取代吡唑类化合物、其制备方法、药物组合物及用途与流程

本发明涉及一种取代吡唑类化合物、其制备方法、药物组合物及用途。
背景技术：
：脑血管病以发病率高、致残率高、致死率高和复发率高等四高而著称。我国是一个脑血管病高发国家，其中脑卒中(或称脑梗或脑中风)是最主要的临床脑血管疾病。《中国脑卒中防治报告-2015》统计表明，我国脑卒中患者多达700万人，每年因脑卒中疾病死亡的患者人数超过130万，已经成为我国第一死亡原因。并且，我国每年的脑卒中新增患者超过200万人，以每年接近9％的速度持续增加，目前在全球范围内我国男性脑卒中发病率为全球第三位，女性脑卒中发病率跃升为全球第二位(参考文献：国家卫生计生委防治工程委员会.中国卒中流行报告2015.北京：中国协和医科大学出版社，2015；wangw,jiangb,sunh,rux,sund,wangwang,wangwang,jiangy,liy,wangy.prevalence,incidenceandmortalityofstrokeinchina:resultsfromanationwidepopulation-basedsurveyof480,687adults.circulation2017；135:759-771)。脑卒中的病理机制是由于脑部血管突然破裂或因血管阻塞导致血液不能流入大脑而引起脑组织损伤的一种疾病，包括缺血性和出血性脑卒中。脑卒中疾病不但死亡率高，而且也是我国成年人残疾的首要原因。其中导致脑中风后遗症和治疗后残疾的病理学机制是脑缺血后血液再灌注时在脑部病灶周围产生大量的活性氧和自由基，这些自由基会通过细胞膜损伤、蛋白质损伤、核酸/dna损害、以及诱导各种炎症介质的产生等形式，对神经细胞，脑细胞形成非可逆伤害，最终导致神经细胞或脑细胞死亡(参考文献：氧自由基与缺血脑卒中，中国中医药咨讯，2010；(10)210-211；dynamicsoffreeradicalprocessesinacuteischemicstroke:influenceonneurologicalstatusandoutcome.j.clin.neurosci.2004,jun,11(5)501-506)。因此，针对脑卒中的临床治疗如果只强调静脉或者动脉溶栓治疗，很难彻底解决和防止自由基神经损伤给患者带来的后遗症以及残疾的问题和隐患。与脑卒中类似，肌萎缩侧索硬化症(als)也是一种以神经细胞受损萎缩和死亡为病理特征的疾病。als也俗称为渐冻症，虽然其发病机制本身目前尚无定论，但生物学证明该疾病至少与超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,sod)有关联。sod是广泛存在于生物体内的金属酶，其中sod1通过歧化反应将线粒体内的自由基等有害物质氧化并分解成水，从而起到解毒作用。目前科学界普遍认为，sod1超氧化物歧化酶的突变，是肌萎缩侧索硬化症形成的原因之一(参考文献：supportiveandsymptomaticmanagementofamyotrophiclateralsclerosis.naturereviews.neurology.2016,12(9):526–38.)。线粒体脑肌病是由于线粒体基因或细胞核基因缺失或突变导致的线粒体结构异常，引起脑部和横纹肌功能异常的一类疾病。该疾病在临床上与癫痫、脑梗塞、脑炎以及脑发育不良等病症类似，是严重影响患者的健康和生命的一类疾病。由于线粒体是对各种损伤最为敏感的细胞器之一，病理学研究表明它受到氧自由基的攻击而导致功能异常进而累及中枢神经系统从而形成线粒体脑肌病(参考文献：线粒体脑肌病影像研究进展，西北国防医学杂志，2011年第32卷第2期)。我国国家卫生健康委员会，科学技术部，工业和信息化部，国家药品监督管理局以及国家中医药管理局联合发布的《关于公布第一批罕见病目录的通知》(国卫医发【2018】10号)中明确规定肌萎缩侧索硬化症、线粒体脑肌病为我国罕见病也称孤儿病。作为罕见病，als虽然发病率很低，但我国人口基数大，据不完全统计我国目前该疾病的患者人数约为10万-20万人，而且目前能够根治该疾病的药物尚未开发成功。线粒体脑肌病在成人中的发病率约为1/4300左右，在儿童中的发病率则高达1/2000。因此，针对该类罕见疾病开发能够改善患者病情的治疗药物是我国乃至全世界生物医药领域科学家的共同奋斗目标和我国医药卫生领域重大攻关课题之一。(参考文献：《肌萎缩侧索硬化症临床诊断进展》[杨琼樊东升.中国现代神经疾病杂志2012.6第12卷第3期；肌萎缩侧索硬化流行病学研究现状[j].中华神经科杂志,2015,48(6):542-544)技术实现要素：本发明人精心开发了一种新型的取代吡唑类化合物，能够有效地预防和/或治疗神经细胞损伤。为此，本发明人提供一种式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物，其中：r1表示氢或烷基；x表示-o-、-s-或-nh-；表示双键，a为o；r2表示h、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的非芳香杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳烷基、或者任选取代的杂芳烷基，所述“任选取代的”是指未取代或被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、卤素、烷酰氧基、烷氧酰氧基、未取代或烷基取代的氨基；或者，表示单键，式(i)中的下式(i)部分形成下式(ii)所示的基团，式(ii)中，n为1或者2，m为1，2，3或4，各个r3相互独立地为羟基，羟甲基，烷酰氧基(优选乙酰氧基)、任选被卤素取代的苯甲酰氧基(优选苯甲酰氧基、对氯苯甲酰氧基)、烷酰氧基甲基(优选乙酰氧基甲基)、任选被卤素取代的苯甲酰氧基甲基(优选苯甲酰氧基甲基、对氯苯甲酰氧基甲基)、烷氧基、烷氧基甲基、或者未取代或被选自烷基、烷酰基(优选乙酰基)、任选被卤素取代的苯甲酰基(优选苯甲酰基、对氯苯甲酰基)的基团、单取代或二取代的氨基。可选地，所述“烷基”，以及“芳烷基”、“杂芳烷基”、“烷氧基”、“芳基烷氧基”、“烷酰氧基”、“烷氧酰氧基”、“烷酰氧基甲基”中的烷基部分各自独立地为c1-20直链或支链烷基，可选地，为c1-17直链或支链烷基，可选地，为c1-8直链或支链烷基，可选地，为c1-6直链或支链烷基，可选地，为c1-4直链或支链烷基，可选地，为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基，异戊基、新戊基、叔戊基、正己基、异己基、庚基、正辛基、正壬基、正癸基、十二烷基、十五烷基、或十六烷基；可选地，所述“环烷基”为c3-8环烷基，可选地，为环丙基、环丁基、环戊基、或环己基；可选地，所述“非芳香杂环基”为含有选自o、n、s的1-2个杂原子的非芳香c3-8杂环基，可选地，为环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、或吗啉基；可选地，所述“芳基”、“芳烷基”中的芳基为苯基、或萘基；可选地，所述“杂芳基”、以及“杂芳烷基”中的杂芳基部分各自独立地为含有选自o、n、s的1-2个杂原子的5-10元单环或双环稠合芳香杂环基团，可选地，为吡咯基、呋喃基、吡啶基、吡嗪基、或嘧啶基。可选地，上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物中，r1表示氢或甲基；x表示-o-或-nh-；表示双键，a为o；r2为c1-c17的支链或直连烷基，c3-6环烷基，苯基c1-c6烷基，吡啶基，任选被一个或多个选自羟基、c1-6烷酰氧基、c1-6烷氧酰氧基或-nr′r″的基团取代的苯基，其中r′r″各自独立地为c1-c6直连或支链的烷基。或者，表示单键，式(i)中的式(i)部分形成式(ii)所示的基团，式(ii)中，n为1或者2，m为2，3或4，各个r3相互独立地为羟基，羟甲基，或者未取代或被c1-6烷酰基单取代的氨基。可选地，上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物中，式(i)所示的取代吡唑类化合物为下式ii、iii或iv所示的化合物，其中，r2定义如上所述。可选地，上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物中，式(i)中的式(i)部分形成下式(iii)或(iv)所示的基团，其中，r′1为氢原子、羟甲基、c1-4烷酰氧基甲基；r′2为羟基或c1-4烷酰氧基；r′3为氢、羟基、c1-4烷酰氧基、氨基、或c1-4烷酰氨基。可选地，上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物中，式(i)中的式(i)部分形成下式所示的基团，可选地，上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物中，所述式(i)所示化合物选自以下化合物：可选地，上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物可以是各种光学异构体形式。对于糖苷类化合物，可以为α构型或β构型。例如，上述化合物33-40可以为α构型或β构型。另一方面，本发明人提供上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物的制备方法，包括将式(a)化合物与依达拉奉在碱性条件下反应的步骤，式中，r1、x、a、r2、的定义如上所述，y为卤素，优选为cl或br。可选地，上述制备方法中，式(i)化合物为式(ii)所示的化合物，所述制备方法的合成路线如下所示，所述制备方法包括：1)将式(c)化合物在催化剂的存在下与乙醛反应，制得式(b)化合物；2)将式(b)化合物在碱性条件下与依达拉奉反应，制得式(ii)化合物；可选的，所述式(c)的制备方法包括将式(d)化合物与二氯亚砜反应；或者，式(i)化合物为式(iii)所示的化合物，所述制备方法的合成路线如下所示，所述制备方法包括：1)将式(d)化合物与氯甲基氯磺酸酯反应，制得式(e)化合物；2)将式(e)化合物在碱性条件下与依达拉奉反应，制得式(iii)化合物；或者，式(i)化合物为式(iv)所示的化合物，所述制备方法的合成路线如下所示，所述制备方法包括：1)将式(h)化合物与甲醛反应，制得式(g)化合物；2)将式(g)化合物与pcl5/pocl3反应制得式(f)化合物，3)将式(f)化合物在碱性条件下与依达拉奉反应，制得式(iv)化合物；或者，式(i)化合物为下式(v)所示的化合物，所述制备方法的合成路线如下所示，式中，y为cl或br，所述制备方法包括将式(m)化合物在碱性条件下与依达拉奉反应制得式(v)化合物；在上述结构式中，r2、r3、m、n定义如上所述。可选地，上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物的各种光学异构体形式，可以通过不同的方法合成，或者通过分离获得。对于上述化合物的α构型和β构型，例如化合物33、34、35、36、37、38、39、40的α构型或β构型，可以通过不同的合成方法制得，或者通过分离获得。另一方面，本发明人提供一种药物组合物，所述药物组合物包括上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物中的一种或多种以及任选的药学上可接受的载体。上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物的给药方式包括：肠胃外给药、口服、喷吸等，可单独使用至少一种这类化合物，或与药用载体，佐药，媒介物，赋形剂，稀释剂等混用。药物组合物剂型可以为例如注射剂、胶囊、粉剂、粒剂、片剂、丸、糖浆、乳剂、悬浮液、溶液等，可按照常规方法配制。肠胃外给药包括皮下注射、静脉注射、肌肉注射、腹膜内注射或输液。注射制剂，如无菌注射水或油悬浮液可按照已知方法用适宜分散剂或润湿剂以及悬浮剂配制。无菌注射制剂也可为无菌注射液、悬浮液或无菌冻干粉针，其中用肠胃外无毒稀释剂或溶剂，如水溶液。可用的合适载体或溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠液。另外，无菌不易挥发油也可作为溶剂或悬浮介质。为此可用不同类型的不易挥发油或脂肪酸，包括天然的、合成的或半合成的脂肪油或酸，以及天然的、合成的或半合成的单、双或三甘油酯。口服固体剂型包括上述粉、粒、片、丸和胶囊。在这些固体剂型中，活性化合物可以混用至少一种添加剂，如蔗糖、乳糖、纤维素、甘露糖醇、麦芽糖、糊精、淀粉、琼脂、藻酸盐、几丁质、脱乙酰壳多糖、果胶、阿胶、明胶、胶原、酪蛋白、清蛋白以及合成或半合成聚合物或甘油酯。这些剂型还可包括惰性载体以外的其他物质，例如润滑剂如硬脂酸镁，防腐剂如苯甲酸酯类(parabens)和山梨醇，抗氧化剂如抗坏血酸、生育酚和半胱氨酸，崩解剂，粘合剂，增稠剂，缓冲剂，增甜剂，香料和增香剂。片和丸可另外加外涂层而制得。口服液体剂型包括药用乳剂、糖浆、悬浮剂、溶液，含有现有技术中常用的稀释剂如水。另一方面，本发明人提供上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物，或者上述药物组合物的用途，用于制备预防或治疗脑卒中、脑栓塞、脑卒中后遗症、脑卒中运动机能障碍、线粒体脑肌病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症等疾病的药物。另一方面，本发明人提供上述式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物，或者上述药物组合物的用途，用于预防或治疗脑卒中、脑栓塞、脑卒中后遗症、脑卒中运动机能障碍、线粒体脑肌病、和/或肌萎缩性脊髓侧索硬化症等疾病。任何特定病人的具体剂量取决于各种因素，包括所用的化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、服药时间、服药方式、分泌速度、药物组合和具体病情。剂量随接受治疗的疾病、症状、对象和用药途径而变化，用于成人治疗时，口服日剂量1-300mg或静脉注射1-100mg，分2-3次用药。例如，用于治疗缺血性脑卒中时，以适当量，如约10-200mg/次口服，或者静脉注射约5-100mg/次，每天分2或3次等剂量使用活性成分。本发明式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物能够有效地防治神经细胞损伤。作为一方面的式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物，具有优异的稳定性。作为另一方面的式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物，具有优异的水溶性。作为另一方面的式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物，细胞毒性小。作为另一方面的式(i)所示的取代吡唑类化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的溶剂化物，具有显著的神经保护作用，可有效地用于预防或治疗脑卒中、脑栓塞、脑卒中后遗症、脑卒中运动机能障碍、线粒体脑肌病、和/后肌萎缩性脊髓侧索硬化症。附图说明图1是各组als小鼠转棒实验坠落潜伏期-时间曲线。图2是各组als小鼠悬线实验坠落潜伏期-时间曲线。具体实施方式以下通过实施例对本发明进行示例性说明，但所提供的实施例不能被理解为是对本发明范围的限制。本发明代表性举例化合物列于表1。表1缩略语tbtu：o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯dmf：n,n-二甲基甲酰胺ed：依达拉奉dbu：1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯tmsotf：三氟甲磺酸三甲基硅酯sod：超氧化物歧化酶mcao：局灶性脑缺血再灌注损伤模型als：肌萎缩侧索硬化症实施例实施例1-12合成路线1：其中起始原料酰氯可以由相应的羧酸制备，路线如下：通用的合成方法1：第一步：在0℃下将无水乙醛与催化量的无水氯化锌溶解在干燥的二氯甲烷(10ml)中，然后缓慢加入化合物(c)，待滴加完成后，加热至50℃，反应2.5h。反应完成后，向反应液中加入100ml二氯甲烷，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(1×50ml)洗涤，将水相用二氯甲烷萃取(2×25ml)，合并有机相。有机相依次用蒸馏水、饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的粗产品用硅胶柱层析纯化，得到化合物(b)。第二步：将依达拉奉(3.6mmol)、碘化钾(0.4mmol)、碳酸钾(10mmol)溶解在干燥的dmf(10ml)中，45℃条件下搅拌10min。然后加入溶解在干燥dmf中的化合物(b)(3.3mmol)，45℃条件下搅拌1h。反应完成后，用油泵抽走大部分溶剂，然后向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和氯化铵水溶液洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相。将有机相依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的粗产品用半制备高压液相色谱分离并使用冷冻干燥机冻干得到目标产物化合物(ii)。酰氯制备方法：在0℃，将二氯亚砜慢慢滴加到化合物(d)中，80℃回流2h。反应完成后，用泵将反应液中剩余的二氯亚砜抽走，并将残留物溶解于适量干燥的二氯甲烷中，直接用于下一步。实施例3异丁酸-1-(3-甲基-1-苯基吡唑)氧乙酯的制备采用通用合成方法1制备，得到黄色油状液体，产率31.17％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.68–7.62(m,2h),7.41(t,j＝7.9hz,2h),7.29–7.23(m,1h),6.46(q,j＝5.3hz,1h),5.58(s,1h),2.53(dt,j＝14.0,7.0hz,1h),2.26(s,3h),1.59(d,j＝5.3hz,3h),1.14(dd,j＝9.4,7.0hz,6h).esi-ms(m/z):[m]+289.20实施例4特戊酸-1-(3-甲基-1-苯基吡唑)氧乙酯的制备采用通用合成方法1制备，得到白色固体，产率为34.28％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.65(d,j＝7.6hz,2h),7.41(t,j＝7.9hz,2h),7.33–7.19(m,1h),6.45(q,j＝5.3hz,1h),5.57(s,1h),2.26(s,3h),1.58(d,j＝5.3hz,3h),1.16(s,9h).esi-ms(m/z):[m]+303.30实施例5辛酸-1-(3-甲基-1-苯基吡唑)氧乙酯的制备采用通用合成方法1制备，得到黄色油状液体，产率为28.94％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.64(d,j＝7.7hz,2h),7.30–7.22(m,2h),7.25(d,j＝8.8hz,1h),6.47(q,j＝5.3hz,1h),5.59(s,1h),2.33–2.24(m,5h),1.64–1.54(m,5h),1.33–1.21(m,8h),0.92–0.84(m,3h).esi-ms(m/z):[m]+345.19实施例7苯甲酸-1-(3-甲基-1-苯基吡唑)氧乙酯的制备采用通用合成方法1制备，得到黄色油状液体，产率为33.26％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.02–7.98(m,2h),7.69–7.65(m,2h),7.62–7.56(m,1h),7.47–7.36(m,4h),7.29–7.24(m,1h),6.69(q,j＝5.3hz,1h),5.65(s,1h),2.23(s,3h),1.72(d,j＝5.3hz,3h).esi-ms(m/z):[m]+323.19实施例9苯丁酸-1-(3-甲基-1-苯基吡唑)氧乙酯的制备采用通用合成方法1制备，得到黄色油状液体，产率为29.87％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.67–7.61(m,2h),7.40(t,j＝7.9hz,2h),7.30–7.11(m,7h),6.48(q,j＝5.3hz,1h),5.60(s,1h),2.61(t,j＝7.5hz,2h),2.31(t,j＝7.4hz,2h),2.25(s,3h),1.95–1.88(m,2h),1.58(d,j＝5.3hz,3h).esi-ms(m/z):[m]+365.25实施例1、2、6、8、10、11、12采用通用合成方法1制备得到化合物1、2、6、8、10、11、12。实施例13-32合成路线2：通用合成方法2：第一步：在室温条件下将化合物(d)(5.68mmol)溶解在二氯甲烷(15ml)和水(17ml)的混合溶液中，剧烈搅拌的条件下缓慢加入碳酸氢钠(28.45mmol)及四丁基硫酸氢铵(0.56mmol)，然后在0℃下滴加氯甲基氯磺酸酯(8.5mmol)，室温搅拌24h。反应完成后，向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和氯化铵水溶液洗涤，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。将有机相依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化，得到化合物(e)。第二步：将依达拉奉(2.93mmol)、碳酸钾(8.84mmol)、碘化钾(3.55mmol)溶解在干燥的dmf(6.00ml)中，50℃条件下搅拌20min。将第一步得到的化合物(e)(2.94mmol)溶解在干燥的dmf(2.50ml)中，并加入到上述溶液中，50℃条件下搅拌3h。反应完成后，向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和氯化铵水溶液洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。将有机相依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化，得到目标产物化合物(iii)。实施例13(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基特戊酸酯的制备采用通用合成方法2制备，得到黄色油状液体，产率为54.64％。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.63(d,j＝7.7hz,2h),7.40(t,j＝7.9hz,2h),7.29–7.22(m,1h),5.74–5.68(m,3h),2.29(s,3h),1.20(s,9h).esi-ms(m/z):[m]+289.22实施例14(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基异丁酸酯的制备采用通用合成方法2制备，得到黄色油状液体，产率为53.37％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.63(d,j＝7.7hz,2h),7.40(t,j＝7.9hz,2h),7.29–7.22(m,1h),5.71(d,j＝1.9hz,3h),2.58(dt,j＝14.0,7.0hz,1h),2.29(s,3h),1.17(d,j＝7.0hz,6h).esi-ms(m/z):[m]+275.18实施例15(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基辛酸酯的制备采用通用合成方法2制备，得到黄色油状液体，产率为60.28％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.63(d,j＝7.9hz,2h),7.40(t,j＝7.9hz,2h),7.28–7.21(m,1h),5.70(s,3h),2.36–2.26(m,5h),1.66–1.55(m,2h),1.27(s,8h),0.87(t,j＝6.7hz,3h).esi-ms(m/z):[m]+331.24实施例16(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基苯丁酸酯的制备采用通用合成方法2制备，得到黄色油状液体1.20g，产率为59.74％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.62(d,j＝7.9hz,2h),7.39(t,j＝7.9hz,2h),7.30–7.11(m,6h),5.69(s,3h),2.62(t,j＝7.6hz,2h),2.34(t,j＝7.4hz,2h),2.28(s,3h),1.99–1.89(m,2h).esi-ms(m/z):[m]+351.13实施例17(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基烟酸酯的制备采用通用合成方法2制备，得到黄色固体0.62g，产率为43.28％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.22(s,1h),8.84(d,j＝4.3hz,1h),8.34(d,j＝8.0hz,1h),7.64–7.59(m,2h),7.51–7.45(m,1h),7.38(t,j＝7.9hz,2h),7.25–7.20(m,1h),5.98(s,2h),5.82(s,1h),2.31(s,3h).esi-ms(m/z):[m]+310.15实施例18(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基苯甲酸酯的制备采用通用合成方法2制备，得到黄色油状液体0.99g，产率为56.21％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.08–8.02(m,2h),7.68–7.57(m,3h),7.50–7.34(m,4h),7.25–7.20(m,1h),5.96(s,2h),5.81(s,1h),2.30(s,3h).esi-ms(m/z):[m]+309.17实施例19(3-甲基-1-苯基吡唑)氧甲基-(2-羟基)苯甲酸酯的制备(1)(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-苄氧基)苯甲酸酯的制备采用通用合成方法2制备，得到黄色固体0.37g，产率为48.93％。(2)(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-羟基)苯甲酸酯的制备(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-苄氧基)苯甲酸酯(0.37g)溶解在5ml甲醇中，加入1％催化量10％的钯/碳，氢气环境下室温搅拌1.5h。反应完成后，用硅藻土过滤反应液，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的油状液体用硅胶柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯:10/1)，得到黄色油状液体0.24g，产率为82.70％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.36(s,1h),7.79(dd,j＝8.0,1.5hz,1h),7.61(d,j＝7.6hz,2h),7.52–7.46(m,1h),7.38(t,j＝7.9hz,2h),7.27–7.206(m,1h),7.04–6.95(m,1h),6.95–6.86(m,1h),5.95(s,2h),5.80(s,1h),2.30(s,3h).esi-ms(m/z):[m]+325.01实施例20(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基乙酰水杨酸酯的制备采用通用合成方法2制备，得到淡黄色固体0.48g，产率为59.78％。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.99(d,j＝7.8hz,1h),7.65–7.57(m,3h),7.40(t,j＝7.9hz,2h),7.33(t,j＝7.6hz,1h),7.28–7.22(m,1h),7.13(d,j＝8.1hz,1h),5.90(s,2h),5.77(s,1h),2.30(s,6h).esi-ms(m/z):[m]+367.18实施例21(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-乙氧羰基氧基)苯甲酸酯的制备在室温条件下将实施例19产物(0.50g)溶解在干燥的二氯甲烷(5ml)中，加入干燥的三乙胺(0.47ml)，然后缓慢加入氯甲酸乙酯(0.35ml)，室温搅拌2.5h。反应完成后，向反应液中加入100ml二氯甲烷，然后用饱和氯化铵水溶液(1×50ml)洗涤，将水相用二氯甲烷萃取(2×25ml)，合并有机相。将有机相依次用饱和氯化铵水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的油状液体用硅胶柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯:3/1)，得到淡黄色油状液体0.54g，产率为88.14％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.00(dd,j＝7.9,j＝1.6hz,1h),7.66–7.58(m,3h),7.43–7.32(m,3h),7.27–7.21(m,2h),5.91(s,2h),5.80(s,1h),4.28(q,j＝7.1hz,2h),2.29(s,3h),1.36(t,j＝7.1hz,3h).esi-ms(m/z):[m]+397.18实施例22(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-异丁酰基氧基)苯甲酸的制备在室温条件下将实施例19产物(0.50g)溶解在干燥的二氯甲烷(5ml)中，加入干燥的三乙胺(0.39ml)，然后缓慢加入异丁酰氯(0.32ml)，室温搅拌2.5h。反应完成后，向反应液中加入100ml二氯甲烷，然后用饱和氯化铵水溶液洗涤，将水相用二氯甲烷萃取，合并有机相。将有机相依次用饱和氯化铵水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的油状液体用硅胶柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯:3/1)，得到淡黄色油状液体0.48g，产率为79.48％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.00–7.93(m,1h),7.65–7.56(m,3h),7.39(t,j＝7.8hz,2h),7.31(t,j＝7.6hz,1h),7.29–7.20(m,1h),7.10(d,j＝8.1hz,1h),5.89(s,2h),5.77(s,1h),2.84(dt,j＝14.0hz,j＝7.0hz,1h),2.29(s,3h),1.32(d,j＝7.0hz,6h).esi-ms(m/z):[m]+395.21实施例23(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-羟基-3-n,n-二甲基)苯甲酸酯的制备(1)2-羟基-3-氨基苯甲酸甲酯的制备将2-羟基-3-氨基苯甲酸(8.0g)加入无水甲醇(80ml)中，0℃条件下缓慢加入二氯亚砜(15ml)，60℃条件下反应24h。反应完成后，减压浓缩溶剂，用碳酸氢钠水溶液调节ph至中性，然后向反应液中加入100ml二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化，得固体产物7.4g，产率为85.1％。(2)2-羟基-3-n,n-二甲基苯甲酸甲酯的制备室温条件下将2-羟基-3氨基苯甲酸甲酯(2.0g)溶解于甲醇(30ml)中，加入甲醛溶液(6ml)，再加入乙酸(0.5ml)，在低温条件下缓慢加入氰基硼酸钠(3.72g)，室温条件下反应2h。反应完成后，用旋转蒸发仪浓缩溶剂，残余物用乙酸乙酯(150ml)溶解，水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得产物2.1g，产率为85.8％。(3)2-苄氧基-3-n,n-二甲基苯甲酸甲酯的制备将2-羟基-3-n,n-二甲基苯甲酸甲酯(2.0g)溶解于干燥的dmf(7.5ml)中，加入碳酸钾(4.25g)，在室温下加入溴化苄(1.83ml)，90℃条件下反应3h。反应完成后，用油泵将大量的溶剂抽走，然后向反应液中加入100ml乙酸乙酯，用饱和氯化铵水溶液(50ml)洗涤，水相用乙酸乙酯萃取(2×25ml)，合并有机相。将有机相依次用饱和氯化铵水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的粗产品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:15/1)，得到产物2.84g，产率为45.55％。(4)2-苄氧基-3-n,n-二甲基苯甲酸的制备将2-苄氧基-3-n,n-二甲基苯甲酸甲酯(2.0g)溶解于甲醇(12ml)中，加入1n氢氧化钠溶液(24ml)，80℃条件下反应2h，反应完成后，用旋转蒸发仪旋走剩余的甲醇溶剂，用盐酸调节ph至有固体析出。加入适量蒸馏水，用二氯甲烷萃取直到水相中不含目标产物，有机相减压浓缩至干，得到黄色固体1.67g，产率为87.72％。(5)氯甲基-(2-苄氧基-3-n,n-二甲基)苯甲酸酯的制备在室温条件下将2-苄氧基-3-n,n-二甲基苯甲酸(1.0g)溶解在二氯甲烷(5ml)及水(10ml)的混合溶液中，剧烈搅拌下缓慢加入碳酸氢钠(1.24g)及四丁基溴化铵(0.11g)，然后在0℃下滴加溶解在5ml干燥二氯甲烷中的氯磺酸氯甲酯(0.73ml)，室温搅拌24h。反应完成后，向反应液中加入100ml二氯甲烷，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)洗涤，将水相用二氯甲烷萃取(2×25ml)，合并有机相。将有机相依次用饱和碳酸氢钠水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的油状液体用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯：15/1)，得到淡黄色固体0.55g，产率为46.31％。(6)(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-苄氧基-3-n,n-二甲基)苯甲酸酯的制备将依达拉奉(0.24g)、碳酸钾(0.71g)、碘化钾(0.34g)溶解在干燥的dmf(6.00ml)中，50℃条件下搅拌20min。将氯甲基-(2-苄氧基-3-n,n-二甲基)苯甲酸酯(0.55g)溶解在干燥的dmf(2.50ml)中，并加入到上述溶液中，45℃条件下搅拌3h。反应完成后，向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和氯化铵水溶液(1×50ml)洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取(2×25ml)，合并有机相。将有机相依次用饱和氯化铵水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的油状液体用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:15/1)，得到产物0.22g，产率为27.87％。(7)(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-羟基-3-n,n-二甲基)苯甲酸酯的制备将(3-甲基-1-苯基吡唑)氧甲基-(2-苄氧基-3-n,n-二甲基)苯甲酸酯(0.22g)溶解在5ml乙酸乙酯中，加入催化量(1％)的钯/碳(10％)，氢气环境下室温搅拌1.5h。反应完成后，用硅藻土过滤反应液，减压浓缩，得到的粗产品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:5/1)，得到黄色固体0.17g，产率为79.26％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.83(s,1h),7.62(d,j＝7.7hz,2h),7.38(t,j＝7.9hz,2h),7.28–7.19(m,1h),7.16–7.04(m,2h),6.92(d,j＝9.0hz,1h),5.96(s,2h),5.81(s,1h),2.88(s,6h),2.29(s,3h).esi-ms(m/z):[m]+368.19实施例24(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-羟基-5-n,n-二甲基)苯甲酸酯的制备(1)2-羟基-5-氨基苯甲酸甲酯的制备将对氨基水杨酸(8.0g)加入无水甲醇(80ml)中，0℃条件下缓慢加入二氯亚砜(15ml)，60℃条件下反应24h。反应完成后，用旋转蒸发仪旋走剩余的甲醇，用碳酸氢钠水溶液将ph调节至中性，然后向反应液中加入100ml二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得固体产物7.50g，产率为85.91％。(2)2-羟基-5-n,n-二甲基苯甲酸甲酯的制备室温条件下将2-羟基-5氨基苯甲酸甲酯(2.0g)溶解于甲醇(30ml)中，向其中加入40％甲醛水溶液(6ml)，再加入乙酸(0.5ml)，在低温下缓慢加入氰基硼酸钠(3.72g)，室温反应2h。反应完成后，用旋转蒸发仪旋走剩余的甲醇溶剂，残余物用150ml乙酸乙酯溶解，蒸馏水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得产物2.0g，产率为85.47％。(3)2-苄氧基-5-n,n-二甲基苯甲酸甲酯的制备将2-羟基-5-n,n-二甲基苯甲酸甲酯(2.0g)溶解于干燥的dmf(7.5ml)中，加入碳酸钾(4.25g)，在室温下加入溴化苄(1.83ml)，90℃条件下反应3h。反应完成后，用油泵将大量的溶剂抽走，然后向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和氯化铵水溶液(1×50ml)洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取(2×25ml)，合并有机相。将有机相依次用饱和氯化铵水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的粗产品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:15/1)，得到产物2.84g，产率为45.55％。(4)2-苄氧基-5-n,n-二甲基苯甲酸的制备将2-苄氧基-5-n,n-二甲基苯甲酸甲酯(2.0g)溶解于甲醇(12ml)中，加入氢氧化钠溶液(24ml)，80℃条件下反应2h，反应完成后，用旋转蒸发仪旋走剩余的甲醇溶剂，用盐酸调节ph至有固体析出，加入适量蒸馏水，用二氯甲烷萃取直到水相中不含目标产物，有机相经减压浓缩得到黄色固体1.67g，产率为87.72％。(5)氯甲基-(2-苄氧基-5-n,n-二甲基)苯甲酸酯的制备在室温条件下2-苄氧基-5-n,n-二甲基苯甲酸(1.0g)溶解在二氯甲烷(5ml)及水(10ml)的混合溶液中，剧烈搅拌的条件下缓慢加入碳酸氢钠(1.24g)及四丁基溴化铵(0.11g)，然后在0℃下滴加溶解在5ml干燥的二氯甲烷中的氯磺酸氯甲酯(0.73ml)，室温搅拌24h。反应完成后，向反应液中加入100ml二氯甲烷，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(1×50ml)洗涤，将水相用二氯甲烷萃取(2×25ml)，合并有机相。将有机相依次用饱和碳酸氢钠水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的油状液体用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯：15/1)，得到淡黄色固体0.55g，产率为46.31％。(6)(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-苄氧基-5-n,n-二甲基)苯甲酸酯的制备将依达拉奉(0.24g)、碳酸钾(0.71g)、碘化钾(0.34g)溶解在干燥的dmf(6ml)中，50℃条件下搅拌20min。将氯甲基-(2-苄氧基-5-n,n-二甲基)苯甲酸酯(0.55g)溶解在干燥的dmf(2.5ml)中，并加入到上述溶液中，45℃条件下搅拌3h。反应完成后，向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和氯化铵水溶液(1×50ml)洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取(2×25ml)，合并有机相。将有机相依次用饱和氯化铵水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的油状液体用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:15/1)，得到产物0.22g，产率为27.87％。(7)(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-羟基-5-n,n-二甲基)苯甲酸酯的制备将(3-甲基-1-苯基吡唑)氧甲基-(2-苄氧基-5-n,n-二甲基)苯甲酸酯(0.22g)溶解在5ml乙酸乙酯中，加入催化量10％的钯/碳，氢气环境下室温搅拌1.5h。反应完成后，用硅藻土过滤反应液，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的粗产品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:5/1)，得到黄色固体0.17g，产率为79.26％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.83(s,1h),7.62(d,j＝7.7hz,2h),7.38(t,j＝7.9hz,2h),7.28–7.19(m,1h),7.16–7.04(m,2h),6.92(d,j＝9.0hz,1h),5.96(s,2h),5.81(s,1h),2.88(s,6h),2.29(s,3h).esi-ms(m/z):[m]+368.22实施例25(3-甲基-1-苯基吡唑-5-)氧甲基-(2-乙氧羰基氧基)苯甲酸的制备在室温条件下将实施例24产物(0.1g)溶解在干燥的二氯甲烷(5ml)中，加入干燥的三乙胺(0.1ml)，然后缓慢加入氯甲酸乙酯(0.08ml)，室温搅拌2.5h。反应完成后，向反应液中加入100ml二氯甲烷，然后用饱和氯化铵水溶液(1×50ml)洗涤，将水相用二氯甲烷萃取(2×25ml)，合并有机相。将有机相依次用饱和氯化铵水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的油状液体用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:3/1)，得到淡黄色油状液体0.11g，产率为85％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.62(d,j＝7.7hz,2h),7.38(t,j＝7.9hz,2h),7.28–7.19(m,1h),7.16–7.04(m,2h),6.92(d,j＝9.0hz,1h),5.96(s,2h),5.81(s,1h),4.21(m,1h),1.29(t,j＝7.8hz,3h),2.88(s,6h),2.29(s,3h).esi-ms(m/z):[m]+440.21实施例26-32采用通用合成路线2制备化合物26-32。实施例331-苯基-3-甲基-5-o-d-葡萄糖苷-吡唑的制备制备方法一：(1)1,2,3,4,6-o-五乙酰基-d-葡萄糖的制备在室温条件下将不含结晶水的葡萄糖(4.5g)及醋酸钾(4.9g)溶解在乙酸酐(25ml)中，然后在90℃下搅拌4h。反应完成后，降温至室温，用油泵将溶剂抽走。向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。将有机相依次用饱和碳酸氢钠水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析纯化，得产物6.3g，产率为65％。(2)2,3,4,6-o-四乙酰基-d-溴代葡萄糖的制备将1,2,3,4,6-o-五乙酰基-d-葡萄糖(2.5g)溶解在干燥的二氯甲烷(8ml)中，然后在适量醋酸溶液中加入2.5ml33％的溴化氢水溶液，并在0℃下将其加入上述二氯甲烷溶液中，在室温条件下搅拌反应2h。反应完成后，向反应液中加入100ml二氯甲烷，然后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，将水相用二氯甲烷萃取，合并有机相。将有机相依次用碳酸氢钠水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的粗产品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:3/1)，得产物1.7g，产率为64.6％。(3)3-甲基-1-苯基-5-o-(2,3,4,6-o-四乙酰基-d-葡萄糖苷)吡唑的制备将依达拉奉(0.35g)及碳酸铯(0.79g)溶解在干燥的dmf(10ml)中，在室温下搅拌20min。然后加入2,3,4,6-o-四乙酰基-d-溴代葡萄糖(1.0g)，室温搅拌24h。反应完成后，先用油泵抽走大量的溶剂，然后向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和氯化铵水溶液洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。将有机相依次用饱和氯化铵水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的粗产品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:4/1)，得产物0.68g，产率为55.4％。(4)1-苯基-3-甲基-5-o-d-葡萄糖苷-吡唑的制备将(3-甲基-1-苯基-5-o-(2,3,4,6-o-四乙酰基-d-葡萄糖苷)吡唑(0.2g)溶解在3ml甲醇中，加入碳酸钾(0.27g)，在室温条件下搅拌1h。反应完成后，得到的粗产品用半制备高压液相色谱分离并使用冷冻干燥机冻干得到白色固体产物0.11g，产率为79％。(通过该方法制备的化合物33用于以下试验例)。1hnmr(600mhz,d2o)δ7.60–7.40(m,5h),5.93(s,1h),5.10(m,1h),3.95–3.86(m,1h),3.79–3.70(m,1h),3.64–3.42(m,4h),2.23(s,3h)。esi-ms(m/z):[m]+337.15制备方法二：(1)2,3,4,6-o-四苄基-1-o-三氯亚氨基-d-葡糖糖的制备将2,3,4,6-o-四苄基-d-葡糖糖(12g，22.2mmol)和dbu(0.3ml，2.2mmol)溶于二氯甲烷(150ml),搅拌下滴加三氯乙腈(11ml，52.9mmol)。室温反应2h，tlc(石油醚/乙酸乙酯5:1)显示反应完全。减压浓缩除去溶剂，硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯10:1)得到无色油状物11g，直接用于下一步。(2)3-甲基-1-苯基-5-o-(2,3,4,6-o-四苄基-d-葡萄糖苷)吡唑的制备将依达拉奉(2.8g，16.1mmol)、2,3,4,6-o-四苄基-1-o-三氯亚氨基-d-葡糖糖(11g，16.1mmol)和4a分子筛加入二氯甲烷中，搅拌下滴加tmsotf(1.1mmol)，室温搅拌1h，tlc(石油醚/乙酸乙酯:4/1)显示反应完全。减压除去溶剂，硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯5:1)，得到淡黄色固体产品8.4g。(3)1-苯基-3-甲基-5-o-d-葡萄糖苷-吡唑的制备将3-甲基-1-苯基-5-o-(2,3,4,6-o-四苄基-d-葡萄糖苷)吡唑(5g，7.2mmol)溶于甲醇(100ml)，加入pd/c(10％)，40℃氢化反应6h，过滤，减压除去溶剂。硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯/甲醇1:1:0.1)得到白色固体1.3g。1hnmr(400mhz,h2o)δ7.545-7.419(m,5h),5.950(s,1h),5.599(m,1h),3.683-3.623(m,4h),3.483-3.348(m,2h),2.233(s,3h)。esi-ms(m/z):[m]+337.15实施例341-苯基-3-甲基-5-o-d-甘露糖苷-吡唑的制备(1)1,2,3,4,6-o-五乙酰基-d-甘露糖的制备在室温条件下将甘露糖(4.5g)及醋酸钾(4.9g)溶解在乙酸酐(25ml)中，然后在90℃下搅拌4h。反应完成后，恢复室温，用油泵将溶剂抽走。向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。将有机相依次用饱和碳酸氢钠水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，用乙醇进行重结晶，得产物6.3g，产率为63％。(2)2,3,4,6-o-四乙酰基-d-溴代甘露糖的制备将1,2,3,4,6-o-五乙酰基-d-甘露糖(1.84g)溶解在干燥的二氯甲烷(4.5ml)中，然后在适量醋酸溶液中加入1.5ml33％的溴化氢水溶液，并在0℃下将其加入上述二氯甲烷溶液中，在室温条件下搅拌反应3.5h。反应完成后，向反应液中加入100ml二氯甲烷，然后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，将水相用二氯甲烷萃取，合并有机相。将有机相依次用碳酸氢钠水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的粗产品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:5/1)，得产物1.19g，产率为61.31％。(3)3-甲基-1-苯基-5-o-(2,3,4,6-o-四乙酰基-d-甘露糖苷)吡唑的制备将依达拉奉(0.35g)及碳酸铯(0.79g)溶解在干燥的dmf(3.50ml)中，在室温下搅拌20min。然后加入2,3,4,6-o-四乙酰基-d-溴代甘露糖(1.0g)，室温搅拌24h。反应完成后，先用油泵抽走大量溶剂，然后向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和氯化铵水溶液洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。将有机相依次用饱和氯化铵水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的粗产品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:4/1)，得产物0.64g，产率为52.14％。(4)1-苯基-3-甲基-5-o-d-甘露糖苷-吡唑的制备将3-甲基-1-苯基-5-o-(2,3,4,6-o-四乙酰基-d-甘露糖苷)吡唑(0.2g)溶解在3ml甲醇中，加入碳酸钾(0.28g)，在室温条件下搅拌1h。反应完成后，得到的粗产品用半制备高压液相色谱分离并使用冷冻干燥机冻干得到白色固体产物0.13g，产率为77.28％。1hnmr(400mhz,d2o)δ7.58–7.50(m,4h),7.46–7.38(m,1h),5.88(s,1h),5.24(s,1h),4.13–4.06(m,1h),3.97–3.89(m,1h),3.78–3.72(m,1h),3.66–3.59(m,2h),3.53–3.44(m,1h),2.23(s,3h).esi-ms(m/z):[m]+337.14实施例351-苯基-3-甲基-5-o-d-半乳糖苷-吡唑的制备(1)1,2,3,4,6-o-五乙酰基-d-半乳糖的制备在室温条件下将半乳糖(9.0g)及醋酸钾(9.8g)溶解在乙酸酐(50ml)中，然后在90℃下搅拌4h。反应完成后，恢复室温，用油泵将溶剂抽走。向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。将有机相依次用饱和碳酸氢钠水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，用乙醇进行重结晶，得产物11.0g，产率为62％。(2)2,3,4,6-o-四乙酰基-d-溴代半乳糖的制备将1,2,3,4,6-o-五乙酰基-d-半乳糖(2.72g)溶解在干燥的二氯甲烷(9ml)中，然后在适量醋酸溶液中加入3ml33％的溴化氢水溶液，并在0℃下将其加入上述二氯甲烷溶液中，在室温条件下搅拌反应3.5h。反应完成后，向反应液中加入100ml二氯甲烷，然后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，将水相用二氯甲烷萃取，合并有机相。将有机相依次用碳酸氢钠水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的粗产品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:5/1)，得产物1.54g，产率为54.47％。(3)3-甲基-1-苯基-5-o-(2,3,4,6-o-四乙酰基-d-半乳糖苷)吡唑的制备将依达拉奉(0.35g)及碳酸铯(0.79g)溶解在干燥的dmf中，在室温下搅拌20min。然后加入2,3,4,6-o-四乙酰基-d-溴代半乳糖(1.0g)，室温搅拌24h。反应完成后，向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和氯化铵水溶液洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。将有机相依次用饱和氯化铵水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的粗产品用硅胶柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯:4/1)，得产物0.99g，产率为75.20％。(4)1-苯基-3-甲基-5-o-d-半乳糖苷-吡唑的制备将3-甲基-1-苯基-5-o-(2,3,4,6-o-四乙酰基-d-半乳糖苷)吡唑(0.2g)溶解在3ml甲醇中，加入碳酸钾(0.28g)，在室温条件下搅拌1h。反应完成后，得到的粗产品用半制备高压液相色谱分离并使用冷冻干燥机冻干得到白色固体产物0.11g，产率为79.36％。1hnmr(400mhz,d2o)δ7.51–7.41(m,4h),7.38–7.31(m,1h),5.84(s,1h),4.97(m,1h),3.89(s,1h),3.79–3.73(m,1h),3.70–3.60(m,4h),2.15(s,3h)。esi-ms(m/z):[m]+337.17实施例361-苯基-3-甲基-5-o-d-(2-脱氧)葡萄糖苷-吡唑的制备(1)1,3,4,6-o-四乙酰基-d-(2-脱氧)葡萄糖的制备将2-脱氧葡萄糖(1.0g，6.1mmol)分散在乙酸酐(5ml)中，在65℃条件下缓慢加入乙酸钾(0.99g，9.1mmol),70℃搅拌反应3.5h，tlc检测反应完毕。反应液冷却至50℃，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析纯化，得到白色固体1.2g，产率59％。(2)3,4,6-o-三乙酰基-d-溴代-(2-脱氧)葡萄糖的制备将1,3,4,6-o-四乙酰基-d-(2-脱氧)葡萄糖(2.5g)溶解在干燥的二氯甲烷(8ml)中，然后在适量醋酸溶液中加入2.9ml33％的溴化氢水溶液，并在0℃下将其加入上述二氯甲烷溶液中，在室温条件下搅拌反应2h。反应完成后，向反应液中加入100ml二氯甲烷，然后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，将水相用二氯甲烷萃取，合并有机相。将有机相依次用碳酸氢钠水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪将溶剂蒸干，得到的粗产品用硅胶柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得产物1.79g，产率为67.43％。(3)3-甲基-1-苯基-5-o-(3,4,6-o-三乙酰基-d-(2-脱氧)葡萄糖苷)吡唑的制备将依达拉奉(4.93g)及碳酸铯(1.34g)溶解在干燥的dmf中，在室温下搅拌20min。然后加入3,4,6-o-三乙酰基-d-溴代-(2-脱氧)葡萄糖(1.0g)，室温搅拌24h。反应完成后，先用油泵抽走大量溶剂，然后向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和氯化铵水溶液洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。将有机相依次用饱和氯化铵水溶液，蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的粗产品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:4/1)，得产物1.07g，产率为84.27％。(4)1-苯基-3-甲基-5-o-d-(2-脱氧)葡萄糖苷-吡唑的制备将3-甲基-1-苯基-5-o-(3,4,6-o-三乙酰基-d-(2-脱氧)葡萄糖苷)吡唑(1.0g)溶解在15ml甲醇中，加入碳酸钾(1.55g)，在室温条件下搅拌1.5h。反应完成后，得到的粗产品用半制备高压液相色谱分离并使用冷冻干燥机冻干得到白色固体产物0.68g，产率为94.12％。1hnmr(600mhz,dmso)δ7.63(d,j＝7.9hz,2h),7.45(t,j＝7.6hz,2h),7.27(t,j＝7.2hz,1h),5.83(s,1h),5.23(m,1h),3.69(d,j＝11.6hz,1h),3.56–3.47(m,2h),3.26–3.19(m,1h),3.17(s,1h),3.08(t,j＝8.9hz,1h),2.24–2.17(d,j＝8.0hz,1h),2.16(s,3h).esi-ms(m/z):[m]+321.20实施例371-苯基-3-甲基-5-o-d-(2-氨基-2-脱氧)葡萄糖苷-吡唑的制备(1)2-乙酰氨基-1,3,4,6-四乙酰氧基-2-脱氧葡萄糖的制备2-氨基-2-脱氧葡萄糖盐酸盐(2.2g,10.2mmol)混悬于吡啶(10ml)中，冷却至0℃，加入乙酸酐(9.4ml，99.6mmol)，室温下搅拌过夜，加入乙酸乙酯(100ml)，用5％稀盐酸，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸浓缩，残留物用二氯甲烷/乙醚重结晶得3.3g白色固体产物。(2)2-乙酰氨基-3,4,6-三乙酰氧基-2-脱氧葡萄糖溴的制备2-乙酰氨基-1,3,4,6-四乙酰氧基-2-脱氧葡萄糖(1.0g，2.6mmol)溶于二氯甲烷(1ml)中，冷却至0℃，缓慢加入溴化氢乙酸溶液(1.6ml，33％inaceticacid)，室温反应3h，加入二氯甲烷(50ml)，有机相用饱和碳酸氢钠洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，残留物直接用于下一步。(3)5-(2-乙酰氨基-3,4,6-三乙酰氧基-2-脱氧葡萄糖苷)-3-甲基-1-苯基-1h吡唑的制备依达拉奉(452mg，2.6mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入三乙胺(0.9ml，6.5mmol)，室温搅拌20min，冷却至0℃。将2-乙酰氨基-3,4,6-三乙酰氧基-2-脱氧葡萄糖溴溶于少量二氯甲烷，缓慢滴加入反应液中，室温搅拌继续反应3h，二氯甲烷(50ml)稀释，有机相用饱和氯化铵洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯:1/1)纯化，得白色固体粗产品，直接用于下一步。(6)1-苯基-3-甲基-5-o-d-(2-氨基-2-脱氧)葡萄糖苷-吡唑的制备上一步粗产物溶于甲醇(15ml)中，加入碳酸钾(538mg，3.9mmol)，室温搅拌反应2h，用醋酸调节ph至中性，半制备(meoh/h2o＝2/3)分离，得粉白色固体300mg。1hnmr(400mhz，d2o)，δ7.34-7.43(m，5h)；5.87(s,1h)；4.97(m,1h)；3.70-3.88(m,3h)；3.42-3.52(m,3h)；2.15(s,3h)；1.65(s,3h)esi-ms(m/z):[m]+378.19实施例381-苯基-3-甲基-5-o-d-吡喃木糖苷-吡唑的制备(1)1,2,3,4-o-乙酰基-d-吡喃木糖的制备将木糖(2g，13.3mmol)混悬于吡啶(10ml)中，0℃下缓慢滴入乙酸酐(10ml，106mmol)，搅拌反应过夜，加入乙酸乙酯(100ml)，用5％稀盐酸，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸浓缩得4g产物，直接用于下一步。(2)2,3,4-三乙酰氧基-d-吡喃木糖溴的制备将1,2,3,4-o-乙酰基-d-吡喃木糖(2.5g，7.86mmol)溶于二氯甲烷(2ml)中，冷却至0℃，缓慢滴入溴化氢乙酸溶液(33wt％，8.5ml)，室温反应30min，加入二氯甲烷(50ml)，有机相用饱和碳酸氢钠洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，残留物用乙醚和正己烷重结晶得产物2.43g。(3)5-(2,3,4-三乙酰氧基-d-吡喃木糖苷)-3-甲基-1-苯基-1h吡唑将依达拉奉(1.2g,7.1mmol)混悬于乙腈(15ml)中，冷却至0℃，缓慢加入氢化钠(284mg,7.1mmol,60％inoil)，室温搅拌20min，加入2,3,4-三乙酰氧基-α-d-吡喃木糖溴(2.4g，7.1mmol)，室温继续搅拌反应1h，加入乙酸乙酯和水分层，有机相用无水硫酸钠干燥，减压旋蒸浓缩得粗产物直接用于下一步。(4)1-苯基-3-甲基-5-o-d-吡喃木糖苷-吡唑的制备将上一步粗产物溶于甲醇中，加入碳酸钾(1.5g,10.7mmol)，室温搅拌反应1h，加醋酸调节ph至7左右，旋蒸除去溶剂，残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯:8/1)得800mg产物。1hmnr(400mhz，cd3od)，δ7.62-7.64(m,2h)；7.42-7.45(m,2h)；7.29-7.31(m,1h)；5.81(s,1h)；4.96-4.97(m,1h)；3.94(dd，j＝7.7hz，j＝3.4hz，1h)；3.53-3.57(m,1h)；3.35-3.42(m,3h)；2.23(s,3h)esi-ms(m/z):[m]+307.18实施例391-苯基-3-甲基-5-o-d-核糖苷-吡唑的制备(1)1-甲氧基-d-核糖的制备d-核糖(5g,33.3mmol)混悬于甲醇(80ml)中，置于冰浴中，缓慢滴加浓硫酸(0.5ml，9.4mmol)，升温至60℃反应过夜，用氨水调节ph至9，过滤，减压除去溶剂得5g粗产品直接用于下一步。(2)1-甲氧基-2,3,4-三苯甲酰基-d-核糖的制备1-甲氧基-d-核糖(2g，12.2mmol)溶于吡啶(30ml)中，冷却至0℃，缓慢滴加苯甲酰氯(8ml，69mmol)，室温搅拌反应过夜，加入乙酸乙酯(100ml)，用5％稀盐酸，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯:10/1)得4g油状产物。(3)2,3,4-三苯甲酰基-d-核糖溴的制备1-甲氧基-2,3,4-三苯甲酰基-d-核糖(2.4g，5mmol)溶于醋酸(8ml)中，缓慢加入溴化氢乙酸溶液(33wt％，8ml)，室温反应2h，加入二氯甲烷(50ml)，有机相用饱和碳酸氢钠洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，残留物直接用于下一步。(4)5-(2,3,4-三苯甲酰氧基-d-核糖苷)-3-甲基-1-苯基-1h吡唑的制备依达拉奉(870mg，5mmol)混悬于乙腈(10ml)中，加入碳酸铯(1.7g，5.25mmol)，室温搅拌20min，用少量乙腈溶解2,3,4-三苯甲酰基-d-核糖溴，缓慢滴加，反应液继续搅拌反应1h，加入乙酸乙酯和水分层，有机相用无水硫酸钠干燥，减压旋蒸浓缩，残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯:5/1)得1g白色固体产物。(5)1-苯基-3-甲基-5-o-d-核糖苷-吡唑的制备5-(2,3,4-三苯甲酰氧基-d-核糖苷)-3-甲基-1-苯基-1h吡唑(309mg，0.5mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入甲醇钠甲醇溶液(30％，0.25ml)，室温反应2小时，用醋酸调节ph至7左右，减压除去溶剂，残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯:1/2)得50mg白色固体产物。1hmnr(400mhz，cd3od)，δ7.53-7.57(m,2h)；7.41-7.47(m,2h)；7.28-7.33(m,1h)；5.80(s,1h)；5.49(s,1h)；4.03-4.16(m,3h)；3.68(dd，j＝12.0hz，j＝3.3hz,1h)；3.68(dd，j＝12.0hz，j＝5.8hz,1h)；2.23(s,3h)esi-ms(m/z):[m]+307.04实施例401-苯基-3-甲基-5-o-d-(2-脱氧)核糖苷-吡唑的制备(1)5-(3,5-二对氯苯甲酰氧基-2-d-脱氧核糖苷)-3-甲基-1-苯基-1h吡唑的制备将依达拉奉(500mg,2.9mmol)混悬于乙腈(15ml)中，冷却至0℃，缓慢加入氢化钠(115mg,2.9mmol,60％inoil)，室温搅拌20分钟，加入3,5-二对氯苯甲酰氧基-2-d-脱氧核糖氯(1.25g，2.9mmol)，室温继续搅拌反应3h，加入乙酸乙酯和水分层，有机相用无水硫酸钠干燥，减压旋蒸浓缩，残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯:5/1)得450mg粗产物。(2)1-苯基-3-甲基-5-o-d-(2-脱氧)核糖苷-吡唑的制备5-(3,5-二对氯苯甲酰氧基-2-d-脱氧核糖苷)-3-甲基-1-苯基-1h吡唑(450mg，0.8mmol)溶于甲醇和二氯甲烷(1:1，10ml)中，加入甲醇钠甲醇溶液(30％，0.2ml)，室温反应2h，用醋酸调节ph至7左右，减压除去溶剂，残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯:1/1.5)得100mg白色固体产物。1hmnr(400mhz，cd3od)，δ7.55(dd，j＝8.7hz，j＝1.2hz,2h)；7.44(t，j＝7.9hz,2h)；7.31(t，j＝7.4hz,1h)；5.82(m,1h)；5.80(s,1h)；4.35(q，j＝11.4hz，j＝6.6hz,1h)；3.96(q，j＝10.9hz，j＝5.3hz,1h)；3.55(dd，j＝11.7hz，j＝5.2hz,1h)；3.45(dd，j＝11.7hz，j＝6.3hz,1h)；2.43(dd，j＝13.8hz，j＝6.7hz,1h)；2.22-2.26(m,4h)esi-ms(m/z):[m]+291.17实施例41-52合成路线4：通用合成方法4：第一步：将式(h)化合物(5.62mmol)和koh(0.66mmol)溶于20mlh2o/二氧六环(1:3v/v)混合溶液，向上述混合溶液中加入甲醛(35％水溶液，8.43mmol)，反应液于70℃反应5min，然后降温至25℃搅拌过夜。用1nhcl调节ph至7，减压浓缩。残余物用丙酮溶解，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到式(g)化合物，直接用于下一步。第二步：式(g)化合物(3.0mmol)溶于10mlpocl3，加热至回流，小心分批加入pcl5(6.0mmol)，回流反应2.5h，tlc检测反应完成。降温至室温，反应液倒入200ml冰水中，1nnaoh溶液调ph至中性，ch2cl2萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化，得到式(f)化合物。第三步：将依达拉奉(3.6mmol)、碘化钾(0.4mmol)、碳酸钾(10mmol)溶解在干燥的dmf(10ml)中，45℃条件下搅拌10min。然后加入式(f)化合物(3.3mmol)的dmf溶液，45℃条件下搅拌1h。反应完成后，用油泵抽走大量溶剂，然后向反应液中加入100ml乙酸乙酯，然后用饱和氯化铵水溶液洗涤，将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相。将有机相依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的粗产品经硅胶柱层析纯化得到目标产物。实施例41n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基乙酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色油状物，收率43.9％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.03(s,1h),7.60–7.50(m,2h),7.45–7.40(m,2h),7.31–7.26(m,1h),6.08(s,1h),5.84(s,2h),2.32(s,3h),1.83(s,3h)。esi-ms(m/z):[m]+246.10实施例42n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基丙酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色油状物，收率41.2％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.01(s,1h),7.62–7.51(m,2h),7.43–7.41(m,2h),7.32–7.29(m,1h),6.07(s,1h),5.83(s,2h),2.32(s,3h),2.27(m,2h),1.02(t,3h)。esi-ms(m/z):[m]+260.17实施例43n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基异丁酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色油状物，收率40.8％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.03(s,1h),7.61–7.54(m,2h),7.45–7.40(m,2h),7.34–7.28(m,1h),6.05(s,1h),5.86(s,2h),2.53(dt,j＝14.0,7.0hz,1h),2.33(s,3h),1.22(d,j＝7.0hz,6h)。esi-ms(m/z):[m]+274.16实施例44n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基三甲基乙酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色油状物，收率43.2％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.02(s,1h),7.62–7.53(m,2h),7.47–7.41(m,2h),7.35–7.27(m,1h),6.03(s,1h),5.82(s,2h),2.33(s,3h),1.20(s,9h)。esi-ms(m/z):[m]+288.12实施例45n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基环丙基乙酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色油状物，收率38.1％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.03(s,1h),7.64–7.53(m,2h),7.45–7.41(m,2h),7.34–7.26(m,1h),6.01(s,1h),5.83(s,2h),2.33(s,3h),1.43(m,1h),0.98(dd,j＝4.42,2.98hz,2h),0.79(dd,j＝7.91,2.95hz,2h)。esi-ms(m/z):[m]+272.15实施例46n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基环戊基乙酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色油状物，收率39.8％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.02(s,1h),7.61–7.53(m,2h),7.44–7.40(m,2h),7.32–7.25(m,1h),6.02(s,1h),5.81(s,2h),2.34(s,3h),2.61(q,j＝8.0hz,1h),1.93-1.84(m,2h),1.82-1.68(m,4h),1.64-1.52(m,2h)。esi-ms(m/z):[m]+300.23实施例47n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基环已基乙酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色油状物，收率40.1％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.03(s,1h),7.62–7.53(m,2h),7.45–7.41(m,2h),7.33–7.24(m,1h),6.03(s,1h),5.82(s,2h),2.32(s,3h),2.13(m,1h),1.89(m,2h),1.78(m,2h),1.66(m,1h),1.42(m,2h),1.24(m,3h)。esi-ms(m/z):[m]+314.24实施例48n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基苯甲酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色油状物，收率45.8％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.02(s,1h),7.84–7.81(m,2h),7.65–7.59(m,2h),7.57–7.52(m,1h),7.49–7.43(m,4h),7.35–7.26(m,1h),6.05(s,1h),5.87(s,2h),2.30(s,3h)。esi-ms(m/z):[m]+308.16实施例49n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基苯乙酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色油状物，收率43.4％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.02(s,1h),7.65–7.59(m,2h),7.45–7.41(m,2h),7.35–7.20(m,6h),6.05(s,1h),5.87(s,2h),3.38(s,2h),2.30(s,3h)。esi-ms(m/z):[m]+322.20实施例50n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基苯丁酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色油状物，收率40.5％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.03(s,1h),7.62–7.53(m,2h),7.45–7.41(m,2h),7.33–7.24(m,3h),7.18(t,j＝7.6hz,3h),6.03(s,1h),5.82(s,2h),2.68(t,j＝7.5hz,2h),2.32(s,3h),2.22(t,j＝7.5hz,2h),2.04–1.93(m,2h)。esi-ms(m/z):[m]+350.11实施例51n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基辛酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色固体，收率38.3％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.02(s,1h),7.61–7.54(m,2h),7.46–7.41(m,2h),7.31–7.25(m,1h),6.02(s,1h),5.81(s,2h),2.38(t,j＝4.0hz,2h),2.31(s,3h),1.51–1.46(m,2h),1.34–1.25(m,8h),0.90(t,j＝4.0hz,3h)。esi-ms(m/z):[m]+330.18实施例52n-((3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)氧基)甲基硬脂酰胺的制备采用通用合成方法4制备，得到黄色固体，收率32.7％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.02(s,1h),7.61–7.54(m,2h),7.46–7.41(m,2h),7.31–7.25(m,1h),6.02(s,1h),5.81(s,2h),2.31(s,3h),2.22(t,j＝7.6hz,2h),1.65–1.63(m,2h),1.34–1.25(m,28h),0.87(t,j＝6.8hz,3h)。esi-ms(m/z):[m]+470.30试验例试验例1：稳定性研究分别在高湿(25℃±2℃,90％±5rh)、光照(25℃±2℃,60％±5rh,4500±500lx)、高温(60℃±2℃，60％±5rh)条件下考察部分实施例样品的稳定性，样品在特定条件的稳定性试验箱中放置7天，检测有关物质和含量，结果列于表2表2注：有关物质无显著变化，是指被测试样品的性状、含量与初始测试值相差在仪器测定误差范围内。结论：依达拉奉在光照条件下含量显著降低，与依达拉奉以酯键直接偶联连的专利cn107400089中公开的化合物分别在高湿(25℃±2℃,90％±5rh)、光照(25℃±2℃,60％±5rh,4500±500lx)及高温(60℃±2℃，60％±5rh)测试条件下产生分解。本发明中的上述化合物在上述药学稳定性标准测试条件下均优于依达拉奉和cn107400089中公开的化合物。试验例2：溶解度试验实验方法：用5ml的ep管取大约0.5ml蒸馏水，慢慢加入干燥的化合物至不能溶解(25℃超声震荡，仍出现浑浊)。将溶液过滤至另一个5ml干净且已称重的ep管中，再称重，计算出溶液的重量。将滤液冻干，称重并计算出所剩固体的溶质质量，计算溶剂的质量，进而计算化合物在水中的溶解度。表3化合物溶解度(mg/ml)3310.13412.33518.0364.2376.5383.8395.1403.0依达拉奉<1.0结论：本发明中的上述化合物在水中的溶解度远远大于已经上市药物依达拉奉，水溶性能够提高几倍至几十倍。试验例3细胞毒性考察1、试验方法将pc12细胞复苏后，用含10％的马血清和5％胎牛血清的rpmi-1640培养基，37℃、5％co2的环境下培养两周，隔一天换一次液。用培养基分别将化合物稀释为12.5、25、50、100、200、300μm的溶液(实施例33-40的化合物另增加400、500μm的溶液)备用。将pc12细胞以1.2×104个/孔的密度接种于96孔板内，37℃、5％co2培养箱中培养24h后，弃液，分别加入上述系列浓度的化合物溶液作为供试液，37℃、5％co2培养箱中继续孵育48h。孵育结束后，向细胞孔内加入20μl5mg/ml的mtt溶液，于37℃条件下孵育4h后，小心吸取上层培养基，加入150μldmso，置于酶标仪中，震荡5min，检测490nm波长处的吸光度值a供试液。以无细胞的空白孔加入dmso后测得的吸光度值a空白作为空白，以未加药处理的细胞孔同法操作测得的吸光度值a对照作为对照，计算各孔细胞存活率，细胞存活率(％)＝(a供试液-a空白)/(a对照-a空白)×100％。2、试验结果表4细胞毒性试验结果化合物ic50(μm)化合物ic50(μm)3>30032>3004>30033>3005>30034>3007>30035>3009>30036>30013251.537>50016233.938>50017>30039>50018>30040>50019>30042>30024272.347268.925>30049>30026>300结论：检测化合物在100μm浓度下，均未见明显毒性。试验例4：体外神经保护作用-i1、试验方法样品配制：所有被测样品用dmso配制成60mm母液，再用细胞培养基稀释200倍至终浓度300μm。之后用细胞培养基稀释成不同浓度梯度的样品溶液备用。测试分组：对照组：正常铺设细胞，与其他被测试细胞组同样只加培养基，培养24h后弃液，再只添加培养基继续孵育24h，不进行化合物和双氧水处理。其他操作与样品组相同。空白组：不铺设细胞，只添加培养基。其他操作与样品组相同。样品测试：将pc12细胞复苏后，用含10％的马血清和5％胎牛血清的rpmi-1640培养基，37℃、5％co2的环境下培养两周，隔一天换一次液。培养基分别将化合物稀释为0、12.5、25、50、100、200、300μm的溶液备用。将pc12细胞以8000个/孔的密度接种于96孔板内，37℃、5％co2培养箱中培养24h后，弃液，分别加入上述系列浓度的化合物溶液作为供试液，37℃、5％co2培养箱中继续孵育24h。孵育后，除空白组和对照组外，其余各孔(包括0μm给药组)加入培养基溶解的终浓度为200μm的h2o2(双氧水)溶液，37℃、5％co2培养箱中继续孵育24h。孵育结束后，向细胞孔内加入20μl5mg/ml的mtt溶液，于37℃条件下孵育4h后，小心吸取上层培养基，加入150μldmso，置于酶标仪中，震荡5min，检测490nm波长处的吸光度值a供试液。以无细胞的空白孔加入dmso后测得的吸光度值a空白作为空白，以未加化合物和双氧水处理的对照组同法操作测得的吸光度值a对照作为对照，计算各孔细胞存活率，细胞存活率(％)＝(a供试液-a空白)/(a对照-a空白)×100％。2、试验结果表5体外神经保护试验结果化合物ec50(μm)化合物ec50(μm)化合物ec50(μm)166.42182.13790.0398.022103.23955.0469.523123.74054.7656.82444.74155.1788.92559.34275.48100.42654.84358.19120.52885.94477.91055.73077.24575.31289.03191.24690.113110.03280.74753.61445.233111.948122.71567.234120.350100.91648.03587.95278.61794.93679.6ed170.81875.0结论：上述实验结果体现了本发明取代吡唑类化合物针对神经细胞在过氧化物，即氧自由基损伤条件下对神经细胞的有效保护作用。自由基对脑神经细胞、线粒体等的损伤是公认的脑卒中，脑栓塞，脑卒中后遗症，脑卒中运动机能障碍，线粒体脑肌病，以及肌萎缩性侧索硬化症的病理机制。选择和使用针对自由基损伤有效的药物对上述疾病患者实施临床治疗是目前主要的防治手段之一。试验例5：体内药效试验mcao模型1、试验方法(1)模型制备sd大鼠，禁食过夜，自由饮水。实验当天用异氟烷气体麻醉并维持。仰卧位固定，沿颈正中线切开皮肤，暴露右侧颈总动脉，小心分离颈总动脉分叉至颅底部血管周围的神经及筋膜，分离颈外动脉分支枕动脉、甲状腺上动脉、舌动脉和上颚上颌动脉，结扎并切断。从颈外动脉游离端插入直径0.260mm尼龙丝线，从颈外动脉远心端将尼龙线导入到颈内动脉，插至willis环大脑中动脉处，以有效阻断大脑中动脉，插入的尼龙丝线长度距颈总动脉分叉处18～20mm。然后将颈外动脉游离端连同腔内尼龙丝线一并结扎。逐层缝合皮下筋膜和皮肤，肌肉注射青霉素防止感染。假手术组动物仅分离出颈内动脉。mcao后2h，小心抽出颈内动脉血管腔内的尼龙丝线，使颈内动脉的血流再灌注，10min后进行神经缺陷评分，有明显神经功能缺陷者(>8分)为造型成功。(2)分组给药选取造模成功的动物，采用随机数字表法随机分组，每组10只。分别为模型对照组、受试药组，对照依达拉奉组，另设10只假手术组。采用尾静脉输注方式给药，给药时间均为30min。假手术组和模型对照组给予等体积生理盐水溶液。(3)对神经功能的影响分别于治疗前、治疗后24h，根据表6评分标准，采用盲法对动物进行神经功能缺陷评分，用于评价神经功能损害程度，总分为16分，分数越高，表明动物神经功能损害程度越严重。每组评分与模型对照组比较，减少的百分数体现化合物对神经功能缺陷的改善程度，即：神经功能改善(％)＝(模型对照组—受试药组或依达拉奉组)/模型对照组×100％。结果见表9。表6大鼠神经功能损害程度评分标准(4)脑梗死范围测定实验结束后取脑，沿冠状面切成2mm厚的切片，间隔取上述一半脑片放入2％ttc染液中，避光37℃温孵10min进行染色，采用数码相机成像系统将数字影象存储于计算机中，并用图象分析系统v4.0软件测量梗死区和全脑面积，计算脑梗死范围(梗死区面积占全脑面积百分比)。(5)统计学处理所有数据均表示为均数±标准差表示，单因素方差分析比较组间差异性，两组间比较用lsd法，p<0.05为差异有统计学意义。2、试验结果表7mcao实验结果结论：在大鼠大脑中动脉缺血再灌注引起的局灶性脑梗塞损伤模型上，本发明的上述化合物静脉输注、单次治疗给药，可具有不同的治疗效应，其效应表现在能不同程度地改善受损的神经功能，不同程度地减小脑梗死范围，减轻脑水肿程度。试验例6：体内药效试验ⅱ-als模型1、试验方法：采用b6sjl-tg(sod1*g93a)小鼠，单剂量腹腔给药，每日给药一次，连续给药4周，给药前及给药后每周称量两次小鼠体重，并采用疲劳转棒仪、悬线试验评价小鼠的运动功能，并在给药前和给药四周后的两个时间点，收集血浆，采用elisa法检测小鼠血浆sod水平。通过上述指标评价实施例化合物对als小鼠模型的药效作用，观察实施例化合物对小鼠生存期和运动功能的改善作用。(1)试验分组和给药方法动物送达spf动物房后适应一周以上。试验前5天开始，每天一次转棒练习，使小鼠习惯转棒运动。试验开始日按小鼠体重随机分组，每组8只。其中，溶剂组每天给药同体积溶剂(生理盐水)。(2)给药体积给药体积为10ml/kg。(3)给药方式和时间每日腹腔给药一次，连续给药4周。(4)指标评价指标评价时间期限：从试验开始至全部动物死亡为止。1)als发病时间：连续2天观察，在悬尾状态下出现肢体震颤和(或)肢体无力即判为发病。肢体无力的判断方法：试验鼠放置于直径为3.5cm的转棒仪上，转速调至15rpm，记录坠落的最长潜伏期，以420秒为分界值，不足420秒即视为肢体无力。2)转棒试验：试验鼠放置于直径为3.5cm的转棒仪上，转速调至12rpm，记录坠落的最长潜伏期，以180秒为分界值，超过180秒按180秒记录，不足180秒按实际时间记录。各组als小鼠转棒实验坠落潜伏期的比较结果见图1。3)悬线试验：将试验鼠置于传统用的鼠笼盖上，轻轻震动鼠笼盖促使试验鼠紧握鼠笼盖，随后迅速翻转鼠笼盖，记录后肢离开笼盖的最长时间，以90秒为分界值，超过90秒按90秒记录，不足90秒按实际时间记录。每次实验重复3次并取其最好成绩记录。各组als小鼠悬线实验坠落潜伏期的比较结果见图2。4)小鼠死亡时间：将鼠置于仰卧位，20秒内不能翻身为俯卧位即判断为死亡。5)血浆sod浓度：在给药前和给药四周后的两个时间点，用含有肝素的ep管采血，充分混合，1000g×10min离心，收集血浆，分装后放于-70℃冰箱。用elisa试剂盒检测血浆sod水平。2、试验结果表8als模型试验结果注：①“+”表示与溶剂组相比具有显著性差异，p<0.05。②实施例化合物组与ed组等摩尔给药。③*号表示与溶剂组相比具有统计学差异,p<0.05。结论：通过28天药物干预：(1)与溶剂组相比，各组als小鼠发病时间不同程度延后；(2)转棒试验和悬线试验结果显示，各给药组坠落潜伏期延长，且实施例24、33组的效果优于已上市药依达拉奉，具有显著药效；(3)各给药组als小鼠的存活时间明显延长；(4)血浆sod结果显示，在给药28天后，给药组小鼠的血浆sod水平明显高于溶剂组小鼠的血浆sod水平，给药化合物抑制了sod值下降。当前第1页1 2 3