3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物及其制备方法和用图

3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物及其制备方法和用图
【专利摘要】本发明属于化学医药领域，具体涉及3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物及其制备方法和用途。本发明提供了一种3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物，其结构如式Ⅰ所示。本发明还提供了3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物的制备方法和用途，包含该衍生物的药物组合物，以及该化合物和药物组合物用于治疗和预防肿瘤的用途。
【专利说明】
3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物及其制备方法和用途
技术领域
[0001] 本发明属于化学医药领域，具体涉及3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物及其制备方法 和用途。
【背景技术】
[0002] 蛋白激酶是一类重要的磷酸转移酶，其功能是催化腺苷三磷酸（ATP)末端的 Y -磷酸基团转移到特定底物蛋白质的氨基酸残基上，使蛋白质磷酸化，从而发挥其生理生 化功能。蛋白激酶是细胞信号转导通路的关键组件。蛋白激酶参与调控多个细胞过程，包 括细胞的生长、能量代谢、细胞周期、转录、凋亡以及分化等。此外，蛋白激酶在维持细胞间 联系、体内平衡、免疫系统功能等方面也起到至关重要的作用。蛋白激酶的异常调节与多种 疾病特别是肿瘤的发生发展相关。蛋白激酶已成为重要的疾病治疗靶标，引起了广泛的关 注。
[0003] 至2001年首个酪氨酸蛋白激酶药物伊马替尼（Imatinib)上市以来，蛋白激酶 药物已成为全球药物市场增长最快的单元，截止2014年已有20多个蛋白激酶药物在全 球范围批准上市，其中包括十余种肿瘤治疗药物，例如伊马替尼（Imatinib)，吉非替尼 (Gefitinib)，厄洛替尼（Erlotinib)，索拉非尼（Sorafenib)，舒尼替尼（Sunitinib)，达沙 替尼（Dasatinib)，尼洛替尼（Nilotinib)，拉帕替尼（Laptinib)，帕唑帕尼（Pazopanib)和 瑞格非尼（Regorafenib)等。蛋白激酶类药物的高研发成功率，特别是多种蛋白激酶靶向 抗肿瘤药物的研发成功，促使其成为科学及制药工业界的热点研究方向。
[0004] 当前蛋白激酶药物的研发虽然取得了巨大的成功，但仍然存在很大的发展空间和 潜力。特别是研发新型的蛋白激酶抑制剂用于难治性肿瘤、耐药性肿瘤、高转移性肿瘤的治 疗，例如三阴性乳腺癌、耐药性肺癌、肝癌、胰腺癌、黑色素瘤、多种白血病等，仍然是当前的 研究热点。

【发明内容】

[0005] 本发明提供了一种3-乙协某吡啤并嘧啶衍牛物，其结构如式I所示：
[0006]
[0007] 其中，&为C4烷基、
[0008] 仏为_H、C广C 8烷基、R8取代的C 3~C 8环烷基、^~^环氧 烷基、
· .、 '--' -V 1 · % w Λ ' ·Ρ^ ν--，. I
[0009] R3~1?7独立地为_H、C广Cs烷基、-〇H、C广Cs烷氧基、卤素
Η Η A-nyn'r14： Ο ;
[0010] Rs~R n独立地为-η、C广C s烷基、卤素、-OH、
[0012] R15~R19独立地为-H、（：广Cs烷基、-OH、（：广C s烷氧基、卤素、-CF3、-0CF3、
[0013] R2。~R 3S独立地为-Η、卤素、C广C s烷基、C广C 8环烷基、-0CF 3或-CF 3;
[0014] R39~R 42独立地为C C s烷基、C 3~C s环烷基或C C s羟基烷基；
[0015] η = 0 ~6。
[0016] 作为本发明优选的技术方案，&为-Η或 R2为-H、C广 C4烷基、R8取代的C 3~C 8环烷基、友C3~C 8环氧烷基、
Η R3~R 7独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基、卤素、&NYR12 〇 、
Rs~R η独立地为-H、C广C 4烷基、卤素、-OH、 R12~R 14独立地为 i·
R15~R 19独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-0CF3、
~R 3S独立地为-H、卤素、 (；~C 4烷基、C C 4环烷基、-OCF 3或-CF 3;R 39~R 42独立地为C C 4烷基、C 3~C s环烷 基或(；~C 4羟基烷基；n = 0~4。 〇
[0017] 优选的，1^为-H 或 ，?. 1?2为_!1、（：1~（：4烷基、 Rs取代的c 3~c s环烷基、c3~c s环氧烷基、 R3~R 7独立地 卜 -、 ' 1 、 ^ ^
s ^ 、' 1 '*-^ 为-Η、(；~C4烷基、-OHJf C4烷氧基、卤素、
L~Rn独立 υ w ΒΧ υ. > 地为-H、Ci~C4烷基、-0Η.
R12~R 14独立地为

^ R 19独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基、卤 素、-CF3、-0CF3
R2。~R38 独立地 为-H、卤素 、(；~C 4烷基、C C 4环烷基、-0CF 3或-CF 3;R 39~R 42独立地为C C 4烷基、 C3~C s环烷基或C丨~C 4羟基烷基；n = 0~4。
[0018] 进一步优选的，心为-H或 ：?^.化为-Η、C广C 4烷基、 ?。/仏取代的c 3~C 8环烷基、X~^ C3~C 8环氧烷基、 R3~R 7独 立地为-Η、（；~C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基、卤素
Rs~R n独立地为-Η、C广C 4烷基、-OH、
R12~R 14 独立地为
-K A R15~R 19独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-0CF3、 ^ ?^38' I
I。~R ；?独立地为-Η、卤素、 Ci~C 4烷基、C C 4环烷基、-0CF 3或-CF 3;R 39~R 42独立地为C C 4烷基、C 3~C s环烷 基或(；~C 4羟基烷基；η = 0~4。 _9] 更进一步优选的，&为-Η或 R2为-Η、C广C 4烷基、 '， Rs取代的C 3~C 8环烷基、分、.·^ C3~C 8环氧烷基、
~R 7独 立地为-H、（：广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基、卤素、
Rs~R n独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、
（12~R 14
独立地> 或
~R 19独立地为-H、C C 4烷基、-OH、C C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-0CF3、 ^ ?38 ：；
R38独立地为-H、卤素、（^~C 4烷基、（^~（：4环烷基、-0CF3 或-CF3;n = 0 ~2。
[0020]最优的，Rj -H 或1?2为_11、（：1~（：4烷基、 ( R8取代的C 3~C 8环烷基、 C3~C 8环氧烷基、
R3~R 7独立 地为-H、Ci~C 4烷基、-0H、C i~C 4烷氧基、-F、-C1.
3~ Rn独立地为-H、C C 4烷基、-OH、
> R12~R 14独立地为 *i a -V|iJ 、 、迎*以 ' '^0 、 " '?
^ Wk 'ao R19独立地为-Η、(^~C4烷基、-(^、(^~C4烷氧基、_F、_
R2。~R 38独立地为-H、C广C 4烷基或-CF 3;n = 0或1。
[0021] 上述3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物，当&为^Ιγβ?2:时，其结构如式II所示： 〇
[0022]
0
[0023]其 中，RiS-H 或 \儿、R2 为 _^1、（：1~（：4烷基、 Rs取代的c 3~c 8环烷基、七^。，c3~c 8环氧烷基、
η = 0 ~4 ;R3~R 5、 尺7独立地为-H、（^~C4烷基、-OH、（^~C4烷氧基或卤素；R 8~Rn独立地为-H、（^~ C4烷基、-OH、
' R15~R 19独立地为-H、C C 4烷
B . 基、-0H、Ci~C 4烷氧基、卤素 、_CF 3、-〇CF3、
《2。~R 38独立地为-H、 (；~C4烷基或-cf3。
[0024] 优选的，R j - H 或 1?2为_11、（：1~（：4烷基、 Rs取代的C 3~C 8环烷基、C3~C 8环氧烷基、
ι = 0 ~4 ;R3~R 5、 馬独立地为-H、（^~C4烷基、-OH、（^~C4烷氧基或卤素；RS~R n独立地为-H、（^~ C4烷基、_〇Η、

~R 19独立地为-Η、C C 4烧
基、-OH、(：广C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-〇CF: w~R 38独立地为-Η、C!~ C4烷基或-cf3。
[0025] 优选的，&为-Η或私为C广C 4烷基、R s取代的C 3~C 8环烷基、V、。/' C3~C 8环氧烷基、
- '-- 、' - 、 - ， η = 0~4 ;R8~R η独立地为-Η、C C 4烷基、-OH、
R3~R 5、仏独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基或卤素 ；R 12为 Rl5 ~R 19 R1S R1S 、
日30、~4 K33、K36 頭 Κ38 ; 独立地为-Η、（^~C 4烷基、-〇H、C C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-〇C R20~R 38独立地为-H、C广C 4烷基或-CF 3。
[0026] 进一步优选的，&为-Η或；私为C广C 4烷基、R s取代的C 3~ t 、 V 〇8环烷基、
=0~4 ;RS~R η独立地为-H、C C 4烷基、-OH、
R3~R 5、馬独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基或卤素 ；R 12为
Ris~ R19独立地为-H、c广C 4烷基、-〇H、C广C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-0CF
R2〇~R 38独立地为-Η、C广C 4烷基或-CF 3。
[0027] 再进一步优选的，札为-Η或：^，馬为C广C 4烷基、R s取代的C 3~ C 8环烷基、
=0~2 ;RS~R η独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OH
R3~R 5、&独立地为-Η、C广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基或卤素 ；R 12为
Rl5~R 19 独立地为-H、（^~C 4烷基、-OH、C C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-〇CF3、
R20~R 3S独立地为-Η、C广C 4烷基或-CF 3。
[0028] 更进一步优选的，札为-Η或：^.馬为C C 4烷基、R s取代的C 3~C 8环烷基、
=0或1 ;R8~Rn独立 〇 〇 地为-Η、(^~(：4烷基、-OH、厂|-§一 R3~1?5為独立地为烷基、-OHXfC^ OH 或 〇 - 烷氧基或卤素 ；RiJ

，R 19独立地为-Η、C C 4烷基、-OH、C C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-0CF3、
2。~R 3S独立地为-Η、C广C 4烷基或-CF 3〇 〇
[0029] 优选的，R3~R5、馬独立地为-Η、（：广C4烷基或卤素 ；RA -Η或R2为-Η、（；~C 4烷基、\1。七Rs取代的C 3~C 8环烷基、v、。，C3~C s环氧烷
基、 η = 0 ~4 ; '~~ Λ ' ' - ?
R8~R η独立地为-Η、C广C 4烷基、-OH、 R12为
： R19独立地为-H、c广C 4烷基、-〇H、C广C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-0CF3- R2〇~R 38独立地为-Η、C广C 4烷基或-CF 3。
[0030] 进一步优选的，R3~R 5、馬独立地为-Η、C广C 4烷基、-F或-Cl ;R A -Η或R2为I C 1~C 4烷基、\1。上、R8取代的C 3~C8环烷基、：^。' C3~C8环
11 氧烷基. n = 0~4; --- -v - 、 ? 9 Rs~R n独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、
R12为

R19独立地为-H、c广C 4烷基、-〇H、C广C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-0CF3、 R2〇~R 38独立地为-Η、C广C 4烷基或-CF 3。
[0031] 更进一步优选的，R3~R 5、馬独立地为-η、甲基或-Cl ;R A -Η或 R2为-H、C广C 4烷基、、Rs取代的C 3~C 8环烷基、.Vvf C3~C s环氧烷 基、
η = 0 ~4 ; Πrv A Rs~R n独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、
R12为
L5~ R19独立地为_H、C广C 4烷基、-〇H、C广C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-0CF3
R2〇~R 38独立地为-Η、C广C 4烷基或-CF 3。
[0032] 优选的，R15~R 19独立地为-H、C广C 4烷基、C广C 4烷氧基、 卤素、_CF3、-0CF3或 、Rl为-η 或 尺2为-η、C 1~C 4烧 基、馬取代的C 3~C 8环烷基、w、， C3~C 8环氧烷基、
η = 0 ~4 ;R3~R 5、 馬独立地为-H、（^~C4烷基、-OH、（^~C4烷氧基或卤素；RS~R n独立地为-H、（^~ C4烷基、_〇H、

R2。~R 38独立地为-Η、c c 4烧 基或-CF3。
[0033] 进一步优选的，R15~R 19独立地为-Η、C广C 4烷基、甲氧 /\ 〇 基、-F、-Cl、-CF3、-0CF3或〉《―心为-Η 或 ，? 尺2为-Η、c 1~ C4烷基、R8取代的C 3~C 8环烷基、C3~C 8环氧烷基、 ?11
η = 0 ~4 ;R3~R 5、 尺7独立地为-Η、（^~C4烷基、-OH、（^~C4烷氧基或卤素；R 8~Rn独立地为-Η、（^~ C4烷基、-0Η、

R2。~R 38独立地为-H、c c 4焼 基或-CF3。
[0034] 最优的，札为-Η或私为C广C 4烷基、R s取代的C 3~C 8环烷基、
η = 0 或 1 ;R3~R 5、R?
独立地为-H、甲基或-Cl ;RS~R n独立地为-H、C C 4烷基、-OH. R12为 5
15 ~R 19 独立地为-H、（：广C4烷基、甲氧基、-F、-Cl、-CF3、-0CF3或. R2。~R38独立地 1 ' * 为-^(^~(^烷基或乂？^ 〇
[0035] 上述3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物，当&为?时，其结构如式III所示： I η
[0036]
[0037] 其中，R 1为-Η或 尺2为-!1、（：1~（：4烷基、 *3iA〇J<\ Rs取代的c 3~c 8环烷基、c3~c 8环氧烷基、
η = 0 ~4 ; R3~R 5、馬独立地为-Η、C C 4烷基、-OH、C C 4烷氧基或卤素 ；R s~R η独立地为-Η、 C!~C 4烷基、-OH、 ~ ^ -Λ ~ ：?·
…iy ' *'l& .、. ' 广R 19独立地为-H、C广C 4烧 ?d ?υ 、 vm Λ. ~
00 Λ 一。 vu ; 基、-0!1、(：1~(：4烷氧基、卤素、-0卩3、-(^卩 3、
1 R2。~R3S独立地为-HXr c4烷基或-cf3。
[0038] 优选的，R2为C广C 4烷基、_ R8取代的C 3~C 8环烷基、友
C3~C s环氧烷基、 I. η = 0~4 ;RS、 > 馬独立地为-Η、C广C 4烷基、-0Η、夕&为-H或 、. ------
、 ?. R3~R 5、R?独立地为-H、c广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基或卤素 ；R 13为 1. ；>· U虫 i.o I。. 、 ^ ν ν
v __ v 9 立地为-Η、(；~C 4烷基、-〇H、C i~C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-0CF3
~ R38独立地为-H、C广C 4烷基或-CF 3。
[0039] 进一步优选的，R2为Ci~C4烷基、^ 1?8取代的C3~08环烷基、C3~ Cs环氧烷基、
Rs、馬独立地为-H、C C 4烧 基、-OH. :1为_H或R3~R5、R7独立地为_H、C丨~ C4烷基、烷氧基或卤素；R13为 R 19独立地为-H、C C 4烷基、-〇H、C C 4烷氧基、 '、：
9. 卤素、-CF3、-OCF:
~R 38独立地为-Η、C C 4烷基或-CF 3。
[0040] 再进一步优选的，1?2为C广C 4烷基、R 8取代的C 3~C 8环烷基、 X-〇/ c3~C s环氧烷基、. Rs、R9独立地为-H、 Ci~C 4烷基、-OH、
1为-H或 R3~R 5、仏独立地为-Η、C广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基或卤素 ；R 13为
~R 19 r
独立地为-Η、（^~C 4烷基、-OH、C C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-〇CF3 R2〇~R 38独立地为-Η、C广C 4烷基或-CF 3。
[0041] 更进一步优选的，私为c C 4烷基、R s取代的C 3~C 8环烷基、C3~C s 环氧烷基、
，R8、R9独立地为 -H、C C 4烷基、
心 为-H或）^. R3~R 5、馬独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基或卤素 ；R 13为 ?
R19独立地为_H、C广C 4烷基、-〇H、C广C 4烷氧基、卤素 、-CF 3、-0CF3、
R2〇~R 38独立地为-Η、C广C 4烷基或-CF 3。
[0042] 优选的，R3~1?5、1?7独立地为-Η、（^~（： 4烷基、-0Η或卤素 Α为-Η或；^. 私为-!1、（：1~（：4烷基、\1^1<馬取代的（：3~（： 8环烷基、：}^#(：3~（：8环氧烷基、 > >

，
*2 >： ? R15~R 19独立地为-H、C C 4烷基、-CF 3或. R2。~R 3S独立地为-H或C C 4烷 基。
[0050] 上述3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物，当&为
k时，其结构 如式IV所示：
[0051]
IV
[0052] 其中，R 1为-Η或 尺2为-!1、（：1~（：4烷基、 仏取代的c 3~c 8环烷基、C3~C 8环氧烷基、
8
ο
[0058] 进一步优选的，R3~1?5為独立地为烷基、-0Η或-Cl ;1为-!1或R2

￥
[0064]其中，R 1 为-Η 或 R2 为 _H、Ci~（：4烷基、
立地为-Η、(；~C4烷基、-OHXr C4烷氧基或卤素；RS~Rn独立地为-HXr C4烷基、-OH、


[0076] 最优的，&为-H ;R 2为C广C 4烷基或-丨<3-RS _ r3~r 5、馬独立地为-η、C广 c4烷基或-cl ;R 9为C C 4烷基；R 15~R 19独立地为-Η或-CF 3。
[0077] 上述3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物，其结构式为：
[0078]

r>c.
[0081] 本发明还提供了上述3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物的制备方法：
[0082] 当R6为5^丫~时，式II所示化合物的合成路线为： 「 〇 1 ：t2
[0084] 当Rj 时，式III所示化合物的合成路线为： 5 8 4 2
[0085]
[0086] 当R6;
七时，式IV所示化合物的合成路线为：
[0087]
?17 8
[0088] 当R6)
~时，式V所示化合物的合成路线为：
[0089] 5 6
3
[0090] 上述反应式中的反应条件为：
[0091] a、化合物1在通常的卤代试剂（如NIS (N-碘代丁二酰亚胺）、NBS (N-溴代丁二酰 亚胺）、Br2、12、IC1、IBr)进行卤代反应制备得到化合物2。
[0092] 13、私的卤代烷（溴带或者碘代）或相应的磺酸酯（甲磺酸酯、对甲苯磺酸酯、对硝 基苯磺酸酯等）在碱性条件下（如KOH、NaOH、K2C03、Na2C0 3, Cs2C03、NaH)与化合物2取代 制得化合物3。
[0093] c、相应的含羧基化合物在通常的缩合条件下（如缩合剂法、混合酸酐法、活化发 等）与相应的含氨基化合物缩合得到对应的以酰胺键连接的化合物7~10。
[0094] d、使相应的中间体在过渡金属催化下与一端带保护基团的炔试剂进行偶联反应 得到相应的中间体，然后再脱保护得到相应的含有炔基的化合物4、化合物6、化合物7、化 合物10及化合物13。
[0095] e、相应的含卤素的中间体与含炔基的中间体在过渡金属催化下进行偶联反应得 到通式II、111、IV、V所示化合物，偶联反应采用钯催化剂（如Pd4 (PPh3) 4、PdAc2、Pd2 (dba) 3、 ?(^?1!3(：12等）、铜盐（如氯化亚铜、溴化亚酮、碘化亚铜等），和适当的有机碱或者无机碱 (如三乙胺、DIPEA (二异丙基乙胺）、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠等）在适当溶剂（如THF (四 氢呋喃）、甲苯、DMF(N，N-二甲基甲酰胺）、1，4_二氧六环等）中于20~150°C反应得到。
[0096] f、化合物12在相应的醇溶液（如甲醇、乙醇等）、浓硫酸催化下得到相应的酯化中 间体。
[0097] g、化合物14在适当的碱（如三乙胺、DIPEA等）和溶剂（如EA (乙酸乙酯）、THF、 二氯甲烷等）及温度下（0-50度）与三光气反应得到化合物15。
[0098] h、化合物15与化合物6在适当的溶剂（如EA(乙酸乙酯）、THF、二氯甲烷、甲苯、 DMF等）中于20~120°C反应得到得到化合物16。
[0099] 其中，&为-H、C广C 4烷基、&或^艾R2为-H、C广C 8烧 基、R8取代的C 3~C 8环烷基、C3~C 8环氧烷基、 9
Η R3~R 7独立地为-Η、C广C s烷基、-OH、C广C s烷氧基、卤素、\NYR12 ο 、
Rs~R n独立地为-H、C广C 8烷基、卤素、-OH、
分R12~R 14独立地为
R15~R 19独立地为-H、C广C s烷基、-OH、C广C s烷氧基、卤素 、-CF 3、-0CF3、
R 3S独立地为-Η、卤素、 C s烷基、C C 8环烷基、-0CF 3或-CF 3;R 39~R 42独立地为C C s烷基、C 3~C s环烷 基或(；~C s羟基烷基；η = 0~6。
[0100] 本发明上述的3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物，包括了它们的同位素化合物、外消旋 体、旋光活性异构体、多晶型形式或其混合物。
[0101] 本发明还提供了上述3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物药学上可接受的盐。
[0102] 本发明还提供了本发明化合物的前药，依据本发明，前药是上述化合物的衍生物， 它们自身可能具有较弱的活性或甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下（例如通过 代谢、溶剂分解或另外的方式）被转化成相应的生物活性形式。
[0103] 本发明还提供了上述3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物药学上可接受的水合物。
[0104] 本发明还提供一种药物组合物，是由本发明提供的上述3-乙炔基吡唑并嘧啶衍 生物添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。本发明提供的3-乙炔基吡唑并嘧啶 衍生物结构如式I~V所示。
[0105] 本发明还提供了上述3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物、它的盐或水合物在制备激酶 抑制剂中的用途。
[0106] 进一步的，上述激酶抑制剂为抑制SRC家族络氨酸蛋白激酶（Blk络氨酸蛋白激 酶、Fgr络氨酸蛋白激酶、Frk络氨酸蛋白激酶、Fyn络氨酸蛋白激酶、Hck络氨酸蛋白激酶、 Lck络氨酸蛋白激酶、Lyn络氨酸蛋白激酶、c-SRC络氨酸蛋白激酶、YES酪氨酸蛋白激酶）、 FLT3 (人FMS样酪氨酸激酶3)、Abl (Abl络氨酸蛋白激酶）、VEGFR1 (血管内皮生长因子受体 1)、VEGFR2(血管内皮生长因子受体2)、VEGFR3(血管内皮生长因子受体3)、RET(RET受体酪 氨酸激酶）、c-RAF(c-RAF丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶）、B-RAF(B-RAF丝氨酸/苏氨酸蛋白激 酶）、c_KIT (酪氨酸蛋白激酶KIT)、H)GF α (血小板衍生生长因子受体a )、TOGF Μ血小板 衍生生长因子受体β )、FGFR1 (成纤维细胞生长因子受体1)、FGFR2 (成纤维细胞生长因子 受体2)、FGFR3 (成纤维细胞生长因子受体3)、EphA2 (EphA2酪氨酸激酶）、EphB2 (EphB2酪 氨酸激酶）、EphB4 (EphB4酪氨酸激酶）、ALK (间变性淋巴瘤激酶）、Met (Met酪氨酸激酶） DDR1 (DDR1络氨酸激酶）、DDR2 (DDR2络氨酸激酶）、Btk (Btk络氨酸激酶）、BMX (BMX络氨酸 激酶）、TAK1 (转化生长因子激酶1)中至少一种激酶的药物。（请根据实际情况修改或删 减上述激酶的种类）
[0107] 本发明还提供了上述3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物、它的盐或水合物在制备抗肿 瘤药物中的用途。
[0108] 进一步的，上述肿瘤为白血病或实体瘤。
[0109] 进一步的，上述实体肿瘤为肺癌、乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、神经胶质瘤、肝癌、甲 状腺瘤、宫颈癌、胃癌或结直肠癌中的至少一种。其中，上述的白血病为急性髓性白血病或 混合型白血病。
[0110] 本发明提供的3-乙炔基吡唑并嘧啶衍生物对人肺癌、人乳腺癌、人胰腺癌、人恶 性黑色素瘤、人白血病等肿瘤均表现出了良好的抑制效果。
【附图说明】
[0111] 图1化合物3对裸小鼠的体内药效学实验。
[0112] 图2化合物31对裸小鼠的体内药效学实验。
[0113] 图3化合物31在不同浓度下对FLK1转基因斑马鱼的血管抑制情况。
【具体实施方式】
[0114] 实施例13-乙炔基-1-异丙基-1H-吡唑并[3,4_d]嘧啶-4-胺（中间体4-1)的 制备
[0115]
[0116] 第一步，制备3-碘-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺：
[0117] 1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺（20g，148. Ommol，1. Oeq)于三 口瓶中，加入 150mL DMF(N，N-二甲基甲酰胺），搅拌并氮气置换3次，加入NIS (N-碘代丁二酰亚胺） (50g，222. 0mmol，1.5eq)后于80°C反应，TLC监控，22h后反应完毕。停止反应，减压浓缩 DMF至剩一半，加入饱和Na203SyjC溶液150mL搅拌，减压过滤，滤饼依次用饱和Na 203S2水 溶液及水洗涤至滤液无色，真空干燥得到目标产物，淡黄色粉末（33. 9g，收率87.8%)。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 8. 17 (s，1H)。MS m/z (ESI) : 262. 1 [M+H]。
[0118] 第二步，制备3-碘-1-异丙基-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺：
[0119] 3-碘-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺（5g，19. 2mmol，1. Oeq)于三口 瓶中， 加入40mL DMF及碳酸钾（5.3g，38.4mmol，2.0eq)后，用氮气置换3次，加入2-溴丙烷 (1.9mL，20. lmmol，1.05eq)后于80°C反应，TLC监控，4h后反应完毕。停止反应，减压蒸去 DMF，用DCM(二氯甲烷）及水萃取3次，合并DCM层后蒸干，用体积比为EA (乙酸乙酯）： PE(石油醚）=1 : 3的混合溶剂重结晶得目标产物，重结晶母液中目标产物可经柱层析分 离得到，淡黄色粉末（5. 4g,收率92.8%)。虫匪1?(4001抱，0150-(16)5 8.19(8，1!1)，4.99- 4. 93 (m，1H)，1. 42 (d，J = 6. 7Hz，6H)。MS m/z (ESI) : 304. Ο [M+H]。
[0120] 第三步，制备1-异丙基-3-((三甲基甲硅烷基）乙炔基）-1Η-吡唑并[3, 4-d]嘧 陡_4_胺：
[0121] 3-碘-1-异丙基-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺（5. 4g, 17. 8mmol, 1. Oeq) 于三 口瓶中，加入 DMF40mL，CuI(339mg，l.78mmol，0.1eq)，Pd(PPh3) 4(lg，0.89mm 〇1，0· 05eq),氮气置换3次后加入三乙胺（5mL, 35. 6mmol, 2. Oeq),三甲基娃乙炔 (2. 65mL, 18. 7mmol，L 05eq)，于80°C反应2. 5h，TLC监控反应完毕后减压蒸去DMF，余下残 余物经柱层析分离得目标产物，直接用于下步反应。MS m/z (ESI) :274. 2 [M+H]。
[0122] 第四步，制备3-乙炔基-1-异丙基-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺：
[0123] 1-异丙基-3-((三甲基甲硅烷基）乙炔基）-1Η-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺于 20mL MeOH(甲醇）中，加入碳酸钾（4. 9g，35. 6mmol，2. Oeq)室温搅拌10min，TLC监控反应 完毕，减压蒸去MeOH后用水分散，DCM洗涤水层3次，合并DCM层，蒸干后经柱层析分离得中 间体4-1，淡灰色粉末（L6g，收率44.7%)。虫匪1?(4001抱，0150-(16)5 8.22(8，1!1)，5.02- 4. 98 (m，1H)，4. 62 (s，1H)，1. 44 (d，J = 6. 7Hz，6H)。MS m/z (ESI) : 202. 1 [M+H]。
[0124] 实施例2~10中间体4-2~4-10的制备
[0125] 采用不同卤代烷烃与1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺反应，添加碳酸铯、碳酸钾、 DIPEA (二异丙基乙胺）或者其他无机或有机碱，PdCl2(PPh3)2或Pd(PPh 3)4等原料，通过与 制备中间体1所述类似的方法得到以下中间体4-2~4-10。
[0126]
[0128] 实施例113-碘-1-(1-(甲磺酰）哌啶-3-基）-1Η-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺 (中间体4-11)的制备
[0129]
[0130] 第一步，制备叔丁基-3-((甲磺酰）氧代）哌啶-1-羧酸酯：
[0131] N-Boc-3-羟基脈陡（2. lg, lOmmol, 1. Oeq), DIPEA (2. lmL, 15mmo 1, 1. 5eq)于 20mL DCM中，搅拌，降温至0°C后缓慢滴加甲磺酰氯（1. OmL，13mmol，1. 3eq)加毕后自然反应至 室温。然后反应液依次用1MHC1溶液，饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液以及水洗 涤，DCM层经无水硫酸镁干燥，过滤后蒸干得产品，黄色固体（2. 65g，收率95. 1% )。MS m/ z (ESI) :280. 1[M+H]。
[0132] 第二步，制备叔丁基-3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-1-基）哌 啶-1-羧酸酯：
[0133] 3-碘-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺（2. 4g，9. 2mmol，L Oeq)，叔丁基-3-((甲 磺酰）氧代）哌陡-1-羧酸酯（3. lg, llmmol, 1. 2eq)，碳酸铯（6. 0g, 18. 4mmol, 2. Oeq)于 50mL DMF中，氮气置换3次后80°C反应，TLC监控3h后反应完毕。蒸干DMF，水分散，DCM 萃取至水层无产物，合并DCM层，蒸干后经柱层析分离得目标产物，淡黄色固体（2. 9g，收率 73.4%)。4匪1?(4001抱，0)(：13)38.31(8，1!1)，6.12(8,2!1)，4.78-4.70(111，1!1)，4.31〇^· s, 1H), 4. 12 (br. s, 1H), 3. 36 (br. s, 1H), 2. 83 (t, J = 12. 0Hz, 1H), 2. 30-1. 94 (m, 2H), L 87 ( d, J = 13. 0Hz, 1H)，1. 74-1. 54 (m, 1H)，1. 44 (s, 9H)。MS m/z (ESI) : 445. 1 [M+H]。
[0134] 第三步，制备3-碘-1-(哌啶-3-基）-1Η-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺：
[0135] 叔丁基-3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-1-基）哌啶-1-羧酸酯 (2. 9g)于甲醇35mL中溶解，加入4MHC1二氧六环溶液35mL，室温搅拌8h后析出固体，然 后将反应液降温至〇°C后减压过滤，滤饼分散于水中，调PH至8后析出固体，减压过滤，水 洗固体，固体于乙醇中，减压蒸去乙醇后真空干燥得目标产物（2. 2g，收率93. 1% )。MS m/ z (ESI) :345. 1 [M+H]。
[0136] 第四步，制备3-碘-1-(1-(甲磺酰）哌啶-3-基）-1Η-吡唑并[3, 4-d]嘧 陡_4_胺：
[0137] 3-碘-1-(哌啶-3-基）-1Η-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺 (172. lmg，0.5mmol，l.Oeq)于 4mL DCM 中，加入 DIPEA(129.24mg，1.0mmol，2.0eq)后于(TC 搅拌，缓慢滴加甲磺酰氯（57. 3mg，0. 5mmol，1. Oeq)，加毕后TLC，确认反应完毕后反应液依 次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液以及水洗涤，DCM层经无水硫酸镁干燥，过滤 后蒸干得中间体4-11，白色粉末（197. 8mg，收率93.7%)。4匪1?(4001抱，0150-(16)5 8· 23 (s, 1H), 4. 83-4. 65 (m, 1H), 3. 69 (d, J = 7. 2Hz, 1H), 3. 59 (d, J = 11. 1Hz, 1H), 3. 07 (t, J =10.9Hz, 1H), 2.91 (s，3H), 2.80 (t，J = 10.9Hz, 1H), 2. 45-2. 00 (m，2H), 1.95 (d，J = 13. 6Hz, 1H)，1. 76-1. 59 (m, 1H)。MS m/z (ESI) : 423. 0 [M+H]。
[0138] 实施例12~19中间体4-12~4-19的制备
[0139] 以不同烷基醇或烷基磺酸酯与1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺反应，添加碳酸铯、 碳酸钾、其他无机或有机碱，甲磺酰氯或者对硝基甲磺酰氯，HC1乙醇溶液，HC1乙醚溶液， 三氟乙酸等原料，通过与制备中间体4-11所述类似的方法得到以下中间体4-12~4-19。
[0140]
[0141]
[0142] 实施例20 (R)-3-碘-1-(1-甲基哌啶-3-基）-1Η-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺 (中间体4-20)的制备
[0143]
[0144] (R)-3-碘-1-(哪哫-?-盎
吡卩生开L3, 4-d]嘧啶-4-胺 (750mg，2mmol，1.0eq)溶于18mL 1,2-二氯乙烧：甲醇=8 : 1(体积比）的混合溶剂 中，缓慢滴加甲醛水溶液（37 %，0. 82mL，lOmmol，5. Oeq)，加毕后室温搅拌lOmin，分两批 加入NaBH3CN (502. 7mg，8mmol，4. Oeq)，lOmin后TLC监控反应完毕，向反应液中滴加水 3mL，加毕后减压蒸干溶剂，残余物分散于水中，调pH至碱性，过滤，水洗固体，然后固体 于乙醇中减压蒸干，残余物经重结晶得中间体4-20,白色粉末（500mg，收率70. 0% )。4 NMR (400MHz, DMS〇-d6) δ 8. 20 (s, 1H), 4. 73 - 4. 66 (m, 1H), 4. 41 (t, J = 4. 8Hz, 1H), 3. 48-3. 4 l(m, 1H), 2.88 (dd，J= 11. 1,3.7Hz, 1H), 2.77 (d，J= 11. 1Hz, 1H), 2.21 (s，3H), 1.97-1.72( m，3H)，1. 71-1. 61 (m，1H)。MS m/z (ESI) : 359. 1 [M+H]。
[0145] 实施例21~24中间体4-21~4-24的制备
[0146] 以不同带芳基的仲胺与1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺反应，添加烷基醛或者芳 基醛等原料，通过与制备中间体4-20所述类似的方法得到以下中间体4-21~4-24。
[0147]
[0148] 实施例25〇?)-1-(〇?)-3-(4-氨基-3-碘-1!1-吡唑并[3,4-(1]嘧啶-1-基）哌 啶-1-基）-2-羟基丙烷-1-酮（中间体4-25)的制备
[0149]
[0150] 将 D-2-羟基闪酸 U57mg, 1. 74mmo 1, 1. 2eq), ΗΟβΤ U_ 羟基苯并三唑） (235. lmg, 1. 74mmol，1. 2eq)，EDCI (1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亚胺盐酸盐） (417mg, 2. 2mmol, 1. 5eq)溶于 DMF 中，加入三乙胺（0· 61mL, 4. 35mmol, 3. Oeq),室温 搅拌0. 5h后加入（R)-3-碘-1-(哌啶-3-基）-1Η-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺 (500mg, 1. 45mmol, 1. Oeq)室温反应约5h，完毕后蒸干DMF，用饱和碳酸氢钠水溶液同二氯 甲烷萃取2次，合并有机层后蒸干，残余物经柱层析分离得中间体4-25,白色固体（442mg， 收率 73.3% )。
[0151] NMR (400MHz, DMS〇-d6) 58.22(s,1H),5.04- 4. 94 (m, 1H), 4. 77-4. 51 (m, 1H), 4. 50 - 4. 44 (m, 1H), 4. 40-4. 26 (m, 1H), 4. 19-4. 03 (m, 1H), 3. 13 - 2. 98 (m, 1H), 2. 76 (t, J = 12. 1Hz, 1H), 2. 25-2. 11 (m, 1H), 2. 06 - 2. 04 (m, 1H)，1. 86 (t, J = 13. 8Hz, 1H)，1. 62 - 1. 49 (m, 1H)，1. 24 - 1. 13 (m, 3H)。MS m/ z (ESI) :417. 1[M+H]。
[0152] 实施例26-31中间体4-26~4-31的制备
[0153] 以不同带芳基的仲胺，不同构型的乳酸等原料，采用与制备中间体4-25所述类似 的方法得到以下中间体4-26~4-31。
[0154]
[0155]
[0156] 实施例324-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-1-基）环己烷-1-醇（中 间体4-32)的制备
[0157]
[0158] 第一步：参照实施例11第一步所述的方法，以4-羟基环己酮乙二醇缩醛及甲基磺 酰氯为原料合成得目标产物。MS m/z (ESI) : 236. 1 [M+H]。
[0159] 第二步，制备3-碘-1-(1,4-二氧杂螺[4. 5]癸烷-8-基）-1Η-吡唑并[3, 4-d] 嘧啶-4-胺：
[0160] 参照实施例11第二步所述方法以1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基甲磺酸酯及 3-碘-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺为原料合成得目标产物。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 8. 19(s，1H)，4· 79-4. 63(m，1H)，3· 98-3. 82(m，4H)，2· 19-2. 11 (m，2H)，1· 91-1. 64(m，6H)。 MS m/z(ESI):402. 2[M+H]〇
[0161] 第三步，制备4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-1-基）环己烷-1-酮：
[0162] 3-碘-1-(1, 4-二氧杂螺[4. 5]癸烷-8-基）-1Η-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺 (1. 94g，4. 84mmol)于40mL丙酮中，加入1MHC1 20mL，于70°C 3h后降至室温反应过 夜，完毕后减压蒸去丙酮，余下水溶液调pH至10,析出大量固体，过滤，干燥得目标产 物，白色固体（1. 68g，收率97.1%)。1!1匪1?(4001抱，0150-(16)58.27(8，1!1)，5.21- 5. 15 (m, 1H)，2. 75-2. 61 (m, 2H)，2. 37 - 2. 26 (m, 4H)，2. 20 - 2. 17 (m, 2H) 〇 MS m/ z(ESI):358. 1[M+H]。
[0163] 第四步，制备4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-1-基）环己烷-1-醇：
[0164] 4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-1-基）环己烷-1-酮 (1. 68g, 4. 7mmol, L Oeq)于甲醇中，降温至0 °C后分批加入硼氢化钠（183mg， 4. 7mmol, 1. Oeq)，加毕后自然升至室温反应，lh后反应完毕，加入5mL水搅拌5min后蒸 干溶剂，残余物经二氯甲烷与饱和碳酸氢钠水溶液萃取后柱层析得中间体4-32,白色固 体（844mg，收率 50. 1 % )。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 8. 19(s，1H)，4. 68(d，J = 4. 3Hz ，1H)，4. 62-4. 50 (m，1H)，3. 56-3. 49 (m，1H)，2. 03-1. 79 (m，5H)，1. 46-1. 29 (m，3H)。MS m/ z(ESI) :360. 2 [M+H] 〇
[0165] 实施例33N-(3-碘-4-甲基苯基）-4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三氟甲 基）苯酰胺（中间体33)的制备
[0166] ?
[0167] 第一步，制备4-甲基-3-三氟甲基-苯甲酸甲酯：
[0168] 4_甲基_3_(三氣甲基）苯甲酸（2. 04g, lOmmol, 1. Oeq)于25mL MeOH中，揽泮下 加入2mL浓硫酸，回流反应，TLC监控，24h小时后反应完毕，蒸干MeOH，DCM溶解，依次用饱 和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液以及水洗涤，DCM层经无水硫酸镁干燥，过滤后蒸干 得产品（1. 85g，收率84. 8% )用于下步。
[0169] 第二步，制备4-溴甲基-3-三氟甲基-苯甲酸甲酯：
[0170] 4-甲基-3-(三氟甲基）苯甲酸甲酯溶于1，2_二氯乙烷（DCE)中，搅拌下 加入 NBS (N-溴代丁二酰亚胺）（1. 81g，10. 18mmol，1. 2eq)，AIBN(偶氮二异 丁腈） (0. 139g，0. 848mmol，0. leq)后氮气置换3次，80°C反应30h后，反应液依次用饱和碳酸氢钠 水溶液，饱和氯化钠水溶液以及水洗涤，DCE层经硫酸镁干燥后，蒸干得产物直接用于下步， 按收率80 %计。
[0171 ] 第三步，制备4- (4-甲基哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲基-苯甲酸甲酯：
[0172] 4-溴甲基-3-三氟甲基苯甲酸甲酯（6. 78mmol, 1. Oeq),三乙胺 (1. 03g, 10. 2mmol, 1. 5eq),氮甲基哌嗪（0· 681g, 6. 8mmol, 1. Oeq)于氯仿中，80 °C 反应， lh后反应完毕。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液及水洗涤，氯仿 层蒸干后残余物经柱层析分离得目标产物，淡黄色油状物（1.72g，收率79. 9%)。MS m/ z (ESI) :317. 2 [M+H]。
[0173] 第四步，制备4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲基-苯甲酸：
[0174] 4_ (4_甲基脈嚷-1-基甲基）_3_三氣甲基-苯甲酸甲醋（1. 72g，5. 4mmo 1)于20ml 乙醇中，加入5M NaOH水溶液3ml，室温搅拌过夜后pH至6,减压浓缩，浓缩液加入四氢呋喃 后减压过滤，滤液蒸干得目标产物，淡黄色粉末（1. 47g，收率89. 9 % )。
[0175] 第五步，制备N-(3-碘-4-甲基苯基）-4_ ((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三氟 甲基）苯酰胺：
[0176] 4_ (4_甲基脈嚷-1-基甲基）_3_三氣甲基-苯甲酸（0· 755g，2. 5mmol, 1. Oeq), HATU (0- (7-偶氮苯并三氮唑-1-氧）-Ν, Ν, Ν'，Ν' -四甲基脲鐺六氟磷酸盐）（1. 14g，3mmol， 1.2eq)，DIPEA(L29g，10mmol，4.0eq)溶于二氯甲烷中室温搅拌0.5h，加入3-碘-4-甲基 苯胺（582. 6mg，2. 5mmol，1.0eq)后于45°C反应过夜，反应完毕后蒸干反应液，饱和碳酸氢 钠水溶液与二氯甲烷萃取三次，合并有机层后减压浓缩，残余物经柱层析分离得中间体33， 淡黄色固体（892mg，收率 69.0% )。虫 NMR(400MHz，CDC13)8. 10(s, lH)，8.08(d, J = 2Hz, 1 Η), 8. 08-8. 05 (m, 1H), 8. 0 (s, 1H), 7. 95 (s, 1H), 7. 55 (dd, J = 4, 2Hz, 1H), 7. 20 (d, J = 8Hz, 1 H)，3. 75 (s, 2H) 2. 60-2. 41 (m, 8H)，2. 40 (s, 3H)，2. 30 (s, 3H)。MS m/z (ESI) : 518. 1 [M+H]。
[0177] 实施例34N-(3-碘-4-甲基苯基）-4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）苯酰胺（中 间体34)
[0178]
[0179] 按照中间体33所述第五步类似的缩合方法得到中间体34,淡黄色固体 (532mg，盐酸盐，收率 76. 7 % )。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 10. 35(br. s，1H)，10. 26 (s, 1H), 8. 34(s, 1H), 7. 95(d, J = 7. 6Hz, 2H), 7. 72 (d, J = 8. 3Hz, 1H), 7. 47 (d, J = 7. 6Hz, 2H), 7. 30 (d, J = 8. 3Hz, 1H), 3. 64 (s, 2H), 3. 39 (br. s, 2H), 3. 01 (br. s, 2H), 2. 87 (br. s, 2H)，2. 73 (s, 3H)，2. 42 (br. s, 2H)，2. 34 (s, 3H)。MSm/z (ESI) : 450. 1 [M+H]。
[0180] 实施例35N-(3-乙炔基-4-甲基苯基）-4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三 氟甲基）苯酰胺（中间体35)的制备
[0181]
[0182] 第一步，制备3-三甲基硅乙炔基-4-甲基苯胺：
[0183] 将 3_ 鹏 _4_ 甲基苯胺（11. 65g，50mmol，1. Oeq)、鹏化亚铜（0· 9g，4. 7mmol， 0. leq)、双三苯基膦二氯化钯（1.75g，2. 5mmol，0. 05eq)溶于二氧六环中，氮气置换三次， 加入 DIPEA(1. 29g，100mmol，2. Oeq)、三甲基石圭乙炔（6. 4g，65mmol，1. 3eq)。升温至 75°C反 应，17h后反应完毕，减压蒸干溶剂，残留物经柱层析分离得到目标产品，直接用于下步反 应。
[0184] 第二步，制备3_乙炔基-4-甲基苯胺：
[0185] 3-三甲基硅乙炔基-4-甲基苯胺用甲醇溶解，加入碳酸钾（3.45g，25mmol， 0. 5eq)，常温搅拌lOmin后反应完毕。减压蒸干溶剂，残留物用DCM、水萃取3次，DCM层干燥 后蒸干，得到油状物，经柱层析分离得到产品3-乙炔基-4-甲基苯胺，黄棕色油状物（4. Og， 收率 61.0% )。? NMR(400MHz，CDC13) S6.99(d，J = 8. 1Hz，lH)，6.81(s，lH)，6.61(d，J = 8. 1Hz，1H)，3. 44 (s，2H)，3. 23 (s，1H)，2. 34 (s，3H)。MS m/z (ESI) : 132. 2 [M+H]。
[0186] 第三步，制备N-(3-乙炔基-4-甲基苯基）-4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三 氟甲基）苯酰胺：
[0187] 按照中间体33第五步所述类似的缩合方法得到中间体35,淡黄色固体（1. 2g，盐 酸盐，收率 71. 7% )。虫 NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 11. 24(br. s，1H)，10. 58(s，1H)，8. 33(d，J =6. 4Hz, 2H), 8. 14(s, 1H), 7. 92(s, 1H), 7. 72(d, J = 8. 3Hz, 1H), 7. 28 (d, J = 8. 3Hz ,1H), 4. 39 (s, 1H), 4. 06 (s, 2H), 3. 47 (d, J = 10. 9Hz, 2H), 3. 22 (br. s, 2H), 3. 13 (br. s, 2H)，2. 89 (br. s, 2H)，2. 77 (s, 3H)，2. 36 (s, 3H)。MS m/z (ESI) : 416. 3 [M+H]。
[0188] 实施例36N-(3-乙炔基-4-甲基苯基）-6-(三氟甲基）甲基吡啶酰胺（中间体 36)的制备
[0189]
[0190] 拘· 0-二風〒举-叩[4€ -Z-〒 K uzy. >?mg, 1. zmmol, 1. zeq;用一录L亚砜溶解， 80°C回流3h，减压蒸干二氯亚砜，得到6_(三氟甲基）吡啶-2-甲酰氯，无色油状物，用 DCM溶解。将3-乙炔基-4-甲基苯胺（131. 17mg，1.0mmol，L0eq)和三乙胺（202.4mg， 2. Ommol，2. Oeq)用DCM溶解，冷却至-5°C，将6-三氟甲基-吡啶-2-甲酰氯DCM溶液缓慢 滴加到其中。滴加完毕后，自然升温至常温，15min后反应完毕。往反应液中加入氢氧化钠 水溶液，DCM萃取2次。合并DCM层，再依次用稀盐酸、水萃取，DCM层用无水硫酸镁干燥， 蒸干得中间体 36,白色固体（225mg，收率 73.9%)。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) Sl0.47(s, 1H), 8. 08-8. 05 (m, 2H), 7. 93 (dd, J = 7. 3, 1. 4Hz, 1H), 7. 76 (d, J = 2. 2Hz, 1H), 7. 54 (dd, J =8.3,2.2Hz，lH)，7.06(d，J = 8.3Hz，lH)，4.16(s，lH),2.13(s，3H)。MS m/ z (ESI) :305. 1 [M+H]。
[0191] 实施例37-61中间体37-61的制备
[0192] 以含不同取代基的芳基甲酸、芳基酰氯、五元杂环酰氯及含不同取代基的苯胺为 原料，采用与制备中间体36所述类似的方法得到以下中间体37-61。
[0193]
[0194]
[0195]
[0196]
[0197] 实施例622-叔丁基-N-(3-乙炔基-4-甲基苯基）噻唑-5-甲酰胺（中间体62) 的制备 「01981 u - N， ' - 『
， Μ 一 f
[0199] 第一步，制备2-叔丁基-噻唑-5-羧酸乙酯：
[0200] 将3-溴丙酮酸乙酯（1.958，10臟〇1，1.(^)和2,2,2-三甲基硫代乙酰胺（1.17 8， 10mm〇l，l.〇eq)加入到20mL乙醇中，常温搅拌48h。反应完毕后，减压蒸干溶剂，残留物用 碳酸氢钠水溶液与DCM萃取，DCM层用无水硫酸镁干燥后蒸干，残留物经柱层析分离得到 2_叔丁基-噻唑-5-羧酸乙酯，无色油状物（1. 15g，收率55. 0% )。虫NMR(400MHz，CDC13) δ 8. 01 (s, 1H), 4. 38(q, J = 7. 1Hz, 2H), 1. 46 (s, 9H), 1. 37 (t, J = 7. 1Hz, 3H) 〇 MS m/ z (ESI) :214. 0[M+H]。
[0201] 第二步，制备2-叔丁基-噻唑-5-羧酸：
[0202] 将2-叔丁基-噻唑-5-羧酸乙酯溶于10mL THF，加入氢氧化锂（0. 45g，10. 9mmol， 1. leq)水溶液5mL，常温搅拌约16h。反应完毕后，减压蒸干溶剂，残留物用5mL水溶解，用 2M HC1调节pH至约为3,析出大量白色絮状固体，抽滤，用水（2X5mL)洗涤滤饼，得到2-叔 丁基-噻唑-5-羧酸，白色固体（0. 55g，收率 55. 0% )。MS m/z(ESI) :184. 0[Μ-Η]。
[0203] 第三步，制备2-叔丁基-噻唑-5-羰基氯化：
[0204] 将2-叔丁基-噻唑-5-羧酸（203. 7mg，1. lmmol)溶于3ml二氯亚砜中，80°C回流 2h后减压蒸干溶剂，直接用于下一步。
[0205] 第四步，制备2-叔丁基-N-(3-乙炔基-4-甲基苯基）噻唑-5-甲酰胺：
[0206] 将3_乙炔基4_甲基-苯胺（131. 2mg，1. Ommol, 1. Oeq)溶于4mL DCM，加入三乙 胺（15L 8mg，L 5mmol，L 5eq)，降温至0°C后缓慢滴加上步2-叔丁基-噻唑-5-羰基氯化 的二氯甲烷溶液（4mL)，加毕后自然升至室温反应10min，然后依次用饱和氯化铵水溶液， 饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液洗涤反应液，有机层经无水硫酸镁干燥后过滤，减 压蒸干溶剂，3mL石油醚洗涤残余物后得目标产物，淡黄色粉末（253. 6mg，收率85. 1 % )。 NMR (400MHz, DMS〇-d6) δ 9. 95 (s, 1Η), 8. 30 (s, 1H), 7. 95 (d, J = 2. 0Hz, 1H), 7. 76 (dd, J =8. 3, 2. 0Hz, 1H)，7. 28 (d, J = 8. 3Hz, 1H)，4. 39 (s, 1H), 2. 37 (s, 3H), 1. 47 (s, 9H)。MS m/ z (ESI) :299. 1[M+H]。
[0207] 实施例63N- (4-氯-3-乙炔基苯基）-3-(三氟甲基）苯酰胺（中间体63)的制备
[0208]
[0209] 第一、二步，制备3-乙炔基-4-氯苯胺：
[0210] 以3-碘-4-氯苯胺为原料，按照中间体35第一、二步所述的方法，得目标 产物，淡黄色油状物（2. lg，收率 77. 8 % )。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 7. 12 (d，J = 8. 7Hz, 1H), 6. 75 (d, J = 2. 8Hz, 1H), 6. 60 (dd, J = 8. 7, 2. 8Hz, 1H), 5. 39 (s, 2H), 4. 34 (s, 1H)。MS m/z(ESI):518. 3[M+H]。
[0211] 第二步，制备N-(4_氯-3-乙炔基苯基）-3-(二氟甲基）苯酰胺：
[0212] 采用中间体36所述的类似方法得到中间体63,淡黄色粉末（291mg，收率90. 1%)。 NMR (400MHz, DMS〇-d6) δ 10. 64 (s, 1H), 8. 30 (s, 1H), 8. 26 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 07 (d, J =2. 5Hz, 1H), 8. 00 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 89-7. 82 (m, 1H), 7. 82-7. 75 (m, 1H), 7. 57 (d, J = 8. 8Hz, 1H)，4. 61 (s, 1H)。MS m/z (ESI) : 324. 1 [M+H]。
[0213] 实施例643-碘-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三氟甲基）苯 基）苯酰胺（中间体64)的制备
[0214]
[0215] 第一步，制备I-漠甲基-4_硝基_2_二氣甲基-苯：
[0216] 将 1-甲基-4-硝基-2-三氟甲基-苯（5.62g，27.4mmol，1.0eq)溶于50ml 1,2-二 氯乙烧，然后依次加入N-溴代丁二酰亚胺（5. 85g，32. 8mmol，1. 2eq)和AIBN(450mg, 2. 7mmol,0. leq),加热回流过夜。然后将反应液冷却至室温，依次用饱和碳酸氢钠溶液，饱 和氯化钠溶液及水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤后减压浓缩得目标产物，直接用于下步反 应。
[0217] 第二步，制备卜甲基-4-(4_硝基_2_(二氟甲基）苯甲基）哌嗪：
[0218] 将上步1-溴甲基-4-硝基-2-三氟甲基-苯（20. 55mmol)溶于50mL DCM中， 加入三乙胺（3. lg，30. 8mmol，1. 5eq)和 N-甲基哌嗪（4. 12g，41. lmmol，2. Oeq),室温反 应，反应完毕后减压浓缩，DCM溶解，依次用饱和碳酸氢钠溶液，饱和氯化钠溶液及水洗涤， 无水硫酸镁干燥，过滤后减压浓缩，残余物经柱层析分离得目标产物，黄色固体。MS m/ z(ESI) :304. 2 [M+H]
[0219] 第三步，制备4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三氟甲基）苯胺：
[0220] 1-甲基-4-(4-硝基-2-(三氟甲基）苯甲基）哌嗪（5g)溶于65mL 75 %乙醇中， 加入0. 5g 10%钯碳，氮气置换后，反应液在氢气下室温搅拌5h，反应完毕后减压过滤，滤 液蒸干后得目标产物，淡黄色固体。MS m/z (ESI) :274. 2 [M+H]。
[0221] 第四步，制备3-碘-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三氟甲基） 苯基）苯酰胺：
[0222] 按照中间体33第五步所述类似的缩合方法得到中间体64，淡黄色固体 (2. 2g，收率 74. 3 % )。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 10. 49 (s，1H)，8. 43 (s，1H)，8. 18 (d，J =1. 5Hz, 1H), 8. 04 (d, J = 8. 5Hz, 1H), 7. 92 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 70 (d, J = 8. 5Hz, 1H) , 7. 50 (d, J = 8. 0Hz, 1H) , 3. 56 (s, 2H) , 2. 45 (s, 3H) , 2. 36 (d, J = 20. 7Hz, 8H)，2. 16 (s, 3H)。MS m/z (ESI) : 518. 3 [M+H]。
[0223] 实施例65中间体65-70的制备
[0224] 以含不同取代基的苯甲酸与含不同取代基的苯胺为原料，采用中间体64或中间 体36所述类似方法得到以下中间体65-70。
[0225]
[0227] 实施例713-乙炔基-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三氟甲 基）苯基）苯酰胺（中间体71)的制备
[0228]
[0229] 第一步，制备3-碘-4-甲基苯甲酸甲酯：
[0230] 将3-碘-4-甲基苯甲酸（15g，57. 14mmol)用甲醇溶解，将浓硫酸缓慢滴入其中， 反应液放热，滴加完毕后升温至70°C反应。TLC监测，48h后反应完全，停止反应，减压蒸干 甲醇，得到棕色油状物，将油状物缓慢倒入200mL水中，呈白色乳浊状，且放热，水用DCM萃 取2次，DCM层再依次用碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液、水萃取一次，DCM层用无水硫 酸钠干燥，减压蒸干DCM后得目标产物，黄棕色油状物。
[0231] 第二步，制备3-三甲基硅乙炔基-4-甲基苯甲酸甲酯：
[0232] 将上步油状物用THF溶解，加入碘化亚铜（1. lg，5. 74mmol，0. leq)和四三苯基膦 钯（3.38,2.86臟〇1，0.0569)，氮气置换三次，加入三乙胺（11.578，114.28臟〇1，2.069)和 三甲基娃乙炔（8. 4g，85. 71mmol，1.5eq)，常温搅拌，24h后反应完毕。减压蒸干溶剂，柱层 析分离得目标产品，黄色油状物。
[0233] 第三步，制备3-乙炔基-4-甲基苯甲酸甲酯：
[0234] 将上步油状物用甲醇溶解，加入碳酸钾（3. 95g，28. 57mmol，0. 5eq)，常温搅拌 lOmin后反应完毕，减压蒸干溶剂，DCM溶解，再依次用碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶 液、水萃取一次，DCM层用无水硫酸钠干燥，经柱层析分离得到目标产品，淡黄色油状物。
[0235] 第四步，制备3-乙炔基-4-甲基苯甲酸：
[0236] 将上步得到的产品用甲醇溶解，加入饱和氢氧化钠水溶液10mL，常温搅拌过 夜。反应完毕后，减压蒸干溶剂，加入水约20mL，用盐酸将pH调成约为3,析出大量白色 固体，用DCM萃取3次，合并DCM层，用水洗涤DCM层一次，无水硫酸钠干燥后，减压蒸干 溶剂得到产品3-乙炔基-4-甲基苯甲酸，淡黄色固体粉末（8. Og，总收率87.2% )。4 NMR (400MHz, DMS〇-d6) δ 13. 04 (br. s, 1H), 7. 93 (s, 1H), 7. 85 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 43 (d, J = 8. 0Hz, 1H)，4. 48 (s, 1H)，2. 45 (s, 3H)。MS m/z (ESI) : 159. 0 [M-H]。
[0237] 第五步，制备3-乙炔基-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三氟 甲基）苯基）苯酰胺：
[0238] 将3-乙炔基-4-甲基苯甲酸（500mg，3. 12mmol，1. 05eq)用DCM溶解，加入 HATU(1. 42g，3. 74mmol，1. 2eq)、DIPEA(806mg，6. 24mmol，2. Oeq)，常温搅拌约 30min 后， 加入3-三氟甲基-4_[(4-甲基哌嗪-1-基）甲基]苯胺（812mg，2. 97mmol，1. Oeq),升 温至45°C回流，20h后反应完毕。减压蒸干溶剂，用DCM和饱和碳酸氢钠水溶液萃取2 次，DCM层蒸干后得到黄色油状物，经柱层析分离得到中间体71，黄棕色固体（807mg， 收率约 65.4 % )。4 NMR(400MHz，CDCl3)S8.33(s，lH)，7.91(s，lH)，7.86(d，J = 13. 7Hz, 2H), 7. 73 (t, J = 7. 1Hz, 2H), 7. 28 (s, 1H), 3. 60 (s, 2H), 3. 32 (s, 1H), 2. 48 (br. s, 11H)，2. 30 (s, 3H)。MS m/z (ESI) : 416. 3 [M+H]。
[0239] 实施例72-76中间体72-76的制备
[0240] 以含不同取代基的苯胺或者芳基胺为原料，采用中间体71或中间体36所述类似 的方法得到以下中间体72-76。
[0241]
[0242] 实施例773-乙炔基-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基）-5-(三氟甲基） 苯基）苯酰胺（中间体77)的制备
[0243]
[0244] 第一步，制备3-(4-甲基-咪唑-1-基）-5_三氟甲基-苯胺：
[0245] 将 3_ 漠-5-三氣甲基-苯胺（500mg，2. lmmol, 1. Oeq)，4_ 甲基 _1H_ 咪唑（20. 5mg， 2. 5mmol, 1. 2eq),鹏化亚铜（60mg，0· 3mmol，0· 14eq)和 8-羟基唾琳（44mg，0· 3mmol, 0. 14eq)溶解在3mL二甲亚砜中，氮气置换3次后升温至120°C反应过夜，反应完毕后 加水稀释，DCM萃取，有机层依次用稀氨水溶液，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸镁干 燥，过滤，减压浓缩后残余物经柱层析分离得目标产物，黄色固体（392mg，收率77. 3 % )。 4匪1?(4001抱，〇)(：13)3 7.73(8，1!1)，6.98(8，1!1)，6.92(8，1!1)，6.83(8，1!1)，6.77(8，1!1)，4· 14 (s，2H)，2· 27 (s，3H)。MSm/z (ESI) : 242. 1 [M+H]。
[0246] 第二步，制备3-乙炔基-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基）-5-(三氟甲 基）苯基）苯酰胺：
[0247] 采用中间体33第五步所述类似的缩合方法得到中间体77,淡黄色固体（350mg，收 率 65. 7 % )。虫 NMR (400MHz, DMS0-d6) δ 10. 68 (s, 1H)，8. 29 (s, 1H)，8. 22 (s, 1H)，8. 16 (s，1 Η), 8. 12 (s, 1Η), 7. 93 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 74 (s, 1H), 7. 51 (d, J = 9. 0Hz, 2H), 4. 56 (s, 1H), 2. 48 (s，3H)，2. 19 (s，3H)。MS m/z (ESI) : 384. 1 [M+H]。
[0248] 实施例783-乙炔基-4-甲基-N-(3-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-5-(三氟甲 基）苯基）苯酰胺（中间体78)的制备
[0249]
[0250] 第一步，制备3-硝基-5-三氟甲基苯甲酰氯：
[0251] 3_硝基_5_三氟甲基苯甲酸（3. 52g，14. 97mmol，1. Oeq)溶于20mL二氯亚砜中， 80°C回流2h，反应完毕后减压蒸干溶剂，余下残余物为目标产物，直接用于下步反应。
[0252] 第二步，制备（4-甲基哌嗪-1-基）（3_硝基-5-(三氟甲基）苯基）甲酮：
[0253] N-甲基脈嚷（1. 5g，15mmo 1,1. 05eq),三乙胺（2. 2g，22. 4mmo1 ,1. 5mmol)溶于 20ml DCM中，上步产物3-硝基-5-三氟甲基苯甲酰氯溶于6mL DCM中，缓慢滴加至反应液中，加 毕后室温反应0. 5h，反应完毕后依次用饱和碳酸氢钠溶液，饱和氯化钠溶液及水洗涤，无水 硫酸镁干燥，过滤，减压蒸干后直接用于下步反应。MS m/z(ESI):318. 1[M+H]
[0254] 第三步，制备1-甲基-4-(3-硝基-5-(三氟甲基）苯甲基）哌嗪：
[0255] 将（4-甲基哌嗪-1-基）（3-硝基_5_(三氟甲基）苯基）甲酮（14. 97mmol)于无 水四氢呋喃中，氮气保护，降温至0°c。用无水四氢呋喃将2mol/L的硼烷二甲硫醚（22. 5mL， 45mmol，3. Oeq)稀释至50mL，然后缓慢滴加至反应液中，加毕后升温至65°C反应过夜，反应 完毕后降温至〇°C，缓慢滴加6M HC1 22. 5mL，加毕后升温至65°C反应lh，然后降温至0°C， 缓慢滴加4MNaOH水溶液调pH至9,反应液用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，无水硫酸镁 干燥，减压过滤，滤液蒸干后残余物经柱层析分离得目标产物，淡黄色油状物（2. 4g，收率 53. 2 % )。MS m/z (ESI) : 304. 1 [M+H]
[0256] 第四步，制备3-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-5-(三氟甲基）苯胺：
[0257] 1-甲基-4-(3-硝基_5_(三氟甲基）苯甲基）哌嗪（2. 4g，7. 96mmol)溶于75% 乙醇中，加入10%钯碳（240mg，10%eq)，氮气置换后通氢气于50°C下反应，反应完毕后，减 压过滤，滤液蒸干得目标产物，白色固体（2. lg，收率96. 1% )。MS m/z (ESI) :274. 1[M+H]
[0258] 第五步，制备3-乙炔基-4-甲基-N-(3-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-5-(三氟 甲基）苯基）苯酰胺：
[0259] 采用中间体33第五步所述类似的缩合方法得到中间体78,淡黄色固体 (260mg，盐酸盐，收率61.7%)。1!1匪1?(4001抱，015〇-(16)31〇.55(8，1!1)，9.28〇^· s, 1H), 8. 10 (s, 3H), 7. 91 (d, J = 8. 1Hz, 1H), 7. 49 (d, J = 8. 1Hz, 1H), 7. 41 (s, 1H), 4. 56 (s, 1 H), 3. 66 (s, 2H), 3. 39 (d, J = 11. 1Hz, 2H), 3. 14-2. 99 (m, 2H), 2. 94 (d, J = 12. 5Hz, 2H), 2. 80 (s, 3H), 2. 47 (s, 3H)，2. 33 (t, J = 11. 9Hz, 2H)。MS m/z (ESI) : 416. 3 [M+H]。
[0260] 实施例793-乙炔基-N- (3-(三氟甲基）苯基）苯酰胺（中间体79)的制备
[0261]
[0262] 第一步，制备3-碘-N-(3-(三氟甲基）苯基）苯酰胺：
[0263] 将间碘苯甲酸（1. 29g，5. 2mmol，1. 05eq)、TBTU(〇-(苯并三 唑-1-氧）-N，N，Ν'，Ν' -四甲基脲鐺六氟硼酸盐）（1. 93g，6. Ommol，1. 2eq)、三乙胺（1. Olg， 10mmol，2. Oeq)加入DCM中，常温搅拌0· 5h，加入间三氟甲基苯胺（805mg，5. Ommol，1. Oeq)， 升温至45°C回流。12h后反应完毕。减压蒸干溶剂，用饱和碳酸氢钠水溶液、DCM萃取一 次，DCM层蒸干，经柱层析分离得到目标产物。虫匪1?(4001抱，0130-(16)5 10.60(8，1!1)，8· 33 (s, 1H), 8. 22 (s, 1H), 8. 05 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 99 (dd, J = 7. 8, 1. 2Hz, 2H), 7. 61 (t, J = 8. 0Hz, 1H)，7. 47 (d, J = 7. 8Hz, 1H)，7. 37 (t, J = 8. 0Hz, 1H)。MS m/z (ESI) : 392. 0 [M+H]。
[0264] 第二步，制备N-(3_(三氟甲基）苯基）-3-((三甲基甲硅烷基）乙炔基）苯酰胺：
[0265] 将上步产物溶于THF (四氢呋喃），加入碘化亚铜（95.23mg，0.5mmol，0. leq)、双 三苯基膦二氯化钯（175. 5mg，0. 25mmol，0. 05eq)，氮气置换三次，再加入DIPEA(1. 29g， lOmmol，2. Oeq)、三甲基娃乙炔（737mg，7. 5mmol，1. 5eq)，常温搅拌，4h后反应完毕。停止反 应，经柱层析分离得到目标产物，直接用于下步反应。MS m/z (ESI) :362. 2 [M+H]。
[0266] 第二步，制备3_乙炔基-N-(3-(二氟甲基）苯基）苯酰胺：
[0267] 将上步产物用甲醇溶解，加入碳酸钾（345. 5mg，2. 5mmol，0. 5eq)，常温搅拌，10min 后反应完毕。蒸干溶剂，残留物经柱层析分离得到中间体79,淡黄色固体（875. Omg，收率约 60. 5% )〇 NMR(400MHz, DMS0-d6) δ 10. 61(s, 1Η), 8. 25 (s, 1H), 8. 10 (s, 1H), 8. 06 (d, J = 8. 3Hz, 1H), 8. 00 (d, J = 7. 9Hz, 1H), 7. 72 (d, J = 7. 7Hz, 1H), 7. 63 - 7. 56 (m, 2H), 7. 47 (d, J =7. 9Hz, 1H)，4. 35 (s, 1H)。MS m/z (ESI) :290. 1 [M+H]。
[0268] 实施例80中间体80的制备
[0269]
[0270] 以含不同取代基的卤代苯甲酸同含不同取代基的苯胺为原料，采 用中间体79所述类似的方法得到以下中间体80。4 NMR (400MHz，⑶Cl3) δ 7. 98 (s, 1H), 7. 91 (s, 1H), 7. 85 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 77 (d, J = 7. 2Hz, 1H), 7. 46 (d, J = 8. 4Hz, 2H)，7. 44-7. 39 (m, 2H)，3. 43 (s, 1H)。MSm/z (ESI) :324. 1 [M+H]。
[0271] 实施例811-(3-乙炔基苯基）-3-(3-(三氟甲基）苯基）脲（中间体81)的制备
[0272]
[0273] 将三光气（1. 79g，6. Ommol，1. 5eq)溶于EA，常温搅拌。将间三氟甲基苯胺（967mg， 6. Ommol，1. 5eq)溶于EA，置于滴液漏斗中，缓慢滴加到三光气的EA溶液中，30min后滴 加完毕。然后缓慢加入三乙胺（1.28，12臟〇1，2.0叫)，析出大量白色固体，常温反应。211 后，减压蒸干溶剂，加入EA，滤去不溶物，收集滤液。向滤液中加入间乙炔基苯胺（469mg， 4.0mmol，l.Oeq)，有固体产生。TLC监测反应完毕后，减压蒸干溶剂，用体积比乙醚：石油醚 =1 :1重结晶得到中间体81，白色固体（543mg，收率约44. 6% )。虫NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 9. 35 (s, 1H), 9. 15 (s, 1H), 8. 01 (s, 1H), 7. 68 (s, 1H), 7. 59 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 52 (t, J =7. 9Hz, 1H), 7. 44 (d, J = 8. 2Hz, 1H), 7. 3 1 (d, J = 7. 8Hz, 2H), 7. 10 (d, J = 7. 6Hz, 1H)，4. 17 (s, 1H)。MSm/z (ESI) : 304. 2 [M+H]。
[0274] 实施例82-83中间体82-83的制备
[0275] 以含不同取代基的苯胺为原料，采用中间体81所述类似的方法得到以下中间体 82-83〇
[0276]
[0277] 实施例84N-(3-((4_氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3,4_d]嘧啶-3-基）乙炔 基）-4-甲基苯基）-4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）苯酰胺（化合物1)的制备
[0278?
[0279] Ν-(3-碘-4-甲基苯基）-4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）苯酰胺 (118mg，0· 263mmol，1. Oeq)，3-乙炔基-1-异丙基-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-胺 (55. 57mg，0· 276mmol，1. 05eq) , Cul (5. 7mg，0· 03mmol，0· leq)，PdCl2(PPh3)2(21. 06 mg，0. 03mmol，0. leq)于三口瓶中，加入2mL DMF溶解后氮气置换三次，加入三乙胺 (53. 23mg，0. 526mmol，2. Oeq)于80°C反应过夜，TLC监控反应完毕后，减压蒸去DMF，残余 物经柱层析分离得化合物1，淡黄色固体（62mg，收率45. 1 % )。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 10. 33(s, 1H), 8. 27(s, 1H), 8. 10(s, 1H), 7. 94(d, J = 7. 6Hz, 2H), 7. 75 (d, J = 8. 2Hz, 1H), 7. 47 (d, J = 7. 6Hz, 2H), 7. 34 (d, J = 8. 2Hz, 1H), 5. 20-4. 93 (m, 1H), 3. 56 (s, 2H), 2. 58 (br. s, 8H), 2. 47 (s, 3H), 2. 34 (s, 3H), 1. 49 (d, J = 6. 4Hz, 6H). MSm/ z (ESI):523. 2930[M+H]。
[0280] 实施例85-175化合物2-92的制备
[0281] 以含不同取代基的芳基乙炔与卤代物为原料，采用实施例84所述类似的方法得 到化合物2-92。
[0282]
[0283]
[0284]
[0285]
[0286]
[0287]
[0288]
[0289]
[0290]
[(
[0292]
[0293]
[0294]
[0295]
[0296]
[0297
[0298:
[0299]
[0300] 实施例933- ((4-氨基-1-(哌啶-4-基）-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-3-基）乙炔 基）-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三氟甲基）苯基）苯酰胺（化合物 93)的制备
[0301]
[0302] 叔-丁基-4-(4-氨基-3-((2-甲基-5-((4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三 氟甲基）苯基）氨基甲酰）苯基）乙炔基）-1Η-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-1-基）哌啶-1-羧 酸酯（1. 46g，2mmol)溶于20mL DCM中，降温至0°C后加入10ml三氟乙酸，自然升至室温反 应，〇.5h后反应完毕，减压蒸干溶剂，残余物用水溶解后调PH至8,析出大量固体，减压过 滤，水洗滤饼，固体经真空干燥后得化合物93,淡黄色粉末（1. 2g，收率94. 9% )。
[0303] 4 NMR (400MHz，DMS0-d6) δ 10. 56 (s，1H)，8. 35 (s，1H)，8. 28 (s，1H)，8. 22 (s，1H)，8 .08 (d, J = 7. 9Hz, 1H), 7. 98 (d, J = 7. 9Hz, 1H), 7. 72 (d, J = 8. 2Hz, 1H), 7. 55 (d, J = 8. 2Hz ,1H), 5. 09-4. 98 (m, 1H), 4. 36-4. 32 (m, 1H), 3. 58 (s, 2H), 3. 21-3. 08 (m, 2H), 2. 99 (d, J = 7. 0Hz, 2H), 2. 58 (s, 3H), 2. 42 (br. s, 8H), 2. 31 (d, J = 11. 7Hz, 2H), 2. 22 (s, 3H), 2. 12 (d, J =11.6Hz,2H)。MSm/z(ESI):632. 3071[M+H]。
[0304] 实施例943- ((1- (1-丙烯酰哌啶-4-基）-4-氨基-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧 啶-3-基）乙炔基）-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三氟甲基）苯基） 苯酰胺（化合物94)的制备
[0305]
[0306] 3- ((4-氨基-1-(哌啶-4-基）-1H-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-3-基）乙炔基）-4-甲 基-N-(4_((4-甲基哌嗪-1-基）甲基）-3-(三氟甲基）苯基）苯酰胺（510mg，0. 807mmol， 1. 〇eq)溶于10mL DCM中，加入三乙胺（163mg，1. 6mmol，2. Oeq)，降温至0°C，缓慢滴加丙烯 酰氯（72yL，0. 888mmol，l. leq)的二氯甲烷液（4mL)，加毕后反应完全。然后依次用饱和 氯化铵水溶液，饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液洗涤反应液，余下有机层用无水硫 酸镁干燥，过滤，滤液减压蒸干，残余物经丙酮：乙醚（1:1)洗涤得化合物94,淡黄色粉末 (440. lmg，收率 72.3% )。
[0307] 4 MMR(400MHz，DMS0-d6) δ 10. 54(s，1H)，8. 33(s，1H)，8. 27(s，1H)，8. 21(s，1H) ，8.06(d，J = 7.7Hz，lH)，7.96(d，J = 7.7Hz，lH)，7.71(d，J = 7.8Hz，lH)，7.54(d，J = 7. 8Hz, 1H), 6. 88 (dd, J = 17. 7, 10. 2Hz, 1H), 6. 14 (d, J = 17. 7Hz, 1H), 5. 71 (d, J = 10. 2Hz ,1H), 5. 08-4. 94 (m, 1H), 4. 56 (d, J = 10. 5Hz, 1H), 4. 21 (d, J = 10. 9Hz, 1H), 3. 57 (s, 2H), 2. 97-2. 84 (m, 1H), 2. 73-2. 62 (m, 1H), 2. 57 (s, 3H), 2. 39 (br. s, 8H), 2. 19 (s, 3H), 2. 01 (br. s，4H)。MS m/z (ESI) :686. 3181 [M+H]。
[0308] 实施例95激酶抑制实验
[0309] 本实验的目的是检测本发明化合物对体外激酶的抑制活性，采用的方法为同位素 标记法（标记ATP上的γ磷酸基团）。本实验分别对Abl (T315I) (h)、ALK(h)、ARK5 (h)、 Axl (h)、Blk (h)、Bmx (h)、BTK (h)、B-Raf (h)、cKit (h)、cSRC (h)、CDK7、CHK1 (h)、c-RAF (h)、 DDR2 (h)、EGFR (h)、EphAl (h)、EphA2 (h)、EphA8 (h)、EphB2 (h)、EphB4 (h)、ErbB2 (h)、 FAK (h)、Fer (h)、FGFR1 (h)、Flt3 (h)、Fms (h)、Fyn (h)、Hck (h)、GSK3 β (h)、IKK a (h)、 IKK β (h)、Itk (h)、JAK3 (h)、JNK1 a 1 (h)、KDR (h)、Lyn (h)、MAPK1 (h)、MEK1 (h)、Met (h)、 mTOR(h)、PAKl(h)、PDGFRa (h)、Pim-l(h)、PKA(h)、PKBa 〇〇、ΡΚΒβ (h)、PKCa (h)、Ret(h)、 RIPK2 (h)、Src (1-530) (h)、TAK1 (h)、TBK1 (h)、Tec (h) activated、Tie2 (h)、TrkA (h)、 ULK3(h)、Yes(h)、PI3KinaSe a(h)等激酶进行体外活性抑制测试。受试化合物的激酶抑制 活性用IC5。（半数抑制浓度）或受试化合物在10 μ Μ浓度下对激酶活性的抑制率来表示。 IC5。值可通过受试化合物在一系列不同浓度下对激酶活性的抑制率计算而获得。实验方法 如下：在一个反应管中，依次加入缓冲液（8mM MOPS, pH 7. 0, 0· 2mM EDTA，10mM MnCl2)，待测 激酶（5-10mU)、待测激酶的底物，lOmM的醋酸镁和γ 33P-ATP溶液，以及不同浓度的受试化 合物。然后向反应中加入MgATP以启动酶反应过程，并在室温下孵育40分钟。最终用5μ 1 的3%磷酸盐缓冲液终止反应，并把10 μ L的反应液滴定到Filtermat A膜上，用75mM的磷 酸盐溶液洗三次，每次5分钟，再用甲醇洗一次。最后干燥Filtermat A膜并对其进行闪烁 计数，闪烁计数值的大小反映了底物被磷酸化的程度，从而可以表征激酶活性被抑制情况。
[0310] 表1给出了部分受试化合物对部分激酶抑制活性的IC50值。（以下各表中的"一" 均表示未进行测试。）
[0311] 表1部分受试化合物对各种激酶的抑制活性（IC5。:nM)
[0312]

[0313] 结果表明，部分受试化合物对激酶如Abl、Abl (T315I)、c-Src (1-530)、 c-Src (T341M)、B-Raf(V600E)、B-Raf、c-RAF、Yes、Fyn、Blk、Bcr-Abl、KDR、FGFR1、EphA2、 EphB2、EphB4、ErbB2 (h)、DDR1、DDR2、TAK1、TrkA、Btk、Bmx 有较好的抑制活性，对部分激酶 如ΙΚΚα、ΙΚΚβ、Axl、H)GFRa有中等的抑制活性。
[0314] 表2给出了部分受试化合物对c-Src (1-530)激酶抑制活性的IC5。值。
[0315] 表2部分受试化合物对c-Src激酶的抑制活性（IC5。:nM)
[0316] 1
[0318] 结果表明，部分受试化合物对Src激酶有较好的抑制活性。
[0319] 表3给出了部分受试化合物在101^的浓度下分别对六131〇'3151)〇1)、八1^〇1)、 ARK5 (h)、Axl (h)、Blk (h)、Bmx (h)、BTK (h)、B-Raf (h)、cKit (h)、cSRC (h)、CDK7、CHK1 (h)、 c-RAF (h), DDR2 (h), EGFR (h), EphAl (h) , EphA2 (h), EphA8 (h), EphB2 (h) , EphB4 (h), ErbB2 (h)、FAK (h)、Fer (h)、FGFR1 (h)、Flt3 (h)、Fms (h)、Fyn (h)、Hck (h)、GSK3 β (h)、 IKK a (h)、IKK β (h)、Itk (h)、JAK3 (h)、JNK1 α 1 (h)、KDR (h)、Lyn (h)、MAPK1 (h)、MEK1 (h)、 Met(h)、mTOR(h)、PAKl(h)、PDGFRa (h)、Pim-l(h)、PKA(h)、PKBa 〇〇、ΡΚΒβ (h)、PKCa (h)、 Ret (h)、RIPK2 (h)、Src a-530) (h)、TAK1 (h)、TBK1 (h)、Tec (h) activated、Tie2 (h)、 TrkA(h)、ULK3(h)、Yes(h)、PI3KinaSe a(h)激酶活性的抑制率（数值表示相对活性蛋白百 分比）。
[0320] 表3部分受试化合物在10 μ Μ的浓度下对部分激酶的抑制率
[0321]
[0322]
[0323]
[0324] 结果表明，部分受试化合物对 Ab 1 (T3151)、Αχ 1、B1 k、Bmx、BTK、B-Raf、cSRC、c-RAF、 DDR2、EphAl、EphA2、EphA8、EphB2、EphB4、ErbB2、FGFR1、FIt3、Fms、Fyn、Hck、IKK a、IKK β、 Itk、JAK3、KDR、Lyn、PDGFR a、Ret、RIPK2、Src (1-530)、TAK1、Tec、Tie2、TrkA、ULK3、Yes 有 较好的抑制活性。部分受试化合物对ALK、cKit、EGFR、FAK、Fer、JNK1 a 1、PKA、PKB β有中 等的抑制活性。
[0325] 实施例96细胞增殖抑制实验
[0326] 本实验的目的是检测本发明化合物对体外人肿瘤细胞增殖抑制活性，采用的方法 为ΜΤΤ (四甲基偶氮唑盐）比色法。
[0327] 1)实验材料：
[0328] 主要试剂：RPMI-1640、胎牛血清、胰酶等购自Gibco BRL公司（Invitrogen Corporation，USA)，DMEM 培养基购自 ATCC(American Type Culture Collection)。四甲基 偶氮唑盐（ΜΤΤ)、二甲基亚砜（DMSO)为Sigma公司（USA)产品。化合物3和化合物31由发 明人合成，体外实验时用100% DMS0配制成10mM储存液，置-20°C冰箱避光保存备用，临用 时用完全培养液稀释至所需浓度。
[0329] 细胞系及培养：本实验所用的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7、SKBR-3、 BT474、MDA-MB-468、MDA-MB-453、MDA-MB-435,大 B 细胞淋巴瘤细胞株 LY-10、HBL-1，人胰 腺癌细胞株Panc-1、Miapaca-2,人肺癌细胞株A549、H358,人白血病细胞株THP-1，人肝 癌细胞株Hepg2,人黑色素瘤细胞株A2058等均购于美国ATCC(American type culture collection)，由本实验室保存。以上所有人淋巴瘤细胞株、大B细胞淋巴瘤细胞株、T细胞 淋巴瘤细胞株用含10%胎牛血清、1001]/1^青霉素、10(^8/1^链霉素的1?^1-1640完全培 养基在5% C02、37°C条件下培养。其余细胞株使用含10%胎牛血清（MV4-11细胞为20% )、 100U/ml青霉素、100 μ g/mL链霉素的DMEM完全培养基在5% C02、37°C条件下培养。
[0330] 2)实验方法：
[0331] 用完全细胞培养液调整细胞浓度为1~2X 104个/mL的细胞悬液，接种于96孔 板，每孔200 μ L细胞悬液，培养过夜。次日，吸弃上清（悬浮细胞离心后吸取上清），然后分 别用梯度浓度的受试化合物处理细胞。同时设不含药物的阴性对照组和等体积的溶剂对照 组，DMS0浓度为0. 1%，每个剂量组设3个复孔，在37°C，5% C02条件下培养。72小时后，每 孔加入浓度为5mg/mL的MTT试剂20 μ L，再培养2-4h后，弃上清，每孔再加入DMS0 150 μ L， 振荡混匀15min，用酶标仪（λ = 570nm)测定吸光度（Α)值（Α值与活细胞数成正比），取其 平均值。相对细胞增殖抑制率=(对照组A570-实验组A570) X 100% /对照组A570。实 验至少重复3次。实验数据用均数表示，数据统计资料采用t检验，P〈0. 05为差异有统计 学意义。以下各化合物对细胞增殖抑制作用均用IC5。或抑制率表示。
[0332] 3)实验结果：
[0333] 采用以上方法，对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7、SKBR-3、BT474、 MDA-MB-468、MDA-MB-453、MDA-MB-435,大 B 细胞淋巴瘤细胞株 LY-10、HBL-1，人胰腺癌细 胞株Panc-1、Miapaca-2,人肺癌细胞株A549、H358,人白血病细胞株THP-1，人肝癌细胞株 Η印g2,人黑色素瘤细胞株A2058等进行了增殖抑制活性测试，结果见表4。
[0334] 表4部分受试化合物对各种细胞株的增殖抑制活性（IC5。： μ M)
[0335]
[0336] 结果表明，受试化合物3和化合物31对MV4-11、Miapaca-2、MDA-MB-231、 MDA-MB-435、A375细胞具有较强的抑制活性；受试化合物3和化合物31对其它肿瘤细胞株 包括CFPAC、U87、MM. 1S、HCT116、HT29、A549等也具有中等的抑制活性。
[0337] 部分受试化合物对MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞的增殖抑制活性见表5。其中， IC5(]〈100nM 用符号 ++++ 表示，100nM〈IC5Q〈500nM 用符号 +++ 表示，500nM〈IC5Q〈1000nM 用符 号++表不，IC5Q>1000nM用符号+表不。
[0338] 表5化合物对MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞的增殖抑制活性
[0339]
[0341] 结果表明，部分受试化合物对MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞较强的增殖抑制活 性。
[0342] 实施例97化合物3和化合物31对SCID裸鼠的体内药效学实验
[0343] 本实验的目的是检测本发明化合物的体内抗肿瘤效果。本实验使用SCID小鼠皮 下肿瘤模型，测试发明化合物3和化合物31的体内抗肿瘤活性。所用细胞株为乳腺癌细胞 株MDA-MB-231。以正在使用的抗乳腺癌药物紫杉醇和乳腺癌临床在研的上市药物达沙替尼 为阳性对照。
[0344] 1)实验材料：
[0345] 胎牛血清、膜酶等购自 Gibco BRL 公司（Invitrogen Corporation，USA)，DMEM 培 养基购自 ATCC(American Type Culture Collection)，人乳腺癌细胞株 MDA-MB-231 购于美 国ATCC公司，SCID小鼠购于中国北京华阜康生物科技股份有限公司。紫杉醇购自中国上 海瀚香生物技术有限公司。达沙替尼购自中国南京康满林化工实业有限公司。
[0346] 2)实验方法：
[0347] 使用6~8周龄SCID小鼠，按照约5 X 106个/0. lmL/只MDA-MB-231细胞浓度接 种于小鼠皮下后肋部，待肿瘤长到200mm3后（约15天），小鼠分组（η = 6)并开始给药。各 组药物溶解于 5 % DMS0+25 % PEG-400+70 % 水。
[0348] 实验分组一：
[0349] 药物溶剂对照组，每天口服灌胃空白溶剂200uL ;
[0350] 化合物3按剂量30mg/kg每天口服灌胃给药；
[0351 ] 化合物3按剂量15mg/kg每天口服灌胃给药.；
[0352] 化合物3按剂量7. 5mg/kg每天口服灌胃给药；
[0353] 阳性对照紫杉醇按剂量10mg/kg每周尾静脉注射给药；
[0354] 实验分组二：
[0355] 药物溶剂对照组，每天口服灌胃给药空白溶剂200uL ;
[0356] 化合物31按剂量40mg/kg每天口服灌胃给药；
[0357] 化合物31按剂量20mg/kg每天口服灌胃给药；
[0358] 化合物31按剂量10mg/kg每天口服灌胃给药；
[0359] 阳性对照紫杉醇按剂量10mg/kg每周尾静脉注射给药；
[0360] 阳性对照达沙替尼按剂量40mg/kg每天口服灌胃给药。
[0361] 观察指标：每三天测量一次小鼠体重及肿瘤长径、短径并计算肿瘤体积 (lengthXWidth2X0. 5)。每天观察各组小鼠有无腹泻，抽搐，皮瘆，体重明显降低等反应。
[0362] 3)实验结果：
[0363] 实验测得的实验分组一的肿瘤生长曲线见图1，实验测得的实验分组二的肿瘤生 长曲线见图图2。
[0364] 实验结果表明，受试化合物3对乳腺癌细胞株MDA-MB-231具有明显的体内生长抑 制作用，在每天30mg/kg的剂量下，可以明显抑制肿瘤生长，并表现出优于阳性对照（紫杉 醇）的抑制效果。化合物31对乳腺癌细胞株MDA-MB-231具有明显的体内生长抑制作用， 在每天20mg/kg的剂量下，可以明显抑制肿瘤生长，并表现出优于阳性对照（紫杉醇及达沙 替尼）的抑制效果。给药过程中未发现小鼠出现体重降低、皮疹、腹泻等不良反应，表明在 测试剂量下，受试化合物3及化合物31在给药剂量范围内毒性较低。
[0365] 实施例98化合物31的转基因斑马鱼血管生成的抑制活性测试
[0366] 本实验的目的是检测发明化合物对体内新生血管的抑制活性，采用的方法是考察 多个浓度下本发明化合物对转基因荧光斑马鱼FLK1-GFP体节间血管的抑制情况。受试化 合物的新生血管抑制活性用受试化合物在10ug/mL、5ug/mL、2. 5ug/mL浓度下对斑马鱼体 节间血管的抑制程度来表示。以乳腺癌临床在研的上市药物达沙替尼为阳性对照。
[0367] 1)实验材料：
[0368] 转基因斑马鱼（FLK1-GFP):本实验室养殖
[0369] 实验试剂：二甲基亚砜（DMS0);受试化合物；达沙替尼
[0370] 主要实验仪器：荧光显微镜；体视显微镜；C⑶相机等。
[0371] 2)实验方法：
[0372] 斑马鱼胚胎的获得：实验室所用的斑马鱼为血管荧光转基因斑马鱼（FLK1 :GFP)。 斑马鱼的养殖和培育参照Westerfield的方法。在取卵的前一天，将雌雄斑马鱼按1:1比 例配对。第二天在28°C左右的温度和充足的光照下使其自然交配产卵。采集足够的斑马鱼 胚胎，清洗后放于胚胎培养液中，并放入28°C培养箱培养。利用形态和发育学标准来随时鉴 定存活情况，已死的胚胎呈白色，应及时取出以防止水质变坏。
[0373] 药物处理：在斑马鱼胚胎受精后10h (显微镜下观察斑马鱼胚胎发育至bud期） 后，随机选取健康的胚胎分组，加入24孔板，每孔10个斑马鱼胚胎，吸净培养液，再加入不 同浓度化合物溶液。化合物31浓度设置分别为10ug/mL、5ug/mL、2. 5ug/mL。达沙替尼浓度 设置分别为10ug/mL。同时设空白对照，不加入任何化合物。然后将其放入28°C培养箱培 养。结果观察：在斑马鱼胚胎受精31h后，取出斑马鱼并剥卵。然后将其放于载玻片上，加入 1%。三卡因溶液麻醉鱼体并用1. 5%甲基纤维素固定鱼体，接着在荧光显微镜下对体节间血 管（Inter segmental vessel, ISV)进行观察计数拍照。
[0374] 3)实验结果：
[0375] 图3反映的是化合物31在不同浓度下对FLK1转基因斑马鱼的血管抑制情况。结 果表明，和对照组相比，化合物31能很好地抑制斑马鱼的血管生成。本实验结果表明，本发 明实施例中制得的化合物31对FLK1转基因斑马鱼的新生血管很好的抑制活性，这一结果 反映了化合物31对VEGFR2具有很好的抑制活性。
【主权项】
1. 3-己快基化哇并嚼巧衍生物，其结构如式I所示：其中，Ri为-H、Ci~〇4烷基-Rz为-H、Ci~Cs烷基、Rs取代的C3~Cs环烷基、C3~Cs环氧烷基、尺3~R 7独立地为-H、C 1~C S烷基、-OH、C 1~C S烷氧基、因素、 ^ 或咕~R11独立地为-H、C 1~C S烷基、因素、-OH、Ri2~R 14独立地为Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C S烷基、-OH、C 1~C S烷氧基、因素 、-CF 3、-OCF3尺2。~R 38独立地为-H、因素 、C 1~C S烷基、C 1~C S环烷基、-OCF 3或-CF 3; Rsg~R 42独立地为C 1~C S烷基、C 3~C S环烷基或C 1~C S居基烷基； η 二 0 ~6。2. 根据权利要求1所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物，其特征在于： Ri为-Η或Rz为-H、Ci~C4烷基、Cs~Cs环氧烷基、Rs~R 7独立地为-Η、C 1~C 4烷基、-OH、C 1~C 4烷氧基、因素、 或Rs~Rii独立地为-H、C 1~C4烷基、因素、-OH、Ri2~R 14独立地为Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OH、C 1~C 4烷氧基、因素 、-CF 3、-OCF3、尺2。~R 38独立地为-H、因素 、C 1~C 4烷基、C 1~C 4环烷基、-0CF 3或-CF 3; Rse~R 42独立地为C 1~C 4烷基、C 3~C S环烷基或C 1~C 4居基烷基； η = 0 ~4 ; 优选的，Ri为-Η或I t > R2为-H、Ci~C4烷基、Rs取代的C3~Cs环烷基、C3~Cs环氧烷基、尺3~R 7独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OH、C 1~C 4烷氧基、因素、 击 或Rs~R 11独立地为-Η、C 1~C 4烷基、-OH、Ri5~R 19独立地为-Η、c 1~C 4烷基、-OH、C 1~C 4烷氧基、因素 、-CF 3、-OCF3、R2。~R 38独立地为-Η、因素 、c 1~C 4烷基、c 1~C 4环烷基、-OCF 3或-CF 3; Rse~R 42独立地为C 1~C 4烷基、C 3~C S环烷基或C 1~C 4居基烷基； η = 0 ~4 ; 进一步优选的，Ri为-Η或R2为-H、C 1~C 4烷基、Rs取代的C 3~C S环烷基、女/\0/〔3~C S环氧烷基、尺3~R 7独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基、因素、 f 或：Rs~R 11独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OHRi2~R 14独立地为Ri5~R 19独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基、因素 、-CF 3、-0灯尺2。~R 38独立地为-Η、因素 、C 1~C 4烷基、c 1~C 4环烷基、-OCF 3或-CF 3; Rse~R 42独立地为C 1~C 4烷基、C 3~C S环烷基或C 1~C 4居基烷基； η = 0 ~4 ; 更进一步优选的，Ri为-Η或R2为-H、C 1~C 4烷基、取代的C 3~C S环烷基、究~0/、C3~C S环氧烷基、尺3~R 7独立地为-H、C广C 4烷基、-OH、C广C 4烷氧基、因素、 ^ 或Rs~R 11独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OH、Ri2~R 14独立地为Ri5~R 19独立地为-H、C广C 4烷基、-〇H、C 1~C 4烷氧基、因素 、-CF 3、-0CF3或尺2。~R 38独立地为-H、因素 、C 1~C 4烷基、C 1~C 4环烷基、-0CF 3或-CF 3; η 二 0 ~2 ; 最优的，Ri为-Η或R2为-H、c广C 4烷基、Rs取代的C 3~C S环烷基、C3~C巧氧烷基、尺3~R 7独立地为-H、C 1~C 4烷基、-〇H、C 1~C 4烷氧基、-F 或9.. Rs~R 11独立地为-Η、C 1~C 4烷基、-OH、Ri2~R 14独立地为Ri5~R19独立地为-Η、c 1 ~C 4烷基、-OH、C1 ~C 4烷氧基、-F、-Cl、-CF 3、-OCFs'或Rw~R 3孤立地为-H、C广C 4烷基或-CF 3;n = 0或1。3.根据权利要求2所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物，其特征在于：当Re为时，其结构如式II所示：其中，Ri为-H或R2为-H、C广C 4烷基、咕取代的C 3~C S环烷基、或~0:/、C3~C S环氧烷基、η 二 0 ~4 ; 尺3~R 5、Rr独立地为-Η、C 1~C 4烷基、-0Η、C 1~C 4烷氧基或因素； 咕~R 11独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OHR。为Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C 4烷基、-〇H、C 1~C 4烷氧基、因素 、-CF 3、-0CF3.或尺2。~R 38独立地为-Η、C 1~C 4烷基或-CF 3。4.根据权利要求3所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物，其特征在于；R 1为-Η或优选的，R2为Cl~〇4烷基、Rs取代的~C巧烷基、~C3~C巧氧烷基、η = 0~4 ;Rs~R U独立 地为-H、Ci~C4烷基、-OH、进一步优选的，R2为C广C 4烷基、R S取代的C 3~C S环烷基、1 = 0~4 ;Rs~Rn独立 地为-H、Ci~C4烷基、-OH再进一步优选的，Rz为C 1~C 4烷基、R 8取代的C 3~C巧烷基、1 = 0~2;咕~1?11独立地 为-H、Ci~C4烷基、-OH、更进一步优选的，R2为C 1~C 4烷基、R S取代的C 3~C S环烷基、 n = 0或1 ;Rs~Rii独立地 '-' 、 -甘、·' 为-H、Ci~C4烷基、-OH、优选的，Rs~R 5、Rr独立地为-H、C 1~C 4烷基或因素； 进一步优选的，Rs~R 5、Rr独立地为-H、C 1~C 4烷基、-F或-C1 ; 更进一步优选的，Rs~R 5、Rr独立地为-H、甲基或-C1 ; 优选的，Ri5~Ri9独立地为-Η、Cl~〇4烷基、Cl~〇4烷氧基、因素、-CFs、-OCFs或进一步优选的，Ri5~R 19独立地为-Η、C 1~C 4烷基、甲氧基、-F、-Cl、-CF 3、-OCF3或最优的，Ri为-H或R2为C 1~C 4烷基、R S取代的C 3~C S环烷基、η = 0或1斯~R 5、咕独立地为-H、甲基或-C1 ;R S~R η独立地 为-Η、Cl~C 4烷基、-OH、Ri5~R 1迦立地为-H、C 1~C 4焼 基、甲氧基、-F、-C1、-CFs、-OCF3或.R2。~R 3孤立地为-H、C 1~C 4烷基或-CF 3。5.根据权利要求2所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物，其特征在于：当Re为时，其结构如式III所示：其中，Ri为-H或R2为-H、C 1~C 4烷基、Rs取代的C 3~C S环烷基、表、C3~C S环氧烷基、 D .η 二 0 ~4 ; 尺3~R 5、Rr独立地为-Η、C 1~C 4烷基、-0Η、C 1~C 4烷氧基或因素； Rs~R 11独立地为-Η、C 1~C 4烷基、-OH、R。为Ri5~R 19独立地为-H、C广C 4烷基、-〇H、C 1~C 4烷氧基、因素 、-CF 3、-0化或尺2。~R 38独立地为-H、C 1~C 4烷基或-CF 3。6.根据权利要求5所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物，其特征在于： R2为Cl~〇4烷基、Rs取代的C3~Cs环烷基、C3~Cs环氧烷基、η = 0~4 ;而、Rs独立地为-H、C 1~C 4焼 基、-OH、进一步优选的，R2为C 1~C 4烷基、咕取代的C 3~C S环烷基、〔3~ Cs环氧烷基咕、1?9独立地为-山(：1~〇4焼 基-再进一步优选的，Rz为C 1~C 4烷基、R 8取代的C 3~C S环烷基-〔3~C S环氧焼 基、或更进一步优选的，R2为C 1~C 4烷基、R班X代的C 3~C S环烷基C3~C S环氧焼 基、咕、Rs独立地为-H、C 1~C 4烷基优选的，Rs~R 5、而独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OH或因素； 进一步优选的，Rs~R 5、Rr独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OH或-C1 ; 优选的，R。为优选的，Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C 4烷基、C 1~C 4烷氧基、因素 、-CF 3或进一步优选的，Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C 4烷基、因素 、-CF 3或更进一步优选的，Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C 4烷基、-CF 3或优选的，R2。~R 38独立地为-H或C 1~C 4烷基；最优的，Ri为-H或,： . .R2为Cl~〇4烷基、Rs取代的C3~ t" ? Cs环烷基、文~0/〔3~C S环氧烷基、；Rs~R 5、咕独立地为-H、C 1~ C4烷基、-OH或-C1 ;R s、R9独立地为-H、C 1~C 4烷基、Ri5~R 1迦立地为-H、C广C 4烷基、-CF 3或尺2。~R 3孤 立地为-H或。~〇4烷基。7.根据权利要求5所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物，其特征在于：当Ri3为时，其结构如式IV所示：其中，Ri为-H或R2为-H、Ci~C4烷基、Rs取代的C3~Cs环烷基、C3~Cs环氧烷基、 η 二 ο ~4 ;Rs~R 5、咕独立地为-Η、c 1~C 4烷基、-OH、C 1~C 4烷氧基或因素； Rs~R 11独立地为-Η、C 1~C 4烷基、-OH、Ri5~R 1迦立地为-H、C 1~C 4烷基、-〇H、C 1~C 4烷氧基、因素 、-CF 3、-0CF3或8.根据权利要求7所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物，其特征在于：R2为Cl~〇4烷基 Rs取代的C3~Cs环烷基、 C3~Cs环氧烷基、 Vη = 0~4 ;馬、R9独立地为-H、C 1~C 4焼 ， 基、-0Η、进一步优选的，R2为Cl~C 4烷基、Rs取代的C3~Cs环烷基、C3~ Cs环氧烷基、枯、39独立地为寸、(：1~〇4焼 基、-OH、再进一步优选的，Rz为C 1~C 4烷基、R 8取代的C 3~C S环烷基、〔3~C巧氧 烷基、Rs、R9独立地为-H、C 1~C 4烷基、或更进一步优选的，Rz为C 1~C 4烷基、R 8取代的C 3~C S环烷基、〔3~C S环氧焼 基、优选的，Rs~R 5、Rr独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OH或因素； 进一步优选的，Rs~R 5、R7独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OH或-C1 ; 优选的，Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C 4烷基、c 1~C 4烷氧基、因素 、-CF 3或进一步优选的，Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C 4烷基、因素 、-CF 3或9更进一步优选的，Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C 4烷基、-CF 3或 -. i ; 最优的，Rl为-Η或R2为Cl~〇4烷基、Rs取代的C3~Cs环烷基.C3~ Cs环氧烷基、Rs~Rs、Rr独立地为-H、C广〇4烷基、-OH或-C1 ; 馬、R迦立地为-H、C 1~C 4烷基、；15~R 19独立地为-H、C广C 4焼 基、-CFa或9.根据权利要求2所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物，其特征在于：当Re为才，其结构如式V所示：其中，Rl为-H或尺2为-H、Ci~C4烷基、C3~Cs环氧烷基、η 二 0 ~4 ; 尺3~R 5、咕独立地为-Η、C 1~C 4烷基、-0Η、C 1~C 4烷氧基或因素； 咕~R 11独立地为-Η、C 1~C 4烷基、-0Η、Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C 4烷基、-〇H、C 1~C 4烷氧基、因素 、-CF 3、-0CF3、威尺2。~R 38独立地为-Η、C 1~C 4烷基或-CF 3。10. 根据权利要求9所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物，其特征在于；R1为-Η或优选的，Rz为C广C 4烷基、〔3~C巧氧烷基、,. ， η = 0 或 1 ;R9为 C 1~C 4烷基、-OH、进一步优选的，R2为Cl~C 4烷基、R9为Cl~C4 烷基、-OH或再进一步优选的，R2为C 1~C 4烷基或R9为C广C 4烷基； 优选的，Rs~R 5、咕独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OH或因素； 进一步优选的，Rs~R 5、Rr独立地为-H、C 1~C 4烷基或因素； 更进一步优选的，Rs~R 5、Rr独立地为-H、C 1~C 4烷基或-C1 ; 优选的，Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C 4烷基、-OH、C 1~C 4烷氧基、因素或-CF 3; 进一步优选的，Ri5~R 19独立地为-H、C 1~C 4烷基、因素或-CF 3; 更进一步优选的，Ri5~R 19独立地为-H或-CF 3; 最优的，Ri为-H ;R 2为C 1~C 4烷基或Rs~R 5、Rr独立地为-H、C 1~C 4焼 基或-C1恥为C 1~C 4烷基；R 15~R 19独立地为-H或-CF 3。 11. 3-己快基化哇并嚼巧衍生物，其特征在于：其结构式为12. 权利要求1~11任一项所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物药学上可接受的盐。13. 权利要求1~11任一项所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物药学上可接受的水合 物。14. 一种药物组合物，是由1~11任一项所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物、权利要 求12所述的盐或权利要求13所述的水合物添加药学上可W接受的辅助性成分制备而成 的。15. 权利要求1~11任一项所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物、权利要求12所述的 盐或权利要求13所述的水合物在制备激酶抑制剂中的用途。16. 权利要求1~11任一项所述的3-己快基化哇并嚼巧衍生物、权利要求12所述的 盐或权利要求13所述的水合物在制备治疗肿瘤药物中的用途。
【文档编号】C07D487/04GK105837575SQ201510016197
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2015年1月13日
【发明人】杨胜勇, 魏于全
【申请人】四川大学