本发明涉及甲壳素提取技术领域，具体涉及一种蟹壳中甲壳素的提取方法。
背景技术：
甲壳质，又称甲壳素、几丁质，英文名Chitin。甲壳素存在于自然界中的低等植物菌类、藻类的细胞，甲壳动物虾、蟹、昆虫的外壳，高等植物的细胞壁等，是从蟹、虾壳中应用遗传基因工程提取的动物性高分子纤维素，被科学界誉之为“第六生命要素”！。纯甲壳素是一种无毒无味的白色或灰白色半透明的固体，在水、稀酸、稀碱以及一般的有机溶剂中难以溶解，因而限制了它的应用和发展。后来人们在研究探索中发现，甲壳素经浓碱处理脱去其中的乙酰基就变成可溶性甲壳素，又称甲壳胺或壳聚糖，它的化学名称为(1，4)-2-氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖，或简称聚胺基葡萄糖。甲壳素主要从虾、蟹壳中提取，虾、蟹壳中的杂质主要是无机盐、蛋白质。以前的研究报道中均是加入大量酸碱去掉这些杂质，生产过程产生大量的高浓度酸碱废液，严重环境污染。
技术实现要素：
本发明的一个目的提供一种简单方便、提取率高、提取纯度高的蟹壳中甲壳素的提取方法。
本发明提供的技术方案为：
一种蟹壳中甲壳素的提取方法，所述提取方法包括：
步骤1、将蟹壳清洗干净后，置于零下20-30℃冷冻4-5小时后，采用液氮粉碎，过100目筛子得到蟹壳粉，加入水，置于超声波中1-2小时后，再放置到电磁场中20-30分钟；
步骤2、按与蟹壳粉重量比为50∶1加入蛋白酶，置于高压反应釜中，加入冰醋酸将PH调节至3-5，温度为45-65℃，搅拌2-4小时后，再放置在水浴中温度为100-120℃灭酶，离心回收上清液，收集沉淀物；
步骤3、将沉淀物加入乙酸乙酯，置于超声波中20-30分钟后，减压旋转蒸发回收乙酸乙酯，冷冻干燥后即得所述甲壳素。
优选的是，步骤1中的水添加量与蟹壳粉等重。
优选的是，步骤1中超声波的工作频率为300-500赫兹，电磁场的感应强度为3000-4000Gs。
优选的是，所述蛋白酶包括胰蛋白酶、木瓜蛋白酶，以重量比1∶2混合。
优选的是，步骤2中加入蛋白酶后置于高压脉冲电场中放置20-30分钟再放置到高压反应釜中，其中所述高压脉冲电场的电场强度为30-50kv，脉冲数为10；高压反应釜的压力为0.5-2Mpa，高压脉冲电场能使蟹壳细胞破裂。
优选的是，步骤2中冰醋酸为质量分数75％的冰醋酸。
优选的是，步骤2中还包括采用乙醇与石油醚混合溶液对沉淀物进行多次洗脱，其中乙醇与石油醚体积比2∶1，采用有机溶剂洗脱能去除蟹壳中的剩余蛋白质，提高甲壳素的纯度。
本发明的有益效果如下：
本发明提取蟹壳中甲壳素的过程中，先冷冻干燥，再液氮粉碎，经过超声波和电磁场双重处理，溶解蟹壳中的杂质、水溶性物质析出溶在水中，并且利用蛋白酶水解蟹壳粉中蛋白质，能很好去除其他杂质，提高甲壳素的提取率和纯度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例1
本实施例蟹壳中甲壳素的提取方法包括：
步骤1、将蟹壳清洗干净后，置于零下20-30℃冷冻4-5小时后，采用液氮粉碎，过100目筛子得到蟹壳粉，加入水，置于超声波中1-2小时后，再放置到电磁场中20-30分钟；
步骤2、按与蟹壳粉重量比为50∶1加入蛋白酶，置于高压反应釜中，加入冰醋酸将PH调节至3-5，温度为45-65℃，搅拌2-4小时后，再放置在水浴中温度为100-120℃灭酶，离心回收上清液，收集沉淀物；
步骤3、将沉淀物加入乙酸乙酯，置于超声波中20-30分钟后，减压旋转蒸发回收乙酸乙酯，冷冻干燥后即得所述甲壳素。
实施例2
本实施例蟹壳中甲壳素的提取方法包括：
步骤1、将蟹壳清洗干净后，置于零下20-30℃冷冻4-5小时后，采用液氮粉碎，过100目筛子得到蟹壳粉，加入与蟹壳粉等重的水，置于超声波中1-2小时后，再放置到电磁场中20-30分钟，超声波的工作频率为300-500赫兹，电磁场的感应强度为3000-4000Gs；
步骤2、按与蟹壳粉重量比为50∶1加入蛋白酶，所述蛋白酶包括胰蛋白酶、木瓜蛋白酶，以重量比1∶2混合，置于高压脉冲电场中放置20-30分钟，其中所述高压脉冲电场的电场强度为30-50kv，脉冲数为10，置于高压反应釜中高压反应釜的压力为0.5-2Mpa，加入冰醋酸将PH调节至3-5，温度为45-65℃，搅拌2-4小时后，再放置在水浴中温度为100-120℃灭酶，离心回收上清液，收集沉淀物采用乙醇与石油醚混合溶液对沉淀物进行多次洗脱，其中乙醇与石油醚体积比2∶1；冰醋酸为质量分数75％的冰醋酸；
步骤3、将洗脱过沉淀物加入乙酸乙酯，置于超声波中20-30分钟后，减压旋转蒸发回收乙酸乙酯，冷冻干燥后即得所述甲壳素。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。