使超昼夜节律正常化的花生四烯酸的用途的制作方法

专利名称：使超昼夜节律正常化的花生四烯酸的用途的制作方法
技术领域：
本发明提供了一种涉及调节昼夜节律(circadian rhythm)的组合物。
背景技术：
人类和其它生物体的多种功能在有限的范围内完成，且其变化具有规则的周期，这通常称为生物节律。最基本的生物节律是具有近似一天的周期变化且被称为昼夜节律。昼夜节律是活的机体本身固有的“自动计算时间的程序”，或所谓的内在时钟功能(也被称为生物钟或机体钟)操纵的一种内在的节律，与完全依赖于活的机体周围的物理变化(例如白天和黑夜、地球的自转、以及温度、湿度和大气压的变化)的外部节律不同。
这些节律可以通过当最大可能性地完全去除外部因素时，检测该节律是否仍然存在而区分。当在一个周期没有作用的环境下，例如在与外界隔离的实验室中，人体表现出大于24小时的周期。该周期被称为自由运转(free-run)周期，且确信为是一种内在周期，或机体时钟(人类的自由运转周期为24.2小时)。
具有自由运转周期的并非24小时的机体时钟，与外界物理变化同步，且通常与日夜变化一致，产生24小时周期。这被称为节律同步化，导致的24小时周期节律被称为超昼夜节律(infradian rhythm)，然而，节律的同步化不仅意味着与24小时周期的一致，也意味着建立起机体时钟的特定阶段和外部环境节律的特定阶段1∶1的时间关系，后者更为重要。例如，动物的活动时期的起始时间由机体时钟决定。在昼出动物中，由于节律的同步化，在环境节律的特定阶段的日出以及由机体时钟的特定阶段建立的活动期之间具有一致性。
超昼夜节律不仅在睡眠习惯和饮食中有所表现，也在体温、血压、心率和内分泌，以及在心血管系统疾病的治疗和预防中有所表现，了解自主神经系统、内分泌系统、血液动力学等等的超昼夜节律以及使其维持正常是十分重要的。在现代社会，轮班工作、长途航空旅行、老龄化社会、生活模式的多样化等导致的人工的、不规则的生活周期正变得很普遍，已经发生了由生物节律失调导致的多种疾病的意外增长，例如超昼夜节律睡眠失调，且具有对治疗这些疾病的有效措施的强烈需求。
在由于超昼夜节律异常导致的一种不同步综合征(时差症(jetlag))中，可导致夜里失眠或白天困倦，另外还可导致头痛、耳鸣、心悸、恶心、胃痛和腹泻，造成判断力和注意力的下降。另外，延迟睡眠阶段综合征(delayed sleep phase syndrome(DSPS))在青春期开始时发病率最高(Diagnostic Classification SteeringCommittee，Thorpy，M.J.International Classification of SleepDisordersDiagnostic and Coding Manual.American SleepDisorders Association，Rochester，1990)。青年人的超昼夜节律睡眠失调使其适应社会困难，使他们的发展受到阻碍(Kajimura，N.，等人Nippon Rinsho，Vol.56，No.2，404页，1998)。
作为调整导致这些病症的超昼夜节律异常的方法，有心里治疗法、非药物疗法和药物疗法。作为非药物疗法，可利用亮光照射，目前，它被肯定地用于季节性的情绪失调以及超昼夜节律睡眠失调的治疗。用于药物治疗的催眠药被粗略地分为巴比妥酸盐型、非巴比妥酸盐型和benzodian型。尽管苯巴比妥酸盐型药物具有强烈的睡眠诱导作用，它们也是有毒性的，且其抑制呼吸和循环的倾向随其血药浓度的增加而变得更强烈，所以必需谨慎地控制它们的使用。
在非苯巴比妥酸盐型药物中，可以导致呼吸抑制、催吐、恶心和昏迷，且具有依赖的危险。因此，目前，从安全的角度来看，以benzodian型药物为主流，但是，也会表现出例如抗焦虑作用、抗惊厥作用和肌肉放松作用等的副作用。也已经了解强烈表现出困倦、摇摆、头昏眼花、疲劳和乏力的“残留效应”和“健忘症效应”，因此必需非常谨慎地控制这些药物的应用。因此，目前为止，没有针对超昼夜节律的具有安全有效的正常化作用的极好的化合物。此外，催眠药仅仅诱导睡眠而没有昼夜节律的同步化功能，例如，当与昼夜节律同步化时，可能减轻时差感，但催眠药不能作到这一点。
作为一种能够与昼夜节律同步化的化合物，已经推荐了褪黑素。褪黑素是一种主要由松果体产生的激素，且其产生在一天内表现出显著的变化。夜间的产生高达日间的50到100倍。
当通过给与β-阻断剂抑制褪黑素在夜间的产生时，可以导致睡眠-觉醒节律失调，例如睡眠褪化，如夜晚增加的中途觉醒(Brismar等人Acta Med.Scand.，223，p.525，1988)和白天清醒水平的降低(Dimenas等人J.Clin.Pharmacol.，30，s103，1990)。由于老年人褪黑素分泌降低，补充褪黑素被称为一种有效的治疗(Garfinkel等人Lancet，346，p.541，1995)。即便在褪黑素的生理产生显著下降的高龄老年人中，在那些能够具有良好睡眠的人中，褪黑素产生的量仍然很高(Haimov等人Sleep，18，p.598，1995)。从这些事实已经确信内源性的褪黑素是一种参与睡眠-觉醒节律调节的生理性催眠物质。
已经有许多关于内源性褪黑素以昼夜节律同步化为目的的催眠作用的报告。然而，尽管有报告说作为给与褪黑素的结果，可以获得高质量的睡眠，例如缩短入睡潜伏时间、降低中途的觉醒和改善失眠(Zhdanova等人Clin.Pharmacol.Ther.，57，p.552，1995)，还存在另一报告，否认对睡眠失调的睡眠调节效应和改善效应(James等人Neuropsychopharmacology，3，p.19，1990)。
非专利文献1Brismar等人Acta Med.Scand.，223，p.525，1988非专利文献2Dimenas等人J.Clin.Pharmacol.，30，s103，1990非专利文献3Garfinkel等人Lancet，346，p.541，1995
非专利文献4Haimov等人Sleep，18，p.598，1995非专利文献5Zhdanova等人Clin.Pharmacol.Ther.，57，p.552，1995非专利文献6James等人Neuropsuchopharmacology，3，p.19，1990附图简述

图1显示了含有花生四烯酸的脂肪/油对光照时期12小时的运动率(％)的影响。
图2显示了含有花生四烯酸的脂肪/油对伴随向后和向前移动6小时的位相(phase)的昼夜节律同步化的影响。
图3显示了通过用光刺激黑暗条件下(自由运转)饲养24小时的小鼠使位相向后移动和位相向前移动时，含有花生四烯酸的脂肪/油对位相(时间)移动量的影响。

发明内容
已经有文献指出(MishimaNippon Rinsho，Vol.56，No.2，p.302，1998)这些结果彼此相反的原因之一是依赖于给药时间而获得，且没有任何已知化合物不依赖于给药时间而具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用。
因此，强烈需要开发一种改善超昼夜节律正常化作用和/或昼夜节律(生物钟)同步化的化合物，副作用小，且良好地用于药物和食物。
相应地，本发明的目的在于提供一种具有使超昼夜节律正常化的功能和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的食品/饮料，含有花生四烯酸和/或含花生四烯酸的化合物，还提供其生产方法。更具体地，本发明的目标为提供一种对由超昼夜节律异常导致的生物节律失调、睡眠失调和延迟睡眠阶段综合征，也对由昼夜节律(生物钟)同步化延迟导致的病症(例如时差症、头痛、耳鸣、心悸、恶心、胃痛、腹泻和判断和注意力的下降)具有改善作用的食品/饮料，其中至少有一种成分选自花生四烯酸、花生四烯酸醇酯和一部分或所有的组成的脂肪酸为花生四烯酸的甘油三酯、磷脂和糖脂类作为有效成分，同时也提供其生产方法。
为了阐明花生四烯酸和/或含有花生四烯酸的化合物的使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用，本发明进行了深入研究。通过评估花生四烯酸和/或含有花生四烯酸的化合物对大鼠昼夜节律同步化的效应，已经在行为药理学上阐明了它的效应。
本发明进一步成功地用微生物工业化生产含有不低于10％重量比的花生四烯酸的甘油三酯，因此现在能够将其用于检测本发明的效应，且已经阐明了所述的甘油三酯的效应。
而且本发明已经成功地生产了含有1、3位结合了中链脂肪酸且通过酶学方法在第2位结合了花生四烯酸的甘油三酯的脂肪/油，因此现在能够将其用于检测本发明的效应，且已经阐明了所述的甘油三酯的效应。
相应地，本发明目的在于提供一种具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的食品/饮料，含有花生四烯酸和/或含花生四烯酸的化合物，还提供其生产方法。
更具体地，本发明提供一种对由超昼夜节律异常导致的生物节律失调、睡眠失调和延迟睡眠阶段综合征，也对由昼夜节律(生物钟)同步化延迟导致的紊乱(例如时差症、头痛、耳鸣、心悸、恶心、胃痛、腹泻和判断和注意力的下降)具有减轻作用的食品/饮料，其中至少有一种成分选自花生四烯酸、花生四烯酸醇酯和一部分或所有的组成的脂肪酸为花生四烯酸的甘油三酯、磷脂和糖脂类作为有效成分，同时也提供其生产方法。
相应于本发明，可能提供一种具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的食品/饮料，含有花生四烯酸和/或含花生四烯酸的化合物，还提供其生产方法，且对现代社会的人们十分有用。
相应地，本发明提供了(1)一种具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的组合物，含有花生四烯酸和/或含花生四烯酸的化合物。上述的含花生四烯酸的化合物优选花生四烯酸的醇酯，或包括花生四烯酸作为其一部分或所有的组成的脂肪酸的甘油三酯、磷脂或糖脂。含有花生四烯酸作为其组成的脂肪酸的一部分或全部的甘油三酯，优选1、3位结合了中链脂肪酸且第2位结合了花生四烯酸的甘油三酯。上述的中链脂肪酸优选选自具有6到12个碳原子的脂肪酸，例如，选自具有8个碳原子的脂肪酸。
本发明也提供了(2)一种具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的组合物，其包含甘油三酯类，所述的甘油三酯类含有花生四烯酸作为其组成的脂肪酸的全部或一部分的甘油三酯。包含含有花生四烯酸作为其组成的脂肪酸的全部或一部分的甘油三酯的甘油三酯类的花生四烯酸的比例优选不低于组成甘油三酯的总脂肪酸重量的10％。包含含有花生四烯酸作为其组成的脂肪酸的全部或一部分的甘油三酯的甘油三酯类优选从属于被孢霉属(Mortierella)的微生物中提取。包含含有花生四烯酸作为其组成的脂肪酸的全部或一部分的甘油三酯的甘油三酯类优选不含二十碳五烯酸，或即便含有，它的量不大于1％。
本发明进一步提供了一种具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的组合物，其含有甘油三酯类，所述的甘油三酯类含有不少于5mol％的其中1、3位结合了中链脂肪酸且第2位结合了花生四烯酸的甘油三酯。上述的中链脂肪酸优选选自具有6到12个碳原子的脂肪酸，例如，选自具有8个碳原子的脂肪酸。
上述(1)到(3)提及的组合物优选对由超昼夜节律异常导致的生物节律失调具有预防和减轻作用。生物节律失调的例子为睡眠失调、由昼夜节律(生物钟)同步化延迟导致的紊乱以及由昼夜节律(生物钟)同步化延迟导致的时差症、头痛、耳鸣、心悸、恶心、腹痛、腹泻和判断能力和注意力的下降。
上述(1)到(3)的组合物的具体实施方式
的例子为食物组合物和药物组合物。对于花生四烯酸的量，一个成年人每天的摄入量优选0.001到20g。花生四烯酸为组成的脂肪酸的化合物优选为花生四烯酸乙醇酯或其组成的脂肪酸的全部或一部分为花生四烯酸的甘油三酯、磷脂或糖脂。上述的组成的脂肪酸的一部分或全部为花生四烯酸的甘油三酯为1、3位结合了中链脂肪酸且第2位结合了花生四烯酸的甘油三酯，中链脂肪酸优选选自具有6到12个碳原子的脂肪酸，例如，选自具有8个碳原子的脂肪酸。
本发明还进一步提供了一种食品组合物，其中该组合物含有不少于0.001％重量比的甘油三酯，其中1、3位结合了中链脂肪酸且花生四烯酸结合在第2位。上述的中链脂肪酸优选选自具有6到12个碳原子的脂肪酸，例如，选自具有8个碳原子的脂肪酸。该食品组合物为例如一种功能性食品、营养添加剂、一种指定的健康食品或老年人食品。
而且，本发明还提供了一种生产具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的组合物的方法，特征在于花生四烯酸和/或含有花生四烯酸的化合物为单独或与基本上不含花生四烯酸或即便含有，其含量也很少的食品材料共同混合。
实施本发明的具体方式本发明涉及一种具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的食品/饮料，含有花生四烯酸和/或含花生四烯酸的化合物，还涉及其生产方法。
本发明的组合物对由超昼夜节律异常导致的生物节律失调、睡眠失调和延迟睡眠阶段综合征以及由昼夜节律(生物钟)同步化延迟导致的病症(时差症、头痛、耳鸣、心悸、恶心、胃痛、腹泻和判断和注意力的下降)具有预防或减轻作用，是一种有效的饮料/食品、健康食品、功能性食品、指定的健康食品、婴儿和幼儿食品、老年食品或药品、准药品等等。
除了花生四烯酸，也可利用任何含有花生四烯酸的化合物作为本发明的有效成分。含花生四烯酸化合物的例子为花生四烯酸盐，例如钙盐和钠盐。其它的例子为花生四烯酸醇酯，例如花生四烯酸甲酯和花生四烯酸乙酯。还可以采用甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、磷脂、糖脂等等，含有花生四烯酸作为全部或部分的组成脂肪酸。
当考虑到应用于食品时，优选花生四烯为甘油三酯或磷脂的形式，或更优选以甘油三酯的形式。尽管几乎没有自然来源的含有花生四烯酸的甘油三酯(这与含有包含作为部分或全部的组成脂肪酸的花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯类具有同样含义)，现在通过本发明工业化地利用含有花生四烯酸作为组成脂肪酸的甘油三酯成为可能，且作为对大鼠昼夜节律的效应的评估结果，已经阐明了本发明的有效成分的效果，且已经阐明具有具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用。
相应地，本发明中，可能利用包含含有花生四烯酸作为部分或全部的组成脂肪酸的甘油三酯的甘油三酯类，是本发明的有效成分(含有花生四烯酸的甘油三酯)。考虑到含有花生四烯酸的甘油三酯，在应用于食品中时，在所有的组成甘油三酯的脂肪酸中，花生四烯酸的比不少于20(w/w)％重量，优选重量不少于30％，或更优选重量不少于40％的脂肪/油(甘油三酯)是优选的形式。相应地，在本发明中可以采用任意的通过孵育具有生产含有花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)能力的微生物而制备的产品。
具有生产含有花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)的能力的微生物的例子是那些属于被孢霉属(Mortierella)、耳霉属(Conidiobolus)、腐霉属(Pythium)、疫霉属(Phytophthora)、青霉属(Penicillium)、枝孢属(Cladosporium)、毛霉属(Mucor)、镰孢属(Fusarium)、曲霉属(Aspergillus)、红酵母属(Rhodotorula)、虫霉属(Entomophthora)、刺孢囊霉属(Echinosporangium)和水霉属(Saprolegnia)的微生物。
关于属于被孢霉属(Mortierella)的被孢霉亚属的微生物，其例子为长形被孢霉(Mortierella elongate)、微小被孢霉(Mortierellaexigua)、喜湿被孢霉(Mortierella hygrophiia)和高山被孢霉(Mortierella alpine)。为了更具体，诸如长形被孢霉(Mortierellaelongate)IFO 8570、微小被孢霉(Mortierella exigua)IFO 8571、喜湿被孢霉(Mortierella hygrophila)IFO 5941和高山被孢霉(Mortierella alpine)IFO 8568、ATCC 16266、ATCC 32221、ATCC42430、CBS 219.35、CBS 224.37、CBS 250.53、CBS 343.66、CBS 527.72、CBS 529.72、CBS 608.70、CBS 754.68等等的株系在此作为例证。
所有的这些株系均可从大阪Institute for Fermentation，Osaka(IFO)(日本大阪财团法人发酵研究所(IFO))、美国典型培养物保藏中心(ATCC)(American Type Culture Collection，ATCC)和Centralbureau voor Schimmelcultures(CBS)无限制地获得。除此之外，也可以使用长形被孢霉SAM 0219(在Fermentation Research Institute的保藏号8703)(在Fermentation Research Institute的保藏号1239)，该菌株是由本发明的研究人员从土壤中分离出来的。
在本发明中采用的株系的培养中，孢子、菌丝体或预先孵育的预培养物接种于液体或固体培养基中后进行孵育。在液体培养基的情形下，可以采用任意通常作为碳源的物质，例如葡萄糖、果糖、木糖、蔗糖、麦芽糖、可溶淀粉、糖蜜、甘油以及甘露醇，但是并非限于它们。
除了例如蛋白胨、酵母提取物、麦芽提取物、肉类提取物、酪蛋白氨基酸(Casamino acid)、谷物浸泡液、大豆蛋白、脱脂大豆和棉籽饼的自然氮源，也可以采用有机氮源，例如尿素以及无机氮源，例如硝酸钠、硝酸铵作为氮源。除了上述物质外，如果需要另外还可以采用无机盐，例如磷酸盐、硫酸镁、硫酸铁以及硫酸铜、维生素等作为辅助营养。对这些进行培养的成分没有特殊限制，只要它们的浓度不妨碍微生物的生长。实际上和通常地，推荐碳源的浓度为0.1到40重量(w/v)％或，优选1到25重量(w/v)％。至于起始加入氮源的量为0.1到10重量(w/v)％或优选0.1到6重量(w/v)％，在孵育期间可以另外加入氮源。
当控制培养基中的碳源浓度时，也可以采用含有不少于45重量(w/w)％的花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)作为本发明的有效成分。在孵育中，从第二到第四天为细胞生长期，在第二到第四天后的时期为脂肪/油聚积期。起始碳源浓度为1到8％重量比，或优选地1到4％重量比，接着，仅在细胞生长期以及脂肪/油聚积期后继地加入碳源，且后继加入的碳源总量为2到20％重量比，或优选5到15％重量比。顺便提及，在细胞生长期间以及脂肪/油聚积期间后继加入的碳源的量依赖于起始氮源的浓度以及孵育7天后培养基中碳源的浓度，优选孵育6天后，或更优选地在孵育4天后为0，由此能够制备含有不少与45％重量比的花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)，并作为本发明的有效成分。
孵育生产花生四烯酸的微生物的温度可以依赖于采用的微生物而变化，可以为5到40℃或优选20到30℃，在细胞在20到30℃孵育生长后，在5到20℃继续孵育，由此能够生产不饱和脂肪酸。通过这种温度控制的方式，也可能提高获得的脂肪酸中高度不饱和脂肪酸的比例。培养基的pH为4到10或优选5到9，通风搅拌培养基，采用摇动培养基或固定培养基。通常进行2到30天孵育，优选5到20天，或更优选5到15天。
除了控制培养基中碳源的浓度，作为提高含有花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)中花生四烯酸比例的另外的方式，也可通过对含花生四烯酸的脂肪/油进行选择性的水解来制备高含量花生四烯酸的脂肪/油。由于进行这样的选择性水解采用的脂肪酶对甘油三酯没有位点特异性，且其水解活性的降低与双键数目成比例，除高度不饱和脂肪酸外的脂肪酸的酯键均被水解。然后在获得的PUFA部分甘油三酯之间发生转酯作用等，由此得到提高了高度不饱和脂肪酸的甘油三酯(″Enhancement of ArchidonicSelective Hydrolysis of aSingle-Cell Oil from Mortierella with Candida cylindraceaLipase″J.Am.Oil Chem.Soc.，72，1323-1327(1998))。
同样，由选择水解含花生四烯酸的脂肪/油而制备的花生四烯酸高含量的脂肪/油(甘油三酯)也可以用作本发明的有效成分。尽管为了排除其它脂肪酸的影响，本发明中花生四烯酸与含花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)的全部脂肪酸的比例优选较高，对这样的高比例没有限制，但是实际上有一些情况下，当应用于食物中时，花生四烯酸的绝对量很重要，因此，即便含有不少于10％重量比的花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)也可以被充分地利用。
在本发明中，关于含有花生四烯酸作为全部或部分组成脂肪酸的甘油三酯，也可以采用中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至第2位的甘油三酯。另外还可以采用含有不少于5mol％，优选不少于10mol％，更优选不少于20mol％或最优选不少于30mol％的中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至第2位的甘油三酯的脂肪/油(甘油三酯)。关于上述的中链脂肪酸连接至1、3位的甘油三酯，可以采用选自具有6到12碳原子的脂肪酸。具有6到12个脂肪酸的例子为辛酸以及癸酸，且特别优选的是1，3-辛酰-2-花生四烯酰-甘油(下文中用“8A8”表示)。
当以婴儿和老年人作为对象时，这样中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至第2位的甘油三酯是理想的脂肪/油(甘油三酯)。当脂肪/油(甘油三酯)被摄入且进入小肠时，它通常被胰脂肪酶水解。该胰脂肪酶特异于1，3-位，因此甘油三酯的1，3-位被剪切，产生2分子的游离脂肪酸，且同时产生1分子的2-单甘油酯(MG)。2-MG对胆汁酸具有很高的溶解性，且具有良好的可吸收性，因此，通常说2-位点的脂肪酸具有更好的吸收性。
当2-MG溶解于胆汁酸中时，它如同表面活性剂地发挥作用，提高游离脂肪酸的吸收。接着，游离脂肪酸和2-MG与胆固醇、磷脂等一同生物合成胆汁酸复合体微团，整合入小肠的表皮细胞，重新合成甘油三酯并最终作为乳糜微粒释放入淋巴。然而，胰脂肪酶的脂肪酸特性具有典型的特性，它对饱和脂肪酸高活性，且对花生四烯酸很难剪切。另外的问题在于，由于胰脂肪酶活性在婴儿和老年人中活性较低，中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至第2位的甘油三酯是最适宜的脂肪/油(甘油三酯)。
作为生产中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至第2位的甘油三酯的特异性方法之一，能够在含有花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)和中链脂肪酸的存在下通过只作用于甘油三酯的1，3位酯键的脂肪酶的作用而生产该甘油三酯。
用作起始材料的脂肪/油(甘油三酯)是一种组成脂肪酸为花生四烯酸的甘油三酯，且当花生四烯酸与组成甘油三酯的总脂肪酸的比例较高时，为了预防未反应的脂肪/油材料(起始甘油三酯以及只有1、3位的一个脂肪酸为中链脂肪酸的甘油三酯)的增加所导致的反应产量的降低，将温度设定于30到50℃，或优选40到50℃，比一般的酶反应温度20到30℃高。
特异性作用于甘油三酯1，3位点酯键的酯酶的例子为由诸如根霉属(Rhizopus)、根毛霉属(Rhizomucor)和曲霉属(Aspergillus)的微生物生产的脂酶以及猪胰脂肪酶。关于这种脂肪酶，可使用商购获得的产品。实例包括，但不限于，德列马根霉(Rhizopus delemar)的脂酶(Tanabe Seiyaku制备的Talipase)、米赫根毛酶(Rhizomucormiehei)的脂酶(Novo Nordisk，Ribozyme IM)和黑曲霉(Aspergillusniger)的脂酶(Amano Seiyaku，Lipase A)，以及可以使用的任何脂酶，前提条件是它对1、3-位是特异性的。
至于使用上述脂肪酶的形式，为了提高反应效率的目的以及对增加酶的耐热性的目的，需要采用用固定载体固定的脂肪酶，使反应温度不低于30℃，或优选不低于40℃。至于固定载体，具有不小于100孔径的高度多孔树脂的离子交换树脂载体可以作为例证，例如DowexMarathon WBA(商品名；Dow Chemical)。
固定载体的一部分悬浮于0.5到20份重量的1，3位点特异性脂肪酶水溶液中，向悬浮液中边搅拌边缓缓加入2到5份冷丙酮(如，-80℃)，由此形成沉淀物。通过在真空中干燥沉淀物而制备固定的酶。在一种简单的方法中，将0.05到4份的1，3位点特异性脂肪酶，1份的固定载体溶解于最少量的水中，搅动以混合固定载体，将混合物真空干燥以制备固定的酶。作为这种操作的结果，大约90％的脂肪酶被固定于载体，但该产物并未表现出任何的转酯作用活性。因此，当将其在加入了1到10％(w/v)的水的底物，优选在加入了1到3％的水的底物中预处理时(含有起始脂肪/油和中链脂肪酸)，固定的酶能够被最大效率地活化且用于生产。
在一些类型的酶中，在本发明的反应体系中加入的水的量非常重要，因此，当不含水时，很难发生转酯反应，而当水的量很大时，发生水解反应，且甘油酯的回收率降低(当发生水解时，产生甘油二酯和甘油一酯)。然而，当在那种情况下采用预处理的方式活化固定的酶时，在本发明的反应体系中加入的水的量不再重要，且即便在一点也不含水的体系中，转酯反应也能有效地进行。当适时地选择酶制备的类型时，也可以忽略预处理。
当采用这种耐热固定酶和提高酶反应温度时，现在可以有效地生产中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至第2位的甘油三酯，即便在含有花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)对1，3位点特异性脂肪酶低反应的情况下仍不降低反应性。
在一种生产具有使超昼夜节律正常化的功能和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的食品/饮料的方法中，一种为花生四烯酸的化合物和/或花生四烯酸为组成性脂肪酸的化合物能够与实质上不含花生四烯酸或如果含有，量也很少的饮料/食品材料复合。这里量很少的表达表示即便当饮料/食品材料中含有花生四烯酸，以及当与之复合的食品组合物被人摄取，其含量仍然低于后文将提及的本发明的花生四烯酸的每日摄取量。
特别是在甘油三酯的部分或全部的组成脂肪酸为花生四烯酸的情况下，关于脂肪/油(甘油三酯)的应用有无限的可能性，可以用作食品、饮料、药品、准药品和其添加剂材料。对其应用目的和应用量没有任何限制。
除了一般的食品，食品组合物的例子为功能性食品、营养补充物、早期婴儿的精制奶、婴儿精制奶、婴儿食品、孕妇和哺乳母亲食品以及老年人食品。含有脂肪/油的食品的例子为本身含有脂肪/油的天然食品，例如肉、鱼和坚果；烹饪中加入脂肪/油的食品如汤；作为加热基质加入脂肪/油的食品如油炸圈；脂肪/油食品如黄油；加工时加入脂肪/油的加工食品如甜饼；以及加工结束时喷洒或施用脂肪/油的食品如硬饼干。也可以向不含脂肪/油的农作物食品、发酵食品、家畜食品、海洋食品或饮料中加入。另外，可以接受功能性食品、药品和准药品的形式，可以是例如肠营养素、粉末、颗粒、片剂、口服液、悬浮液、乳液和糖浆等的加工形式。
除了本发明的有效成分外，本发明的组合物可以含有多种通常用于饮料/食品、药物或准药品的载体以及添加剂。为了预防本发明的有效成分的氧化，特别优选含有抗氧化剂。抗氧化剂的例子为天然物质，例如维生素E化合物、黄酮衍生物、甜茶内酯化合物、曲酸，没食子酸衍生物、儿茶素化合物、fukiic酸、棉酚、吡嗪衍生物、芝麻酚、guaiaol，、guaiacic酸、p-香豆酸(p-coumalic acid)、去甲二氢愈创木酸、固醇化合物、萜烯化合物、核酸碱基化合物、类胡萝卜素化合物和木脂体(lignan)化合物，以及以抗坏血酸棕榈酸盐、抗坏血酸硬脂酸盐、丁基羟基苯甲醚(butylhydroxyanisole，BHA)、丁基羟基甲苯(butylhydroxytoluene，BHT)、一叔丁基氢醌(mono-tert-butylhydroquinone，TBHQ)、4-羟甲基-2，6-二叔丁基苯酚(4-hydroxymethyl-2，6-di-tert-butylphenol，HMBP)为代表的合成物质。
维生素E化合物的例子为α-维生素E、β-维生素E、γ-维生素E、δ-维生素E、ε-维生素E、ζ-维生素E、η-维生素E以及维生素E酯(例如维生素E醋酸盐)。类胡萝卜素化合物的例子为β-胡萝卜素、角黄素以及虾青素。
除了本发明的有效成分外，本发明的组合物可以包括如多种载体的载体、膨胀剂(extender)、稀释剂、填充剂、分散剂、赋形剂、粘合剂、溶解剂(如水、乙醇和植物油)、溶解辅助剂、缓冲剂、溶解促进剂、胶凝剂、悬浮剂、面粉、米粉、淀粉、玉米淀粉、多糖、乳蛋白、胶原、稻米油以及卵磷脂，而添加剂的例子为维生素化合物、甜味剂、有机酸、着色剂、香味剂、防潮剂、纤维、电解液、矿物质、营养素、抗氧化剂、防腐剂、芳香剂、湿润剂以及天然食物提取物和植物提取物，但并不限于这些。
花生四烯酸和花生四烯酸为组成脂肪酸的化合物的主要药学成分为花生四烯酸。已经报道在Kanto区每天从食物中摄入的花生四烯酸的量为0.14g，在Kansai区为0.19到0.20g(Shishitsu Eiyogaku，4，73-82，1995)，必需摄入相应或更多量的花生四烯酸。相应地，根据本发明，按照花生四烯酸的量计算，成年人(如体重为60kg)每天花生四烯酸和花生四烯酸为组成脂肪酸的化合物的摄取量为0.001到20g，优选0.01到10g，更优选0.05到5g且最优选0.1到2g。
当本发明的有效成分应用于饮料/食品时，与食品复合的花生四烯酸的绝对量也很重要。然而，由于与饮料/食品复合的绝对量根据欲被复合的饮料/食品的摄入量而变化，当含有部分或全部组成的脂肪酸为花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯与食品复合时，复合按照花生四烯酸的量不少于0.0003％重量进行，优选不少于0.003％重量或更优选不少于0.03％重量进行。另外，当中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至第2位的甘油三酯与食品复合时，作为中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至第2位的甘油三酯，其含量不少于0.001％重量，优选不少于0.01％重量，或更优选地，不少于0.1％重量。
当本发明的组合物用作药物时，通过药物制备领域常用的方法来生产，例如日本药典中提及的方法及其类似的方法。
当本发明的组合物用作药物时，只要达到本发明的目标，并不特别限制组合物中有效成分的复合量，但应当采用合适的复合比例。
当本发明的组合物用作药物时，优选以单位剂量的形式给药，且特别优选口服给药。本发明的组合物的剂量可以根据年龄、体重、症状、给药频率等改变，例如，根据本发明，按照花生四烯酸的量计算，推荐成年人(大约60kg)每天的花生四烯酸化合物和/或花生四烯酸为组成脂肪酸的化合物的施用量为大约0.001到20g，优选大约0.01到10g，更优选大约0.05到5g或最优选大约0.1到2g，1天分1到3次给药。
生物钟位于大脑中的视上核。大脑磷脂膜的主要脂肪酸是花生四烯酸和二十二碳六烯酸，且当考虑到它们的平衡时，在本发明的组合物中优选花生四烯酸与二十二碳六烯酸的组合。通常，花生四烯酸(n-6型不饱和脂肪酸)和二十二碳六烯酸(n-3型不饱和酸)为用同样的酶分别从亚麻酸和α-亚麻酸生物合成的。因此，当单独给予花生四烯酸时，它抑制了二十二碳六烯酸的生物合成。另一方面，当单独给予二十二碳六烯酸时，抑制了花生四烯酸的合成。
为了预防这一缺陷，需要花生四烯酸和二十二碳六烯酸组合摄入。由于大脑的磷脂膜中的二十碳五烯酸的比例很低需要很少含有二十碳五烯酸。最优选很少含有二十碳五烯酸且含有花生四烯酸和二十二碳六烯酸的组合物。在花生四烯酸与二十二碳六烯酸的组合中，花生四烯酸/二十二碳六烯酸的比例(重量比)需要在0.1到15范围内，优选0.25到10。最优选其中混合了少于花生四烯酸的五分之一(重量比)的二十碳五烯酸的饮料/食品。
实施例下面通过实施例的方式更加具体地阐述本发明，然而本发明并非限于下列实施例。
本发明的食品组合物为饮料/食品、健康食品、功能性食品、指定的健康食品、婴儿和老年人食品，包括通过在包装所述的食品组合物的容器上和/或促进所述的食品组合物的销售的工具(如宣传册)上描述或显示下列事实而销售的情形。因此，它们是所述的食品组合物和/或所述食品组合物的成分具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用，且具有对由昼夜节律异常导致的生物节律失调、睡眠失调和延迟睡眠阶段综合征以及昼夜节律同步化延迟的病症(时差症、头痛、耳鸣、心悸、恶心、胃痛、腹泻和判断和注意力的下降)的预防或改善作用实施例1.生产含有花生四烯酸作为组成脂肪酸的甘油三酯的方法采用高山被孢霉作为生产花生四烯酸的微生物。在10kL发酵罐中制备含有1.8％的葡萄糖、3.1％的脱脂大豆粉、0.1％的大豆油、0.3％的KH2PO4、0.1％的Na2SO4、0.05％的CaCl2.2H2O和0.05％的MgCl2.6H2O的培养基(6kL)，调整起始pH为6.0。将预培养溶液(30L)接种，并在温度为26℃、通风为360m3/小时和内部压力为200kPa的条件下将其置于通风搅拌培养8天。搅拌的速率调整至保持溶解的氧浓度为10到15ppm。关于葡萄糖的浓度，通过flowing-down法将培养基内的浓度设置为在1到2.5％的范围内，直到第4天，之后将其维持在0.5到1％(上文的％表示重量(w/v)％)。
在培养完成后，通过过滤和干燥回收含有花生四烯酸为组成脂肪酸的甘油三酯的细胞，并用己烷从得到的细胞中提取脂肪/油，且进行纯化步骤以获得可食用的脂肪/油(脱胶、脱酸、脱臭和脱色)，以产生150kg含有花生四烯酸的甘油三酯(其中花生四烯酸连接至甘油三酯的任意位置)。将获得的脂肪/油(甘油三酯)制成甲酯，用气相色谱分析获得的脂肪酸甲酯，其中花生四烯酸在总脂肪酸的比例为40.84％。
另外，棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚麻酸、γ-亚麻酸以及双高-γ-亚麻酸分别为11.63％、7.45％、7.73％、9.14％、2.23％和3.27％。另外，将上述的含有花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)制成乙酯，将含有40％花生四烯酸乙酯的脂肪酸乙酯混合物用常规的高效液相色谱进行分离，获得99％纯度的花生四烯酸乙酯。
实施例2.含有不少于5％的中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至第2位的甘油三酯(8A8)的甘油三酯的制备将离子交换树脂载体(Dowex Marathon WBA；Dow Chemical；TradeMark)(100g)悬浮在80ml 12.5％的德列马根霉(Rhizopus delemar)脂肪酶(Talipase Powder；Tanabe Seiyaku)水溶液中，并真空干燥以产生固定脂肪酶。
之后，采用实施例1中制备的80g含有40％重量比的花生四烯酸的甘油三酯(TGA 40S)、160g辛酸、12g上述的固定脂肪酶和4.8ml水在30℃搅拌(130rpm)进行反应48小时。反应结束后，去除反应溶液以产生活化的固定脂肪酶。
接着将固定脂肪酶(德列马根霉脂肪酶；载体Dowex MarathonWBA，商标)(10g)装入配有包装套的玻璃柱中(1.8×12.5cm；体积31.8ml)，实施例1中制备的TGA 40S和辛酸按1∶2混合的混合脂肪/油以恒定的流速(4ml/小时)流入柱子，以进行持续反应，产生400g的反应脂肪/油。同时，柱子的温度保持为40到41℃。从获得的反应脂肪/油中，通过分子蒸馏将未反应的辛酸和游离脂肪酸除去，然后进行纯化步骤以获得可食用的脂肪/油(脱胶、脱酸、脱臭脱臭和脱色)，以产生含有8A8的脂肪/油(甘油三酯)。
当检测用气相色谱和高效液相色谱制备的含有8A8的脂肪/油(甘油三酯)中的8A8比率时，为31.6％(顺便提及，8P8、8O8、8L8、8G8和8D8的比率分别为0.6、7.9、15.1、5.2和4.8％。结合到甘油三酯二位的脂肪酸P、O、L、G和D分别为棕榈酸、油酸、亚麻酸、γ-亚麻酸、和双高-γ-亚麻酸，8P8为1，3-辛酰-2-棕榈酰-甘油，8O8为1，3-辛酰-2-油酰-甘油，8L8为1，3-辛酰-2-亚麻酰-甘油，8G8为1，3-辛酰-2-γ-亚麻酰-甘油以及8D8为1，3-辛酰-2-双高-γ-亚麻酰-甘油)。顺便提及，将得到的含有8A8的脂肪/油(甘油三酯)用常规的高效液相色谱进行分离和纯化，得到96mol％的8A8。
实施例3.含花生四烯酸的脂肪/油对光照和黑暗周期的相变(phase change)的同步化促进作用在大鼠中研究了实施例1中制备的以花生四烯酸为组成脂肪酸的甘油三酯(含花生四烯酸的脂肪/油)对光照和黑暗周期的相变的影响。
大鼠具有大多在光照阶段休息(睡觉)，而在黑暗期间活动的习性。因此将光照和黑暗周期改变为其6小时前和6小时后的范围，以天的方式检测了对同步化影响，直到达到对新的光照和黑暗周期的同步化。顺便提及的是，为了评估同步化，通过连续测量日间的活动量并检测在光照期间和黑暗期间活动量随时间的变化，而研究大鼠的超昼夜节律。
按照将大鼠在安装了红外线传感器的盒子中分别饲养，用红外线传感器对运动量进行计数的形式对大鼠的超昼夜运动量进行检测。因此，每当动物经过红外线传感器，都计数一次，数字被整合以产生运动量(计数)。用ANOVA和Student′st检验进行统计处理。
18个月大小的20只雄性Fischer种系的大鼠被分为2组，对照饲料组(10只大鼠OC(18M)组)和含花生四烯酸脂肪/油复合饲料组(10只大鼠OA(18M)组)，在预饲养大约2周后，给与列于表1的对照饲料和含花生四烯酸脂肪/油复合饲料。
表1.试验饲料

大鼠摄入饲料的量为大约20g，每天每只大鼠摄入的含有花生四烯酸的脂肪/油的量为0.1g。与实施例1中制备的含有花生四烯酸的脂肪/油结合的总脂肪酸中，花生四烯酸占40％，因此，每只大鼠每天摄入的花生四烯酸的量为40mg。对人摄入量而言，40mg相应于133mg/60kg/天。将动物在动物室饲养，室内温度保持在23.5±1℃，湿度保持在55±5％，且让动物自由摄入饲料和饮水。光照和黑暗周期包括12小时的(01:00到13:00)黑暗期和12小时(13:00到01:00)的光照期间。
从摄入试验饲料的2周后开始持续检测超昼夜移动量(记录位相的开始)。每天，计算运动总量和光照阶段运动与运动总量的比例([光照期间的运动量]/[运动总量]×100％)。从记录阶段的起始开始的第十天(开始饲养的第40天，开始摄入试验饲料的第26天)，将光照和黑暗周期的位相(phase)推后6小时(12小时的黑暗期(07:00到19:00)以及12小时的光照期间(19:00到07:00))，直到确定昼夜节律同步化的日子。接着，10天后，(记录阶段开始后第20天)，将光照和黑暗周期位相提前6小时(12小时的黑暗期(01:00到13:00)以及12小时的光照期(13:00到01:00))，直到确定昼夜节律同步化的日子。
按照下列方式进行同样的试验，将8只Fischer种系的2个月大小的雄性大鼠分为2组，对照组(4只大鼠；YC(2M)组)以及含有花生四烯酸的脂肪/油复合饲料组(4只大鼠；YA(2M)组)，另外，将8只Fischer种系的22个月大小的雄性大鼠分为2组，对照组(4只大鼠；OC(22M)组)以及含有花生四烯酸的脂肪/油复合饲料组(4只大鼠；OA(22M)组)。
显示了2个月、18个月和22个月的对照饲料组和含有花生四烯酸的脂肪/油复合饲料组的12小时光照阶段的运动率(％)(图1)。很明显，当摄入含有花生四烯酸的脂肪/油时，年老大鼠(18M和22M)的12小时的光照阶段的运动率(％)显著地抑制，由此优化了超昼夜节律。
接着，图2显示了2个月、18个月和22个月的对照饲料组和含有花生四烯酸的脂肪/油复合饲料组大鼠位相推后和提前6小时后同步化所需要的天数(图2)。至于环境的光照和黑暗周期位相改变期间的昼夜节律同步化所需要的时间(天)，在年轻(2M)大鼠中，位相提前比位相推后所需时间更长，而在年老大鼠(18M和22M)中，位相推后比位相提前所需时间更长。然而，作为摄入含花生四烯酸的脂肪/油的结果，同步化所需的时间(天)显著缩短。由于这在年老大鼠中特别有效，确定了在衰老昼夜节律的光照同步化的改变，而不是节律分派(rhythm dispatch)，花生四烯酸具有调整因衰老而变化的作用。
实施例4.含有花生四烯酸的脂肪/油对光照刺激24小时黑暗条件下饲养(自由运动)的大鼠使位相推后和位相提前的同步化的改善作用当在黑暗条件下饲养24小时后，没有从外界获得信息(光)，因此大鼠在固有的时期(生物钟)(被称为自由运转，含义为不受同步化影响)变得活跃。当计算基于24小时的自由运转周期，在定义为昼夜节律时间的横坐标上表示时，其开始的一半(12小时)称为个体日间(生物钟判断其为日间，大鼠休息)而第二个一半(12小时)称为个体夜间(生物钟判断其为夜间，小鼠变得活跃)。当光照射大鼠时，自由运转的节律位相根据该时期向前或向后移动。例如在15:00的昼夜节律时间，用130luxes的光照射以检测位相的向后移动，在20:00的节律时间，同样的光照照射以检测位相的向前移动。
将18个月大小Fischer种系的20只雄性大鼠分为2组，对照饲料组(10只大鼠OC(18M)组)和含花生四烯酸脂肪/油复合饲料组(10只大鼠OA(18M)组)，在与实施例3相同，预饲养2周后，每组给与列于表1的对照饲料和含花生四烯酸脂肪/油复合饲料。
大鼠摄入饲料的量为大约20g，每天每只大鼠摄入的含有花生四烯酸的脂肪/油的量为0.1g。实施例1中制备的与含有花生四烯酸的脂肪/油结合的总脂肪酸中，花生四烯酸占40％，因此，每只大鼠每天摄入的花生四烯酸的量为40mg。对人摄入量而言，40mg相应于133mg/60kg/天。将动物在动物室饲养，室内温度保持在23.5±1℃，湿度保持在55±5％，且让动物自由摄入饲料和饮水。光照和黑暗周期包括12小时的(01:00到13:00)黑暗期和12小时(13:00到01:00)的光照期。
从摄入试验饲料的第70天，开始24小时黑暗条件下(自由运转)的饲养，连续测量超昼夜的运动(记录位相的开始)。从自由运转饲养的2周后，用130luxes的光在已经提及的15:00的昼夜节律时间照射30分钟，测量位相的移动量(小时)。接着，2周后，在20:00的昼夜节律时间用光同样照射，测量位相的移动量(小时)。将8只Fischer种系的2个月大小的雄性大鼠分为对照组(4只大鼠；YC(2M)组)以及含有花生四烯酸的脂肪/油复合饲料组(4只大鼠；YA(2M)组)进行同样的试验。
另外，将8只Fischer种系的22个月大小的雄性大鼠分为2组，对照饲料组(4只大鼠；OC(22M)组)以及含有花生四烯酸的脂肪/油复合饲料组(4只大鼠；OA(22M)组)，在包括12小时(01:00到13:00)的黑暗期和12小时(13:00到01:00)的光照期的光照和黑暗循环下饲养8天，接着开始24小时黑暗条件下饲养(自由运转)，同时开始摄入试验食物，持续测量超昼夜运动量(位相记录的开始)。从自由运转饲养的第12天，用130luxes的光照在15:00的昼夜节律时间照射30分钟，测量位相的移动量(小时)。接着，2周后在20:00的昼夜节律时间用光同样照射，测量位相的移动量(小时)。
结果在图3中显示。在2个月、18个月和22个月的对照饲料组中，年龄对光照的昼夜节律的位相移动量没有大的影响，而作为摄入含有花生四烯酸的脂肪/油的结果，位相移动量增加了。
实施例5.光照和黑暗循环中8A8(96mol％)对相变的同步化的改善作用实施例2中制备的8A8(96mol％)对光照和黑暗循环的相变的影响按照与实施例3相同的方式进行。
将18个月大小Fischer种系的20只雄性大鼠分为2组，对照饲料组(10只大鼠OC(18M)组)和8A8复合饲养组(10只大鼠OA(18M)组)，每组给与列于表2的对照饲料和8A8复合饲料。
表2.试验饲料

大鼠摄入饲料的量为大约20g，每天每只大鼠摄入的含有花生四烯酸的脂肪/油的量为0.1g。因此，每只大鼠每天摄入的花生四烯酸的量为40mg。对人摄入量而言，40mg相应于133mg/60kg/天。将动物在动物室饲养，室内温度保持在23.5±1℃，湿度保持在55±5％，且让动物随意摄入饲料和饮水。光照和黑暗周期包括12小时的(01:00到13:00)黑暗期和12小时(13:00到01:00)的光照期间。从摄入试验饲料的2周后开始持续检测超昼夜运动量(位相记录的开始)。每天，计算运动总量和光照阶段运动与运动总量的比例([光照期间的运动量]/[运动总量]×100％)。
从记录位相的起始开始的第十天(开始饲养的第40天，开始摄入试验饲料的第26天)，将光照和黑暗周期的位相推后6小时(12小时的黑暗期(07:00到19:00)以及12小时的光照期(19:00到07:00))，确定直到昼夜节律同步化的日子。接着，10天后(位相记录开始后第20天)，将光照和黑暗周期位相提前6小时(12小时的黑暗期(01:00到13:00)以及12小时的光照期(13:00到01:00))，直到确定昼夜节律同步化的日子。将8只Fischer种系的2个月大小的雄性大鼠分为2组，对照饲料组(4只大鼠；YC(2M)组)以及8A8复合饲料组(4只大鼠；YA(2M)组)，按照这样的方式进行同样的试验。
关于位相向后移动的同步化天数，2个月的对照饲料组和8A8复合饲料组大鼠同步化所需要的天数分别为3.7天和4.1天，18个月大小的分别为7.28天和5.72天。关于位相向前移动的同步化天数，2个月的对照饲料组和8A8复合饲料组大鼠同步化所需要的天数分别为9.8天和9.43天，18个月大小的分别5.63天和3.32天。因此作为摄入8A8的结果，缩短了需要的同步化的时间(天数)。
实施例6.制备复合了含有花生四烯酸作为组成脂肪酸的脂肪/油(甘油三酯)的胶囊的实例将作为食品添加剂的明胶(100重量份)和35重量份的甘油溶解在50到60℃的水中，以制备具有2,000cps粘度的明胶膜。接着，将实施例1中制备的含有花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)与0.05％重量比的维生素E油混合，制备成分1。将实施例2中制备的含32mol％的8A8的脂肪/油(甘油三酯)与0.05％重量比的维生素E油复合，制备成分2。
之后，将50％重量的实施例1中制备的含花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)与50％重量的鱼油(鲔鱼(tuna)油二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸在总脂肪酸的比例分别为5.1％和26.5％)混合，接着将0.05％重量的维生素E油与其混合产生成分3。将80％重量的含有花生四烯酸的脂肪/油(甘油三酯)与20％重量的鱼油(鲔鱼(tuna)油二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸在总脂肪酸的比例分别为5.1％和26.5％)，接着，将0.05％重量的维生素E油与其混合，产生成分4。将99％的实施例1中制备的花生四烯酸乙酯与0.05％重量的维生素E油混合以制备成分5。用这些成分1到5进行胶囊制造，且用常规方法干燥以产生每个含有200mg成分的软胶囊。
实施例7.脂肪输液(transfusion)的应用将含有96％的实施例2中制备的8A8的脂肪/油(甘油三酯)(400g)、48g纯化的卵黄卵磷脂、20g油酸、100g甘油和40ml 0.1N的氢氧化钠混合并均质化，接着加入注射用蒸馏水至4升。采用高压喷雾乳化器将其乳化以制备脂质乳液。将每200ml的脂质乳液装入塑料袋中，并用高压蒸汽在121℃灭菌20分钟，以生产脂肪输液。
实施例8.果汁的应用将β-环糊精(2g)加入20ml的20％乙醇水溶液，将100mg实施例1中制备的含有花生四烯酸的甘油三酯(与0.05％的维生素E复合)加入其中，并在50℃下温育混合物2小时。在冷却至室温后(大约1小时)，另外在4℃下边搅拌边进行温育10小时。通过离心分离回收获得的沉淀物，用正己烷冲洗并冷冻干燥，产生1.8g的包含含有花生四烯酸的甘油三酯的环糊精的包含复合物。将粉末(1g)与10升果汁均质地混合，以制备含有花生四烯酸的甘油三酯的果汁。
权利要求
1.一种具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的组合物，含有花生四烯酸和/或含花生四烯酸的化合物。
2.根据权利要求1的组合物，其中含花生四烯酸的化合物为花生四烯酸醇酯或含有花生四烯酸作为一部分或所有的组成脂肪酸的甘油三酯、磷脂或糖脂。
3.根据权利要求2的组合物，其中含有花生四烯酸作为一部分或所有的组成脂肪酸的甘油三酯为中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至2位的甘油三酯。
4.根据权利要求3的组合物，其中中链脂肪酸选自具有6到12个碳原子的脂肪酸。
5.根据权利要求4的组合物，其中中链脂肪酸选自具有8个碳原子的脂肪酸。
6.一种具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的组合物，含有甘油三酯类，所述的甘油三酯类包含含有花生四烯酸作为所有或一部分组成脂肪酸的甘油三酯。
7.根据权利要求6的组合物，其中含有包含花生四烯酸作为所有或一部分组成脂肪酸的甘油三酯的甘油三酯类的花生四烯酸不低于组成甘油三酯的总脂肪酸的10％重量。
8.根据权利要求6或7的组合物，其中含有花生四烯酸作为所有或一部分组成脂肪酸的甘油三酯从属于被孢霉属(Motiierella)的微生物中提取。
9.根据权利要求6到8的任一项的组合物，其中含有花生四烯酸作为所有或一部分组成脂肪酸的甘油三酯为不含二十碳五烯酸或即使含有，量也不超过1％的甘油三酯。
10.一种具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的组合物，含有甘油三酯类，所述的甘油三酯类含有不少于5mol％的中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至2位的甘油三酯。
11.根据权利要求10的组合物，其中中链脂肪酸选自具有6到12个碳原子的脂肪酸。
12.根据权利要求11的组合物，其中中链脂肪酸选自具有8个碳原子的脂肪酸。
13.权利要求1到12所述的组合物，对由超昼夜节律异常导致的生物节律失调具有预防或减轻作用。
14.根据权利要求13的组合物，其中该组合物对生物节律失调的睡眠失调具有预防或减轻作用。
15.根据权利要求13的组合物，其中该组合物对生物节律失调的昼夜节律(生物钟)同步化延迟导致的病症具有预防或减轻作用。
16.根据权利要求15的组合物，其中该组合物对由昼夜节律(生物钟)同步化延迟导致的时差症、头痛、耳鸣、心悸、恶心、胃痛、腹泻和判断和注意力的下降具有预防或减轻作用。
17.根据权利要求13的组合物，其中该组合物对生物节律失调的延迟睡眠阶段综合征具有预防或减轻作用。
18.权利要求1到17的任一项所述的组合物，其中该组合物为食品组合物或药物组合物。
19.一种含有花生四烯酸或含花生四烯酸的化合物的食品组合物，使成年人每天花生四烯酸的摄取量为0.001到20g。
20.根据权利要求19的食品组合物，其中含花生四烯酸的化合物为花生四烯酸醇酯或含有花生四烯酸作为一部分或所有的组成脂肪酸的甘油三酯、磷脂或糖脂。
21.根据权利要求20的食品组合物，其中含有花生四烯酸作为一部分或所有的组成脂肪酸的甘油三酯为中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至2位的甘油三酯。
22.根据权利要求21的食品组合物，其中中链脂肪酸选自具有6到12个碳原子的脂肪酸。
23.根据权利要求22的组合物，其中中链脂肪酸选自具有8个碳原子的脂肪酸。
24.一种食品组合物，其中含有不少于0.001％重量的中链脂肪酸连接至1、3位而花生四烯酸连接至2位的甘油三酯。
25.根据权利要求24的食品组合物，其中中链脂肪酸选自具有6到12个碳原子的脂肪酸。
26.根据权利要求25的食品组合物，其中中链脂肪酸选自具有8个碳原子的脂肪酸。
27.根据权利要求19到26任一项的组合物，其中食品组合物为一种功能性食品、营养补充物、指定的健康食品或老年人食品。
28.一种生产具有使超昼夜节律正常化的作用和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的组合物的方法，其特征在于将花生四烯酸和/或含花生四烯酸的化合物单独或与基本上不含花生四烯酸或，即便含有，量也很少的食品材料一起复合。
全文摘要
一种具有使超昼夜节律正常化的功能和/或使昼夜节律(生物钟)的同步化改善的作用的组合物，含有花生四烯酸和/或含花生四烯酸的化合物。
文档编号A61P43/00GK1756544SQ200480005559
公开日2006年4月5日 申请日期2004年3月26日 优先权日2003年3月27日
发明者秋元健吾, 小野佳子, 河岛洋, 永井克也 申请人:三得利株式会社