含1,3,4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物、其制备方法及应用
【专利摘要】本发明公开了一种含1,3,4?噁二唑的4?羟基吡咯啉?2?酮衍生物、其制备方法及应用，结构通式(I)如下：I式中：R1为取代芳烃，取代苄基；R2为取代芳烃，氢。本发明具有较好的抗细菌及抗植物病毒活性，且化合物稳定。
【专利说明】
含1 ,3,4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物、其制备方法及 应用
技术领域
[0001] 本发明涉及化学技术领域，具体来说涉及一种含1，3,4_噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物，同时还涉及该含1，3,4_噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物的制备方法及该 含1，3，4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物在抗植物细菌和抗植物病毒方面的应用。
[0002]
【背景技术】
[0003] 4-羟基吡咯啉-2-酮类化合物是一种天然产物类似物，具有杀菌、除草、杀虫、抗肿 瘤、抗病毒等广泛的农药和医药生物活性从而引起了研究者广泛的兴趣并深入研究得到许 多具有生物活性的新型药物，该类化合物结构多变但都含一个共同的结构单元五元内酰胺 环。1，3,4_噁二唑结构的化合物是杂环化学中一类比较重要的衍生物，因其具有良好的药 物活性如:抗细菌、抗真菌、抗炎、抗焦虑及抗结核等而被广泛关注。将1，3，4-噁二唑环引入 不同的化合物结构中，通过结构修饰能生成一系列具有广谱生物活性的化合物，它在新型 农药创制中发挥越来越重要的作用。
[0004] 在抗细菌方面，2008年，Peukert等（i?ioo_rg·. ifec/. Zeii.，2008，251， 1840-1844.)设计合成了3个吡咯啉酮类衍生物，抑菌活性测试结果表明，所有化合物对金 黄色葡萄球菌的MIC5Q均为0.5 //g/mL· 2015年，Li等(j9ioo_rg·. ifec/. Zeii·，2015， 481-484.)报道了一系列2-巯基-5-取代1，3,4 -噁二唑化合物，生物活性测试结果 表明，大部分化合物对水稻白叶枯病菌和番茄青枯病菌具有很好的抑制活性，其中化合物 2-巯基-5- (4-氟苯基）-1，3，4_噁二唑对水稻白叶枯病菌和番茄青枯病菌的EC5Q分别为 17.20 //g/mL和41.37 //g/mL均低于对照药剂噻菌酮和叶枯坐的EC5〇(59.69 //g/mL，99.80 // g/mL)〇
[0005] 抗真菌方面，2014年，Lu(CAi/3. Zeii.，2014，61-64.)等报道一系列 新型含甲氧基丙烯酸吡咯啉-2，4_二酮化合物1-57对其进行抗真菌活性测试结果表明，在 当药剂浓度为100 pg/mL时，大部分化合物对水稻纹枯病菌具有很好的抑制活性。2014年， Li等2014，％，1677-1680.)合成一系列5-取代苄基-2-磺酰 基取代-1，3，4-噁二唑类化合物，生物活性测试结果表明该类化合物对水稻纹枯病菌和稻 瘟病菌具有较好的抑制活性，化合物4-氟苄基-2-甲磺酰基-1，3,4-噁二唑类对水稻纹枯病 菌和稻瘟病菌都具有很好的抑制活性，其EC 5q值分别为1.1牌/mL和7.1牌/mL。
[0006] 在抗植物病毒方面，2013年，Xu 等（5ioorg·. #ec/. Zeii.，2013，M， 5821-5824.)合成了一系列含1，2，3-噻二唑及1，3，4-噁二唑类化合物，抗烟草花叶病毒测 试结果表明：该类化合物具有很好的抗病毒活性，在500 ;g/mL浓度下，部分化合物对烟草 花叶病毒的钝化活性分别为90.3%和85.5%略低于对照药剂宁南霉素(92.5%)。
[0007] 综上所述，吡咯啉酮类化合物具有较好的杀菌活性以及1，3,4_噁二唑类化合物表 现出较好的抗细菌，抗真菌和抗病毒活性。但是1，3，4-噁二唑砜类化合物不稳定。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于克服上述缺点而提供一种具有较好的抗细菌及抗植物病毒活性，且 化合物稳定的含1，3，4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物。
[0009] 本发明的另一目的在于提供该含1，3,4_噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物的制 备方法。
[0010] 本发明的再一目的在于提供该含1，3,4_噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物在抗 植物细菌及抗植物病毒方面的应用。
[0011] 特别是在抗烟草花叶病毒方面和抑制水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌与柑橘溃疡 病菌方面的应用。
[0012] 本发明的含1，3，4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物，其结构通式(I)如下：
式中： 办为取代芳烃，取代苄基;R2为取代芳烃，氢。
[0013] 优选： 办选自邻，间，对位卤素取代芳基，邻，间，对位烷氧基取代； R2选自邻，间，对取代卤素芳基，邻，间，对取代烷氧基芳基，苯基，氢;所述卤原子为 氟、氯、溴、碘。
[0014] 优选化合物如表1所示：
含1，3，4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物，其制备方法如下：
一种含1，3,4_噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物在用于抑菌和抗病毒的药物和药剂 方面的应用。
[0015] -种含1,3,4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物在抗烟草花叶病毒方面和抑制 水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌与柑橘溃疡病菌方面的应用。
[0016] 本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知:通过对一系 列含1，3,4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物的合成并测试该类衍生物的抗植物细菌及 抗植物病毒活性。测试结果显示，不但对水稻白叶枯病菌具有较好的抑制活性，对柑橘溃疡 病菌具有一定的抑制活性同时还保持了一定的抗烟草花叶病毒的活性，且本发明化合物稳 定。
[0017] 具体实施方法 实施例1:3-(5-(苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫基)-1-(4-甲基苯基)-4-羟基-吡咯啉-2酮 (八-1)，包括以下步骤： (1) 苯甲酸乙酯的制备 在100 mL圆底烧瓶中加入2.0 g (16.38 mmol)苯甲酸，加50 mL乙醇溶解，并滴加1 mL(20.1 mmol)浓硫酸，加热回流2 h，TLC检测反应结束，饱和碳酸钠溶液调pH至7左右，二 氯甲烷(30mLX3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，脱溶，柱层析(PE:EA=10:1，K/K)得 无色油状液体2.2 g，产率89.4%; (2) 苯甲酰肼的制备 在100mL圆底烧瓶中加入2 g (13.32 mmol)苯甲酸乙酯，50 mL无水乙醇作为溶剂，加 入l.OOg (19.98 mmol) 80%水合肼，将体系置于油浴温度为80 °C下，加热回流6h，TLC检测 反应结束，减压蒸馏除去溶剂，向体系中加入30 mL纯净水，用二氯甲烷萃取，最后得白色片 状晶体 1.7 g，产率93.9·%，熔点 112 -114 °C。
[0018] (3 ) 5-(苯基)-1，3，4-噁二唑-2-硫醇的制备 在100 mL圆底烧瓶加入1.5 g (11.02mmol)苯甲酰肼和0.93 g(16.53 mmol)氢氧化 钾，并加入50 mL甲醇溶解，滴加1.00 mL (16.53 mmol)二硫化碳，在室温条件下搅拌12h， TLC检测5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-硫醇全部变为5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-硫 钾盐，再加入0.62 g (11.02 mmol)氢氧化钾，油浴温度为80 °C下加热回流8h，TLC检测 反应结束，减压蒸馏除去溶剂，加入30mL纯净水，用1M HC1调节pH值为2~3，体系析出大量 白色固体，抽滤，水洗，烘干，乙醇重结晶，得淡黄色固体1.71 g，收率87.2%，熔点：219-2220C。
[0019] ⑷Λ^(4-甲基苯基)-甘氨酸乙酯的制备 在100 mL三口烧瓶中加入2 g (18.66 mmol) 4-甲基苯胺、1.84 g (22.40 mmol)无水 醋酸钠、2.74 g (22.40 mmol)氯乙酸乙酯和30 mL无水乙醇在油浴温度为85 °C下加热回流 6-8 h，TLC检测反应结束，反应结束后向体系中加入20 mL纯净水，此时体系为橘红色液体， 待体系冷却至室温后，用二氯甲烷(20 mLX3)萃取，柱层析(PE:EA=10:1，K/K)分离纯化得 到白色絮片状固体2.9 g，收率80.3 %，熔点：57-58 °C。
[0020] (5)，(2-溴乙酰基)-，(对甲苯基)甘氨酸乙酯 在100 mL烧瓶中加入3.0 g(15.52 mmoDA^(对甲苯基)甘氨酸乙酯，50 mL二氯甲烧作 溶剂，在冰浴条件下用恒压滴液漏斗向体系中滴加4.70g (23.29mmo 1)溴乙酰溴，待滴加完 毕后，体系在室温下搅拌2h，TLC检测反应结束，加入10mL纯净水，减压蒸馏出去溶剂，柱层 析(PE:EA=10:1，K/K)分离纯化得到淡黄色晶体3.3 g，收率67.7 %，熔点：137-138°C (6 )，对甲苯基-ΛΚ 2- (5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-硫基）乙酰基)甘氨酸乙酯的制备 在50 mL烧瓶中加入0.2 g(1.12 mmol) 5-(苯基）-1，3,4_噁二唑-2-硫醇，0.19g (1.35 mmol)碳酸钾，20 mL丙酮作溶剂，再向反应并瓦中加入0.35g (1.12 mmol) #-(4-甲基 苯基)_甘氨酸乙酯，在室温下搅拌6 h，TLC检测反应结束，体系析出大量白色固体，TLC检测 反应结束，加入10mL冰水继续搅拌1 h，抽滤，水洗，得到白色粉末状固体0.28 g，产率为 60.63%〇
[0021] (7)3-(5-(苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫基)-1-(4-甲基苯基)-4-羟基-吡咯啉-2-酮 的制备 在50 mL圆底烧瓶中加入0.20 g (0.49 mmol)，对甲苯基-(2-(5-苯基-1，3,4-噁二 唑-2-巯基）乙酰基）甘氨酸乙酯，20 mL丙酮作为溶剂，加入固体叔丁醇钾0.11 g (0.97 mmo 1 )，室温搅拌24 h，待TLC监测反应完全，反应中体系中析出大量的固体，抽滤，水洗，甲 醇重结晶得到淡黄色固体0.08 g，产率为45.0%，熔点：198-200°C。
[0022]本发明含4-羟基吡咯啉-2-酮及1，3，4_噁二唑类衍生物的工艺步骤及工艺条件， 3-(5-(苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫基)-1-(4-甲基苯基)-4-羟基-吡咯啉-2酮为例说明，其 他不同取代R4PR2以此例参照合成。
[0023] 实施例2:3-(5-(苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫基)-1-苯基-4-羟基-吡咯啉-2酮(A- 2) (1) 苯甲酸乙酯的制备 如实施例1 (1)方法和条件合成， (2) 苯甲酰肼的制备 如实施例1 (2)方法和条件合成。
[0024] (3 ) 5_(苯基)-1，3，4-噁二唑-2-硫醇的制备 如实施例1 (3)方法和条件合成。
[0025] (4)，(4_苯基)_甘氨酸乙酯的制备 如实施例1 (4)方法和条件合成，将（18.66 mmol) 4-甲基苯胺换为（21.48 mmol)苯 胺。
[0026] (5)，(2_溴乙酰基)_，(苯基)甘氨酸乙酯 如实施例1 (5)方法和条件合成，将（15.52 mmol)，（对甲苯基）甘氨酸乙酯换为 (16.76 mmoDA^(对甲苯基)甘氨酸乙酯 (6 )ΛΚ 2-溴乙酰基)-，苯基-(2-(5-苯基-1，3，4_噁二唑-2-巯基）乙酰基)甘氨酸乙酯 的制备 如实施例1 (6)方法和条件合成，将（1.12 mmol) ΛΗ4-甲基苯基)-甘氨酸乙酯换为 (1.12 mmol) f苯基-甘氨酸乙酯。
[0027] (7)3-(5-(苯基)-13,4-噁二唑-2-巯基)-1-(4-甲基苯基)-4_羟基-吡咯啉-2酮 的制备 如实施例1 (7)方法和条件合成。将(0.49 mmol)，对甲苯基-(2-(5-苯基-1，3,4-噁 二唑-2-巯基）乙酰基)甘氨酸乙酯换为(0.50mmol)，苯基-(2-(5-苯基-l，3,4-噁二唑-2-硫基）乙酰基)甘氨酸乙酯 实施例3:3-(5-(4-氟苯基)-1,3,4-噁二唑-2-硫基)-1-(4-氯苯基)-4-羟基-吡咯啉-2 酮(A-4) (1) 4-氟苯甲酸乙酯的制备 如实施例1 (1)方法和条件合成，区别在于将(16.38 mmol)苯甲酸换为（14.27 mmol) 4-氟苯甲酸 (2) 4-氟苯甲酰肼的制备 如实施例1 (2)方法和条件合成，区别在于将（13.32 mmol)苯甲酸乙酯换为（11.89 謹〇1) 4-氟苯甲酸乙酯。
[0028] (3)5-(4-氟苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫醇的制备 如实施例1 (3)方法和条件合成，区别在于将（11.02mmol)苯甲酰肼换为(9.73 mmol) 对氟苯甲酰肼。
[0029] (4)^(4-氯苯基)_甘氨酸乙酯的制备 如实施例1 (4)方法和条件合成，区别在于加入（18.66 mmol) 4-甲基苯胺换为（15.68 mmol) 4-氯苯胺。
[0030] (5)，(2-溴乙酰基)-^(4-氟苯基)甘氨酸乙酯 如实施例1(5)方法和条件合成，将（15.52 mmol)，(对甲苯基)甘氨酸乙酯换为（15.21 mmol )Λ^(对甲苯基)甘氨酸乙酯 (6)ΛΚ4-氯苯基)-(2-(5-(4-氟苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫基）乙酰基)甘氨酸乙酯的 制备 如实施例1 (6)方法和条件合成，区别在于将（1.12 mmol) 5-(苯基)-1，3,4_噁二唑-2_硫醇换为（1.02 mmol) 5-(4-氟苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫醇，将（1.12 mmol)AK2-溴乙 酰基)_ ΛΚ4-甲基苯基)-甘氨酸乙酯换为（1.02 mm〇l)AK2-溴乙酰基)-ΛΚ4-氯苯基)-甘 氨酸乙酯。
[0031] (7)3-(5-(4-氟苯基)-13,4-噁二唑-2-硫基)-1-(4-氯苯基)-4-羟基-吡咯啉-2 酮的制备 如实施例1 (7)方法和条件合成，区别在于(0.49 mmol)，对甲苯基-(2-(5-苯基-1， 3,4_噁二唑-2-巯基）乙酰基）甘氨酸乙酯换为(0.48 mmol)，对甲苯基-(2-(5-(4-氟苯 基)-1，3，4-噁二唑-2-巯基）乙酰基)甘氨酸乙酯。
[0032] 实施例4:3-(5-(4-氯苯基)-1，3,4_噁二唑-2-巯基)-1-(4-氟苯基)-4-羟基-吡咯 啉-2酮的合成(A-8) (1) 4-氯苯甲酸乙酯的制备 如实施例1 (1)方法和条件合成，区别在于将（16.38 mmol)苯甲酸换为（12.77 mmol) 4-氯苯甲酸 (2) 4-氯苯甲酰肼的制备 如实施例1 (2)方法和条件合成，区别在于将（13.32 mmol)苯甲酸乙酯换为（10.83 mmol) 4-氯苯甲酸乙酯。
[0033] (3 ) 5-( 4-氯苯基)-1，3，4-噁二唑-2-硫醇的制备 如实施例1 (3)方法和条件合成，区别在于将（11.02mmol)苯甲酰肼换为(8.79 mmol) 对氯苯甲酰。
[0034] (4)，(4_氟苯基)_甘氨酸乙酯的制备 如实施例1 (4)方法和条件合成，区别在于加入(18.66 mmol) 4-甲基苯胺换为（18.00 _〇1) 4-氟苯胺。
[0035] (5)，(2_溴乙酰基)-^(4-氟苯基)甘氨酸乙酯 如实施例1 (5)方法和条件合成，将（15.52 mmol)，（对甲苯基）甘氨酸乙酯换为 (15.21 mmol) f(对甲苯基)甘氨酸乙酯 (6 ) ΛΚ 4-氯苯基)-ΛΚ 2- (5- (4-氟苯基)-1，3，4-噁二唑-2-硫基）乙酰基)甘氨酸乙酯 的制备 如实施例1 (6)方法和条件合成，区别在于将（1.12 mmol) 5-苯基-1，3,4-噁二唑-2-硫醇换为(0.94 mmol) 5-(4-氯苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫醇，将（1.12 mmol) ΛΚ4-甲基 苯基)_甘氨酸乙酯换为(0.94 mmol)，(4_氯苯基)-甘氨酸乙酯。
[0036] (7)3-(5-(4-氟苯基)-13,4-噁二唑-2-硫基)-1-(4-氯苯基)-4-羟基-吡咯啉-2 酮的制备 如实施例1 (7)方法和条件合成，区别在于(0.49 mmol)，对甲苯基-(2-(5-苯基-1， 3,4_噁二唑-2-巯基）乙酰基）甘氨酸乙酯换为(0.45 mmol)，对甲苯基-(2-(5-(4-氟苯 基)-1，3，4-噁二唑-2-巯基）乙酰基)甘氨酸乙酯。
[0037] 实施例5:3-(5-(4-氯苯基）-1，3,4_噁二唑-2-巯基)-1-氢-4-羟基-吡咯啉-2酮 (A-12) (1) 4-氯苯甲酸乙酯的制备 如实施例1 (1)方法和条件合成，区别在于将（16.38 mmol)苯甲酸换为（12.77 mmol) 4-氯苯甲酸 (2) 4-氯苯甲酰肼的制备 如实施例1 (2)方法和条件合成，区别在于将（13.32 mmol)苯甲酸乙酯换为（10.83 mmol) 4-氯苯甲酸乙酯。
[0038] (3)5-(4-氯苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫醇的制备 如实施例1 (3)方法和条件合成，区别在于将（11.02mmol)苯甲酰肼换为(8.79 mmol) 对氯苯甲酰。
[0039] (4)，(2_溴乙酰基)_甘氨酸乙酯 如实施例1 (5)方法和条件合成，将（15.52 mmol)，(对甲苯基）甘氨酸乙酯换为 (29.09 mmol)甘氨酸乙酯 (5 )ΛΚ 2-溴乙酰基）2- (5- (4-氟苯基)-1，3，4-噁二唑-2-硫基）乙酰基)甘氨酸乙酯的 制备 如实施例1 (6)方法和条件合成，区别在于将（1.12 mmol) 5-苯基-1，3,4-噁二唑-2-硫醇换为（1.02 mmol) 5-(4-氟苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫醇，将（1.12 mmol) ΛΚ4-甲基 苯基)_甘氨酸乙酯换为（1.02 mm〇l)，(2-溴乙酰基)-甘氨酸乙酯。
[0040] (6)3-(5-(4-氟苯基)-1,3,4-噁二唑-2-巯基)-1-氢-4-羟基-吡咯啉-2酮的制备 如实施例1 (7)方法和条件合成，区别在于(0.49 mmol)，对甲苯基-(2-(5-苯基-1， 3,4_噁二唑-2-巯基）乙酰基）甘氨酸乙酯换为(0.45 mmol)，对甲苯基-(2-(5-(4-氟苯 基)-1，3，4-噁二唑-2-硫基）乙酰基)甘氨酸乙酯 实施例6:3-(5-(3-甲氧基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-硫基)-1-(4-氟苯基)-4-羟基-吡咯 啉-2酮(A-13) (1) 3-甲氧基苯甲酸乙酯的制备 如实施例1 (1)方法和条件合成，区别在于将（16.38 mmol)苯甲酸换为（13.15 mmol) 3_甲氧基苯甲酸 (2) 3-甲氧基苯甲酰肼的制备 如实施例1 (2)方法和条件合成，区别在于将（13.32 mmol)苯甲酸乙酯换为（11.10 mmol) 3-甲氧基苯甲酸乙酯。
[0041 ] (3)5-(3-甲氧基苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫醇的制备 如实施例1 (3)方法和条件合成，区别在于将（11.02mmol)苯甲酰肼换为(9.03 mmol) 3-甲氧基苯甲酰。
[0042] (4)，(4_氟苯基)_甘氨酸乙酯的制备 如实施例1 (4)方法和条件合成，区别在于加入(18.66 mmol) 4-甲基苯胺换为（18.00 _〇1) 4-氟苯胺。
[0043] (5)，(2_溴乙酰基)-^(4-氟苯基)甘氨酸乙酯 如实施例1 (5)方法和条件合成，将（15.52 mmol)，（对甲苯基）甘氨酸乙酯换为 (15.21 ι?πιο1)Λ^(4-氟苯基)甘氨酸乙酯 (6)ΛΚ3-甲氧基苯基)-ΛΚ2-(5-(4-氟苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫基）乙酰基)甘氨酸 乙酯的制备 如实施例1 (6)方法和条件合成，区别在于将（1.12 mmol) 5-苯基-1，3,4-噁二唑-2-硫醇换为(0.96 mmol) 5-(3-甲氧基苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫醇，将（1.12 mmol) ΛΚ4-甲基苯基)-甘氨酸乙酯换为(0.96 mmol)，(4_氯苯基)-甘氨酸乙酯。
[0044] (7)3-(5-(4-氟苯基)-1，3,4_噁二唑-2-硫基)-1-(4-氯苯基)-4-羟基-吡咯啉-2 酮的制备 如实施例1 (7)方法和条件合成，区别在于(0.49 mmol)，对甲苯基-ΛΚ2-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-巯基）乙酰基)甘氨酸乙酯换为(0.45 mmo 1)，对甲苯基-ΛΚ 2-(5-(4-氟 苯基)-1，3，4-噁二唑-2-巯基）乙酰基)甘氨酸乙酯。
[0045] 利用以上的合成方法，选取不同的取代苯甲酸为原料，经酯化、肼解、环化和酸化 得到5-取代苯基-1，3，4-噁二唑-2-硫醇，然后又以取代苯胺为原料，与氯乙酸乙酯亲核取 代反应的中间体，取代甘氨酸乙酯，再与溴乙酰溴反应得到体#-(2-溴乙酰基)-#-取代_ 甘氨酸乙酯，产物与5-取代苯基-1，3，4_噁二唑-2-硫醇反应得取代-ΛΚ2-(5-取代-1，3， 4_噁二唑-2-硫基）乙酰基)甘氨酸乙酯，然后再叔丁醇存在下发生克莱森分子内酯缩合反 应，得到含1，3，4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物(即化合物Α-1~Α-20)。
[0046] 优选合成的一系列含1，3,4_噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物，其熔点，核磁数 据，质谱及红外光谱(IR)数据如表2所示。
[0047] 试验例1:目标化合物的抗烟草花叶病毒活性实验 采用半半叶斑法测定化合物的抗植物病毒活性。准确称取3 mg供试化合物于称量瓶 中，加入溶剂DMS0 60 A使其充分溶解。用含1 % Tween 20的二次蒸馏水将其配成500 mg / L的化合物溶液。另取250 /L 2 %宁南霉素水剂，加入溶剂DMS0 60 /L，含1 % Tween 20的二次蒸馏水10 mL，配成500 mg / L的宁南霉素溶液。
[0048] 药剂对TMV侵染的活体治疗活性。选取长势一致的心叶烟，先用排笔蘸取病毒液 (浓度为6ΧΠΓ3 mg / mL)，在叶面(全叶)沿其支脉方向人工摩擦接种于撒有金刚砂的叶 片上，左右叶片的接种力度尽量保持一致，叶片下方用平整木板支撑。待病毒液干后，用流 水冲洗掉叶片上面的金刚砂。待叶片干后，在左半叶涂施药剂，右半叶涂施灭菌水作对照。 每药剂处理设3株，每株3-4片叶，随后将植株放在光照培养箱中保湿培养，控制温度 23±1 °C，光照10000 Lux，2-4 d后观察并记录产生枯斑的数目。按上述方法每药剂进行 3次重复，计算抑制率。
[0049] 药剂对TMV侵染的活体保护活性。选取长势一致的心叶烟，用毛笔轻轻在左半叶涂 施药剂，右半叶涂施灭菌水作对照，24小时后接种病毒。用排笔蘸取病毒汁液(浓度为6 X 1(T3 mg / mL)，在叶面(全叶)沿其支脉方向人工摩擦接种于撒有金刚砂的叶片上，左右叶 片的接种力度尽量保持一致，叶片下方用平整木板支撑。待病毒液干后，用流水冲洗掉叶片 上面的金刚砂。每药剂处理设3株，每株3-4片叶，随后将植株放在光照培养箱中保湿培 养，控制温度23 ± 1 °C，光照10000 Lux，2-4 d后观察并记录产生枯斑的数目。按上述 方法每药剂进行3次重复，计算抑制率。
[0050] Y(%)=(R-L)/RX100% 其中:Y为化合物对对烟草花叶病毒的抑制率;R为对照组(右半叶）枯斑个数，；L为处 理组(左半叶）枯斑个数。本发明实施例辅以说明本发明的技术方案，但实施例的内容并不 局限于此，实验结果如表3所示。
[0051 ]试验例2:化合物的抑细菌活性试验 分别称取目标化合物及对照药剂于DMS0中，配制5%溶液，分别取80 A、40 A溶液于含 4 mLNB培养基(牛肉膏3 g、蛋白胨5 g、酵母提取物lg、葡萄糖10g，二次水lL，pH=7.0-7.2) 试管中，将配好溶液取出200 A用分光光度计测定0D值，再加入40 A已摇好菌液，于30°C， 180rpm恒温摇床中培养24 h。待试验结束，于试管取出200 A并用分光光度计测定0D值，对 照药剂本身所造成的误差进行校正，校正0D值及防效的计算公式如下： 校正0D值:含菌培养基0D值-无菌培养基0D值 防效%=(校正后对照培养基菌液0D值-校正含药培养基菌液0D值)/校正后对照培养基 菌液0D值XI00 本发明实施例辅以说明本发明的技术方案，但实施例的内容并不局限于此，实验结果 如表4,表5所;^:。
[0052]对水稻白叶枯病菌活性测试表明，大部分化合物对水稻白叶枯病菌和柑橘溃疡病 菌具有一定的抑制活性，在浓度为200牌/mL时，化合物A-1，A-2，A-3，A-11，A-15，A-16对水 稻白叶枯病菌的抑制活性达到了90%以上，其中化合物A-2，A-3，A-11，A-15在浓度100探/ mL时的抑制活性仍可达到90%以上，远高于对照药剂叶枯唑的抑制活性。化合物A-2，A-9，A-11，A-15在200探/mL浓度下对柑橘溃疡病菌抑制活性可达70%以上，均高于对照药剂噻菌 酮对柑橘溃疡病菌的抑制活性，其中化合物A-2，A-11，A-15在100牌/mL浓度下对柑橘溃疡 病菌的抑制活性仍可达到50%以上。所合成的大部分目标化合物对烟草青枯病菌均未表现 出较为明显的抑制活性。
[0053]试验例3:高活性化合物对水稻白叶枯病菌毒力回归方程和EC5Q值的测定 将合成的化合物和商品对照药剂分别配置成5个相应浓度的含毒NB液体培养基，取5 mL于试管中，用酶标仪测定含毒无菌液体培养基0D值(OD595)，加入40 A含有水稻白叶枯病 病原菌的NB液体培养基，然后在28 °C、180 rpm恒温摇床振荡培养24 h，用酶标仪测定各个 浓度菌液的0D值(0D595 )。并且另外测定对照药剂含毒无菌的NB液体培养基的0D值以及24 h 后各个浓度菌液的0D值，对由于药剂本身造成的0D值进行校正。将抑制率数据转换成几率 值(y)、药剂浓度（ig/mL)转换成对数值(X)，在Exce 1数据处理软件中进行回归分析，得到 毒力回归方程(y=ax+b)和相关系数(R)，计算药剂对病原菌抑制中浓度(EC5Q)，并以相应的 商品药剂作为对照。
[0054]部分的对水稻白叶枯病菌具有较好抑制活性的目标化合物的EC5Q如表5所示
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未 脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等 同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
【主权项】
1. 一种含1，3,4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物，其结构通式(I)如下：式中： 办为取代芳烃，取代苄基;R2为取代芳烃，氢。2. 如权利要求1所述的含1，3,4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物，其中： 办选自邻，间，对位卤素取代芳基，邻，间，对位烷氧基取代； R2选自邻，间，对取代卤素芳基，邻，间，对取代烷氧基芳基，苯基，氢;所述卤原子为氟、 氯、溴、碘。3. 如权利要求1或2所述的含1，3，4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物，其中：优选具 体化合物如表1所示： 表1.优选化合物编号及结构4. 一种含1，3，4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物，其制备方法如下：其中：当R2为Η时，中间体f为甘氨酸乙酯(NH2CH2COOEt)由甘氨酸通过酯化(NH2CH2COOH) 得到。5. -种含1，3，4_噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物在用于抑菌和抗病毒的药物和药 剂方面的应用。6. 如权利要求5所述的一种含1，3，4-噁二唑的4-羟基吡咯啉-2-酮衍生物在抗烟草花 叶病毒方面和抑制水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌与柑橘溃疡病菌方面的应用。
【文档编号】C07D413/12GK105949181SQ201610387078
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年6月3日
【发明人】杨松, 陈玲, 吴志兵, 王培义, 胡德禹, 薛伟, 李振兴, 周磊
【申请人】贵州大学