本发明涉及生物制药领域，具体地说涉及原料药中间品的制备。
背景技术：
绒促性素是从受精卵着床第1天，即受孕的第8天开始，由胎盘滋养层合体细胞分泌的。受孕后第20天尿中可测得HCG，当妊娠45天时，尿中HCG的浓度升高，60-70天时达到高峰。绒促性素成品呈白色或类白色粉末，易溶于水，不溶于乙醇、乙醚和丙酮等有机溶剂。干品稳定，稀溶液不稳定，过酸、过碱或受热都易被破坏，但在胶体溶液中能保护其活力不受损失，如在甘油溶液中，100℃能保持1小时。
临床主要用于男性垂体机能不足所致的性机能过低症和隐睾症，用于由黄体功能不全引起的功能性子宫出血病和习惯性流产。与自孕马血清、绝经期妇女尿中提取的促性激素合用，可诱发排卵，治疗不育症，亦可用于皮肤搔痒症、神经性皮炎等。
1927年Zondek和Ascbheim首先发现妊娠妇女尿中存在着促性腺激素，1936年Brown和Venning找到在妊娠第60-80天，尿中绒促性素分泌达到最高峰。1928年Zondek和Ascbheim 首先用乙醇沉淀法，从孕妇尿中取得了活性物质，其他研究者则进行应用吸附剂从尿中直接吸附绒促性素的研究，这包括1932年Katzman和Doisy用苯甲酸吸附法，1943年Katzman等人用人造沸石层析吸附法，1954年Loraine和Brown用高岭土吸附法，1959年难波修一等人用离子交换树脂吸附法等，用这些方法所取得的绒促性素再用各种纯化方法进行纯化。
技术实现要素：
本发明提供了一种从粗品中提取绒促性素的方法。
本发明的技术方案是：将绒促性素粗品经高盐提取液提取、乙醇沉淀、离心、低盐提取液提取、乙醇沉淀、离心、脱水、干燥得到绒促性素中间品，包括如下步骤：
（1）高盐提取液提取：绒促性素粗品加入8-12℃高盐提取液中，高盐提取液用量为粗品重量的5倍（w/v），在80-120rpm条件下搅拌提取3小时，提取液离心，离心时间30分钟/车，离心转速3500rpm，收集离心上清液，离心沉淀物再按粗品重量1：2（w/v）比例加入8-12℃的高盐提取液溶解，在80-120rpm条件下搅拌提取1小时，提取液离心，离心时间30分钟/车，离心转速3500rpm，收集离心上清液，弃去固体分离物。
（2）乙醇沉淀、离心：合并二次离心上清液，边搅边加入90%以上乙醇，乙醇温度不超过-10℃，使乙醇浓度达到79-81%，加完乙醇后继续搅拌30分钟，然后停止搅拌，在8~12℃条件下静置沉淀15~18小时，静置时间结束后，虹吸上层乙醇，下层沉淀物离心，离心转速3500rpm，离心时间30分钟/车，温度不超过10℃，弃去上层离心母液，收集下层固体即得高盐提取物。
（3）低盐提取液提取：将高盐提取物加入到8-12℃的低盐提取液中，低盐提取液用量为高盐提取物的5倍（w/v），在转速80-120rpm条件下搅拌提取4小时，提取液离心，离心时间30分钟/车，离心转速3500rpm，收集上清液，离心沉淀物再按高盐提取物重量1：2（w/v）加低盐提取液，搅拌提取1小时，提取液离心，离心时间30分钟/车，离心转速3500rpm，收集上清液，弃去固体分离物。
（4）乙醇沉淀：合并二次离心上清液，边搅边加入90%以上乙醇，乙醇温度不超过-10℃，使乙醇浓度达到79-81%，加完乙醇后继续搅拌30分钟，然后停止搅拌，在8~12℃条件下静置沉淀15~18小时。
（5）离心、脱水、干燥：静置时间结束后，虹吸上层乙醇，下层沉淀物离心，离心转速3500rpm，离心时间30分钟/车，温度不超过10℃，弃去上层离心母液，收集下层固体物，按离心固体物重量1:5（w/v）比例加入无水乙醇脱水，再按上述步骤离心，收集固体物，在-0.1MPa下真空干燥，干燥20小时以上，温度低于15℃，干燥后即得绒促性素中间品。
与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：
本发明提供了一种从粗品中提取绒促性素的方法，其基本过程为：控制温度在8-12℃，先以高浓度的盐溶液对绒促性素粗品提取，经乙醇沉淀、离心后得到高盐提取物，再以低浓度的盐溶液对高盐提取物提取，经乙醇沉淀、离心、脱水、干燥后得到绒促性素中间品。其特点是：先后用高盐提取液和低盐提取液对粗品提取纯化，且每种提取液均对粗品进行两次提取，最大限度保证将活性蛋白从粗品中提取出来，再经乙醇沉淀、离心、脱水、干燥后得到绒促性素中间品。本方法提取的绒促性素中间品产率更高、效价更好，且本方法操作简单、成本低，便于工业化生产。且以本方法制得的绒促性素中间品可直接用柱层析法进一步分离纯化，以此制得的绒促性素精品，其效价在6000IU/mg以上。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例为从粗品中提取绒促性素的方法，其具体操作为：
（1）高盐提取液配制：配制含乙酸钠0.1mol/L、氯化钙0.015mol/L、氯化钠0.5mol/L的纯化水溶液，方法为：分别称取乙酸钠13.6g、氯化钙1.66g、氯化钠29.2g，加入纯化水溶解并稀释至1L，然后向该溶液中滴加冰乙酸，调节pH值至5.0-5.2。根据绒促性素粗品的重量，配制所需量的高盐提取液，在8-12℃条件下保存。
（2）高盐提取液提取：将绒促性素粗品加入到大罐中，按粗品重量1：5（w/v）比例加入8~12℃的高盐提取液，打开搅拌桨，在80-120rpm转速下搅拌3小时，之后，提取液用低速大容量冷冻离心机离心，使固液分离；设定离心时间30分钟/车，离心转速3500rpm，离心温度不高于10℃；离心结束后，收集上清液，于8-12℃环境下暂存；下层离心沉淀物收集后，再次提取，按粗品重量1：2（w/v）比例加入8-12℃的高盐提取液，在80-120rpm转速下搅拌提取1小时，提取液用低速大容量冷冻离心机离心；设定离心时间30分钟/车，离心转速3500rpm，离心温度不高于10℃；离心结束后，收集上清液，下层固体分离物弃去。
（3）乙醇沉淀、离心：合并二次离心上清液，加入到大罐中，边搅拌边加入90%以上乙醇（乙醇温度不超过-10℃），同时用密度计测量乙醇浓度，乙醇浓度达到79-81%停止加入，继续搅拌30分钟，然后停止搅拌，在8~12℃条件下静置沉淀15~18小时，直至罐内乙醇清澈沉淀物全部沉入罐底部；之后，用软管自然虹吸上层乙醇，下层沉淀物用低速大容量冷冻离心机离心；设定离心转速3500rpm，离心时间30分钟/车，温度不超过10℃；离心结束后，弃去上层母液，收集下层固体，即得高盐提取物。
（4）低盐提取液配制：配制0.1mol/L乙酸钠溶液，方法为取13.6g乙酸钠，加纯化水溶解并稀释至1L。向上述溶液中滴加冰乙酸，调节pH至4.8-5.0；根据高盐提取物的重量，配制所需量的低盐提取液，在8-12℃条件下保存。
（5）低盐提取液抽提：将高盐提取物加入到大罐中，按高盐提取物重量1：5（w/v）比例加入8-12℃低盐提取液，打开搅拌桨，在80-120rpm转速下搅拌提取4小时，之后用低速大容量冷冻离心机对提取液离心；设定离心时间30分钟/车，离心转速3500rpm，离心温度不高于10℃；离心结束后，收集上清液，在8-12℃条件下暂存；下层离心沉淀物收集后再次提取，按高盐提取物重量1：2（w/v）比例加低盐提取液，搅拌提取1小时，提取液用低速大容量冷冻离心机离心；设定离心时间30分钟/车，离心转速3500rpm，离心温度不高于10℃；离心结束后，收集上清液，弃去下层固体分离物。
（6）乙醇沉淀：合并二次离心上清液，加入到大罐中，边搅拌边加入90%以上乙醇（乙醇温度不超过-10℃），同时用密度计测量乙醇浓度，直至乙醇浓度达到79-81%停止加入，继续搅拌30分钟，然后停止搅拌，在8~12℃条件下静置沉淀15~18小时，直至罐内乙醇清澈沉淀物全部沉入罐底部。
（7）离心、脱水、真空干燥：静置时间结束后，用软管自然虹吸上层乙醇，下层沉淀物用低速大容量冷冻离心机离心；设定离心转速3500rpm，离心时间30分钟/车，温度不超过10℃；离心结束后弃去上层离心母液，收集下层固体物，称量其重量，按固体物重量1:5（w/v）比例加入无水乙醇脱水，再按上述步骤离心，弃去上层液体，收集下层离心固体，放入真空干燥箱真空干燥；真空度为-0.1MPa，环境温度应低于15℃，干燥时间20小时以上；干燥后的即得绒促性素中间品。
本方法得到的中间品为淡黄色粉末，经检验，其效价为684 IU/mg。以本方法制得的绒促性素中间品可直接用柱层析法进一步分离纯化，制得绒促性素精品，精品效价在6000IU/mg以上。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。