FG‑4592单晶及其制备方法与流程

本发明涉及一种FG-4592的单晶及其制备方法，属于医药技术领域。

背景技术：

贫血是慢性肾脏病(CKD)和肿瘤最常见的并发症,也是导致CKD和心血管并发症的发病率及死亡率增加的重要危险因素。贫血不仅诱发心血管疾病并发症,而且是影响住院率和死亡率的重要危险因素,显著影响患者生活质量。在中国，有研究表明随着肾功能的降低（CKD期数的增加）贫血的发生率是增加的。

肾性贫血和肿瘤贫血患者EPO水平较低，在进行治疗过程中，往往通过注射EPO或者EPO类似物来提高体内EPO水平进行治疗，从而帮助病人增加红细胞数量。

FibroGen和Astellas等公司正在致力研究一种新的治疗方法，即经稳定乏氧诱导因子(HIF)刺激EPO的生成来治疗贫血。此类药物不仅可以提供口服的便利，而且具低成本优势，同时还有望因HIF-PH抑制剂能够刺激完全的促红细胞生成作用，包括铁活性化和抑制前炎症细胞因子对红细胞产生的负面影响等而改善重组EPO的疗效。FG-4592 (Roxadustat)即是这类药物的典型代表。

FG-4592是一种口服缺氧诱导因子（HIF）脯氨酰羟化酶抑制剂，在临床上用于治疗贫血，目前处于期临床试验阶段。FibroGen公司预计到2017年在美国提交FG-4592治疗CKD和ESRD引起的贫血的上市申请，FG-4592是这一类新颖的潜在贫血治疗药物临床开发中走的最远的候选药物。

目前尚未有FG-4592单晶制备方法的报道。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种FG-4592的单晶。

本发明的另一个目的是提供前述FG-4592的单晶的一种制备方法。

本发明为实现上述发明目的采用的技术方案如下：

本发明是一种FG-4592单晶，其单晶X-射线衍射图具有如下特征：晶体属三斜晶系，空间群为P，晶胞参数为a=8.5830(17) Å，b=9.2790(19) Å，c=11.359(2)Å；α=99.16(3)° ，β=108.36(3)°， γ=102.16(3)°, 晶胞体积814.2 (3) ų, 晶胞内分子数Z=2。

本发明中所述的FG-4592，其化学名称为[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-甲酰基)-氨基]-乙酸，分子式为C₁₉H₁₆N₂O₅。FG-4592结构式如下：

本发明所述的FG-4592单晶，其进一步的技术特征是：其X-射线衍射图具有特征衍射角2θ、晶面间距d和相对强度%，2θ误差为0.2。

本发明还公开了一种FG-4592单晶的制备方法，其特点是：将FG-4592溶于有机溶剂中，溶解后自然冷却至室温，加入或不加入溶析剂，密封，静置，析出晶体，过滤即得。所述的溶析剂优选为盐酸或乙酸。

本发明所述的一种FG-4592单晶的制备方法，其进一步优选的技术方案是：溶解方式为超声溶解。

本发明所述的一种FG-4592单晶的制备方法，其进一步优选的技术方案是：溶解方式为在30℃-80℃下加热溶解。

本发明所述的一种FG-4592单晶的制备方法，其进一步优选的技术方案是：所述FG-4592与有机溶剂的重量体积比为1g:1~100ml。最优选的FG-4592与有机溶剂的重量体积比为1g:40~60ml。

本发明所述的一种FG-4592单晶的制备方法，其进一步优选的技术方案是：所述有机溶剂为乙腈、无水乙醇、丙酮中的一种或任意几种的组合。

与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：本发明采用简单的溶剂与样品配比即可快速获得FG-4592的单晶，通过单晶XRD获得该化合物的绝对构型。利用单晶X-射线粉末衍射花样模拟可以确定样品的晶型。通过制备FG-4592的单晶，不仅可以获得分子的绝对构型和晶型，还可以采用分子对接的手段模拟其与靶蛋白（PHD）的结合模式，深入了解其发挥药效的作用机理。

附图说明

图1 是FG-4592单晶分子堆积图；

图2 是FG-4592单晶分子立体投影图；

图3 是FG-4592 X射线粉末衍射图；

图4 是FG-4592单晶XRD粉末衍射花样模拟图。

具体实施方式

下面通过具体实施例子并结合附图对本发明进一步阐述，但并不限制本发明。

实施例1，一种FG-4592单晶，其单晶X-射线衍射图具有如下特征：晶体属三斜晶系，空间群为P，晶胞参数为a=8.5830(17)， b=9.2790(19)， c=11.359(2)Å；α=99.16(3)° β=108.36(3)° γ=102.16(3)°, 晶胞体积814.2 (3) ų, 晶胞内分子数Z=2。其X-射线衍射图具有如下特征：衍射角2θ、晶面间距d和相对强度%，2θ误差为0.2。

该FG-4592单晶的制备方法如下：将FG-4592溶于有机溶剂中，所述FG-4592与有机溶剂的重量体积比为1g:1ml；溶解方式为超声溶解，所述有机溶剂为乙腈、无水乙醇、丙酮中的一种；溶解后自然冷却至室温，加入或不加入溶析剂，密封，静置，析出晶体，过滤即得。

实施例2，实施例1所述的一种FG-4592单晶，其制备方法如下：将FG-4592溶于有机溶剂中，所述FG-4592与有机溶剂的重量体积比为1g:10ml；溶解方式为超声溶解，所述有机溶剂为乙腈、无水乙醇、丙酮中的任意二种的组合；溶解后自然冷却至室温，加入或不加入溶析剂，密封，静置，析出晶体，过滤即得。

实施例3，实施例1所述的一种FG-4592单晶，其制备方法如下：将FG-4592溶于有机溶剂中，所述FG-4592与有机溶剂的重量体积比为1g:40ml；溶解方式为在30℃下加热溶解，所述有机溶剂为乙腈、无水乙醇、丙酮中的三种的组合；溶解后自然冷却至室温，加入或不加入溶析剂，密封，静置，析出晶体，过滤即得。

实施例4，实施例1所述的一种FG-4592单晶，其制备方法如下：将FG-4592溶于有机溶剂中，所述FG-4592与有机溶剂的重量体积比为1g:60ml；溶解方式为在80℃下加热溶解，所述有机溶剂为乙腈、无水乙醇、丙酮的组合；溶解后自然冷却至室温，加入或不加入溶析剂，密封，静置，析出晶体，过滤即得。

实施例5，实施例1所述的一种FG-4592单晶，其制备方法如下：将FG-4592溶于有机溶剂中，所述FG-4592与有机溶剂的重量体积比为1g:50ml；溶解方式为在50℃下加热溶解，所述有机溶剂为乙腈、无水乙醇、丙酮中一种；溶解后自然冷却至室温，加入或不加入溶析剂，密封，静置，析出晶体，过滤即得。

实施例1－5中，当加入溶析剂时，所述的溶析剂为盐酸或乙酸。

实施例6：FG-4592的单晶制备实验一

将1g FG-4592溶于90ml 65℃乙腈中，制成饱和溶液，然后将溶有FG-4592的乙腈溶液冷却至室温，密封，置于室温条件下静置2天后，长出规则的棒状单晶。

采用Enraf-Nonius CAD4四圆单晶衍射仪收集衍射强度数据，Mo Kα辐射, λ = 0.71073 Å，共聚焦单色器，准直管直径φ=0.30mm，晶体与CCD探测器距离d=45mm，管压45kv，管流0.88mA, ω/2θ扫描方式。

在计算机上用直接法(Shelx97) 解析晶体结构，使用最小二乘法修正结构参数和判别原子种类，最终确定不对称单位分子式为C₁₉H₁₆N₂O₅, 分子量为352.34，计算晶体密度为1.437Mg/m³。精修后获得分子绝对构型，见图1~2。

得到的FG-4592单晶，其单晶X-射线衍射图具有如下特征，晶体属三斜晶系，空间群为P，晶胞参数：a=8.5830(17) Å，b=9.2790(19) Å，c=11.359(2)Å；α=99.16(3)° ，β=108.36(3)°， γ=102.16(3)°。晶胞体积814.2 (3) ų,晶胞内分子数Z＝2。FG-4592 XRD粉末衍射图见图3，理论单晶XRD粉末衍射花样图见图4。

本发明中用到的药物为FG-4592，化学名称为[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-甲酰基)-氨基]-乙酸，分子式为C₁₉H₁₆N₂O₅。

FG-4592 XRD粉末衍射峰值表

实施例7：FG-4592的单晶制备实验二

将1g FG-4592溶于60ml无水乙醇中，超声使溶解，制成饱和溶液，然后将溶有FG-4592的乙醇溶液冷却至室温，密封，置于室温条件下静置2天后，长出规则的棒状单晶。

采用Enraf-Nonius CAD4四圆单晶衍射仪收集衍射强度数据，Mo Kα辐射, λ = 0.71073 Å，共聚焦单色器，准直管直径φ=0.30mm，晶体与CCD 探测器距离d=45mm，管压45kv，管流0.88mA, ω/2θ扫描方式。

在计算机上用直接法(Shelx97) 解析晶体结构，使用最小二乘法修正结构参数和判别原子种类，最终确定不对称单位分子式为C₁₉H₁₆N₂O₅, 分子量为352.34，计算晶体密度为1.437Mg/m³。精修后获得分子绝对构型，见图1~2。

得到的FG-4592单晶，其单晶X-射线衍射图具有如下特征，晶体属三斜晶系，空间群为P，晶胞参数：a=8.5830(17) Å，b=9.2790(19) Å，c=11.359(2)Å；α=99.16(3)° ，β=108.36(3)°， γ=102.16(3)°。晶胞体积814.2 (3) ų,晶胞内分子数Z＝2。

本发明中用到的药物为FG-4592，化学名称为[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-甲酰基)-氨基]-乙酸，分子式为C₁₉H₁₆N₂O₅。

实施例8：FG-4592的单晶制备实验三：

将1g FG-4592置于50ml乙腈中，加入0.1mol/L的氢氧化钠5ml溶液，超声使溶解，然后加入0.1mol/L的盐酸3ml，密封，置于室温条件下静置2天后，长出规则的棒状单晶。

采用Enraf-Nonius CAD4四圆单晶衍射仪收集衍射强度数据，Mo Kα辐射, λ = 0.71073 Å，共聚焦单色器，准直管直径φ=0.30mm，晶体与CCD探测器距离d=45mm，管压45kv，管流0.88mA, ω/2θ扫描方式。

在计算机上用直接法(Shelx97) 解析晶体结构，使用最小二乘法修正结构参数和判别原子种类，最终确定不对称单位分子式为C₁₉H₁₆N₂O₅, 分子量为352.34，计算晶体密度为1.437Mg/m³。精修后获得分子绝对构型，见图1~2。

得到的FG-4592单晶，其单晶X-射线衍射图具有如下特征，晶体属三斜晶系，空间群为P，晶胞参数：a=8.5830(17) Å，b=9.2790(19) Å，c=11.359(2)Å；α=99.16(3)° ，β=108.36(3)°， γ=102.16(3)°。晶胞体积814.2 (3) ų,晶胞内分子数Z＝2。FG-4592 XRD粉末衍射图见图3，理论单晶XRD粉末衍射花样图见图4。

综上所述，本发明的FG-4592的单晶制备方法，可以得到较好的FG-4592单晶，获得该化合物的绝对构型和样品的晶型。

以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。