本发明属于生物医药领域，具体涉及一种聚乙二醇修饰重组人胰岛素的方法。
技术背景
胰岛素是人体内唯一降低血糖的激素，对于糖尿病的治疗特别是抑制并发症至关重要。但目前胰岛素的使用面临注射次数频繁，低血糖风险，患者体重增加等诸多问题。为减少频繁地注射胰岛素给糖尿病患者带来诸多的不便和痛苦，同时降低低血糖事件，特别是夜间低血糖事件，临床需要降糖有效时间更长且药物代谢更平稳的长效胰岛素类似物。
技术实现要素：
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种聚乙二醇修饰重组人胰岛素的方法，解决了目标产物分离困难的问题。
本发明的技术方案为：将重组人胰岛素溶液加入装有填料的容器中，搅拌，使蛋白质分子均匀吸附在填料上，过滤得到该填料并加入到含活性聚乙二醇的溶液中，搅拌，使活性聚乙二醇与重组人胰岛素形成共价键，然后将填料装柱、用缓冲液梯度洗脱分离，并收集聚乙二醇修饰的重组人胰岛素组分。
上文所述的重组人胰岛素的浓度为10～25毫克/毫升，优选为10～15毫克/毫升；所述的填料为层析柱填料，为疏水柱填料、离子层析柱填料或亲和层析柱填料之一，优选为疏水柱填料；所述的活性聚乙二醇的分子量在5000～50000之间，优选为分子量在5000～30000之间；所述的缓冲液为ph为2.0～8.0的醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液和枸橼酸缓冲液之一，优选为醋酸盐缓冲液；所述的重组人胰岛素为重组人胰岛素desb30。
下面通过实施例对本发明作进一步的描述，这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定。本领域的技术人员应理解，对本发明的技术特征所作的等同替换，或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。
具体实施例方式
实施例1
以100毫摩尔ph为6.0的醋酸钠溶液为缓冲液a；将氯化钠加入到a中使得氯化钠浓度为1摩尔/升，以此为缓冲液b；向a中加入活性聚乙二醇10000(mpeg-nhs)，用于配制活性聚乙二醇溶液。所添加的活性聚乙二醇的摩尔量是重组人胰岛素desb30摩尔量的4倍。再用缓冲液a平衡柱填料hyperdfs3次，过滤，加入30毫升浓度为5毫克/毫升的重组人胰岛素desb30，搅拌3小时，过滤，干燥。
将干燥的柱填料加入50毫升活性聚乙二醇溶液中，搅拌，反应3小时，将填料装入层析柱中。再用缓冲液a淋洗，以除去未反应的活性聚乙二醇及其他杂质。最后，用0～100％的梯度添加缓冲液b，得到聚乙二醇修饰的重组人胰岛素desb30。
实施例2
以200毫摩尔ph为7.0的磷酸盐溶液为缓冲液c；将氯化钠加入到a中使得氯化钠浓度为1摩尔/升，以此为缓冲液d；向a中加入活性聚乙二醇10000(mpeg-nhs)，用于配制活性聚乙二醇溶液。所添加的活性聚乙二醇的摩尔量是干扰素摩尔量的5倍。再用缓冲液c平衡柱填料hyperdfs3次，过滤，加入50毫升浓度为5毫克/毫升的γ-干扰素，搅拌3小时，过滤，干燥。
将干燥的柱填料加入50毫升活性聚乙二醇溶液中，搅拌，反应3小时，将填料装入层析柱中。再用缓冲液c淋洗，以除去未反应的活性聚乙二醇及其他杂质。最后，用0～100％的梯度添加缓冲液d，得到聚乙二醇修饰的重组人胰岛素desb30。