一种VC‑CAR分子及在清除HIV‑1感染细胞中的应用的制作方法

文档序号:12342461阅读:来源:国知局

技术特征:

1.SEQ ID NO:1所示的HIV-1广谱中和抗体VRC01来源的scFv序列在作为CAR分子的胞外抗原结合域中的应用。

2.一种VC-CAR分子,其特征在于,由SEQ ID NO:1所示的HIV-1广谱中和抗体VRC01来源的scFv序列和CAR分子胞内段序列连接而成,HIV-1广谱中和抗体VRC01来源的scFv序列在N端,CAR分子胞内段序列在C端。

3.根据权利要求2所述的VC-CAR分子,其特征在于,所述VC-CAR分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。

4.根据权利要求2所述的VC-CAR分子,其特征在于,所述VC-CAR分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

5.一种改造的CD8+ T细胞,其特征在于,使用权利要求2至4任一项所述的VC-CAR分子转导至CD8+ T细胞中制备得到。

6.权利要求5所述的改造的CD8+ T细胞在制备清除 HIV-1感染细胞的制剂中的应用。

7.根据权利要求5所述的改造的CD8+ T细胞,其特征在于,由以下方法制备得到:(1)收集外周血单个核细胞并分离富集其中的CD8+ T细胞,利用anti-CD3、anti-CD28和IL-2激活CD8+ T细胞;(2)细胞激活48小时后,以1ml/1×106细胞的比例加入VC-CAR分子重组的病毒浓缩液进行感染,同时加入聚凝胺溶液,离心后继续培养;8~12小时后,进行第二轮病毒感染。

8.根据权利要求7所述的改造的CD8+ T细胞,其特征在于,所述anti-CD3的浓度为1μg/mL,anti-CD28的浓度为1μg/mL,IL-2的浓度为10ng/mL。

9.一种扩增权利要求5或7或8所述的改造的CD8+ T细胞的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)CD8+ T细胞被VC-CAR分子重组的病毒感染改造后的12小时,离心换液,洗去培养基中的病毒,以新鲜培养基重悬细胞,并加入IL-2和IL-7保持细胞状态;(2)病毒感染改造后的第3天和第5天,根据细胞状态和增殖情况,对细胞添加完全RMPI1640培养基,细胞浓度维持在2×106/ml,并补充IL-2和IL-7,继续培养并及时传代,进一步扩增细胞。

10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述IL-2的浓度为10ng/mL, IL-7的浓度为10ng/mL。

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