专利名称：一种依达拉奉注射液的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及药物制剂及其分析领域，特别涉及一种依达拉奉注射液的质量检测方法。
背景技术：
市场上的依达拉奉注射液(商品名:百依达,英文名:Edaravone Injection,汉语拼音:Yidalafeng Zhusheye),主要成分为依达拉奉,化学名称为3_甲基-1-苯基_2_卩比唑啉-5-酮，分子式=CiciHltlN2tl，分子量:174.2，依达拉奉的结构式为:
人H
HiC**
依达拉奉是一种自由基清除剂，可以抑制脑缺血、缺氧后再灌注引起的大量自由基和脂质过氧化物的产生，从而减轻脑细胞损害，促进神经功能恢复。依达拉奉是一种脑保护剂，临床研究提示N-乙酰门冬氨酸(NAA)是特异性的存活神经细胞的标志，脑梗塞发病初期含量急剧减少。脑梗塞急性期患者给予依达拉奉，可抑制梗塞周围局部脑血流量的减少，使发病后第28天脑中NAA含量较甘油对照组明显升高。临床前研究提示，大鼠在缺血/缺血再灌注后静脉给予依达拉奉，可阻止脑水肿和脑梗塞的进展，并缓解所伴随的神经症状，抑制迟发性神经元死亡。机理研究提示，依达拉奉可清除自由基，抑制脂质过氧化，从而抑制脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤。
依达拉奉注射液是一种理想的脑保护剂药物制剂，具有良好的市场前景；所以，需要建立专门质量检测方法以保证其质量。
发明内容
本发明的目的是提供一种依达拉奉注射液的质量检测方法，所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O计)，为0.2mg/ml 0.5mg/ml，含有亚硫酸氢钠(NaHSO 3计)为0.06mg/ml 0.6mg/ml ;所述的依达拉奉注射液的质量检测方法的检测项目包括:盐酸半胱氨酸含量检测、亚硫酸氢钠含量检测。本发明的目的是通过以下的技术方案实现的:
一种依达拉奉注射液的质量检测方法，该注射液的原料中包括依达拉奉、亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸、注射用水，其重量份数比为750:500:250:500000 ;所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O计)，为0.2mg/ml 0.5mg/ml，含有亚硫酸氢钠(NaHSO 3计)为0.06mg/ml 0.6mg/ml ;所述的依达拉奉注射液的质量检测方法所检测项目包括:盐酸半胱氨酸含量检测、亚硫酸氢钠含量检测。所述的盐酸半胱氨酸含量检测的方法为:
A、依达拉奉注射液供试品制备:
a.将所述的依达拉奉注射液加水稀释至原体积的5倍，得到依达拉奉注射液的稀释
液；
b.将所述的依达拉奉注射液的稀释液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到依达拉奉混合液A ;所述的依达拉奉注射液的稀释液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1 ;
c.将所述的依达拉奉混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21 ;
d.将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560nm波长处测定吸收度。B、盐酸半胱氨酸对照品制备:
a.精密配制100u g/mL的盐酸半胱氨酸水溶液；
b.将所述的盐酸半胱氨酸水溶液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到盐酸半胱氨酸混合液A ;所述的盐酸半胱氨酸水溶液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1 ;
c.将所述的盐酸半胱氨酸混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的盐酸半胱氨酸对照品；所述的盐酸半胱氨酸混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21 ；
d.将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560nm波长处测定吸收度；
经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸(C3H7NO2 S HCI H2O计)，为
0.2mg/ml 0.5mg/ml。所述的亚硫酸氢钠含量检测的方法为:
A、依达拉奉注射液供试品制备:
a、取所述的依达拉奉注射液，用0.01%乙二胺四乙酸二钠溶液稀释至原体积的250倍，得到依达拉奉注射液的稀释液；
b、将所述的依达拉奉注射液的稀释液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到依达拉奉混合液A，将所述的依达拉奉混合液A室温下放置45分钟，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉注射液的稀释液、碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为 10:1:1 ；
C、将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在557 nm波长处测定吸收度；
B、亚硫酸氣纳对照品制备:
a.用0.01%乙二胺四乙酸二钠溶液作为溶剂精密配制2g/mL的亚硫酸氢钠溶液；
b、将所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到亚硫酸氢钠混合液A，将所述的亚硫酸氢钠混合液A室温下放置45分钟，得到所述的亚硫酸氢钠对照品；所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为10:1:1 ;
C、将所述的亚硫 酸氢钠对照品通过照紫外-可见分光光度法，在557nm波长处测定吸收度；经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有亚硫酸氢钠(NaHSO 3计)，为0.06mg/ml
0.6mg/ml o本发明的有益效果为:
本发明采用紫外-可见分光光度法进行盐酸半胱氨酸、亚硫酸氢钠的定量检测，具操作简单、准确度高、重现性好等优点，能够保证目前市场上的依达拉奉注射液的质量。
具体实施例方式实施例1:
一种依达拉奉注射液的质量检测方法，该注射液的原料中包括依达拉奉、亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸、注射用水，其重量份数比为750:500:250:500000 ;所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O计)，为0.2mg/ml 0.5mg/ml，含有亚硫酸氢钠(NaHSO 3计)为0.06mg/ml 0.6mg/ml ;所述的依达拉奉注射液的质量检测方法的检测项目包括:盐酸半胱氨酸含量检测、亚硫酸氢钠含量检测。所述的盐酸半胱氨酸含量检测的方法为:
A、依达拉奉注射液供试品制备:
a.将所述的依达拉奉注射液加水稀释至原体积的5倍，得到依达拉奉注射液的稀释
液；
具体的操作为:
精密量取所述的依达拉奉注射液10ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到依达拉奉注射液的稀释液；
b.将所述的依达拉奉注射液的稀释液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到依达拉奉混合液A ;所述的依达拉奉注射液的稀释液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1 ;
所述的酸性茚三酮溶液的配制方法为:取茚三酮0.25g，加冰醋酸6mL与盐酸4mL超声使溶解，即得；所述的酸性茚三酮溶液需临用新制；
具体的操作为:
精密量取所述的依达拉奉注射液的 稀释液2mL，置25mL量瓶中，加入冰醋酸与酸性茚三酮溶液各lmL，轻轻摇匀，密塞；
c.将所述的依达拉奉混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21 ；
具体的操作为:
将装有所述的依达拉奉混合液A的25ml量瓶水浴加热10分钟，立即冷却，加入乙醇至刻度，摇匀，得到所述依达拉奉注射液供试品；
d.将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560nm波长处测定吸收度。所述的紫外-可见分光光度法按照中国药典2005年版二部附录IV A中的记载进行；
B、盐酸半胱氨酸对照品制备:
a.精密配制100 V- g/mL的盐酸半胱氨酸水溶液；b.将所述的盐酸半胱氨酸水溶液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到盐酸半胱氨酸混合液A ;所述的盐酸半胱氨酸水溶液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1 ;
所述的酸性茚三酮溶液的配制方法为:取茚三酮0.25g，加冰醋酸6mL与盐酸4mL超声使溶解，即得；所述的酸性茚三酮溶液需临用新制；
具体的操作为:
精密量取所述的盐酸半胱氨酸水溶液2mL，置25mL量瓶中，加入冰醋酸与酸性茚三酮溶液各lmL，轻轻摇匀，密塞；
c.将所述的盐酸半胱氨酸混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的盐酸半胱氨酸对照品；所述的盐酸半胱氨酸混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21 ；
具体的操作为:
将装有所述的盐酸半胱氨酸混合液A的25ml量瓶水浴加热10分钟，立即冷却，加入乙醇至刻度，摇匀，得到所述盐酸半胱氨酸对照品；
d.将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560nm波长处测定吸收度；
经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O计)，为
0.2mg/ml 0.5mg/ml。所述的亚硫酸氢钠含量检测的方法为:
A、依达拉奉注射液供试品制备:
a、取所述的依达拉奉注射液，用0.01%乙二胺四乙酸二钠溶液稀释至原体积的250倍，得到依达拉奉注射液的稀释液；
具体的操作为:
精密量取所述的依达拉奉注射液1ml，置250ml量瓶中，加0.01%乙二胺四乙酸二钠溶液稀释至刻度，摇匀，得到依达拉奉注射液的稀释液；
b、将所述的依达拉奉注射液的稀释液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到依达拉奉混合液A，将所述的依达拉奉混合液A室温下放置45分钟，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉注射液的稀释液、碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为 10:1:1 ；
所述的碱性品红溶液的配制方法为:取碱性品红0.05g置IOOml量瓶中，加盐酸5ml溶解，加水至刻度， 摇匀即得。具体的操作为:
精密量取所述的依达拉奉注射液的稀释液IOml，加入0.05%碱性品红溶液Iml与0.2%甲醛溶液lml，摇匀，室温下放置45分钟，
C、将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在557 nm波长处测定吸收度；
所述的紫外-可见分光光度法按照中国药典2005年版二部附录IV A中的记载进行；
B、亚硫酸氣纳对照品制备:
a.用0.01%乙二胺四乙酸二钠溶液作为溶剂精密配制2g/mL的亚硫酸氢钠溶液；
b、将所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到亚硫酸氢钠混合液A，将所述的亚硫酸氢钠混合液A室温下放置45分钟，得到所述的亚硫酸氢钠对照品；所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为10:1:1 ;
所述的碱性品红溶液的配制方法为:取碱性品红0.05g置IOOml量瓶中，加盐酸5ml溶解，加水至刻度，摇匀即得。具体的操作为:
精密量取所述的亚硫酸氢钠溶液10ml，加入0.05%碱性品红溶液Iml与0.2%甲醛溶液lml,摇匀，室温下放置45分钟，
C、将所述的亚硫酸氢钠对照品通过照紫外-可见分光光度法，在557 nm波长处测定吸收度；
经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有亚硫酸氢钠(NaHSO 3计)，为0.06mg/ml
0.6mg/ml o所述的检测方法中，还包括以下检测内容:
1、性状检测:所述的依达拉奉注射液为无色澄明液体；
2、鉴别检测:
(I)、取所述的依达拉奉注射液适量，滴加碘化铋钾试液，即生成橙黄色沉淀。(2)、在含量测定项下的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品峰的保留时间一致。
2、pH值检测:应为3.0 4.5 (中国药典2005年版二部附录VI H)。3、有关物质检测:精密量取所述的依达拉奉注射液5ml，置IOOml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1ml，置IOOml量瓶中，加水稀释至刻度，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液20 Ul注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的20% ;再取供试品溶液和对照溶液各20 yl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/2(0.5%)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0%)。4、细菌内毒素检测:取所述的依达拉奉注射液，用细菌内毒素检查用水稀释至2倍体积，依法检查(中国药典2005年版二部附录XI E)，每Iml中含内毒素的量应小于
0.5EU。5、依达拉奉检测:照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定。6、色谱条件 与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以
0.02mol/L磷酸二氢钾(三乙胺调节pH值至7.0±0.5)_甲醇(70: 30)为流动相；检测波长为240nm。理论板数按依达拉奉峰计算应不低于1000,依达拉奉峰与其它峰的分离度
应符合规定。7、测定法:精密量取所述的依达拉奉注射液适量，加水稀释制成每Iml含15 ii g的溶液，精密量取20 u 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取依达拉奉对照品37mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置IOOml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。所述的依达拉奉注射液为脑保护剂。所述的依达拉奉注射液的规格为IOml: 15mg。
所述的依达拉奉注射液贮藏方式为密闭，置凉暗处保存。所述的依达拉奉注射液的有效期暂定18个月。本实施例所述的依达拉奉注射液的原料中包括依达拉奉、亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸、注射用水，其重量份数比为750:500:250 =500000 ；
所述的依达拉奉注射液的制备方法为:
A、配制:按照上述配比取的依达拉奉，加入上述配比的90 100°C的注射用水，搅拌使主药完全溶解，加入处方量的亚硫酸氢钠500g和盐酸半胱氨酸250g，搅拌均匀，加注射用水至上述配比的80%，使溶液凉至80°C，加上药用活性炭150g搅拌15分钟，趁热过滤，脱炭，滤液加注射用水至全量，用稀盐酸或氢氧化钠试液调节PH值为4.0 4.5,用0.45 ii m微孔滤膜过滤，得到半成品；
B、灌封:半成品检验合格后，用0.22 y m微孔滤I吴过滤,灌封于IOml曲颈玻璃安it瓦中，装量按10.5ml (增加量0.5ml)，灌封。C、灭菌、检漏:将灌封合格的半成品置灭菌柜内，用饱和蒸汽115°C灭菌30分钟。用胭脂红使用色素配制的红色色水,真空度_80kpa以上条件下检漏，纯化水清洗，50°C以下烘干后检出漏支即可。D、灯检:按收灭菌检漏后的半成品，检出瓶身有裂纹、漏气、破损、装量不合格药等废品。 E、印字、包装:按规定进行印字包装。F、成品检验:对药品质量进行质检，并由质检部门对本批药品生产过程按规定进行评估，合格后入库。所述的依达拉奉注射液的成品率为80% 95%。
权利要求
1.一种依达拉奉注射液的质量检测方法，其特征在于:该注射液的原料中包括依达拉奉、亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸、注射用水，其重量份数比为750:500:250:500000 ;所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O计)，为0.2mg/ml 0.5mg/ml,含有亚硫酸氢钠(NaHSO 3计)为0.06mg/ml 0.6mg/ml ;所述的依达拉奉注射液的质量检测方法的检测项目包括:盐酸半胱氨酸含量检测、亚硫酸氢钠含量检测。
2.根据权利要求1所述的依达拉奉注射液的质量检测方法，其特征在于:所述的盐酸半胱氨酸含量检测的方法为: A、依达拉奉注射液供试品制备: a.将所述的依达拉奉注射液加水稀释至原体积的5倍，得到依达拉奉注射液的稀释液； b.将所述的依达拉奉注射液的稀释液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到依达拉奉混合液A ;所述的依达拉奉注射液的稀释液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1 ; c.将所述的依达拉奉混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21 ; d.将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560nm波长处测定吸收度； B、盐酸半胱氨酸对照 品制备: a.配制100V- g/mL的盐酸半胱氨酸水溶液； b.将所述的盐酸半胱氨酸水溶液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到盐酸半胱氨酸混合液A ;所述的盐酸半胱氨酸水溶液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1 ; c.将所述的盐酸半胱氨酸混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的盐酸半胱氨酸对照品；所述的盐酸半胱氨酸混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21 ； d.将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560nm波长处测定吸收度； 经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O计)，为0.2mg/ml 0.5mg/ml。
3.根据权利要求1所述的依达拉奉注射液的质量检测方法，其特征在于:所述的亚硫酸氢钠含量检测的方法为: A、依达拉奉注射液供试品制备: a、取所述的依达拉奉注射液，用0.01%乙二胺四乙酸二钠溶液稀释至原体积的250倍，得到依达拉奉注射液的稀释液； b、将所述的依达拉奉注射液的稀释液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到依达拉奉混合液A，将所述的依达拉奉混合液A室温下放置45分钟，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉注射液的稀释液、碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为 10:1:1 ； C、将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在557nm波长处测定吸收度； B、亚硫酸氣纳对照品制备:a.用0.01%乙二胺四乙酸二钠溶液作为溶剂配制2ii g/mL的亚硫酸氢钠溶液； b、将所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到亚硫酸氢钠混合液A，将所述的亚硫酸氢钠混合液A室温下放置45分钟，得到所述的亚硫酸氢钠对照品；所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为10:1:1 ; C、将所述的亚硫酸氢钠对照品通过照紫外-可见分光光度法，在557 nm波长处测定吸收度； 经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有亚硫酸氢钠(NaHSO 3计)，为0.06mg/ml .0.6mg/ml o
全文摘要
本发明提供一种依达拉奉注射液的质量检测方法，所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸(C3H7NO2S·HCl·H2O计)，为0.2mg/ml～0.5mg/ml，含有亚硫酸氢钠(NaHSO3计)为0.06mg/ml～0.6mg/ml；所述的依达拉奉注射液的质量检测方法的检测项目包括盐酸半胱氨酸含量检测、亚硫酸氢钠含量检测。本发明采用紫外-可见分光光度法进行盐酸半胱氨酸、亚硫酸氢钠的定量检测，具操作简单、准确度高、重现性好等优点，能够保证目前市场上的依达拉奉注射液的质量。
文档编号G01N21/31GK103245621SQ20121002971
公开日2013年8月14日 申请日期2012年2月10日 优先权日2012年2月10日
发明者缪也夫, 郭冰洲 申请人:陕西健民制药有限公司