。
[0061] 优选地作为甘油三酯、甘油二酸酯、甘油一酸酯、游离脂肪酸或它们的盐或酯、磷 月旨、溶血磷脂、甘油醚、脂蛋白、神经酰胺、糖脂或它们的组合提供DHA、EPA和/或DPA。
[0062]更优选地，根据本发明使用的组合包含至少甘油三酯形式的DHA。
[0063] 优选地，根据本发明使用的组合包含用于每天给予400至5000mg(DHA+EPA)，更优 选地每天500至3000mg，最优选地每天1000至2500mg的充足量的DHA和EPA。
[0064]存在于根据本发明使用的组合中的总脂肪酸中的（DHA+EPA)的比例优选地是5-50wt. %，更优选地是10_45wt. %，最优选地是15_40wt. %。
[0065] 更优选地，根据本发明使用的本组合包含用于给予每天300至4000mg，更优选地每 天500-2500mg的量的DHA的充足量的DHA。
[0066] 根据本发明使用的本组合优选地包含非常少量的花生四烯酸(AA)。
[0067] 基于总的脂肪酸，根据本发明使用的本组合优选地包含小于5wt. %的花生四烯 酸，更优选地低于2.5wt. %，例如低至0.5wt %。
[0068]优选地，根据本发明使用的本组合中的重量比DHA/AA是至少5,优选地至少10,更 优选地至少15,优选地高达例如30或甚至高达60。
[0069] 根据本发明使用的本组合中的ω -6/ ω -3脂肪酸的比率优选地低于0.5，更优选地 低于0.2,例如低至0.05或0.01。具体地，根据本发明使用的本组合中的比率ω-6/ω-3脂肪 酸(C20和更高)优选地低于0.3，更优选地低于0.15，例如低至0.06或低至0.03。
[0070] 根据本发明使用的本组合优选地包含基于总的脂肪酸的l-40wt. %的DHA，优选地 基于总的脂肪酸的3-36wt. %的DHA，更优选地基于总的脂肪酸的10-30wt. %的DHA。
[0071] 根据本发明使用的本组合优选地包含基于总的脂肪酸的0.5_20wt.%的EPA，优选 地基于总的脂肪酸的2-1 Owt. %的EPA，更优选地基于总的脂肪酸的5-1 Owt. %的EPA。
[0072] 通过组合给予的含有18-24个碳原子的多不饱和脂肪酸的日剂量在0.4-15克的范 围内，优选地在0.6-10g的范围内，具体在l-5g的范围内。
[0073] 具体地，通过包含EPA和DHA两者的组合实现了良好的结果。如果两者都存在，那么 重量与重量比EPA = DHA通常在1:99至99:1的范围内，优选地在1:10-5:1的范围内，具体在1: 5-1:2的范围内。
[0074] 如果EPA和/或DHA存在，那么DHA加 EPA的总的日剂量合起来优选地在300-5000mg/ 天的范围内，优选地在500-3000mg/天的范围内，具体在1000-2500mg/天的范围内。
[0075] 在一个有利的实施方式中，适合将鱼油或藻类油作为PUFA的来源。特别适合将鱼 油作为PUFA的来源。
[0076] 本文使用的术语"嘧啶衍生物"是指含有杂环的六元环的分子，该环包含1和3位的 氮，和2、4、5和6位的碳，其中，至少碳提供有官能团，具体是选自酮基（=0)和伯胺基团（_ NH2)的官能团。杂环通常包含一个或两个双键。优选地，环中的氮中的至少一个结合至糖 基，具体结合至核糖或脱氧核糖。
[0077] 优选地，嘧啶衍生物选自嘧啶碱基及其衍生物的组，具体选自尿嘧啶、胞嘧啶、和 它们的衍生物的组。它们的优选的衍生物是尿嘧啶或胞嘧啶的核苷以及尿嘧啶或胞嘧啶的 核苷酸。因此，在一个优选的实施方式中，组合提供选自UMP、UDP、UTP、CMP、CDP、CTP dUMP、 dUDP、dUTP、dCMP、dCDP和dCTP的组中的至少一种核苷酸。
[0078] 可以如此使用核苷或核苷酸，或可以衍生它的官能团的一个或多个。具体地，可以 衍生连接至杂环六元环的氨基，或可以例如通过C1-C24羧酸衍生，优选地酯化(酰化)核苷 或核苷酸的核糖或脱氧核糖的一个或多个羟基。
[0079] 在一个实施方式中，嘧啶衍生物包含选自PUFA组的脂肪酸部分。因此，在一个具体 的实施方式中，本发明使用的组合包含组合在单个分子中的PUFA和嘧啶衍生物，其可以在 体内水解。嘧啶衍生物的酯和制备这些的方法通常是本领域已知的。EP 1，390,378和US 5， 470,838中描述了这些衍生物等。
[0080] 优选地，根据本发明用于应用的组合包含选自尿苷、脱氧尿苷、磷酸尿苷、尿嘧啶、 酰化尿苷、和胞苷的尿苷源。
[0081] 在本发明的上下文中可以将在人体内转化为尿苷的饮食胞苷视为尿苷的来源。因 此，根据本发明用于应用的组合可以包含作为尿苷的来源的胞苷、脱氧胞苷、磷酸胞苷、胞 嘧啶和/或酰化胞苷。
[0082] 优选地，根据本发明使用的本组合包含尿苷和/或磷酸尿苷，更优选地包含磷酸尿 苷。
[0083]具体地，根据本发明使用的本组合包含选自单磷酸尿苷(UMP)、二磷酸尿苷(UDP) 和三磷酸尿苷(UTP)的一种或多种磷酸尿苷，以及更优选地包含UMP。
[0084]最优选地，根据本发明使用的本组合包含UMP和/或尿苷。优选地，通过UMP提供根 据本发明使用的本组合中的至少50wt. %的尿苷，更优选地至少75wt. %，最优选地至少 95wt · % 〇
[0085]优选地给予根据本发明使用的本组合(或以一定格式）以提供0.08_3g/天，优选地 0.1-2g/天，更优选地0.2-lg/天的量的尿苷(尿苷、脱氧尿苷、磷酸尿苷、尿嘧啶和酰化尿苷 衍生物的累积量）。
[0086] 根据本发明使用的本组合优选地包含每100mL液体产物0.08-3g UMP，每100mL液 体产物〇. l-2g UMP，更优选地每100mL液体产物0.2-lg的量的尿苷。
[0087] 优选地，每千克体重每天给予1-37.5mg UMP。
[0088]使用等价物和UMP的分子量，通过采用等摩尔量可以由UMP的剂量计算重量基础上 所需的等价物的剂量，后者是(约）324道尔顿。因此，嘧啶的日剂量有利地在3-116μπι〇 1/kg 体重/天的范围内。
[0089] 优选地至少每天一次，具体每天2-10次给予该组合。对于小于每天一次给予该组 合或组合物的实施方式，活性成分的单位剂量(每次服用的剂量)通常在本文其他地方提到 的日剂量的范围内，但是活性成分的浓度可以更高。
[0090] 在一个有利的实施方式中，作为营养组合物的一部分给予组合。营养组合物通常 进一步包含可消化的碳水化合物部分和/或蛋白质物质部分。进一步地，组合物可以包含含 有PUFA的脂质部分和一种或多种其他脂质。
[0091] 在一个具体的实施方式中，营养组合物包含饮食纤维。已经发现与PUFA和嘧啶组 合的纤维的存在对便秘，尤其是慢传输型便秘具有积极效果。此外，已经发现其在患有神经 退行性疾病，如帕金森病的受试者中提供肌肉运动功能的改善。
[0092] 根据本发明的纤维的总的日剂量优选地是1至15g，更优选地是3至12g，具体是4-l〇g。就根据本发明使用的产物中的总的纤维含量而言，纤维的含量优选地是l_15g/100g， 具体是3-10g/100g产物。
[0093] 纤维可以选自可溶纤维和不溶纤维。
[0094] 纤维通常由多个碳水化合物单元组成。纤维可以是短链难消化的碳水化合物或长 链难消化的碳水化合物。根据纤维的类型，国家食品法规对于什么构成短链或长链具有不 同的限定。如本文中使用的，短链纤维通常具有小于20,具体是2-12以下，更具体是3-9的聚 合度;长链纤维具有至少高于为短链纤维指定的聚合度，如10或更高、13或更高或20或更 尚。
[0095] 发明人出乎意料地发现与〇-3-PUFA(EPA/DHA)和嘧啶衍生物(尿苷来源)组合的 纤维的特定基团的存在对便秘具有积极效果。通过实施例示出，关于结肠长度和肠传输，用 包含产生丁酸酯的纤维的饮食治疗的小鼠比用不含这种纤维的饮食治疗的小鼠表现得更 好。从实施例，发明人意识到尤其是帕金森患者可以受益于与尿苷来源、《3-PUFA和可选地 一种或多种其他组分如维生素 D组合的产生丁酸酯的纤维。
[0096] 产生丁酸酯的纤维是难消化的碳水化合物，当被结肠菌群发酵时具有分解产物丁 酸酯。本文使用的术语'产生丁酸酯的纤维'具体是指体内发酵24小时后能够产生至少 0.5mmol或更多，优选地至少0.75mmol或更多，更优选地至少I .Ommol或更多丁酸酯/克纤维 的纤维。实际上，在这些条件下，体外发酵24小时后，可产生的丁酸酯的最大量通常是5mmol 或更少，具体是3.5mmol或更少，更具体是2.5mmol或更少的丁酸酯/克纤维。
[0097] 使用半动态结肠模型（例如，使用??Μ人造消化道系统）可确定可产生的丁酸酯的 量。在可替代的模型中，收集健康成人(没有胃肠道问题;在取样之前最近2周没有使用抗生 素)的新鲜大便样品。将大便样品分为更小的份并在厌氧柜中将其与丙三醇（10%)混合，并 存储在-80 °C下。在每个实验中，以相同的浓度集中来自所有供体的大便样品并将其一起混 合在厌氧柜中，以尽可能多地避免成人微生物群中依赖受试者的变化。在发酵条件下用纤 维接种样品，且允许发酵发生。24h后使用GC确定丁酸酯的产生。具体地，
[0098]-该模型利用来自19-35岁的四个健康成人(例如三个男性供体和一个女性供体） 的样品；
[00"]-将纤维接种在200mg/6m 1大便悬浮液含量的大便悬浮液中 [0100]-通过1:5v/v混合奠便与发酵介质制备大便悬浮液；
[0101]-发酵介质:缓冲蛋白胨水3.0g/l，酵母提取物2.5g/l，胰化蛋白胨3.0g/l，L-半胱 氨酸-HCl 0.4g/l，胆汁盐0.05g/l，K2HP04.3H202.6g/l，NaHC03 0.2g/l，NaCl 4.5g/l， MgS04.7H20 0.5g/l，CaC12.2H20 0.3g/l，FeS04.7H20 0.005g/l。可以将组分逐一添加到 800ml水中，用K2HP04或NaHC03调节pH至6.3±0.1并将体积填充到1升。在121°C下消毒介质 15分钟
[0102] -发酵温度是37 °C
[0103] 根据本发明产生丁酸酯的纤维的总剂量优选地是1至15g/剂量，更优选地2至IOg/ 剂量，具体地3-8g/剂量。基于根据本发明使用的组合物中总的纤维含量，产生丁酸酯的纤 维的总含量高达IOOwt%，具体地99wt. %或更低，更具体地95wt. %或更低。基于总的纤维 含量，产生丁酸酯的纤维的总含量优选地是至少50wt. %，优选地至少70wt. %，更优选地至 少80wt. %，具体地90wt. %或更高。
[0104] 优选地，在使用上述的半动态结肠模型的情况下，根据本发明使用的组合或营养 组合物包含足以产生0.3-5mmol，更优选地0.5-3.5，具体地0.7-3，更具体地1.0-2.5mmol 丁 酸酯/克纤维的量的纤维。
[0105] 优选的可溶的产生丁酸酯的纤维包括低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、麸皮和 糊精(例如Nutriose:?)。这些是易溶的，并且当发酵时是结肠菌群产生丁酸酯的合适底物。 优选的麸皮是燕麦麸皮、米糠和麦麸。在一个特别优选的实施方式中，使用了几种产生丁酸 酯的纤维，如FOS和糊精加可选的麸皮和/或GOS;或FOS和麸皮加可选的糊精和/或GOS。通过 短链FOS、长链FOS、燕麦麸皮、GOS和糊精的组合实现了良好的结果。在其他优选的实施方式 中，组合物是包含一种或多种产生丁酸酯的纤维但基本不含GOS的营养组合物的一部分。这 种组合物优选地是不含乳制品的组合物。
[0106] 优选的不溶的产生丁酸酯的纤维包括抗性淀粉，如高直链淀粉或回生淀粉或RS3 淀粉。抗性淀粉适合提供每g抗性淀粉特别多的丁酸酯产物。
[0107] 在Englystetal Am J Clin Nutr 1999,69,448-454的系统中，将抗性淀粉定义为 消化之后在2小时内保持完整的那些淀粉。商业可获得的抗性淀粉是Acti star和Nove lose 330〇
[0108] 优选的抗性淀粉是来自水稻或玉米的抗性淀粉。
[0109] 在一个具体的实施方式中，抗性淀粉包含大于50wt%的al，4葡聚糖的直链聚合 物，其具有10和35之间的聚合度。这种抗性淀粉的合适来源是豆子、豌豆、热处理的马铃薯 和热处理的谷类。与木聚糖组合的抗性淀粉和β葡聚糖同时存在于结肠中将支持正确类型 的生成丁酸酯的细菌种类的生长。
[0110] 在一个具体的实施方式中，营养组合物包含一种或多种游离氨基酸或它们的盐。
[0111] 在一个具体的实施方式中，营养组合物包含一种或多种微量元素。
[0112] 在一个具体的实施方式中，营养组合物包含一种或多种维生素。
[0113] 在一个具体的实施方式中，组合物包含胆碱。优选地，本营养组合物包含胆碱和/ 或卵磷脂。优选地，给予营养组合物(或以一定的形式）以提供大于50mg胆碱/天，优选地80-2000mg胆碱/天，更优选地120-1 OOOmg胆碱/天，最优选地150_600mg胆碱/天。
[0114] 优选地，本营养组合物包含50mg至3克胆碱/100mL液体制剂，优选地200mg-1000mg 胆喊/I OOml。
[0115] 本营养组合物可以有利地包含磷脂，优选地以卵磷脂的形式提供磷脂。本营养组 合物优选地是液体组合物，其中，以0.01和1克卵磷脂/100mL，更优选地0.05和0.5克卵磷 月旨/100mL的量提供卵磷脂。
[0116] 本营养组合物可以有利地包含维生素，优选地包含维生素 C、维生素 E、和维生素 B， 更优选地包含维生素 C、维生素 E、维生素 B6、维生素 B12和叶酸。
[0117] 有利地，包含维生素 B12和叶酸。
[0118] 本营养组合物优选地包含每100mL液体产物50至1000 yg叶酸，更优选地150至750μ g，最优选地200至500yg叶酸。
[0119] 本方法优选地包括给予50-1000yg叶酸/天，更优选地150-750yg，最优选地200-500yg叶酸/天。
[0120] 本营养组合物优选地包含每100mL液体产物0.5至15yg维生素 B12,更优选地1至10 1^，最优选地1.5至5以〖维生素1312。
[0121] 本方法优选地包括给予0.5-15yg维生素 B12/天，更优选地l-10yg，最优选地1.5-5 yg维生素 B12/天。
[0122] 有利地，根据本发明的本营养组合物包含每100mL液体产物0.5至3mg，优选地0.5-2mg维生素 B6。
[0123] 优选地，包含维生素 B6、维生素 B12和叶酸。
[0124] 进一步地，发明人发现了维生素 D在本发明的组合中的积极效果。维生素 D特别适 合包含在用于老人、帕金森患者或痴呆患者，例如阿尔茨海默患者的本发明的组合中。
[0125] 通过包含维生素 D3(胆钙化固醇、骨化二醇、骨化三醇）的组合物已经得到了良好 的结果。
[0126] 如果存在，那么根据本发明使用的营养组合物中的维生素 D的浓度，优选地维生素 D3的浓度通常在5-110yg/100的范围内，具体在6-85yg/100g的范围内，优选地在10-50yg/ 100g的范围内，更优选地是15-45yg/100g。
[0127] 根据本发明使用的组合通常向治疗的哺乳动物(特别是人）提供每天高达约50yg 剂量的维生素 D。如果存在，那么日剂量优选地是至少5yg，更优选地是25-40yg。对于液体产 物，维生素 D3含量优选地是5-85yg/单位剂量。液体产物的单位剂量优选地具有50-250ml， 具体100-150ml的体积。
[0128] 营养组合物可以是可饮用的流体组合物、可g的组合物或固体组合物。优选地，营 养组合物是液体组合物，优选易于饮用的液体组合物。
[0129] 优选地通过口服将根据本发明的组合或营养组合物给予需要其的受试者。在可替 代的实施方式中，使用了管饲(tube feeding)。
[0130] 在又一个实施方式中，直肠给予组合。
[0131]根据本发明使用的组合，或本发明的营养组合物，包括本文所描述的任何实施方 式，优选地用于预防或治疗患有神经系统紊乱或有患神经系统紊乱的风险的受试者的便 秘，具体地慢传输型便秘(也称为变慢的传输型便秘）。如在本文中使用的，'有风险'具体是 指明显在平均值以上的风险。
[0132] 承认便秘是急性中风患者中频繁出现的普遍经历。一个可能的原因可能是肠蠕动 波的协作削弱以及盆底和外括约肌的松弛。
[0133] 胃肠功能失调是频繁的且有时是帕金森病(PD)的主要征兆，其中，便秘可由降低 的排便频率引发。已经报告了大于50%的PD患者患有中度至严重的便秘。这些ro患者中的 一些具有病理学延长的结肠传输时间，换句话说患有慢传输型便秘。结肠中α-突触核蛋白 聚集体的减少可能有利于自主神经系统(ANS)和/或肠神经系统(ENS)更好地作用，因此允 许胃肠道蠕动的更好作用，以及更通常是消化过程(指的是包括摄取、消化、营养物的吸收 和通便)的更好作用。
[0134] 此外，已经示出抗胆碱药和左旋二羟苯丙氨酸(1-二羟苯丙氨酸)通过使大肠运动 减速，增强便秘问题。
[0135] 已经示出慢传输和胃瘫导致1-二羟苯丙氨酸在肠道中降解为多巴胺。多巴胺反过 来抑制胆碱能纤维并甚至进一步分别加剧慢传输和胃排空延迟的问题。
[0136] 研究已经示出1-二羟苯丙氨酸在同时解决便秘问题时更有效。
[0137] 因此，可以将根据本发明使用的组合或本发明的营养组合物与用于治疗PD的抗胆 碱药如苯海索、奥芬、苯托品、波那普林、贝纳利秦、或mithixine平行使用，或与1-二羟苯丙 氨酸平行使用（即，同时、或之前、或之后给予）。
[0138] 根据本发明使用的组合或本发明的营养组合物可以用于治疗突触核蛋白病相关 的/有关的便秘，包括(除ro之外)路易体痴呆和多系统萎缩症。
[0139] 肠道功能障碍常见于多发性硬化患者。可能通过慢性(低级）炎症减弱，通过下调 TLR4可能得到的减弱，预期根据本发明使用的组合或本发明的营养组合物改善便秘问题， 尤其是慢传输型便秘。
[0140] 具有脊髓损伤的患者患有结肠传输时间延长，导致慢传输型便秘得到良好证明。 可能通过自主神经系统(ANS)和/或肠神经系统(ENS)更好地作用，预期根据本发明使用的 组合或本发明的营养组合物改善便秘问题，尤其是慢传输型便秘。
[0141] 存在影响周围神经系统和/或运动神经元的其他疾病，便秘与其有关。这种疾病的 实例是糖尿病性神经病、单纯性自主神经衰竭(PAF)。
[0142] 可能通过自主神经系统(ANS)和/或肠神经系统(ENS)更好地作用，预期根据本发 明使用的组合或本发明的营养组合物改善便秘问题，尤其是慢传输型便秘。（参见Winge et al.,2003,J Neurol Neurosurg Psychiatry；74；13-19)
[0143] 在患有GI-失调如肠梗阻、结肠炎、炎症性肠病(更具体地克罗恩病或溃疡性结肠 炎）、和消化性溃疡的患者中，可能通过慢性(低级）炎症减弱，通过下调TLR4可能得到的减 弱，预期根据本发明使用的组合或本发明的营养组合物改善便秘问题，尤其是慢传输型便 秘。
[0144] 触发胃肠道粘膜的慢性炎症的GI-失调增强粘膜完整性的破坏，这激活TLR4。
[0145] 在患有PDD(广泛性发展障碍），具体地ASD(自闭症）的患者中，可能通过慢性(低 级)炎症减弱，通过下调TLR4可能得到的减弱，预期根据本发明使用的组合或本发明的营养 组合物改善便秘问题，尤其是慢传输型便秘。
[0146] 现在将通过下列实施例说明本发明。
[0147] 实施例1
[0148] 通过大脑的立体定位手术纹状体内注射2.7yg鱼藤酮在小鼠中诱发便秘，其帕金 森病(PD)最重要的和衰弱非运动症状。流行病学研究之前已经示出暴露于这种杀虫剂诱发 帕金森病(PD)。除了观察到的便秘，纹状体内注射鱼藤酮还导致众所周知的ro运动症状，由 小鼠保持移动转棒的能力消弱示出（参见图1)。转棒踏旋器由底座(行走板)上具有非滑表 面的塑料棒组成。将小鼠放置在加速棒上，速度从2rpm开始逐渐升高到20rpm。记录的啮齿 动物保持在旋转棒上的能力(第一次倒下的时间）最大是5分钟。基准线之前，用转棒装置训 练小鼠以排除贯穿实验的学习效应。
[0149] 在该动物模型中，示出用UMP+鱼油的饮食干涉将肠传输时间标准化至控制级并治 疗便秘。
[0150] 使用四个各有10只小鼠的实验组，根据表1其被注射了鱼藤酮或载体且其接受了 对照或活性饮食（阳性饮食，active diet) ( =UMP+鱼油）。表2呈现了对照和活性饮食的具 体组成。手术之前一周开始饮食干涉并持续六周。
[0151] 表1实验组
[0155] (*)参见Reeves 1993-J Nutr;Nov; 123(11); 1939-51 · 1 UMP+鱼油显著增加胃内施加的伊文思蓝通过注射鱼藤酮的小鼠的小肠的传输速 度(参见图2)。出于该目的，在小鼠死亡之前1小时，手术之后六周通过不锈钢插管胃内给予 1.5 %甲基纤维素溶液(O，3ml/动物）中的2.5 %伊文思蓝染料。将蓝色肠管的长度(cm)作为 肠传输时间的量度(图2中示出）。
[0157] 手术后六周测量的关于UMP+鱼油饮食的注射鱼藤酮小鼠的结肠的长度也几乎恢 复到正常(参见图3)。
[0158] 此外，给定UMP+鱼油的注射鱼藤酮的小鼠的GI管道具有显著少于对照饮食的注射 鱼藤酮小鼠的特征突触核蛋白聚集体(参见图4和图5)。可以将帕金森患者的乙状结肠 (sigmoid colon)中α-突触核蛋白的存在用作疾病的替代标志。
[0159] 实施例2:
[0160] 准备使用液体产物，提供每IOOmL:
[0161] 能量：50-120kcal
[0162] 蛋白质：0_10g
[0163] 脂质：l-5g
[0164] 难消化的碳水化合物:4_30g
[0165] 且其包含：
[0166] DHA+EPA+DPA= 1000-2000mg
[0167] 单磷酸尿苷(二钠盐)0.5g
[0168] 实施例3
[0169] 根据本发明的优选的营养组合物每日剂量或每100mL组合物包含：
[0170] 100-500mg，优选地200-400mg EPA，
[0171] 900-1500mg，优选地950-1300mg DHA
[0172] 50-600mg，优选地60-200mg 磷脂，
[0173] 200-600mg，优选地300-500mg 胆碱，
[0174] 400-800mg，优选地500-700mg UMP，
[0175] 20_60mg，优选地30_50mg维生素 Ε(α-ΤΕ)，
[0176] 6〇- IOOmg，优选地 60_90mg 维生素 C，
[0177] 40_80yg，优选地 45_65yg 砸，
[0178] 1-5以8，优选地2-4以8维生素趴2，
[0179] 0 · 5-3mg，优选地 0 · 5-2mg 维生素 B6，和
[0180] 200-600yg，优选地300-500yg 叶酸。
[0181] 实施例4
[0182] 如实施例2或3准备将液体产物用于患有神经病的糖尿病患者，其中碳水化合物部 分由以下各项组成(每IOOmL):
[0183] 1.5g 半乳糖
[0184] 3g异蔗糖
[0185] Ig缓慢消化的淀粉
[0186] 0.2g 果糖
[0187] 3g麦芽糖糊精
[0188] 2g葡萄糖
[0189] 1.05g异麦芽低聚糖
[0190] 实施例5
[0191] 研究了疗法设定中包含嘧啶衍生物(UMP)和PUFA来源(DHA)的饮食的影响，其中， 用根据本发明的饮食治疗开始于注射5.4yg鱼藤酮或载体4周后并持续七周。使用了六个雄 性C57B1/6J小鼠实验组，如下表指出，其被载体(Sham)或鱼藤酮处理并接受了对照饮食或 根据本发明的饮食(饮食1或饮食2):
[0192] 表3:实验组
[0194] 下表呈现了对照和活性饮食的组成。
[0195] 表4:饮食的组成
[0197] 1产生丁酸酯的纤维(5克/100g饮食）：
[0198] 1.50g GOS
[0199] 〇.17g 长链 FOS
[0200] 1.67g 短链 FOS
[0201] 1.67g nutriose
[0202] 和进一步的0.5g乳糖以及0.5g碳水化合物以及水分7.27g
[0203] 2其他维生素(每100g饮食） 抗坏血酸（100%纯） 0.16 g 维生素 E (乙酸生育酚，50%) 0.465 g 维生素 D (胆钙化固醇，：500.000 TU/g) 5 6
[0204] 维生素 Β6 (吡哆醇盐酸盐，82 %) 0.00407 g 叶酸（100%) 0.00060 g 维生素 B12 (氰钴胺素0,1%) 0.0:575 g: 亚硒酸钠* 5 H20 0.00034 g
[0205]饮食1由对照饮食加其他的UMP和DHA(鱼油)组成。
[0206]饮食2如饮食1，没有纤维素，但是取而代之的是低聚半乳糖和低聚果糖(长链和短 链低聚果糖两者的混合物并代替UMP尿苷。
[0207]纹状体内注射鱼藤酮或sham(载体）1周后开始转棒测试，进行10周。如图6所示，鱼 藤酮诱发运动问题，但是用饮食1或饮食2开始治疗后，示出了运动功能的改善(与'鱼藤酮+ 对照食物'组相比，棒上增加的平均时间）。其他存在的饮食纤维对运动功能具有积极影响。
[0208]图7和8示出了饮食1和2对肠传输和结肠长度的影响。
【主权项】
1. 一种嘧啶衍生物和具有18-24个碳原子的多不饱和脂肪酸的组合，用于预防或治疗 便秘。2. 根据权利要求1所述的用于应用的组合，其中，所述便秘是慢传输型便秘。3. 根据权利要求1或2所述的用于应用的组合，其中，所述便秘与胃肠失调有关。4. 根据权利要求3所述的用于应用的组合，其中，所述胃肠失调是胃肠道粘膜的慢性炎 症，优选地选自由肠梗阻、结肠炎、炎症性肠病、以及消化性溃疡组成的组。5. 根据权利要求1或2所述的用于应用的组合，其中，所述便秘与神经系统紊乱或精神 障碍有关。6. 根据权利要求5所述的用于应用的组合，其中，所述神经系统紊乱是周围神经病、自 主神经病、或肠神经系统神经病，优选地是自主神经病、或肠神经系统神经病。7. 根据权利要求5或6所述的用于应用的组合，其中，所述神经系统紊乱选自由以下组 成的组:突触核蛋白病、糖尿病性神经病、杜兴肌营养不良、脑血管疾病、多发性硬化、单纯 性自主神经衰竭、以及脊髓损伤，优选地选自由脑血管疾病、多发性硬化、单纯性自主神经 衰竭、脊髓损伤、以及帕金森病组成的组。8. 根据权利要求5至7中任一项所述的用于应用的组合，其中，所述神经系统紊乱是脊 髓损伤。9. 根据权利要求5所述的用于应用的组合，其中，所述神经系统紊乱是帕金森病。10. 根据权利要求5至7中任一项所述的用于应用的组合，其中，所述神经系统紊乱是中 风。11. 根据权利要求6所述的用于应用的组合，其中，所述神经系统紊乱是大脑性麻痹。12. 根据权利要求5至7中任一项所述的用于应用的组合，其中，所述精神障碍是广泛性 发育障碍，优选地是自闭症，或所述精神障碍是抑郁症，尤其是抑郁情绪障碍。13. 根据权利要求1至12中任一项所述的用于应用的组合，其中，所述多不饱和脂肪酸 选自ω-3多不饱和脂肪酸的组，优选地选自由二十二碳六烯酸（DHA)、二十二碳五烯酸 (DPA)、以及二十碳五烯酸(ΕΡΑ)组成的组。14. 根据权利要求13所述的用于应用的组合，其中，通过所述组合给予的DHA加 ΕΡΑ的日 剂量在400mg至5000mg的范围内，优选地在500mg至3000mg的范围内，尤其是在lOOOmg至 3000mg的范围内。15. 根据前述权利要求中任一项所述的用于应用的组合，其中，所述组合包含提供具有 18-24个碳原子的多不饱和脂肪酸的鱼油。16. 根据前述权利要求中任一项所述的用于应用的组合，其中，所述嘧啶衍生物是碱 基、核苷或核苷酸。17. 根据前述权利要求中任一项所述的用于应用的组合，其中，所述嘧啶衍生物选自以 下的组:尿苷、脱氧尿苷、衍生的尿苷、衍生的脱氧尿苷、胞苷、脱氧胞苷、衍生的胞苷以及衍 生的脱氧胞昔。18. 根据前述权利要求中任一项所述的用于应用的组合，其中，所述嘧啶衍生物是核苷 酸，所述核苷酸的一个或多个官能团可以衍生。19. 根据权利要求18所述的用于应用的组合，其中，所述核苷酸选自UMP、UDP、UTP、CMP、 CDP、CTP dUMP、dUDP、dUTP、dCMP、dCDP以及dCTP的组，其中，可选地将所述核苷酸的（脱氧） 核糖的一个或多个羟基部分酰化。20. 根据权利要求19所述的用于应用的组合，其中，所述核苷酸是UMP或酰化UMP。21. 根据权利要求17-20中任一项所述的用于应用的组合，其中，所述组合包含尿苷或 酰化尿苷。22. 根据前述权利要求中任一项所述的用于应用的组合，其中，将所述组合给予至少18 岁的人。23. 根据前述权利要求中任一项所述的用于应用的组合，其中，作为营养组合物的一部 分给予所述组合。24. 根据权利要求23所述的用于应用的营养组合物，包含胆碱。25. 根据权利要求23或24所述的营养组合物，进一步包含磷脂、维生素 E、维生素 C、硒、 维生素 B12、维生素 B6以及叶酸中的至少一种。26. -种用于监测便秘、优选慢传输型便秘的治疗的方法，所述方法包括给予根据权利 要求1至23中任一项所述的用于应用的组合或根据权利要求24或25所述的营养组合物，以 及测量结肠中的α-突触核蛋白聚集体的水平。27. -种用于监测突触核蛋白病，优选PD、路易体痴呆、或多系统萎缩症，更优选PD的治 疗的方法，所述方法包括给予根据权利要求1至23中任一项所述的用于应用的组合或根据 权利要求24或25所述的营养组合物，以及测量结肠中的α-突触核蛋白聚集体的水平。28. 根据权利要求1至23任一项中描述的组合用于制备用于预防或治疗便秘、优选慢传 输型便秘的药物或制剂的用途。29. 根据权利要求28所述的用途，其中，分别预防或治疗患有根据权利要求4或6-12中 描述的胃肠失调、神经系统紊乱或精神障碍的受试者的便秘、优选慢传输型便秘。
【文档编号】A61K31/519GK105979939SQ201480075054
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2014年9月30日
【发明人】达 席尔瓦 索菲娅·洛佩斯
【申请人】N.V.努特里西阿公司