胆汁酸(ba)由于其在溶解和消化脂溶性营养物方面的作用而众所周知。近来，ba已作为具有全身性内分泌功能的信号传导分子而出现。已显示ba及其衍生物调节若干核激素受体，特别是类法尼醇(farnesoid)x受体(fxr)，并且是g蛋白偶联受体tgr5的激动剂。通过fxr和tgr5进行的信号传导调节若干代谢路径，不仅调控ba合成和肠肝再循环，而且也调控甘油三酯、胆固醇、葡萄糖和能量体内平衡(thomas,etal.natrevdrugdiscovery,2008,7,678-693[thomas等人，自然评论药物发现，2008,7,678-693])。
6α-乙基-3α,7α,23-三羟基-24-降-5β-胆烷-23-硫酸钠盐(在本文中被称为“int-767”)是靶向fxr与tgr5两者的双重激动剂。
int-767诱导由脂肪细胞的fxr依赖性脂质摄取，并且使由肠内分泌细胞的tgr5依赖性的glp-1分泌增加。体内int-767治疗功效由糖尿病db/db小鼠中以及通过链脲佐菌素(streptozotocin)给予而致使患有糖尿病的小鼠中的胆固醇和甘油三酯水平降低所证明(adorini,etal.molecularpharmacology,2010,78,617-630[adorini等人，分子药理学，2010,78,617-630])。靶向fxr与tgr5两者的双重激动剂可不仅适用于治疗多种肝和代谢疾病，而且也适用于治疗肾和胃肠失调。
合成int-767的各种方法已例如描述于wo2008/002573中，并且最近描述于wo2014/066819中。然而，对能够以减少步骤数目、增加产率和较高纯度制备int-767的方法仍然存在需要。本申请解决了这些需要。
技术实现要素：
本发明的目标在于提供制备胆汁酸衍生物和新颖中间体的方法。本文所述的方法和中间体的用途涉及合成使fxr与tgr5两者活化的胆汁酸衍生物。
在一方面，本发明涉及一种制备式(a)化合物：
或其药学上可接受的盐的方法，其中r1是h或c1-c6烷基；所述方法包括以下步骤：
(a)用还原剂使式(b)化合物的醛转化以制备式(c)化合物
其中r2是保护基；
(b)用硫酸化试剂使所述式(c)化合物转化以制备式(d)化合物
或其药学上可接受的盐；并且
(c)将所述式(d)化合物的c-3羟基脱保护。
本发明的另一目标在于提供作为中间体用于本文所述的方法中的新颖化合物。
在一方面，中间体是式(b)化合物：
其中r1是h或c1-c6烷基；并且r2是保护基。
本发明的另一目标在于提供一种制备式(a)化合物的钠盐的方法：
其中r1是h或c1-c6烷基，所述方法包括以下步骤：
(a)将式(a)化合物或其药学上可接受的盐溶解于水溶液中；并且
(b)使所述水溶液穿过阳离子交换树脂。
除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与由本发明所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。尽管在实施或测试本发明时可使用与本文所述的那些方法和材料类似或等效的方法和材料，但以下描述适合方法和材料。这些材料、方法和实例仅具有说明性而非意图具有限制性。
本发明的其他特征和优势将根据以下详细说明而变得清楚。
具体实施方式
定义
此处收集说明书和权利要求中使用的某些术语。
如本文所用的术语“c1-c6烷基”是指具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链烃部分。c1-c6烷基部分的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基和正己基。“c1-c4烷基”是指具有1、2、3或4个碳原子的直链或支链烃部分。
如本文所用的术语“dcm”是指二氯甲烷。
如本文所用的术语“mtbe”是指甲基叔丁基醚。
如本文所用的术语“thf”是指四氢呋喃。
如本文所用的术语“etoac”是指乙酸乙酯。
如本文所用的术语“hex”是指己烷。
如本文所用的术语“wfi”是指注射用水。
如本文所用的术语“tlc”是指薄层色谱法。
如本文所用的术语“hplc”是指高效液相色谱法。
如本文所用的术语“pyr”是指吡啶。
如本文所用的术语“还原试剂”是指例如使醛转化成醇的试剂。
术语“硫酸化试剂”是指例如使醇转化成硫酸酯的试剂。
如本文所用的术语“保护基”是指用于掩蔽例如羟基官能度的合适部分，在反应条件下是稳定/不反应的(例如，不与用于反应中的试剂反应)。本领域技术人员将认识到用于保护羟基而非另一种官能度(例如，羧酸)的特定部分。
术语“阳离子交换”是指液相中的阳离子与作为带负电荷的固体聚合物的反离子存在的另一阳离子交换的过程。阳离子交换可以色谱方式用于分离阳离子。
如本文所用的术语“阳离子交换树脂”是指能够使聚合物内的特定离子与穿过它们的溶液中的阳离子交换的聚合物。相较于树脂中的阳离子，阳离子交换树脂对溶液中的阳离子具有更高亲和力。阳离子交换树脂可基于聚苯乙烯磺酸盐。
如本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指碱加成盐，包括但不限于选自钠、锂或钾盐的碱金属盐或选自钙或镁的碱土金属盐。碱加成盐进一步包括无机和有机胺盐，包括但不限于铵、甲铵、乙铵、二乙铵、三乙铵、赖氨酸、精氨酸、n-甲基还原葡糖胺和胆碱。
短语“药学上可接受的载体”是本领域公知的，并且包括例如涉及于将任何主题组合物从身体的一个器官或部分携带或转运至身体的另一器官或部分的药学上可接受的物质、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或囊封物质。
如本文所用的术语“药学上可接受的赋形剂”是指在制备药物组合物中有用的一种赋形剂，该组合物通常是安全、无毒的并且不是生物学上或其他方面不希望的，并且包括对于兽用连同人类药用是可接受的一种赋形剂。
如本文所用的“溶剂合物”是指含有化学计量或非化学计量的溶剂的式(a)化合物的溶剂添加形式。一些化合物倾向于在结晶固体状态下捕集固定摩尔比的溶剂分子，由此形成溶剂合物。如果该溶剂是水，那么形成的溶剂合物是水合物，当溶剂是醇时，形成的溶剂合物是醇化物。通过将一个或多个水分子与物质之一组合形成水合物，其中水保持其作为h2o的分子状态，这种组合能够形成一种或多种水合物。
“药物组合物”是含有式(a)化合物或其药学上可接受的盐的配置品。在一个实施例中，药物组合物呈散装形式，或呈单位剂型。单位剂型是多种形式中的任一者，包括例如胶囊、iv袋、片剂、在气雾剂吸入器上的单个泵、或小瓶。单位剂量的组合物中的活性成分(例如本发明化合物或其盐的配置品)的量是有效量，并且根据涉及的特定治疗而变化。本领域技术人员将了解，依据例如患者的年龄和病症而定对剂量进行常规变化可能是有必要的。剂量也将取决于给予途径。涵盖多种途径，包括口服、经眼、眼用、经肺、经直肠、胃肠外、经皮、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、鼻内等。用于局部或经皮给予本申请的化合物的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液、贴剂和吸入剂。在另一个实施例中，将活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体以及与所需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。
如本文所定义，术语“代谢物”是指式(a)化合物的葡萄糖醛酸苷化和硫酸化衍生物，其中一个或多个葡萄糖醛酸或硫酸酯部分连接至所述化合物。葡萄糖醛酸部分可通过与化合物的羟基(例如3-羟基和/或7-羟基)的糖苷键连接至化合物。化合物的硫酸化衍生物可通过羟基(即3-羟基或7-羟基)的硫酸化来形成。代谢物的实例包括但不限于式(a)化合物的3-o-葡萄糖醛酸苷、7-o-葡萄糖醛酸苷和3-o-7-o-葡萄糖醛酸苷，以及式(a)化合物的3-硫酸酯、7-硫酸酯和3,7-双硫酸酯衍生物。
如本文所用的术语“治疗”是指缓解、减轻、减弱、消除、调节或改善疾病状态或状况，即导致疾病状态或状况消退。
如本文所用的术语“预防”是指完全或几乎完全阻止疾病状态或状况在患者或受试者中出现，尤其当所述患者或受试者易患这种疾病状态或状况或处于染上疾病状态或状况的风险下时。预防也可包括抑制疾病状态或状况(即遏止疾病状态或状况的发展)，以及缓解或改善所述疾病状态或状况(即导致所述疾病状态或状况消退)，例如当所述疾病状态或状况可已存在时。
如本文所用的短语“降低……的风险”是指使中枢神经系统疾病、炎症性疾病和/或代谢疾病在患者中出现的可能性或概率降低，尤其当受试者易经受这种出现时。
如本文所用的术语“约”或“近似”等当连同数值一起使用时可包括大于或小于所述术语所涉及或相关的数值的一定范围的数值。例如，范围可包括比所述术语所涉及或相关的数值从小5％至大5％，从小4％至大4％，从小3％至大3％，从小2％至大2％，或从小1％至大1％的数值。例如，“约5”可包括从4.5至5.5、从4.55至5.45、从4.6至5.4、从4.65至5.35、从4.7至5.3、从4.75至5.25、从4.8至5.2、从4.85至5.15、从4.9至5.1、或从4.95至5.05的数值。
本发明方法
在一方面，本发明涉及一种制备式(a)化合物：
或其药学上可接受的盐的方法，其中r1是h或c1-c6烷基；所述方法包括以下步骤：
(a)用还原试剂使式(b)化合物的醛转化以制备式(c)化合物
其中r2是保护基；
(b)用硫酸化试剂使所述式(c)化合物转化以制备式(d)化合物
或其药学上可接受的盐；并且
(c)将所述式(d)化合物的c-3羟基脱保护。
在一个实施例中，通过本发明方法制备的化合物是式(a)化合物，其中r1是c1-c4烷基。在另一个实施例中，r1是甲基、乙基或丙基。在另一个实施例中，r1是乙基。
在一个实施例中，通过本发明方法制备的化合物是式(a)化合物，其中c-7羟基呈α定向。在一个实施例中，c-7羟基呈β定向。
在另一个实施例中，通过本发明方法制备的化合物是式(a)化合物，其中r1是c1-c4烷基，并且c-7羟基呈α定向。在一个实施例中，r1是乙基，并且c-7羟基呈α定向。
在一个实施例中，通过本发明方法制备的化合物是式(a)化合物，其中r2保护基选自c(o)c1-c4烷基、c1-c6烷氧基羰基、任选取代的芳基氧基羰基、苯甲酰基、苯甲基、特戊酰基、四氢吡喃基醚、四氢呋喃基、2-甲氧基乙氧基甲基醚、甲氧基甲基醚、乙氧基乙基醚、对甲氧基苯甲基醚、甲基硫基甲基醚、三苯基甲基、二甲氧基三苯甲基、甲氧基三苯甲基和甲硅烷基醚。在一个实施例中，甲硅烷基醚选自三甲基甲硅烷基醚、三乙基甲硅烷基醚、三异丙基甲硅烷基醚、叔丁基二甲基甲硅烷基醚和叔丁基二苯基甲硅烷基醚。在一个实施例中，r2保护基是苯甲酰基或乙酰基。在一个实施例中，r2保护基是c(o)c1-c4烷基。在一个实施例中，r2保护基是乙酰基。
在一个实施例中，步骤(a)中的还原试剂是nabh4、nacnbh3、libh4、(i-bu2alh)2或有机硼烷。在一个实施例中，还原试剂是nabh4。在一个实施例中，还原试剂的摩尔比是从约3当量至约2当量。在另一个实施例中，摩尔比是约2.2当量。
步骤(a)中的还原通过使用适合溶剂进行。在一个实施例中，在醇溶剂中进行还原。在一个实施例中，醇溶剂是甲醇。在一个实施例中，醇溶剂是异丙醇。在一个实施例中，醇溶剂是乙醇。
在一个实施例中，步骤(a)中的还原在约2小时与约48小时之间的时期，例如2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时以及介于之间的任何时间增量中进行。
在一个实施例中，步骤(a)中的还原在约-10℃与约15℃之间的温度例如-10℃、-5℃、0℃、3℃、5℃、7℃和10℃下以及介于之间的任何温度增量下进行。在一个实施例中，还原在约5℃下进行。
在另一个实施例中，步骤(b)中的硫酸化试剂选自三氧化硫吡啶、三氧化硫三甲胺、三氧化硫三乙胺、三氧化硫n,n-二甲基甲酰胺、聚合物结合型三氧化硫吡啶(即聚(4-乙烯基吡啶)三氧化硫)、氯磺酸、发烟硫酸或氨基磺酸。在一个实施例中，硫酸化试剂是三氧化硫三甲胺。在一个实施例中，硫酸化试剂是三氧化硫三乙胺。在一个实施例中，硫酸化试剂是三氧化硫n,n-二甲基甲酰胺。在一个实施例中，硫酸化试剂是所结合的硫吡啶络合物聚合物(即聚(4-乙烯基吡啶)三氧化硫)。在一个实施例中，硫酸化试剂是发烟硫酸。在一个实施例中，硫酸化试剂是三氧化硫吡啶。在实施例中，硫酸化试剂的摩尔比在约1.3当量与约1.0当量之间。在另一个实施例中，摩尔比是约1.05当量。
在一个实施例中，步骤(b)中的转化在约30分钟与约3小时之间的时期，例如30分钟、45分钟、1小时、1.5小时、2小时、3小时以及介于之间的任何时间增量中进行。
在一个实施例中，使用盐酸在酸性条件下进行步骤(c)中的脱保护。在一个实施例中，用amberlysth+树脂进行脱保护。在一个实施例中，相对于式(d)化合物的量，amberlysth+树脂的比率在约1.0wt/wt％与约0.3wt/wt％之间。在另一个实施例中，比率是约0.5wt/wt％。
在一个实施例中，通过本发明方法制备的化合物是化合物7b：
在一个实施例中，方法进一步包括使化合物7b转化成化合物7c：
在一个实施例中，通过将化合物7b溶解于含有铵的碱性水溶液中来准备转化成化合物7c。在一个实施例中，碱性溶液是氢氧化铵水溶液。在一个实施例中，碱性溶液是约28％氢氧化铵水溶液。在一个实施例中，氢氧化铵水溶液在转化期间维持ph>8。
在一个实施例中，方法进一步包括使化合物7c转化成化合物7：
在一个实施例中，转化成化合物7包括以下步骤：
(a)将化合物7c溶解于水溶液中；并且
(b)使所述水溶液穿过阳离子交换树脂。
在另一方面，方法进一步包括使式(e)化合物转化以制备式(b)化合物：
在一个实施例中，用臭氧处理式(e)化合物，随后添加三苯基膦或二甲基硫醚。在另一个实施例中，臭氧含有氧气。在一个实施例中，使用二甲基硫醚。在另一个实施例中，使用三苯基膦。在一个实施例中，三苯基膦或二甲基硫醚的摩尔比在约1.3当量与约1当量之间。在另一个实施例中，摩尔比是约1.12当量。在一个实施例中，在醇溶剂中进行转化。在一个实施例中，醇溶剂是甲醇。在一个实施例中，转化在约-70℃与约-50℃之间的温度例如-70℃、-65℃、-60℃、-55℃和-50℃下以及介于之间的任何温度增量下进行。
在另一方面，方法进一步包括保护式(f)化合物的c-3羟基以制备式(e)化合物：
在一个实施例中，用乙酸酐处理式(f)化合物。在一个实施例中，乙酸酐的摩尔比在约2.0当量与约1当量之间。在另一个实施例中，摩尔比是约1.66当量。在一个实施例中，转化由二甲基氨基吡啶催化。在另一个实施例中，吡啶用于转化中。在另一个实施例中，在乙醚或四氢呋喃中进行转化。在一个实施例中，在低于30℃的温度下进行转化。
在一方面，方法进一步包括使式(g)化合物转化以制备式(f)化合物：
在一个实施例中，用对甲苯磺酸处理式(g)化合物。在一个实施例中，对甲苯磺酸的摩尔比是从约0.1当量至约0.02当量。在另一个实施例中，摩尔比是约0.05当量。在一个实施例中，在醇溶剂中进行转化。在一个实施例中，醇溶剂是乙醇。在一个实施例中，在约50℃与约90℃之间的温度例如50℃、60℃、70℃、75℃、80℃和90℃下以及介于之间的任何温度增量下进行转化。
在另一方面，方法进一步包括使式(h)化合物转化以制备式(g)化合物：
在一个实施例中，用苯基溴化镁处理式(h)化合物。在另一个实施例中，苯基溴化镁的摩尔比是约2当量至约6当量。在另一个实施例中，摩尔比是约5当量。在一个实施例中，在非质子性溶剂中进行转化。在一个实施例中，非质子性溶剂是四氢呋喃。在一个实施例中，转化在约25℃与约70℃之间的温度例如25℃、30℃、40℃、50℃、60℃和70℃下以及介于之间的任何温度增量下进行。
在一方面，方法进一步包括使式(i)化合物转化以提供式(h)化合物：
在一个实施例中，用c1-c6醇使式(i)化合物酯化。在一个实施例中，c1-c6醇是甲醇或乙醇。在一个实施例中，c1-c6醇是甲醇。在另一个实施例中，用酸催化转化。在另一个实施例中，通过h+dowex树脂来递送酸。在一个实施例中，转化在约55℃与约85℃之间的温度例如55℃、65℃、75℃和85℃下以及介于之间的任何温度增量下进行。
本发明的另一目标在于提供作为中间体用于本文所述的方法中的新颖化合物。在一方面，中间体是式(b)化合物：
其中r1是h或c1-c6烷基；并且r2是保护基。
在一个实施例中，中间体是式(b)化合物，其中r1是c1-c4烷基。在另一个实施例中，r1是甲基、乙基或丙基。在另一个实施例中，r1是乙基。在一个实施例中，c-7羟基呈α定向。在一个实施例中，c-7羟基呈β定向。在一个实施例中，r2保护基选自c(o)c1-c4烷基、c1-c6烷氧基羰基、任选取代的芳基氧基羰基、苯甲酰基、苯甲基、特戊酰基、四氢吡喃基醚、四氢呋喃基、2-甲氧基乙氧基甲基醚、甲氧基甲基醚、乙氧基乙基醚、对甲氧基苯甲基醚、甲基硫基甲基醚、三苯基甲基、二甲氧基三苯甲基、甲氧基三苯甲基和甲硅烷基醚。在一个实施例中，甲硅烷基醚选自三甲基甲硅烷基醚、三乙基甲硅烷基醚、三异丙基甲硅烷基醚、叔丁基二甲基甲硅烷基醚和叔丁基二苯基甲硅烷基醚。在一个实施例中，r2保护基是苯甲酰基或乙酰基。在一个实施例中，r2保护基是c(o)c1-c4烷基。在一个实施例中，r2保护基是乙酰基。
在一个实施例中，式(b)化合物是：
本发明的另一目标涉及一种制备式(a)化合物的钠盐的方法
其中r1是h或c1-c6烷基，所述方法包括以下步骤：
(a)将式(a)化合物或其药学上可接受的盐溶解于水溶液中；并且
(b)使所述水溶液穿过阳离子交换树脂。
在一个实施例中，式(a)化合物的钠盐由游离碱制备。在一个实施例中，式(a)化合物的钠盐由铵盐制备。在一个实施例中，式(a)化合物的钠盐由吡啶鎓盐制备。在另一个实施例中，阳离子交换树脂是diaion树脂na+型。在一个实施例中，在穿过阳离子交换树脂之前，用甲基叔丁基醚/2-甲基-四氢呋喃的混合物洗涤步骤(a)中的水溶液。在另一个实施例中，使穿过阳离子交换树脂的水溶液冻干。在另一个实施例中，将冻干产物精制过滤以去除硫酸钠。在一个实施例中，通过反相色谱法来进一步纯化式(a)化合物的钠盐。
在一方面，本申请的方法产生基本上纯的式(a)化合物或其药学上可接受的盐。如本文所用的术语“纯度”是指式(a)化合物的基于本领域中通常使用的分析方法(例如hplc)的量。纯度基于化合物的“有机”纯度，并且不包括对任何量的水、溶剂、金属、无机盐等的测量。在一个实施例中，通过比较hplc中的峰下面积来将式(a)化合物的纯度与参照标准物的纯度进行比较。在一个实施例中，式(a)化合物具有大于约96％的纯度。在一个实施例中，式(a)化合物具有大于约98％的纯度。例如，合成的式(a)化合物的纯度是96.0％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97.0％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％。例如，合成的式(a)化合物的纯度是98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％。例如，合成的式(a)化合物的纯度是98.0％、98.5％、99.0％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％。例如，合成的式(a)化合物的纯度是98.5％、99.0％或99.5％。在一个实施例中，通过hplc来测定纯度。
本申请提供了用于合成高纯度的式(a)化合物的方法，该方法是安全的并且大规模产生式(a)化合物。在一个实施例中，本申请的方法以高产率和纯度(>98％)产生式(a)化合物。
药物组合物
本申请进一步提供用于口服给予的式(a)化合物。在一个实施例中，配置品经口服给予以预防和治疗fxr和/或tgr5介导的疾病和病症。
适于口服给予的配置品可按以下提供：离散单元，诸如片剂、胶囊、扁囊剂(由药剂师用于提供药物的糯米纸胶囊)、锭剂，各自含有预定量的一种或多种式(a)化合物；粉剂或颗粒剂；于水性或非水性液体中的溶液或混悬液；或水包油或油包水乳液。
本申请的配制品可以通过任何合适的方法制备，典型地通过将一种或多种式(a)化合物与液体或细碎的固体载体或两者以所需的比例一致且紧密地混合，如果需要，使所得混合物成形为所希望的形状。
例如，片剂可通过压制包含具有一种或多种式(a)化合物的粉末或颗粒和一种或多种任选成分诸如粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂或表面活性分散剂的紧密混合物，或通过模制粉状活性成分和惰性液体稀释剂的紧密混合物来制备。
例如，可基于受试者的重量(例如在约50kg至约100kg之间的人)给予一个或多个片剂以达到靶标剂量水平。
考虑到配制品的类型的问题，除以上具体提及的成分之外，本申请的口服配置品也可包括为制药领域技术人员已知的其他试剂。适合的口服配置品可包括调味剂。
在一个实施例中，本申请涉及一种或多种式(a)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或氨基酸缀合物的药物配置品，其中一种或多种式(a)化合物通过本申请的方法产生。在另一个实施例中，口服给予配置品。
在一个实施例中，配置品呈片剂形式。在另一个实施例中，配置品包含一种或多种式(a)化合物和选自微晶纤维素、淀粉乙醇酸钠、硬脂酸镁、包覆物质或胶体二氧化硅的一种或多种组分。在一个实施例中，包覆物质是
除非另外指示，否则本文所用的所有百分比和比率都以重量计。二聚杂质百分比是基于面积百分比的，典型地是如通过分析性hplc所量化的。治疗方法
式(a)化合物及其药学上可接受的盐适用于多种医学目的。式(a)化合物可以在用于预防或治疗fxr和/或tgr5介导的疾病和病症的方法中使用。在一个实施例中，疾病或病症选自胆道闭锁、胆汁郁积性肝病、慢性肝病、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、丙型肝炎感染、酒精性肝病、原发性胆汁性硬化(pbc)、归因于进行性纤维化的肝损害、肝纤维化和心血管疾病(包括动脉粥样硬化、动脉硬化、高胆固醇血症和高脂质血症)。在一个实施例中，式(a)化合物可以在用于使甘油三酯降低和/或使hdl增加的方法中使用。式(a)化合物的其他作用包括使碱性磷酸酶(alp)、胆红素(bilirubin)、alt、ast和ggt降低。在一个实施例中，本申请涉及一种包含一种或多种式(a)化合物和药学上可接受的载体的药物组合物，其中所述一种或多种式(a)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或氨基酸缀合物通过本申请的方法产生。
在一个实施例中，口服、胃肠外或局部给予化合物或药物组合物。在一个实施例中，口服给予化合物或药物组合物。
在一个实施例中，本申请涉及一种用于抑制罹患胆汁郁积性病症的受试者的纤维化的方法，所述方法包括向所述受试者给予有效量的一种或多种式(a)化合物或其药物组合物的步骤，其中所述一种或多种式(a)化合物通过本申请的方法产生。在一个实施例中，本申请涉及一种用于抑制不罹患胆汁郁积性病症的受试者的纤维化的方法，所述方法包括向所述受试者给予有效量的一种或多种式(a)化合物或其药物组合物的步骤，其中所述一种或多种式(a)化合物通过本申请的方法产生。在一个实施例中，待抑制的纤维化发生在表达fxr的器官中。
在一个实施例中，胆汁郁积性病症定义为具有碱性磷酸酶、7-谷氨酰基转肽酶(ggt)和5'核苷酸酶的血清水平异常升高。在另一个实施例中，胆汁郁积性病症进一步定义为呈现有至少一种临床症状。在另一个实施例中，症状是发痒(瘙痒)。在另一个实施例中，纤维化选自下组，该组由以下组成：肝纤维化、肾纤维化和肠纤维化。在另一个实施例中，胆汁郁积性病症选自下组，该组由以下组成：原发性胆汁性硬化、原发性硬化性胆管炎、药物诱发的胆汁郁积、遗传性胆汁郁积和妊娠肝内胆汁郁积。在另一个实施例中，受试者不罹患与选自下组的疾病或病症相关的胆汁郁积性病症，该组由以下组成：原发性肝和胆管癌、转移癌、败血症、长期全胃肠外营养疗法、囊性纤维化和肉芽肿性肝病。
在一个实施例中，受试者患有与选自下组的疾病相关的肝纤维化，该组由以下组成：乙型肝炎；丙型肝炎；寄生性肝病；移植后细菌性、病毒性和真菌性感染；酒精性肝病(ald)；非酒精性脂肪肝病(nafld)；非酒精性脂肪性肝炎(nash)；由甲氨蝶呤(methotrexate)、异烟肼(isoniazid)、酚丁(oxyphenistatin)、甲基多巴(methyldopa)、氯丙嗪(chlorpromazine)、甲苯磺丁脲(tolbutamide)或胺碘达隆(amiodarone)诱发的肝病；自体免疫肝炎；类肉瘤病；威尔逊氏病(wilson'sdisease)；血色素沉着病；高雪氏病(gaucher'sdisease)；iii、iv、vi、ix和x型糖原贮积病；α1-抗胰蛋白酶缺乏症；齐薇格综合征(zellwegersyndrome)；酪氨酸血症；果糖血症；半乳糖血症；与巴德-吉亚利综合征(budd-chiarisyndrome)、静脉闭塞疾病或门静脉血栓形成相关的血管紊乱；和先天性肝纤维化。
在一个实施例中，受试者患有与选自下组的疾病相关的肠纤维化，该组由以下组成：克罗恩氏病(crohn'sdisease)、溃疡性结肠炎、放射后结肠炎和显微镜下结肠炎。
在一个实施例中，受试者患有与选自下组的疾病相关的肾纤维化，该组由以下组成：糖尿病性肾病变、高血压性肾硬化、慢性肾小球性肾炎、慢性移植肾小球病变、慢性间质性肾炎和多囊性肾病。
实例
以下实例意图说明本发明的某些实施例，但不例示本发明的完全范围。
实例1.合成式(i)化合物：
其中r1是h或c1-c6烷基，
式(i)化合物可易于由本领域技术人员制备。具体来说，本发明化合物可根据美国专利号7,786,102和7,994,352中的公开程序制备。
实例2.合成化合物1
化合物1可根据wo2013/192097中的公开程序制备。在这个程序中，3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸(kcla)用作可商购获得的起始物质。
实例3.合成化合物7(int-767)
化合物1用作起始物质。广义地说，使化合物1的侧链酸缩短一个碳。使所得醇转化成硫酸酯，并且进一步转化成钠盐。具体来说，化合物1的酯化继之以格里纳(grignard)反应(分别是步骤1和2)提供原醇化合物3。在脱水(步骤3)和乙酸酯保护(步骤4)之后，将所得化合物4用臭氧处理(步骤5a)，还原(步骤5b)，并且通过柱色谱法纯化(步骤5c)。步骤6被分成3个阶段：步骤6a(磺化)、步骤6b(脱保护和盐转换)和步骤6c(转化成na+盐，冻干，na2so4去除和再冻干)。
步骤1.合成化合物2
向反应容器中装入化合物1(1.064kg，1当量)、h+dowex(相对于化合物1，10重量％)和甲醇(12.5体积)。在温和回流(约65℃)下搅拌内含物19-20小时，之后，反应根据tlc[6:4乙酸乙酯:己烷(etoac:hex)，磷钼酸(pma)染色]以及hplc分析而被视为完成。在冷却至约25℃后，过滤内含物，并且用2体积的甲醇(meoh)洗涤过滤器。使滤液浓缩直至速率已显著降低。接着，为去除残余甲醇，将浓缩物用dcm(4体积)再溶解，并且浓缩直至馏出物速率已显著降低。重复进行dcm溶剂交换/浓缩。在用10体积的dcm稀释浓缩物之后，添加21％碳酸钠(2体积)，并且将内含物搅拌45分钟。分离有机层并再装入反应器中，并且用饱和氯化钠(盐水)萃取。在相切割之后，有机溶液经硫酸钠干燥，过滤并再装入反应器中。在浓缩以及直至馏出物速率已显著降低之后，用无水四氢呋喃(thf)(2体积)对浓缩物进行溶剂交换，并且浓缩直至馏出物速率已显著降低。将溶剂交换重复3-4次，直至浓缩物样品ipc显示出≤500ppmmeoh和≤1250ppmdcm。将浓缩物用约2体积的无水thf稀释并滴入鼓中，称重，并且测定wt％以计算步骤2的当量。
步骤2.合成化合物3
向1号反应容器中装入来自先前步骤的在thf中的化合物2。在考虑wt.％下，用无水thf稀释溶液以获得约17体积的总无水thf。向2号反应器中装入苯基溴化镁(1.0m于thf中)(5当量)，并且用最少约1体积的无水thf冲洗管线。在允许发生温升以及使反应器温度朝缓慢升温至约60℃，在维持温度<65℃的速率同时，将1号反应容器的内含物(即底物)缓慢装入2号中的格里纳溶液中。在添加完成(以及最小量无水thf管线冲洗)后，使反应混合物搅拌1小时，之后，根据tlc(6:4etoac:hex，pma染色)以及hplc分析而被视为完成。向3号反应容器中装入约12.5体积的3nhcl溶液，并且冷却至2℃-5℃。在维持内部温度≤15℃的速率下，将来自2号的反应混合物缓慢逆向猝灭至3号中的hcl溶液中。使淬灭的反应混合物继续在约15℃下搅拌45分钟。停止搅拌并使各层分离，并且进行相切割。向水相中装入约10体积的甲基叔丁基醚(mtbe)，并且使混合物剧烈搅拌约20分钟。在停止搅拌之后，使各相分离，并且再次用mtbe(约7.5体积)萃取水相。合并有机相并用盐水(约7.5体积)萃取，进行相切割，并且有机相经硫酸钠干燥。浓缩经过滤溶液直至馏出物速率已显著降低。添加无水乙醇(4体积)，并且浓缩直至馏出物速率已显著降低。重复进行乙醇溶剂交换并用约4体积的无水乙醇稀释浓缩物，并且滴入鼓中，称重并测定wt％以计算步骤3的当量。
步骤3.合成化合物3a
向反应容器中装入来自先前步骤的在无水乙醇中的化合物3。在考虑wt.％下，用无水乙醇稀释溶液以获得等于9-10体积的总量的无水乙醇。添加对甲苯磺酸(0.05当量)，并且使反应加热至75℃，持续16小时。通过tlc(4:6etoac:hex，pma染色)以及通过hplc分析来确定反应完成。在使内含物冷却至<20℃之后，装入饱和碳酸氢钠水溶液(0.1当量)。使反应混合物浓缩至它的原始体积的约1/4，并且用dcm(7体积)稀释。接着，添加饱和碳酸氢钠水溶液(7体积)，并且剧烈搅拌混合物，使各相分离并进行相切割。向有机层中装入盐水(3体积)。剧烈搅拌混合物，使各相分离，并且进行相切割。有机层经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩直至馏出物速率已显著降低。添加无水thf(4体积)，并且浓缩稀释溶液直至馏出物速率已显著降低。重复进行无水thf溶剂交换/浓缩。将浓缩物于无水thf(4体积)中稀释，滴入鼓中，称重，并且测定wt.％以计算步骤4的当量。
步骤4.合成化合物4
向反应容器中装入来自先前步骤的在无水thf中的化合物3a。在考虑wt.％下，用额外thf稀释溶液以获得等于约6体积的总量的thf。添加吡啶(1.66当量)和乙酸酐(1.66当量)。在单独容器中将二甲基氨基吡啶(dmap)(0.07当量)溶解于10体积thf(相对于dmap)中，并且在维持反应温度≤30℃同时缓慢装入反应混合物中。使反应在25℃下保持16小时。通过tlc(4:6etoac:hex，pma染色)以及通过hplc分析来确定反应完成。在完成后，使反应冷却至0-5℃，并且在维持淬灭温度≤25℃同时用水(2体积)缓慢淬灭。停止搅拌，并且使各层分离。在相切割之后，将水层用dcm萃取两次(分别是2体积和1体积)，并且依序用1nhcl(4体积)、9％碳酸氢钠水溶液(2体积)和盐水(2体积)萃取合并的有机层。有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干燥。
步骤5a.合成化合物5
借助于dcm(5.7体积)和甲醇(1.5体积)，向反应容器中装入化合物4。在搅拌和达到均质后，使反应混合物冷却至-65℃至-70℃。在维持温度≤-60℃同时，使臭氧(通过臭氧发生器)鼓泡穿过溶液，直至溶液变成浅绿色/蓝色。通过用三苯基膦(tpp)使小型等分试样淬灭以及通过tlc(2:8，etoac:hex)和hplc进行分析来确认反应完成。用预先溶解于dcm(相对于底物，0.7体积)中的三苯基膦(1.12当量)的溶液极其缓慢淬灭所得中间臭氧化物，在添加期间维持淬灭温度≤-50℃。使反应混合物缓慢升温(经约6小时)至0±5℃。在维持内部温度<5℃同时，缓慢添加水(4.8体积)。将混合物转移至分离容器中，并且使有机层分离。将水层用dcm(2体积)反萃取，进行相切割，并且将合并的有机层用盐水(1.1体积)洗涤，进行相切割并经硫酸钠干燥，随后在真空中浓缩至干燥。
步骤5b和5c.合成化合物6
借助于200度(proof)乙醇(2体积)，向反应容器中装入化合物5。在搅拌和达到均质后，使反应混合物冷却至0±5℃。在维持反应温度≤5℃的速率下，向混合物中逐份装入硼氢化钠(2.2当量)。在使反应升温至15℃±5℃之后，通过tlc(4:6，etoac:hex)和hplc进行分析来确定反应完成。在使反应混合物冷却至0±5℃之后，在维持温度≤5℃同时，通过逐滴添加1nhcl(约4.5-5体积)来淬灭反应(监测ph至淬灭结束；所需ph＝2)。将内含物转移至分离容器中，并且添加dcm(2.7体积)。分离有机层，并且将水层用dcm(2体积)反萃取并进行相切割；合并的有机层用盐水(1.3体积)洗涤，进行相切割并经硫酸钠干燥，随后在真空中浓缩至干燥。通过用etoac和hex梯度洗脱进行的柱色谱法以及使纯级分浓缩来纯化残余物以提供纯化合物6(以约70％总产率)。
步骤6.合成化合物7a
借助于dcm(5.5体积)，向反应容器中装入化合物6(250.8g，1当量)。在搅拌和达到均质后，将三氧化硫吡啶络合物(1.05当量)一次性装入。在室温下搅拌反应混合物1小时，并且通过hplc进行分析来确定完成。将反应内含物转移至旋转蒸发器(rotaryevaporator/rotovap)中，并且浓缩至接近干燥。在添加甲醇(meoh)(0.4体积)之后，使所得溶液浓缩至干燥。泡沫状固体用meoh(0.4体积)再稀释，并且通过二氧化硅塞(相对于化合物6，约8/1wt/wt％)用meoh洗脱。通过tlc(9:1，dcm:meoh)确定的含有产物的所有级分都在真空中浓缩至干燥，并且通过硅胶柱纯化来以93％产率；98％纯度提供329.8g纯化合物7a。
步骤6b.合成化合物7b
借助于无水变性etoh(11.9体积)，向反应容器中装入化合物7a。在添加水(2.8体积当量)和amberlysth+树脂(相对于化合物7a，0.5wt/wt％)之后，在40℃±5℃下搅拌反应混合物60-70小时。通过hplc分析来确定反应完成。使反应内含物冷却至室温，过滤(以去除树脂)，转移至旋转蒸发器中并浓缩至接近干燥。
去除残余乙酸：向各旋转蒸发烧瓶中装入水(约3.2/1wt/wt％水/烧瓶内含物的质量)。使内含物浓缩至接近干燥。通过装入与先前装入的相同量的水以及浓缩至干燥来重复操作。通过1hnmr相对积分(wt/wt％)来测定残余乙酸。
步骤6c.合成化合物7c
在向各旋转蒸发烧瓶中装入水(与先前向各烧瓶中的装入相同量)之后，将各烧瓶装以28％氢氧化铵直至ph＝10。使各旋转蒸发烧瓶的内含物浓缩至接近干燥。再次，向各烧瓶中装入相同量的水以及28％氢氧化铵直至ph＝10。在浓缩至干燥(或直至观察到最小量的水馏出物)之后，针对残余吡啶，提交采用的各旋转蒸发烧瓶的样品(gc)。
步骤c.合成化合物7
借助于水(6.4体积)，向分离容器中装入化合物7c。在以体积计4/1添加mtbe/2-甲基四氢呋喃的混合物(总计4.9体积)以及搅拌1分钟之后，分离各相。向水相中添加mtbe(2.5体积)，并且搅拌混合物1分钟，随后进行相切割。水相通过旋转蒸发器来浓缩，用水(对于涉及的各烧瓶，约3-4体积)稀释并再浓缩。重复进行水溶剂交换/浓缩，并且将残余物再溶解于水(约3体积)中并缓慢穿过离子交换柱(diaion树脂na+型，8.1/1，wt./wt.树脂/化合物7c)。使含有颜色(棕色至浅褐色)的级分浓缩至干燥(或接近干燥)，并且用水(4.35体积)稀释并冻干。在冻干器循环完成(并且kf≤5％)之后，将所得蓬松固体添加至含有无水乙醇(3.8-4.0体积)的反应容器中直至观察到浅色浆液。将溶液精制过滤以去除任何痕量硫酸钠副产物。在浓缩至干燥之后，残余物用水(4体积)稀释并浓缩至干燥(残余etoh去除)。在用水(4.35体积)稀释残余物之后，使溶液再经受冻干。通过高分辨率电喷雾离子化质谱分析法将化合物7的阴离子(c25h43o6s)的分子量确认为471.28m/e。所述过程提供316.1g化合物7，通过hplc(elsd)99％纯度。通过相同过程制备的化合物7的其他批次以约72％产率和99.2％纯度(通过hplc)提供化合物7。
化合物7也通过反相色谱法来进一步纯化。程序需要将化合物7溶解于wfi(10.1体积)中，并且装载至径向压缩biotageflash400l反相柱装置上。使hplc级乙腈(acn)与wfi的比率的梯度缓慢增加，并且通过hplc来分析级分以测定所需纯级分(>90％至100％纯度)。然后使纯级分浓缩至合理体积以装载至冻干器中。(hplc测定按照原样(wt/wt％)为103.5％)。