技术总结
本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种简便、快速的筛选、鉴定利用基因组编辑技术创建的纯合突变体的方法。该方法用于筛选与鉴定利用CRISPR/Cas9系统创建的纯合突变体，包括构建CRISPR/Cas9系统载体、转化植物体、利用MSBSP‑PCR筛选纯合突变体等步骤。本申请主要技术思路为：CRISPR/Cas9系统创制的突变体中，相比较于野生型的DNA，PCR反应获得少量的产物或者不能得到产物。另一方面，本申请采用的是两轮PCR，第一轮PCR的产物作为第二轮PCR的模板，可以避免基因组DNA复杂性对产物的影响，提高了PCR方法鉴定CRISPR/Cas9系统创制突变体的效率。
技术研发人员：王燃;苗雨晨;郭敬功;李坤;金立锋;魏攀;王中;祁超亚;张林;李锋
受保护的技术使用者：中国烟草总公司郑州烟草研究院;河南大学
技术研发日：2017.12.15
技术公布日：2018.06.29