甲磺酸索拉菲尼光降解产物的制备方法、检测方法和应用与流程

本发明涉及化学物质技术领域，尤其涉及甲磺酸索拉菲尼光降解产物的制备方法、检测方法和应用。

背景技术：

索拉非尼(sorafenib)是拜耳和onyx公司共同研制的一种多靶点的生物靶向新药，临床前研究和临床试验提示索拉非尼有广泛的抗肿瘤作用。索拉非尼是一种新颖的二芳基缩脲，化学名4-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-酰脲]-苯氧基}-吡啶-2-羧酸甲胺，临床使用的是索拉非尼的对甲苯磺酸盐。索拉非尼是首个口服小分子多激酶抑制剂，研究发现它能同时抑制多种存在于细胞内和细胞表面的激酶，包括抑制血管内皮生长因子-2(vegfr-2)、血管内皮生长因子-3(vegfr-3)以及血小板源生长因子-β(pdgfr-β)的酪氨酸激酶的活性，具有双重的抗肿瘤作用；既能直接抑制肿瘤细胞的增殖，又能通过抑制血管新生，达到肿瘤饥饿疗法的目的。

2005年12月20日被fda批准用于治疗晚期肾细胞癌，2006年11月30日在中国上市。该药对肝癌、非小细胞肺癌以及黑色素瘤也有一定疗效。随着研究的不断进展，索拉非尼必将成为恶性肿瘤的一线或二线治疗方案中的重要药物，造福于人类的肿瘤事业。在我国，自主研发出与索拉非尼的结构和药理作用相似、效果更佳的新药将是我国靶向治疗的重要课题。

研究索拉非尼的合成工艺有着极广阔的前景。不仅是由于索拉非尼本身所具有的重要作用，它还拥有一个很大的市场有待于我们去发掘、去占有。积极开发索拉非尼的原药，包括其合成工艺的原料，中间体等都有相当高的附加值，并且在索拉非尼的合成技术基础上，开发新的结构相似的创新型肿瘤治疗药物，将具有较广阔用途的发展前景。

甲磺酸索拉菲尼已经进入药品市场，国内外药典都没有收载，没有提供对照品，但是需要对其原料药和制剂进行有关物质监控，保证其质量和安全，目前，关于甲磺酸索拉菲尼的有关物质研究还较少，杂质对照品的制备研究也较少，需要对其有关物质进一步研究。

技术实现要素：

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种甲磺酸索拉菲尼光降解产物的制备方法、检测方法和应用，本发明制备方法简单，可大量生产，且制得的甲磺酸索拉菲尼光降解产物纯度高，纯度可达99％；检测方法能快速、有效检测甲磺酸索拉菲尼光降解产物，所述光降解产物能与极性相近的化合物完全分离开，分离度均大于1.5，响应灵敏度高，其检测限为0.13ng，定量限为0.46ng；制得的甲磺酸索拉菲尼光降解产物纯度较高，可以作为杂质对照品，按照杂质对照品外标法对甲磺酸索拉菲尼原料药及其制剂中的光降解杂质进行监控。

本发明提出的一种甲磺酸索拉菲尼光降解产物的制备方法，包括如下步骤：将甲磺酸索拉菲尼溶液经光降解处理，然后经硅胶柱层析洗脱得到洗脱液；减压浓缩得到甲磺酸索拉菲尼光降解产物；

其中，硅胶柱层析的流动相为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，流速为400-600ml/h，取洗脱0.5-1h的洗脱液。

优选地，硅胶柱层析的流动相流速可以为410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580或590ml/h。

优选地，二氯甲烷和甲醇的体积比为9.5-10.5：1。

优选地，二氯甲烷和甲醇的体积比可以为9.6：1、9.7：1、9.8：1、9.9：1、10：1、10.1：1、10.2：1、10.3：1或10.4：1。

优选地，硅胶柱长30-40cm，硅胶柱直径为1.8-2.2cm。

优选地，硅胶柱长可以为31、32、33、34、35、36、37、38或39cm，硅胶柱直径可以为1.85、1.9、1.95、2、2.05、2.1或2.15cm。

优选地，甲磺酸索拉菲尼溶液的溶剂为甲醇、乙醇、二甲基亚砜或n,n-二甲基甲酰胺。

优选地，甲磺酸索拉菲尼溶液的溶剂为甲醇。

优选地，甲磺酸索拉菲尼溶液的浓度为0.01-0.03g/ml。

优选地，甲磺酸索拉菲尼溶液的浓度可以为0.011、0.012、0.013、0.014、0.015、0.016、0.017、0.018、0.019、0.02、0.021、0.022、0.023、0.024、0.025、0.026、0.027、0.028或0.029g/ml。

优选地，光降解的光照强度为4000-5000lx，光降解的光照时间为3-5天。

优选地，光降解的光照强度可以为4100、4200、4300、4400、4500、4600、4700、4800或4900lx，光降解的光照时间可以为3.5、4或4.5天。

优选地，所述甲磺酸索拉菲尼光降解产物的结构式为：

本发明还提出了上述甲磺酸索拉菲尼光降解产物的检测方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以磷酸盐缓冲水溶液为流动相a，以乙腈和乙醇的体积比为55-65：35-45为流动相b，检测波长为257-261nm，进行梯度洗脱；

所述梯度洗脱过程为：0-10min内，流动相a和流动相b的体积比为65：35；10-20min内，流动相a和流动相b的体积比从65：35匀速渐变至35：65；20-30min内，流动相a和流动相b的体积比从35：65匀速渐变至65：35；30-40min内，流动相a和流动相b的体积比为65：35。

优选地，流动相b中，乙腈和乙醇的体积比可以为56：44、57：43、58：42、59：41、60：40、61：39、62：38、63：37或64：36。

优选地，检测波长可以为257.1、257.2、257.3、257.4、257.5、257.6、257.7、257.8、257.9、258、258.1、258.2、258.3、258.4、258.5、258.6、258.7、258.8、258.9、259、259.1、259.2、259.3、259.4、259.5、259.6、259.7、259.8、259.9、260、260.1、260.2、260.3、260.4、260.5、260.6、260.7、260.8或260.9nm。

优选地，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。

优选地，磷酸盐缓冲水溶液的ph＝3.4-3.6。

优选地，磷酸盐缓冲水溶液的ph可以为3.41、3.42、3.43、3.44、3.45、3.46、3.47、3.48、3.49、3.5、3.51、3.52、3.53、3.54、3.55、3.56、3.57、3.58或3.59。

优选地，用磷酸调节磷酸盐缓冲水溶液ph＝3.4-3.6。

优选地，磷酸盐缓冲水溶液中，磷酸盐的浓度为1.3-1.5g/l。

优选地，磷酸盐缓冲水溶液中，磷酸盐的浓度可以为1.31、1.32、1.33、1.34、1.35、1.36、1.37、1.38、1.39、1.4、1.41、1.42、1.43、1.44、1.45、1.46、1.47、1.48或1.49g/l。

优选地，磷酸盐为磷酸二氢钾。

优选地，流速为0.95-1.05ml/min。

优选地，流速可以为0.96、0.97、0.98、0.99、1、1.01、1.02、1.03或1.04ml/min。

优选地，柱温为25-35℃。

优选地，柱温可以为26、27、28、29、30、31、32、33或34℃。

优选地，进样量为5-50μl。

优选地，进样量可以为6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40或45μl。

检测上述甲磺酸索拉菲尼光降解产物的具体步骤为：配制甲磺酸索拉菲尼光降解产物溶液并进样，通过面积归一法检测其纯度。

上述甲磺酸索拉菲尼光降解产物溶液为浓度为0.02g/ml的光降解产物甲醇溶液。

本发明还提出了上述甲磺酸索拉菲尼光降解产物作为杂质对照品在甲磺酸索拉菲尼原料药及其制剂的有关物质检查中的应用。

本发明制备方法简单，可大量生产，且制得的甲磺酸索拉菲尼光降解产物纯度高，纯度可达99％；本发明检测方法能快速、有效检测甲磺酸索拉菲尼光降解产物，所述光降解产物能与极性相近的化合物完全分离开，分离度均大于1.5，选用光降解产物的最大吸收波长259nm作为检测波长，保证了所述光降解产物的响应灵敏度，其检测限为0.13ng，定量限为0.46ng，提高检出量和检测结果的准确性；制得的甲磺酸索拉菲尼光降解产物纯度较高，可以作为杂质对照品，按照杂质对照品外标法对甲磺酸索拉菲尼原料药及其制剂中的光降解杂质进行监控，提高甲磺酸索拉菲尼原料药及其制剂的质量监控的准确性，提高其安全性和可控性。

附图说明

图1为本发明制得的甲磺酸索拉菲尼光降解产物的氢谱信号图。

图2为本发明制得的甲磺酸索拉菲尼光降解产物的碳谱信号图。

图3为本发明制得的甲磺酸索拉菲尼光降解产物的uv检测图。

图4为本发明制得的甲磺酸索拉菲尼光降解产物的hplc检测图。

具体实施方式

下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

实施例1

一种甲磺酸索拉菲尼光降解产物的制备方法，包括如下步骤：将浓度为0.02g/ml甲磺酸索拉菲尼的甲醇溶液于光照强度为4500lx的日光灯下，光照5天，然后经硅胶柱层析洗脱得到洗脱液；减压浓缩得到甲磺酸索拉菲尼光降解产物；

其中，硅胶柱层析的流动相为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，其中，二氯甲烷和甲醇的体积比为10：1，流速为500ml/h，硅胶柱长35cm，硅胶柱直径为2.0cm，取洗脱0.5-1h的洗脱液。

取实施例1制备得到的甲磺酸索拉菲尼光降解产物进行核磁、紫外光谱检测，结果参照图1-3，图1为本发明制得的甲磺酸索拉菲尼光降解产物的氢谱信号图；图2为本发明制得的甲磺酸索拉菲尼光降解产物的碳谱信号图；图3为本发明制得的甲磺酸索拉菲尼光降解产物的uv检测图。

由图1和图2可以看出，核磁氢谱和碳谱数据如下：

¹h-nmr(dmso,600mhz)δppm:9.126(1h,s,n-h),8.979(1h,s,n-h),8.803-8.811(1h,d,j＝7.2hz,pyr-h),8.510-8.519(1h,d,j＝5.4hz,n-h),8.045(1h,s,ar-h),7.604-7.619(3h,d,j＝9.0hz,ar-h*3),7.530-7.543(1h,d,j＝7.8hz,ar-h),7.391-7.395(1h,d,j＝2.4hz,ar-h),7.321-7.334(1h,d,j＝7.8hz,ar-h),7.179-7.194(2h,d,j＝9.0hz,ar-h*2),7.153-7.166(1h,m,pyr-h),2.791-2.799(3h,d,j＝4.8hz,n-ch3)；

¹³c-nmr(dmso,125mhz)δppm:169.07,166.88,155.66,155.55,153.45,150.83,143.63,140.30,132.99,132.74,132.53,124.99,124.53*2,123.46*2,121.20,117.29,117.09,111.78,29.09。

由图3可以看出：甲磺酸索拉菲尼光降解产物的紫外最大吸收波长为259nm。

实施例2

一种甲磺酸索拉菲尼光降解产物的制备方法，包括如下步骤：将浓度为0.01g/ml甲磺酸索拉菲尼的乙醇溶液于光照强度为5000lx的日光灯下，光照3天，然后经硅胶柱层析洗脱得到洗脱液；减压浓缩得到甲磺酸索拉菲尼光降解产物；

其中，硅胶柱层析的流动相为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，其中，二氯甲烷和甲醇的体积比为10.5：1，流速为400ml/h，硅胶柱长40cm，硅胶柱直径为1.8cm，取洗脱0.5-1h的洗脱液。

实施例3

一种甲磺酸索拉菲尼光降解产物的制备方法，包括如下步骤：将浓度为0.03g/ml甲磺酸索拉菲尼的n,n-二甲基甲酰胺溶液于光照强度为4000lx的日光灯下，光照4天，然后经硅胶柱层析洗脱得到洗脱液；减压浓缩得到甲磺酸索拉菲尼光降解产物；

其中，硅胶柱层析的流动相为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，其中，二氯甲烷和甲醇的体积比为9.5：1，流速为600ml/h，硅胶柱长30cm，硅胶柱直径为2.2cm，取洗脱0.5-1h的洗脱液。

实施例4

一种甲磺酸索拉菲尼光降解产物的检测方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸调节ph＝3.5的磷酸二氢钾缓冲水溶液为流动相a，以乙腈和乙醇的体积比为60：40为流动相b，检测波长为259nm，流速为1ml/min，柱温为30℃，其中，磷酸二氢钾缓冲水溶液的浓度为1.4g/l，进行梯度洗脱；

所述梯度洗脱过程为：0-10min内，流动相a和流动相b的体积比为65：35；10-20min内，流动相a和流动相b的体积比从65：35匀速渐变至35：65；20-30min内，流动相a和流动相b的体积比从35：65匀速渐变至65：35；30-40min内，流动相a和流动相b的体积比为65：35。

样品配制：

甲磺酸索拉菲尼光降解产物溶液：紧密称取实施例1制备得到的甲磺酸索拉菲尼光降解产物并溶解于甲醇中配制得到浓度为0.02g/ml的光降解产物甲醇溶液。

试验操作：取甲磺酸索拉菲尼光降解产物溶液20μl进样，记录色谱图。

hplc检测图见图4，由图4可以看出本发明制备得到的甲磺酸索拉菲尼光降解产物纯度高达99.157％，各峰之间的分离度均大于1.5，可以有效分离。

实施例5

一种甲磺酸索拉菲尼光降解产物的检测方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸调节ph＝3.4的磷酸二氢钾缓冲水溶液为流动相a，以乙腈和乙醇的体积比为65：35为流动相b，检测波长为261nm，流速为0.95ml/min，柱温为35℃，其中，磷酸二氢钾缓冲水溶液的浓度为1.3g/l，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱过程同实施例4。

样品配制：

甲磺酸索拉菲尼光降解产物溶液：同实施例4。

试验操作：取甲磺酸索拉菲尼光降解产物溶液50μl进样，记录色谱图。

实施例6

一种甲磺酸索拉菲尼光降解产物的检测方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸调节ph＝3.6的磷酸二氢钾缓冲水溶液为流动相a，以乙腈和乙醇的体积比为55：45为流动相b，检测波长为257nm，流速为1.05ml/min，柱温为25℃，其中，磷酸二氢钾缓冲水溶液的浓度为1.5g/l，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱过程同实施例4。

样品配制：

甲磺酸索拉菲尼光降解产物溶液：同实施例4。

试验操作：取甲磺酸索拉菲尼光降解产物溶液5μl进样，记录色谱图。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。