一种利用模拟移动床拆分拉米夫定的方法与流程

本发明涉及一种手性药物拆分技术，特别涉及一种拆分拉米夫定对映体的模拟移动床色谱分离方法。

背景技术：

拉米夫定(lamivudine，3-tc)，即(2r-顺式)-4-氨基-i-(2-羟甲基-l，3-氧硫杂环戊-5基)-ih一嘧啶-2-酮，是核苷类抗病毒药。开始用于治疗艾滋病，1995年后逐渐发现其对hbv-dna的抑制作用，并在全球先后进行了拉米夫定治疗乙型肝炎的ⅱ期和ⅲ期临床试验，是建今为止唯一经历长期慢性乙型肝炎治疗试验的核苷类药物。

拉米夫定分子结构中具有一个手性中心，其r一对映体比s一对映体更加具有生物毒性作用。

拉米夫定左旋体主要抑制hbvdna多聚酶，基本不与人类dna多聚酶发生相互作用。拉夫米定r一对映体可抑制人线粒体dna合成，引起周围神经病变。

文献中有关拉米夫定的对映体的分离报道较少，目前仅发现利用环糊精衍生物作为手性添加剂或者手性固定相及生物酶催化法进行过分离，但分离效果并没有达到基线要求，而拉米夫定作为中间体出口时需要另一对对映体控制在0.3％以下。

利用模拟移动床分离药物技术近年来得到了迅速的发展。美国的一些专利文献报道了模拟移动床用于手性药物如光学异构体、外消旋物质和对映体，以及石油化工品的分离。其中us5,518,625专利文献涉及了心得安，氨酰心安和3-氯-苯-1-丙醇的手性分离。在中国的专利申请有德国德雷斯顿药品工业有限公司用模拟移动床色谱分离法制取高纯环苞菌素，还有日本代科化学株式会社和日产化学工业株式会社用模拟移动床分离甲羟戊酸内酯类化合物技术。

目前未见到有关模拟移动床色谱拆分拉米夫定对映体的技术方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种利用模拟移动床色谱拆分拉米夫定对映体的技术方法。

本发明为实现上述发明目的采用的技术方案如下：

一种拉米夫定药物的模拟移动床分离方法，其特征在于，用万古霉素手性固定相，用甲醇/冰醋酸/三乙胺(v/v/v)＝100/0.1/0.1作为流动相，用模拟移动床色谱系统分离拉夫米定对映体。

其工作步骤包括如下：

将拉米夫定溶于流动相甲醇/冰醋酸/三乙胺(v/v/v)＝100/0.1/0.1，浓度为0.1～500mg/ml。

应用模拟移动床色谱系统将拉米夫定s型异构体和r型异构体分开。

调整模拟移动床色谱系统切换阀的切换时间，从而得到高纯度的拉米夫定r型异构体。

萃取液与萃余液分别用薄膜旋转蒸发器浓缩至无醇味，用乙醇洗出后，在真空干燥箱烘干至恒重。

本发明的有益效果：本发明用模拟移动床色谱技术将拉米夫定s型异构体与r型异构体分开，纯度可达到99.7％以上。工艺简单，产品稳定可靠，可用于工业化生产。

附图说明

本发明将通过例子并参照附图的方式说明，其中：

图1为模拟移动床色谱系统的基本原理流程图；

图2为模拟移动床色谱系统的结构示意图。

图1中p、d、f分别为冲洗泵进料位置；流动相泵进料位置；进料泵的进料位置；ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ表示四根色谱柱。

图2中p为冲洗泵；d为流动相泵；f为进料泵；v1、v2、v3、v4为冲洗泵p上与六通阀相连的端口；v5、v6、v7、v8为流动相泵d上与六通阀相连的端口；v9、v10、v11、v12为进料泵f上与六通阀相连的端口；1#、2#、3#、4#为进料系统与色谱柱之间相连的六通阀；v13、v14、v15为切换阀x阀上与六通阀相连的端口；v16、v17、v18为切换阀y阀上与六通阀相连的端口；v19、v20、v21为切换阀z阀上与六通阀相连的端口；v22、v23、v24为切换阀w阀上与六通阀相连的端口；x、y、z、w为切换阀；r#、e#为出料处与切换阀之间连接的六通阀。

具体实施方式

本发明通过下面的实施例进行说明。

采用模拟移动床色谱系统，样品溶液、洗脱液和流动相分别通过三台泵进入系统中，拉米夫定s型异构体和r型异构体分别从快组分和慢组分两个出口流出，操作温度为25℃。

固定相及流动相的选择

采用万古霉素手性固定相，填料粒径为10～60μm，粒径越小，分离效果越好。流动相采用甲醇/冰醋酸/三乙胺(v/v/v)＝100/0.1/0.1。

分离步骤

拉米夫定样品溶于流动相，浓度为0.1～500mg/ml。进料浓度的增加有利于提高产率，但受拉米夫定溶解度的控制。色谱系统由四根色谱柱组成，结构简单，分离效果也较好。样品溶液与流动相，冲洗液进入到色谱系统，经过smb分离，可以从萃取液出口和萃余液出口获得纯度较高的左旋拉米夫定和右旋拉米夫定。经过旋蒸，结晶可以得到左旋拉米夫定和右旋拉米夫定纯品。

成品检验

流动相：甲醇/冰醋酸/三乙胺＝100/0.1/0.1

流速：1ml/min

色谱柱：4.6×250mm,5μm，万古霉素手性固定相

检测器：sti501型紫外检测器

检测波长：277nm

下面通过具体实例进一步对本发明进行说明。

模拟移动床色谱系统中切换阀切换时间的选择对分离左旋拉米夫定和右旋拉米夫定影响很大。不同的切换时间，左旋物与右旋物的分离效果有着明显的差异。

将拉米夫定样品溶于流动相，并抽滤超声，以除去样品内含有的杂质及气泡，可以减少杂质对色谱柱的污染，提高色谱柱的使用寿命。

流动相的配制：甲醇/冰醋酸/三乙胺(v/v/v)＝100/0.1/0.1，抽滤，超声。

模拟移动床装置属于三带模拟移动床装置，包括四根色谱柱，一台冲洗相泵，一台流动相泵，一台进料液输送泵，七个自动控制阀，plc自动控制系统，六通，管线，储液罐。进样液流速uf＝0.1ml/min；洗脱液流速为ud＝1ml/min；萃取液流速为up＝2ml/min；切换时间选择ts＝5.5min。

萃取液与萃余液分别用薄膜旋转蒸发器浓缩至无醇味，用乙醇洗出后，在真空干燥箱烘干至恒重。

成品hplc检测：sti501紫外检测器，万古霉素手性色谱柱，流动相甲醇/冰醋酸/三乙胺(v/v/v)＝100/0.1/0.1，检测波长277nm，流速1ml/min，检测灵敏度0.0600aufs，进样量20μl，检测温度25℃。

本发明并不局限于前述的具体实施方式。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。

技术特征：

技术总结
本发明涉及一种手性药物的分离，尤其涉及一种利用模拟移动床拆分拉米夫定的方法。该方法采用拉米夫定消旋体作为原料，应用模拟移动床色谱柱法分离制备拉米夫定R型异构体，模拟移动床采用万古霉素手性固定相，流动相甲醇/冰醋酸/三乙胺(V/V/V)＝100/0.1/0.1，从拉米夫定中分离出R型异构体。另外模拟移动床色谱过程是连续过程，提高了生产的自动化水平和生产效率，降低生产成本，整个分离过程不接触有毒溶剂。

技术研发人员：金湘益
受保护的技术使用者：宁波拓谱生物科技有限公司
技术研发日：2017.08.29
技术公布日：2017.12.22