一种检测肿瘤代谢通路基因表达的引物组、PCR芯片及其应用的制作方法

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种检测肿瘤代谢通路基因表达的引物组、pcr芯片及其应用。

背景技术：

肿瘤细胞与正常细胞相比，肿瘤细胞的代谢改变和异常是肿瘤的又一重要特征，其与肿瘤的发生发展互为因果。肿瘤细胞即使在供养充足情况下，线粒体功能发生缺陷与三羧酸循环代谢改变导致氧化还原代谢失调，从而通过糖酵解途径大量吸收葡萄糖产生能量，满足快速生长需求，此即著名的warburg效应。肿瘤代谢的改变已成为新的肿瘤特征之一(hallmarksofcancer)。因此，从新的角度(如肿瘤代谢)去探索肿瘤细胞与正常细胞关键性不同的生物学特性，并针对该靶点进行特异性精准干预是肿瘤研究领域的重大科学问题。肿瘤代谢异常及其异于正常细胞的调控机制的研究是国际肿瘤研究领域的新热点，被认为是未来十年生物医学领域最具有突破性进展的重要学科之一。该领域的研究对进一步认识肿瘤的生物学特性和确定关键干预靶点以期更有效防治癌症具有重大意义。

目前使用比较广泛的基因表达检测手段依然是pcr和基因芯片技术。pcr一次只能检测单个或少量基因，而基因芯片虽然可以检测大量基因及其表达，但是假阳性率高，准确性不足。新一代测序具有高通量、准度高的优点，既可以一次性检测大量基因，准确率又高于基因芯片，但是其成本昂贵，结果分析复杂，周期长等缺点。而目前rt²profiler^tmpcr芯片既可以进行特定的信号通路的研究，也可以作为验证芯片结果的方法，其特异性高，灵敏度高和重复性好。但是其往往仅含有某个代谢通路的基因，如葡萄糖代谢pcr芯片检测葡萄糖和糖原代谢相关的调控和酶通路的84个关键基因，因此有一定的局限性，而且其价格较昂贵，约4800元/板/样，如要检测大量样品及数个通路时，成本会极高。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是克服现有技术中的基因表达检测技术手段在研究检测肿瘤样品方面的缺陷和不足，提供一种操作简便，结果可靠，成本低廉的代谢型pcr芯片用于检测肿瘤代谢通路基因的异常表达，所述pcr芯片基于sybrgreen的实时定量pcr方法，通过检测肿瘤细胞或者组织中mrna水平的表达来发现代谢通路中异常表达的基因，以发现与临床预后、耐药等相关的异常表达基因，进一步研究该基因在肿瘤发生、发展中的作用及与预后的相关性，有望发现关键代谢蛋白靶标而实现对特定肿瘤发生或预后的精准诊断，以及实现个体化干预治疗。

本发明的目的是提供一种检测肿瘤代谢通路基因的引物组。

本发明的另一目的是提供一种代谢型pcr芯片。

本发明再一目的是提供上述代谢型pcr芯片在肿瘤研究中的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种检测肿瘤代谢通路基因表达的引物组，包括分别特异性扩增肿瘤代谢通路相关的168个基因的引物对，所述引物对序列依次如seqidno.1～seqidno.336所示。

本发明的难点在如何在同一次实验中，相同的pcr反应条件下保证不同的基因有相近的扩增效率，并且获得与单个基因实时定量pcr反应相当的灵敏度，特异性和可重复性。因此本发明首先设计筛选出最佳的候选引物，接着通过实验，在不同反应条件下，检测pcr反应体系与pcr引物的组合，最终获得了优化的引物和pcr反应体系，能够同时特异性扩增出目的168个基因，适应pcr芯片的要求。该pcr芯片能够通过检测不同组织(或细胞)中代谢基因的表达，而发现异常表达的基因。

本发明所使用的引物的cg含量，解链温度(tm)，以及其他一些化学的和物理的特性都相似，以保证在相同的pcr条件(尤其是相同退火温度)下，所有不同的基因都能扩增出特异性产物；而且引物扩增的片段大小均在100到200bp左右，确保在相同的反应时间内，不同的基因均能扩增出完整片段；并增强引物3’端的铆定能力，减少引物二聚体和非特异性退火的发生。

优选地，所述检测引物组还包括至少一对特异性扩增内参基因β-actin、prkg1、gapdh、gusb、hmbs的引物对，所述引物对序列依次如seqidno.337～seqidno.346所示。

优选地，所述引物组还包括有能特异性的检测非转录的基因组dna重复片段，从而检测样品中是否存在dna污染的“基因组dna参照(gdc)”引物，其序列如seqidno.347～seqidno.348所示。

优选地，所述引物组还包括用于检测rt反应的效率的“反转录参照(rtc)”引物，其序列如seqidno.349～seqidno.350所示。

优选地，所述引物组还包括用于检测pcr反应效率的“阳性pcr参照(ppc)”引物，其序列如seqidno.351～seqidno.352所示。

一种代谢型pcr芯片，所述pcr芯片包含上述任一所述引物组。

优选地，所述引物组中的引物对每对都单独存在于pcr板孔中。

更优选地，所述pcr板孔中的引物为液体，其引物浓度为1.2～1.6pmol。

更优选地，引物浓度为1.4pmol。

优选地，所述pcr芯片包括特异性扩增肿瘤代谢通路相关的168个基因的引物对，所述引物对序列依次如seqidno.1～seqidno.336所示；还包括特异性扩增内参基因β-actin、prkg1、gapdh、gusb、hmbs的引物对，所述引物对序列依次如seqidno.337～seqidno.346所示；还包括检测是否存在dna污染的引物，其序列如seqidno.347～seqidno.348所示；还包括检测反转录效率的引物，其序列如seqidno.349～seqidno.350所示；还包括检测pcr扩增效率的引物，其序列如seqidno.351～seqidno.352所示。

优选地，所述pcr芯片的pcr反应程序为95℃预变形30s；95℃变形5s，60℃退火延伸30s，重复40个循环；65℃，1min；95℃15s。

优选地，所述pcr芯片的制备方法包括如下步骤：

s1.引物稀释：将合成的引物采用无rna酶水(rnase-free水)溶解，终浓度为10μmol。冰上操作，负20℃，保存备用。

s2.pcr芯片母板的制备：按照pcr芯片基因引物相对应的孔将步骤s1稀释的引物(正向和反向引物混合)加入进圆底96孔板，200μl/孔。

s3.pcr芯片工作板的制备：采用高通量自动移液系统将母板的引物80μl分装进含有无rna酶水160μl的圆底96孔板中；进一步采用高通量自动移液系统将该96孔板中的引物10.5μl分装进pcr板中，负20℃，保存备用。

上述pcr芯片包含有可分别特异性扩增与肿瘤代谢通路相关的168个基因的引物组，因此可将所述pcr芯片应用到肿瘤研究当中。

优选地，所述应用为筛选肿瘤耐药株异常表达的代谢基因或/和与临床预后相关的异常表达的代谢基因。

优选地，所述应用为筛选以异常表达的基因为靶点的抗肿瘤药物。

优选地，所述肿瘤为淋巴瘤或/和白血病。

更优选地，所述淋巴瘤为淋巴瘤细胞株su-dhl-2，raji或jeko-1等；所述白血病为白血病细胞株mv411。

进一步，所述pcr芯片是研究一组特异性基因表达水平的理想方法，基于sybrgreen的实时定量pcr方法，适用面广，简单方便，具有广泛的应用前景。

进一步，所述pcr芯片包括特异性扩增代谢通路的168个基因的引物对，芯片中所包含的基因更完整，更精确。

本发明的具体实施中，检测确认引物人全基因组中的高度特异性，有效避免非特异性产物产生。并且引物不会扩增e.coli基因组，后者是taqdna多聚酶的常见污染源。

本发明的具体实施中，所使用的引物的cg含量，解链温度(tm)，以及其他一些化学的和物理的特性都相似，以保证在相同的pcr条件(尤其是相同退火温度)下，芯片中的不同的基因都能扩增出特异性产物。

本发明的具体实施中，引物扩增的片段大小均在100到200bp左右，确保在相同的反应时间内，不同的基因均能扩增出完整片段；并增强引物3’端的铆定能力，减少引物二聚体和非特异性退火的发生。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明的引物组可分别特异性扩增与肿瘤代谢通路相关的168个基因，且特异性好、准确度高、重复性好。

(2)本发明的代谢型pcr芯片，可用于检测代谢通路的基因表达且基因范围相对集中，节省了在数据分析方面所花费的时间，相对更简洁、针对性更强，所得到的信息也有利于接下来的更深入、更准确的研究。

(3)本发明的代谢型pcr芯片操作简便，涵盖基因广泛、特异性好、准确度高、重复性好，耗时短，成本低廉。

(4)本发明的代谢型pcr芯片可用于发现异常肿瘤(高转移、高恶性、预后差、耐药等)中代谢通路异常表达的基因，有望发现关键代谢蛋白靶标而实现对特定肿瘤发生或预后的精准诊断，以及实现个体化干预治疗。

附图说明

图1为代谢型pcr芯片的plate1和plate2的示意图；plate1a1-g12和plate2a1-g12孔包含了代谢通路的168个相关基因的引物。

图2为代谢型pcr芯片的各个引物的特异性(熔解曲线)图。

图3为代谢型pcr芯片的重复性试验图。

图4为代谢型pcr芯片的灵敏性试验图；当总rna量低至50ng时，使用pcr芯片实验体系仍能获得很高的阳性信号比例。

图5为索拉菲尼耐药株构建的过程及耐药株的成功建立图。

图6为代谢型pcr芯片在耐药细胞株mv411r中对异常表达基因的筛选图。

图7为代谢型pcr芯片筛选结果的可靠性和准确性验证图。

图8为索拉菲尼耐药株对其他flt3抑制剂存在交叉耐药性的验证图。

图9为代谢型pcr芯片筛选异常表达的基因为靶点药物的抗肿瘤应用结果。

图10为代谢型pcr芯片检测11株淋巴瘤细胞中异常基因的表达情况结果。

图11为代谢型pcr芯片筛选出的异常表达的基因与临床淋巴瘤预后的关系。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1肿瘤代谢通路相关基因的pcr扩增引物设计

1.本发明人团队通过大量前期研究，确定了与肿瘤代谢通路相关的168个基因，其基因名及功能分类如表1所示。

表1本发明的168个与肿瘤代谢通路相关基因及其功能分类

2.本发明团队通过大量研究，设计和筛选出了肿瘤代谢通路相关的168个基因相对应的特异性扩增引物，所述引物扩增效率高，引物的cg含量均在35～65％之间，退火温度(tm)均为60～68℃之间，引物长度均为10～23bp，扩增的片段大小都在100～200bp。

3.选定β-actin、prkg1、gapdh、gusb和hmbs作为内参基因。

同时还设计了以下三种引物：

(1)“基因组dna参照(gdc)”引物：能特异性的检测非转录的基因组dna重复片段，从而检测样品中是否存在dna污染；

(2)“反转录参照(rtc)”引物：用于检测rt反应的效率；

(3)“阳性pcr参照(ppc)”引物：检测pcr反应效率。

4.上述基因及其引物序列见表2

表2代谢型pcr芯片扩增的各个代谢通路的基因的特异性引物序列

实施例2制备代谢型pcr芯片

1、将实施例1设计出的引物组由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

2、将合成的引物采用无rna酶水(rnase-free水)溶解，终浓度为10μmol。冰上操作，负20℃，保存备用。

3、pcr芯片母板的制备：按照pcr芯片基因引物相对应的孔将引物(正向和反向引物混合)加入进圆底96孔板，200μl/孔。

pcr芯片工作板的制备：采用高通量自动移液系统将母板的引物80μl分装进含有无rna酶水160μl的圆底96孔板中；进一步采用高通量自动移液系统将该96孔板中的引物10.5μl分装进pcr板中，负20℃，保存备用。

经过验证，所述基因对应的引物在制备的pcr芯片中的分布如图1所示。

实施例3肿瘤细胞rna提取及逆转录

1、细胞培养：淋巴瘤细胞株su-dhl-2、raji、jeko-1等及白血病细胞株mv411按照说明进行培养。

2、rna提取及逆转录

(1)预处理：玻璃仪器用0.1％depc水处理过夜，240℃烘烤4h。塑料器材用0.1％depc水处理过夜，1.034×10spa，121℃高压灭菌20min，烘干。

(2)收集细胞以及总rna的提取：

a.细胞收集(5×10⁶～10⁷)弃培养基，pbs(depc水处理)洗涤，向细胞中中加入1mltrizol，吹打数次，将细胞悬液转移到1.5mleppendorf管中，室温静置5min；

b.向细胞匀浆液中按每1mltrizol加0.2ml氯仿，用力振摇15sec，室温放置2min，4℃，12,000xg离心15min。离心后液体分三层，下层为红色的酚-氯仿相，中间层，上层为无色的水相(约占溶液总体积的60％)，rna几乎完全在水相中；

c.将上层水相转至一干净1.5mleppendorf管中，按每1mltrizol加入0.5ml异丙醇，室温放置10min，4℃12,000xg离心10min；

d.弃上清，加入1ml75％乙醇后涡旋震荡，7,500xg，4℃离心5min。弃上清，空气中干燥rna5～10min，加入适量depc水溶解rna。

e.测rna的浓度及纯度,a260/2801.8-2.0左右。

(3)cdna第一链的合成：在无rna酶的pcr管中依次加入以下组分：

a.去除rna中的dna

混匀，甩下，42℃，2min，室温5min

b.反转录反应(冰上进行，普通pcr仪进行)

c.反转录后，负20℃，保存备用。

实施例4验证代谢型pcr芯片的引物特异性、重复性及不同量的rna扩增后的阳性比例

1、将实施例3逆转录后的cdna采用无rna酶水稀释10倍(重复性验证)，或稀释10倍，20倍(不同浓度的阳性比例)。

2、取sybrgreen1250μl+稀释后的cdna192μl混匀。

3、采用连续分液器将上述混匀的液体加入制备的pcr芯片(96孔pcr板)，每孔14.5μl。终体积即为25μl。

(1)所述ppc孔中为阳性pcr参照(ppc)引物，用于检测pcr反应的效率，其序列为：

forward(5‘-3’)：aactccatcatgaagtgtgacg；

reverse(5‘-3’):gatccacatctcgctggaagg；

加入扩增阳性的β-actin产物(pcr产物)，以检测pcr扩增的效率。

(2)所述rtc孔中为反转录参照(rtc)引物，用于检测rt反应的效率，其序列为：

forward(5‘-3’)：aactccatcatgaagtgtgacg；

reverse(5‘-3’):gatccacatctcgctggaagg

加入rt后的产物，以检测rt反应的效率。

(3)所述gdc孔中为基因组dna参照(gdc)，该引物能特异性的检测非转录的基因组dna重复片段，引物序列为：

forward(5‘-3’)：aactccatcatgaagtgtgacg；

reverse(5‘-3’):gatccacatctcgctggaagg；

加入提取的rna(未进行rt)，以检测扩增中有无基因组dna污染。

4、采用荧光定量pcr仪bio-radcfx96，进行pcr反应。

扩增条件为：95℃30sec；95℃5sec，60℃30sec，40个循环；65℃15sec；95℃15sec。

5、结果

结果如图2、3、4所示：

如图2所示，代谢型pcr芯片plate1和plate2的目的基因引物的熔解曲线。结果显示168个目的基因的引物特异性强。

如图3所示，代谢型pcr芯片plate1和plate2的目的基因扩增的重复性。结果显示代谢型pcr芯片重复性好(rsd<0.01)。

如图4所示，代谢型pcr芯片plate1和plate2的目的基因引物的在不同浓度下的阳性ct值。结果显示代谢型pcr芯片灵敏度好，可用于下一步的试验。

实施例5代谢型pcr芯片在肿瘤研究中的应用

1、采用代谢型pcr芯片筛选耐药株异常表达的代谢基因

(1)构建索拉菲尼耐药的白血病mv411细胞株。构建流程如图5a所示：最终耐药株mv411r培养于含有500nm的sorafenib的含有10％fbs的1640培养基中；

(2)如图5b所示，构建的索拉菲尼耐药株对索拉菲尼有显著的耐药性；

(3)采用制备的代谢型pcr芯片检测耐药株mv411r的肿瘤代谢相关基因的表达；

(4)采用2^-△△ct法行数据统计，计算各个基因的相对表达量。

(5)结果

结果如图6所示，txnrd3，pdk1基因在索拉菲尼耐药的白血病细胞株mv411r中显著高表达；

因为pdk1基因在肿瘤耐药中的作用已有多篇文章报道，因此本专利未进一步验证与检测，也进一步说明了本专利发明的pcr芯片的可靠性和可利用性。

2、异常表达基因的准确性验证

(1)采用rt-qpcr的方法检测txnrd3基因在耐药株mv411r中的表达；

(2)采用westernblot的方法检测txnrd3基因在耐药株mv411r中的表达，按照说明进行操作；

(3)结果

结果如图7所示，txnrd3mrna和蛋白水平在索拉菲尼耐药的白血病细胞株mv411r中显著升高，证明所述代谢性pcr准确性高。

实施例6代谢型pcr芯片在肿瘤研究中的应用：代谢型pcr芯片筛选出异常表达的基因txnrd3为靶点的药物对耐药株的作用

1、前期研究表明对索拉菲尼耐药的细胞对其他flt3抑制剂均有交叉耐药性，如图8所示，研究表明auranofin可以抑制硫氧还蛋白还原酶的活性而抑制肿瘤细胞的生长；

2、检测索拉菲尼耐药的细胞株mv411r对auranofin的敏感性；

3、结果

结果如图9所示，敏感株mv411和耐药株mv411r对auranofin均有较好的敏感性，两者的ic50无差异。

实施例7代谢型pcr芯片在肿瘤研究中的应用：采用代谢型pcr芯片检测淋巴瘤肿瘤样品异常表达的代谢基因与临床预后的关系

1、采用代谢型pcr芯片检测11株淋巴瘤细胞中代谢基因的表达；

2、采用2^-△△ct法行数据统计，计算各个基因的相对表达量。

3、结果

结果如图10所示，glt1d1基因在临床疗效好的弥漫大b淋巴瘤中表达低，而在恶性度高、难治疗的伯基特和套细胞淋巴瘤中表达相对较高。

4、进一步验证淋巴瘤肿瘤样品中glt1d1基因的表达与临床预后的关系

(1)采用代谢型pcr芯片检测临床淋巴瘤肿瘤样品中glt1d1基因的表达；

(2)采用δct法行数据统计(本发明相对应的excel表计算，直接输入ct值即可)，计算各个基因的相对表达量；

(3)结果

结果如图11所示，glt1d1基因在临床中高表达与临床预后差相关。

综上所述，制备的代谢型pcr芯片在耐药的肿瘤细胞中可以成功、有效的筛选出异常表达的代谢基因。进一步验证筛选结果，也显示了制备芯片的可靠性和准确性。而且针对筛选出异常表达的基因做为靶点，选用相应的药物可以有效的发挥抗肿瘤作用。而且该芯片用于临床肿瘤的检测也可以发现与临床预后差相关的基因。进一步研究该基因在肿瘤发生、发展中的作用及与预后的相关性。有望发现关键代谢蛋白靶标而实现对特定肿瘤发生或预后的精准诊断，以及实现个体化干预治疗。充分显示了制备的代谢型pcr芯片在肿瘤研究中的应用价值。

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<110>中山大学肿瘤防治中心

<120>一种检测肿瘤代谢通路基因表达的引物组、pcr芯片及其应用

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acggggttagggagattgtg20

<210>40

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>40

gcctgcaatagctccgaaga20

<210>41

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>41

tgacaattctcatctgaggtcca23

<210>42

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>42

cagggataccctttagcagtttt23

<210>43

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>43

atcaatcggactctggaaacgg22

<210>44

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>44

tcagggagtagcgcatggt19

<210>45

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>45

cctgctacatggcaactgcta21

<210>46

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>46

agaggtgcccaatgatggga20

<210>47

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>47

atgggaatgcgccccttatg20

<210>48

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>48

aggtggcggatgtagtctttt21

<210>49

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>49

cagggacaaatggcgagacta21

<210>50

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>50

ggggtgtgttccccaatctt20

<210>51

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>51

ggcagttccgagaaatcctct21

<210>52

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>52

ctccttggtctaacttgattccc23

<210>53

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>53

atgcctcactcgtacccag19

<210>54

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>54

tttccaccccaatttggctca21

<210>55

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>55

gcgtctaaatgagcgtcactat22

<210>56

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>56

ggaggcggggttacattgtag21

<210>57

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>57

tggtgtctatcgaagatccctt22

<210>58

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>58

ccttggcgatcctctttgg19

<210>59

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>59

ccgggaactcagacctcatc20

<210>60

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>60

ctctgcacctagtcgcatgg20

<210>61

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>61

ggccacttggacctccttc19

<210>62

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>62

gccattagactgagccagtttg22

<210>63

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>63

actttggagcagttattgggag22

<210>64

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>64

gacgccatttgacagcacc19

<210>65

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>65

gcagaagggaacaatgtcgtg21

<210>66

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>66

cgtagtagcaggagatcatcgt22

<210>67

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>67

ggagaccatcacgaatgcaga21

<210>68

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>68

tagacagggcaacaaagtgct21

<210>69

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>69

ttgaccaggagattgacatggg22

<210>70

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>70

caaccgcatcaggacctca19

<210>71

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>71

ggacaggagcaccctcatttc21

<210>72

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>72

cctccgaatggcatctctcag21

<210>73

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>73

ggcttcgacacccgtgtaa19

<210>74

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>74

cgtcaaacctcttgtcatcca21

<210>75

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>75

agaagcacccctactacaactc22

<210>76

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>76

tctggggaacaatctcctcgt21

<210>77

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>77

gaacaaggttaaagccgagcc21

<210>78

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>78

gtggcagattgactcctacca21

<210>79

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>79

aaactggatgttagagggaagcg23

<210>80

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>80

ggccgacctagatgactcataag23

<210>81

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>81

gatggggatcgaaacatgattct23

<210>82

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>82

gctggaaatacggaatgctgaa22

<210>83

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>83

gagctgctatgggacctgga20

<210>84

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>84

gctcgggcgtcaaaactga19

<210>85

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>85

gcagagagtgcttattgacatca23

<210>86

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>86

tgtgaaagtttctcactgctgg22

<210>87

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>87

aggagtcttccccttgcttt20

<210>88

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>88

cctgtcaccacaatcaccag20

<210>89

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>89

actgcctatatcgacttcgcc21

<210>90

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>90

aagccccattagtcactttgtag23

<210>91

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>91

ctgtgatacggatcagaaaccg22

<210>92

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>92

tccaccaaacaataaagagtgct23

<210>93

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>93

gatgtcccgttgccttattc20

<210>94

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>94

tgtaactcctttccccactca21

<210>95

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>95

ggagcatttctcgcgctaca20

<210>96

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>96

acaggcaattcttgtcgcaaa21

<210>97

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>97

tgaagtcacagggctactgtt21

<210>98

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>98

ccttccgttcactacgatttcct23

<210>99

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>99

atcggttcaagtatgctcggg21

<210>100

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>100

gaccaagttttccacgacgtt21

<210>101

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>101

aacccattcgcacaccttg19

<210>102

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>102

atggtaagcgcccatatcttg21

<210>103

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>103

ccctacagcctactggtgact21

<210>104

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>104

tgtactcgttgggctcaaagt21

<210>105

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>105

tgcttcctccacgaatttgaaa22

<210>106

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>106

ccaccatacatcatgtccacag22

<210>107

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>107

cggaactccacgagtgacc19

<210>108

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>108

ccccgccataccctgtagt19

<210>109

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>109

gaaatgtccgaagttcgcttga22

<210>110

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>110

tcagctttcgtagcagtgact21

<210>111

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>111

gaactgccctctagggagac20

<210>112

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>112

aaccttcctgctgttagggta21

<210>113

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>113

ggaggtgtgacagaacgcat20

<210>114

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>114

catctgctgccttcattattgc22

<210>115

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>115

caccaaatggcaccatacgaa21

<210>116

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>116

ccccataagcatgacgacctat22

<210>117

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>117

cccgtattatctggcagttcatc23

<210>118

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>118

atcagtctggtcacggtttgg21

<210>119

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>119

tgctgccaaagcacctattca21

<210>120

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>120

gtgaccggctgctattggg19

<210>121

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>121

tagtgcagaatacgcagtctttg23

<210>122

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>122

cagcatgttggaagccgac19

<210>123

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>123

aaacaattcctccgtccgcta21

<210>124

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>124

atggcattgcgaatgtcctct21

<210>125

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>125

tttggatcacaaccgagctaaag23

<210>126

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>126

acatctggatactgagtcgagg22

<210>127

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>127

ctagcatgacgactgaactgatg23

<210>128

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>128

agaggcactggtgatccaga20

<210>129

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>129

tcggcccagaacaatgctaaa21

<210>130

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>130

gcggctttggtctcgatgt19

<210>131

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>131

tgccagcatattggggtgg19

<210>132

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>132

ggaactcctcaaacctggtgg21

<210>133

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>133

gctggaggagaattacacccg21

<210>134

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>134

ggatgttcccatactggtccc21

<210>135

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>135

ttgagaaagcgttcaatgcca21

<210>136

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>136

cacgtagggtgaatccgtcag21

<210>137

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>137

gccatcatgccgtagcatc19

<210>138

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>138

agcctcagttccatcacagat21

<210>139

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>139

tggtagcatcccgtaattttgc22

<210>140

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>140

attcggcgtacagtctgcatc21

<210>141

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>141

gcagcagtgctatctaaagaagg23

<210>142

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>142

ccaggaaattgaacgcaggac21

<210>143

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>143

caaacaggaacccgaggtttt21

<210>144

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>144

cagcttggtaacacatgctgtat23

<210>145

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>145

acagctccccgtatcaagaaa21

<210>146

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>146

gcatgatcttcggaaggtcaa21

<210>147

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>147

taggttcaaaccgtcctctgt21

<210>148

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>148

gagagacccctgcactcaaag21

<210>149

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>149

catctctccactggactagcg21

<210>150

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>150

tccatcgcagagcaaggattc21

<210>151

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>151

tctccgttcccaaaggatatgt22

<210>152

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>152

caccagctaaaacctgtgcc20

<210>153

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>153

gagcaacggcttctgtcattt21

<210>154

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>154

tgcttgactcgtaccatgtcc21

<210>155

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>155

tttgctatggacgacaaatcaga23

<210>156

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>156

ctggcttcccaccattaagg20

<210>157

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>157

cagggtaagaccgtgatccaa21

<210>158

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>158

ccagctccaccgcatacttg20

<210>159

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>159

gccgagatggaccagatactc21

<210>160

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>160

ctgccgttgcaccaatgag19

<210>161

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>161

cttggggccaaaaaggtgttc21

<210>162

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>162

gaggtagcggtcctcatacag21

<210>163

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>163

tgctcacctatcctctgatcg21

<210>164

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>164

gctgggagtaggacagcac19

<210>165

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>165

aatgaggtgggcttaaagcaag22

<210>166

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>166

agttccactccacagttcaga21

<210>167

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>167

acaatcgggaaagtcaagatacc23

<210>168

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>168

caccaatcaacagagggctac21

<210>169

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>169

agggtctgttacctagcttgg21

<210>170

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>170

acgttcgcaatcctgtagattt22

<210>171

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>171

cagtgcatcggaaggacttg20

<210>172

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>172

gggatgagggacagtggaaa20

<210>173

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>173

agccttacgttctgcctagc20

<210>174

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>174

aaaccggccactcttcaagac21

<210>175

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>175

tggaggctctatccctgaaga21

<210>176

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>176

actatcacccggactcaatgtt22

<210>177

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>177

agcacccacagcatactcc19

<210>178

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>178

acactggaataagacgaccaatg23

<210>179

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>179

caaggcggtcaattagaagagg22

<210>180

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>180

ggctcccatagtttccattcc21

<210>181

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>181

cccaacaaggagtttatgctct22

<210>182

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>182

cacagtgacgttttatctgcct22

<210>183

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>183

ccgacgagtagtacaacacagc22

<210>184

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>184

gcttccttggacagttgagca21

<210>185

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>185

atgcctctgctccatactttgg22

<210>186

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>186

tggctcttgccatctcgtg19

<210>187

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>187

ttagcaaatcacccattggactg23

<210>188

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>188

cccctctaaaaatcggctccta22

<210>189

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>189

gctgttatgtacccaagcaaaga23

<210>190

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>190

tccccactcaattccatcact21

<210>191

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>191

tgtggctgaaatcttgcccaa21

<210>192

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>192

agttgaagcgcagagacaaca21

<210>193

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>193

tgactggtacaagacaaaggaga23

<210>194

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>194

tgccatctgagggcttattca21

<210>195

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>195

ggttggggagactacacctga21

<210>196

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>196

cttggccctggttttgggat20

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<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>197

ggggcgctgaagactatgc19

<210>198

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>198

ttccctgattccgcagacaaa21

<210>199

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>199

aactgattattggtgaccgacag23

<210>200

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>200

ggcaacagtggatctcttttga22

<210>201

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>201

ggtgagaggacccgtgaag19

<210>202

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>202

cgctaccttagaggtggcat20

<210>203

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>203

ggtagcggcagcaaaatatgc21

<210>204

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>204

ccacacagtcctcgatctgag21

<210>205

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>205

gctgggcgaaaacttgctcta21

<210>206

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>206

ccagtcgatagctggtggatt21

<210>207

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>207

caggtctctccgctcatcaag21

<210>208

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>208

gcccgaggttttaggtaattgt22

<210>209

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>209

ggaggacctgttgatgctagt21

<210>210

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>210

tggggtttttcgatgacttcaaa23

<210>211

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>211

atggcccaatttgtccgtaac21

<210>212

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>212

tggcgtagtaccaaaatgtgg21

<210>213

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>213

atacccaaggagtcgtttctgc22

<210>214

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>214

gattgacggatcagtcttagcc22

<210>215

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>215

gcagaacccgagtatcctaaagg23

<210>216

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>216

ttcccagcatccatagttgcc21

<210>217

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>217

aacgatggcactgaatttgga21

<210>218

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>218

aacgggtgttgttactcccag21

<210>219

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>219

tcagagcatcggtttcaaagg21

<210>220

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>220

agggctcggttagacagaaag21

<210>221

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>221

catacaagctacatttcgggacc23

<210>222

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>222

agcccggagtgtcttcagaa20

<210>223

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>223

tgtcctgttgagacactggtg21

<210>224

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>224

acaaacgcggtcatcccttc20

<210>225

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>225

gttttctgtccgtggaacatcc22

<210>226

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>226

atttctggtcaagccactctg21

<210>227

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>227

ggtcacggatggtgtgaag19

<210>228

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>228

gcggtacgaatcgtctcctg20

<210>229

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>229

ctgcccaaaatggtgggtgt20

<210>230

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>230

ggaggttttagtcctggtccc21

<210>231

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>231

ctgtccagaccaaaacgaagaa22

<210>232

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>232

cgatgcaacaaacccgtaagc21

<210>233

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>233

gggtccatatccacgacaaca21

<210>234

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>234

gacgtgtccacctctaatcattg23

<210>235

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>235

atgccagtacactgaatgatgg22

<210>236

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>236

gatgcagcatatacaggagcaa22

<210>237

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>237

cctcaccgccctctatgtg19

<210>238

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>238

cggccaatctcagtggagc19

<210>239

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>239

cccattctgaacccagacatc21

<210>240

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>240

aatgacctccccggtggta19

<210>241

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>241

gaccttgccagaataatcacagc23

<210>242

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>242

gggtgtggataatgtctccgt21

<210>243

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>243

gcccttcaaccaacatcttct21

<210>244

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>244

aggggtacagtgataaacggg21

<210>245

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>245

gccacggctcatcatagctg20

<210>246

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>246

agcaggtgtgctttgacttca21

<210>247

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>247

gtggggctataccgtgaagg20

<210>248

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>248

tggtccaaaaccatcgtaactg22

<210>249

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>249

ggaagccatcaaacgtgactt21

<210>250

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>250

cccgttccttattgaaaccaagc23

<210>251

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>251

ggtgggccaaaggatgaagag21

<210>252

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>252

ccacaagccaaacgacttcc20

<210>253

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>253

ggagaccagagtatgggagtt21

<210>254

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>254

ccggcgttttcgcatgttg19

<210>255

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>255

catttacagccttactgggagg22

<210>256

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>256

atgcagtcaaatctggtggca21

<210>257

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>257

gggagcctcttgcaggataaa21

<210>258

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>258

gaatggggcatagctcaccac21

<210>259

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>259

cagtcggtgtatgccttctcg21

<210>260

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>260

gagggacgccacattctcg19

<210>261

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>261

gaatgggcagaacgagcatc20

<210>262

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>262

ccggccctatgaggaacttc20

<210>263

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>263

cacgagtgatcccaagccc19

<210>264

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>264

caatgtaacctgcaccaacaatg23

<210>265

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>265

cccatcaaacaagggcttctg21

<210>266

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>266

ctgcatccgcctatacaatctt22

<210>267

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>267

gggaatgaaagaaagggttga21

<210>268

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>268

gccaagatggtgaagcagat20

<210>269

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>269

tgtgtgaagttactcgtgtcaaa23

<210>270

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>270

gcaggtactccgaagtctgt20

<210>271

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>271

ttcaagaccgagtggtcaaca21

<210>272

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>272

cacctcatactcaatggcgag21

<210>273

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>273

ggactggcaacaacaacaaga21

<210>274

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>274

agcggtacttggtggagtagt21

<210>275

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>275

cagagccggaagtggaacc19

<210>276

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>276

ccacggagcgaagaacttgat21

<210>277

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>277

atgggcaatttattggtcctcac23

<210>278

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>278

cccaagtaacgtggtctttcac22

<210>279

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>279

ctagccccgacactcagaaga21

<210>280

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>280

ggccatgatcgctatgggt19

<210>281

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>281

gctccttcaggaagatttggc21

<210>282

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>282

gggacaacaaagtctagcacca22

<210>283

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>283

tcatgtggtacgcccctgt19

<210>284

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>284

gcgggcaaagagtaaaccca20

<210>285

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>285

ccacggagatcattgctttca21

<210>286

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>286

aggtgtattgacccatgctagat23

<210>287

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>287

gaagctgtcggactacaaagg21

<210>288

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>288

tcggtggggcacacaaaag19

<210>289

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>289

atgacagagtagaacgtgtacgc23

<210>290

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>290

tacaggaggccaattccaaga21

<210>291

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>291

accatccctttggctattgaga22

<210>292

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>292

ttctgcctgcggagtttatca21

<210>293

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>293

ctgcccgtatgtccacctg19

<210>294

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>294

agctcctcgacgtagtagaga21

<210>295

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>295

gagccacggacaagactacc20

<210>296

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>296

gggcaggttactgattctgg20

<210>297

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>297

ccggatggagtccgtgagat20

<210>298

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>298

gggcacttgttggaacagc19

<210>299

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>299

tctacctgacgcgcaaatataag23

<210>300

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>300

cttctccgcagagtcgtgt19

<210>301

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>301

tctggaaaagatcgcaacgc20

<210>302

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>302

gcccaaaggctccgtatctg20

<210>303

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>303

ttgggctctatgggaaggac20

<210>304

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>304

gggagatgtatttgcagcgga21

<210>305

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>305

gaacggctggaagcaatgaag21

<210>306

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>306

tgccatccacagtttcagttt21

<210>307

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>307

tgtgtatgggatactggactgt22

<210>308

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>308

aggcattagggttgttctgaaaa23

<210>309

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>309

tgggatctcgttggaaataacac23

<210>310

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>310

tcaggacgtaggctccagaag21

<210>311

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>311

agctgcctacaacctggtga20

<210>312

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>312

tccactcagaacggaaggtgt21

<210>313

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>313

atgtcgaagccccatagtgaa21

<210>314

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>314

tgggtggtgaatcaatgtcca21

<210>315

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>315

ttgacctacgtggcttggaag21

<210>316

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>316

ggtaacggaatcgggctgaat21

<210>317

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>317

caccacaggacagtacaggat21

<210>318

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>318

cgtgctgaataataccactcaca23

<210>319

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>319

tccgagagatgagtcaagagg21

<210>320

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>320

caccttccactcctatgaggc21

<210>321

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>321

gtcaagaggcgaacacacaac21

<210>322

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>322

ttggacggacaggatgtatgc21

<210>323

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>323

gaggttggctctgactgtacc21

<210>324

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>324

tccgtcccagtagattaccac21

<210>325

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>325

ttgaaacctgaaaatgtcctgct23

<210>326

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>326

ggtgagccacaacttgttctt21

<210>327

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>327

tcctcctcaagaatgatggca21

<210>328

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>328

gtgcgttcgatgacagtggt20

<210>329

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>329

ccacgaccatcatcaggtgaa21

<210>330

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>330

cctcacggaggcattctaaagt22

<210>331

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>331

acaggaaccctgccaaaagta21

<210>332

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>332

caacactgctaaccttagacaca23

<210>333

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>333

tttgaagaccataacccaccac22

<210>334

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>334

attacaccagttcgtccctttc22

<210>335

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>335

ggagcctagtcaagcctgaga21

<210>336

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>336

catccgttgatgtgcaatgcg21

<210>337

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>337

aactccatcatgaagtgtgacg22

<210>338

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>338

gatccacatctgctggaagg20

<210>339

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>339

acgtggggtcactggtgtat20

<210>340

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>340

gctgtccgggtacagttgtaaa22

<210>341

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>341

acaactttggtatcgtggaagg22

<210>342

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>342

gccatcacgccacagtttc19

<210>343

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>343

gacacgctagagcatgaggg20

<210>344

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>344

gggtgagtgtgttgttgatgg21

<210>345

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>345

ctgcaagcgggaaaaccct19

<210>346

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>346

ctccagatgcgggaactttct21

<210>347

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>347

aactccatcatgaagtgtgacg22

<210>348

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>348

gatccacatctcgctggaagg21

<210>349

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>349

aactccatcatgaagtgtgacg22

<210>350

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>350

gatccacatctcgctggaagg21

<210>351

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>351

aactccatcatgaagtgtgacg22

<210>352

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>352

gatccacatctcgctggaagg21