一种依达拉奉有关物质的制备方法与流程

本发明属于化学医药领域，具体涉及一种依达拉奉二聚体和三聚体的制备方法，即4,4'-双-(3-甲基-1-苯基-5-吡唑啉酮)和3,3',5'-三甲基-1,1'',2'-三苯基-1h,1''h-[4,4'：4',4''-三吡唑]-3',5,5''（2'h,4h,4''h）-三酮的制备方法。

背景技术：

依达拉奉（式ⅰ，3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮）是日本三菱株式会社研发的中枢神经用药，于2001年4月获日本厚生省批准上市。依达拉奉是一种抗氧化以及自由基清除药物，临床主要用于脑出血、脑梗死治疗，其具有强大的自由基清除功能，能够有效地对神经起到保护作用，这对于治疗急性脑梗死具有重要的临床意义。另外，其还可用于放射性脑水肿、创伤性蛛网膜下隙出血、原发性肾病综合征、血管源性帕金森综合征、充血性心力衰竭、脊髓损伤、病毒性心肌炎、急性百草枯中毒、一氧化碳中毒、周围性面神经炎等的治疗。

依达拉奉在临床上主要以注射剂型使用，在生产、贮藏和使用过程中由于高温灭菌等因素影响，可能产生相应的有关物质，导致药品质量下降。

已有报道的二聚体（式ⅱ）、三聚体（式ⅲ）是依达拉奉原料药和制剂中存在的主要杂质，常作为质量标准中特定的有关物质进行定性和定量分析，所以研究二聚体和三聚体的制备方法具有重要的意义。

现有技术cn104098512以依达拉奉与过氧化氢反应制得二聚体，该方法反应时间较长，收率很低，同时过氧化氢的使用对仪器损耗大。

现有技术cn106432082以依达拉奉与二氧化锰反应制得三聚体，该反应具有操作繁琐，溶剂不友好，后处理复杂等缺点。

依达拉奉二聚体、三聚体作为依达拉奉的有关物质，在定量及定性分析过程中用量很少，但其价格昂贵，制备过程中，反应时间长，操作繁琐，原料利用率低。因此，目前仍存在着改进依达拉奉有关物质制备方法的需求，以期得到一种反应时间短，环境友好，对设备损耗小的杂质制备方法。目前尚未有一步制得二聚体和三聚体的文献报道。

技术实现要素：

现有技术中，依达拉奉杂质的制备方法中，均是以氧化剂促进二聚体或三聚体的形成。本发明的发明人尝试在常规条件下，以碳酸盐，碳酸氢盐，磷酸盐，磷酸氢盐，硫酸盐等为催化剂，通过改变反应温度及时间来制备依达拉奉二聚体或三聚体，均未获得成功。本领域技术人员可知，高压微波具有加速分子碰撞，缩短反应时间的特点。然而，本发明的发明人经过大量的实验，意外的发现，以非氧化性的碳酸盐为催化剂，在微波条件下，不仅实现了上述反应，还同时以高收率得到了依达拉奉二聚体和三聚体，实现了一步制备两种依达拉奉有关物质。由于依达拉奉二聚体，三聚体作为质量标准中特定的有关物质，用量少，单次使用不超过10mg，因此，高压微波条件下的制备方法可以满足用量需求。

本发明的目的在于，提供一种同时制备两种依达拉奉有关物质的制备方法。

一方面，本发明提供了一种依达拉奉有关物质的制备方法，将依达拉奉加入有机溶剂中，加入碳酸盐，高压微波条件下反应，制得如式ii所示的依达拉奉二聚体和式iii所示的依达拉奉三聚体，

。

进一步地，所述有机溶剂为乙醇，甲醇，乙腈，异丙醇中的一种或几种。

更进一步地，所述有机溶剂为乙醇。乙醇条件下，更有利于二聚体和三聚体的生成。

进一步地，所述碳酸盐为碳酸钾，碳酸钠，碳酸铯，碳酸锂中的一种或几种。当将碳酸盐替换为氧化剂时，得到依达拉奉三聚体，未得到依达拉奉二聚体。当将碳酸盐替换为碳酸氢盐，磷酸盐，磷酸氢盐，硫酸盐等时，均未得到依达拉奉二聚体和三聚体。

本发明依达拉奉有关物质的制备方法中，加入碳酸盐后，反应液ph值小于7。

更进一步地，所述碳酸盐为碳酸铯。碳酸铯为催化剂时，能最大限度的提高依达拉奉二聚体和三聚体的含量。

进一步地，所述高压微波条件为：功率10-100w，温度80-120℃，反应时间为10-60min。所用高压微波管为30ml。该条件下，依达拉奉二聚体，三聚体质量收率分别不低于10%。

更进一步地，所述高压微波条件为：功率50w，温度100℃，反应时间为25min。该条件下，所得依达拉奉杂志中二聚体质量收率不小于20%，三聚体质量收率不低于30%。

进一步地，依达拉奉与碳酸盐的质量比为1:0.1-0.2，碳酸盐在反应中为催化剂。

进一步地，依达拉奉与有机溶剂的质量体积比为1:15-20。

进一步地，所述有关物质中二聚体质量收率不低于5%，三聚体质量收率不低于10%。

本发明所述质量收率均为分离收率。

另一方面，本发明提供了一种依达拉奉二聚体与三聚体的分离纯化方法，以200-300目硅胶为柱层析固定相，以乙酸乙酯+正己烷混合液（乙酸乙酯/正己烷=1/2）为流动相，洗脱分离得二聚体和三聚体。分离得到的二聚体、三聚体可以作为质量标准中杂质对照品，进行定性和定量分析。

本发明制备方法相对于现有技术具有以下优点：（1）大大缩短了反应时间，节约了时间成本；（2）同时制备两种依达拉奉杂质，提高了原料利用率；（3）操作简单；（4）所得二聚体，三聚体经分离后，纯度高；（5）对仪器损耗小。

附图说明

图1：实施例1所得杂质分离后依达拉奉二聚体高效液相色谱图。

图2：实施例1所得杂质分离后依达拉奉三聚体高效液相色谱图。

具体实施例

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。凡是在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。本发明所用依达拉奉原料为自制品，纯度大于99%。由本发明方法制备得到的二聚体、三聚体，分离纯化后，经高效液相分析：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为以稀醋酸（1→100）-甲醇（3:1，氨水溶液调整ph值为5.5），紫外检测波长为240nm。柱温40℃，色谱峰记录时间为主成分峰保留时间的3倍，采用面积归一化法。

实施例1依达拉奉有关物质的制备

依次向微波反应管中加入1.00g依达拉奉，15ml乙醇，0.20g碳酸铯，设定功率50w，温度100℃，高压微波反应25min，反应完毕，减压浓缩至固体混合物。以200-300目硅胶为柱层析固定相，以乙酸乙酯+正己烷混合液（乙酸乙酯/正己烷=1/2）为流动相，洗脱分离后减压浓缩至干，分别得到二聚体0.23g，收率23%；三聚体0.35g，收率35%。

质谱和核磁结构确证数据如下：

二聚体（式ⅱ化合物）

ms（esi）：347.9（m+h）⁺

¹hnmr（dmso，400mhz）：δ11.50（2h，s），7.76（4h，m），7.46（4h，m），7.23（2h，m），2.16（6h，s）

三聚体（式ⅲ化合物）

ms（esi）：519.7（m+h）⁺，541.7（m+na）⁺

¹hnmr（dmso，400mhz）：δ11.61（1h，s），10.36（1h，s），7.87（2h，m），7.69（4h，m），7.43（6h，m），7.19（3h，m），2.12（9h，s）

实施例2依达拉奉有关物质的制备

依次向微波反应管中加入1.00g依达拉奉，15ml甲醇，0.20g碳酸铯，设定功率10w，温度120℃，高压微波反应60min，反应完毕，减压浓缩至固体混合物。以200-300目硅胶为柱层析固定相，以乙酸乙酯+正己烷混合液（乙酸乙酯/正己烷=1/2）为流动相，洗脱分离后压浓缩至干，分别得到二聚体0.14g，收率14%；三聚体0.29g，收率29%。结构确证同实施例1。

实施例3依达拉奉有关物质的制备

依次向微波反应管中加入1.00g依达拉奉，20ml乙腈，0.10g碳酸锂，设定功率100w，温度80℃，高压微波反应10min，反应完毕，减压浓缩，得到固体混合物。以200-300目硅胶为柱层析固定相，以乙酸乙酯+正己烷混合液（乙酸乙酯/正己烷=1/2）为流动相，洗脱分离后减压浓缩至干，分别得到二聚体0.17g，收率17%；三聚体0.13g，收率13%。结构确证同实施例1。

实施例4依达拉奉有关物质的制备

依次向微波反应管中加入1.00g依达拉奉，20ml乙腈，0.10g碳酸锂，设定功率120w，温度70℃，高压微波反应20min，反应完毕，减压浓缩至固体混合物。以200-300目硅胶为柱层析固定相，以乙酸乙酯+正己烷混合液（乙酸乙酯/正己烷=1/2）为流动相，洗脱分离后减压浓缩至干，分别得到二聚体0.05g，收率5%；三聚体0.17g，收率17%。结构确证同实施例1。

实施例5依达拉奉有关物质的制备

依次向微波反应管中加入1.00g依达拉奉，20ml甲醇，0.20g碳酸铯，设定功率5w，温度130℃，高压微波反应10min，反应完毕，减压浓缩至固体混合物。以200-300目硅胶为柱层析固定相，以乙酸乙酯+正己烷混合液（乙酸乙酯/正己烷=1/2）为流动相，洗脱分离后减压浓缩至干，分别得到二聚体0.07g，收率7%；三聚体0.11g，收率11%。结构确证同实施例1。

实施例6依达拉奉有关物质的制备

依次向微波反应管中加入1.00g依达拉奉，20ml异丙醇，0.10g碳酸钾，设定功率60w，温度90℃，高压微波反应40min，反应完毕，减压浓缩至固体混合物。以200-300目硅胶为柱层析固定相，以乙酸乙酯+正己烷混合液（乙酸乙酯/正己烷=1/2）为流动相，洗脱分离后减压浓缩至干，分别得到二聚体0.09g，收率19%；三聚体0.13g，收率13%。结构确证同实施例1。

对比例1依达拉奉有关物质的制备

依次向微波反应管中加入1.00g依达拉奉，20ml乙醇，0.10g碳酸氢钠，设定功率80w，温度100℃，高压微波反应60min，反应完毕，减压浓缩至固体混合物。以200-300目硅胶为柱层析固定相，以乙酸乙酯+正己烷混合液（乙酸乙酯/正己烷=1/2）为流动相洗脱，减压浓缩至干，未得到二聚体和三聚体。

对比例2依达拉奉有关物质的制备

依次向微波反应管中加入1.00g依达拉奉，15ml乙醇，0.10g磷酸钠，设定功率50w，温度100℃，高压微波反应60min，反应完毕，减压浓缩至固体混合物。以200-300目硅胶为柱层析固定相，以乙酸乙酯+正己烷混合液（乙酸乙酯/正己烷=1/2）为流动相洗脱，减压浓缩至干，未得到二聚体和三聚体。

对比例3依达拉奉有关物质的制备

依次向微波反应管中加入1.00g依达拉奉，15ml乙醇，0.20g二氧化锰，设定功率50w，温度100℃，高压微波反应60min，反应完毕，减压浓缩至固体混合物。以200-300目硅胶为柱层析固定相，以乙酸乙酯+正己烷混合液（乙酸乙酯/正己烷=1/2）为流动相洗脱，减压浓缩至干，得到三聚体0.21g，收率21%，未得到二聚体。

对比例4依达拉奉有关物质的制备

依次向反应瓶中加入1.00g依达拉奉，15ml乙醇，0.20g碳酸铯，回流反应48h，反应完毕，减压浓缩，得到固体混合物。以200-300目硅胶为柱层析固定相，以乙酸乙酯+正己烷混合液（乙酸乙酯/正己烷=1/2）为流动相洗脱分离后，减压浓缩至干，未得到二聚体和三聚体。