一种用于贴壁细胞蛋白质提取实验中的冰盒的制作方法

技术领域

本实用新型涉及医疗器械领域，具体的说是一种用于贴壁细胞蛋白质提取实验中的冰盒及其应用。

背景技术：

在细胞实验中，提取细胞蛋白质后进行后续western blot、pull down、ChIP、质谱等蛋白质定性定量的实验具有重要意义，因此，细胞蛋白质的提取显得尤为重要。而在常温下进行细胞蛋白质的提取时，蛋白质往往会发生降解，导致实验失败。因此，我们常常在低温环境下进行贴壁细胞蛋白质的提取，避免其降解。目前，在贴壁细胞蛋白质提取的实验操作过程中，针对低温操作的一般方法是制作冰盒，通常是将装有碎冰的泡沫盒制成一个简易的冰盒，将铺有细胞的培养孔板（如6孔板，12孔板，3.5厘米培养皿，6厘米培养皿，10厘米培养皿）置于盛有碎冰的泡沫冰盒里进行蛋白质的刮取，将刮取的蛋白质转入EP管中放于泡沫盒，然后进行后续超声仪低温超声及4℃离心机离心等。但在提取的样本较多的情况下，提取蛋白质花费的时间很长，泡沫盒里的部分碎冰就会发生融化，造成冰层中掺杂大量水分，水分容易渗入细胞培养孔板、培养皿或EP管里造成实验结果偏差，同时浸没在冰层中的EP管外壁上的标识容易使被水泡去，且不利于碎冰的重复利用。另外，进行贴壁细胞蛋白质提取的实验操作涉及到孔板、培养皿、细胞刮、EP管等多种物品，既不利于实验的有效进行，也很占用实验空间，容易造成实验操作台较为凌乱。因此，设计一种用于贴壁细胞蛋白质提取实验过程中的冰盒装置具有重大意义。

技术实现要素：

本实用新型针对以上问题的提出，而研究设计一种用于贴壁细胞蛋白质提取实验中的冰盒。与现有技术相比，本实用新型提供的冰盒结构简单，使用方便，适用于多种贴壁细胞蛋白质提取实验过程中细胞蛋白质的刮取、存放等。

为实现上述目的，本实用新型采用的技术方案是：

一种用于贴壁细胞蛋白质提取实验中的冰盒，盒体为长方体，其特征在于该冰盒包括三大部分，其中，第一部分（1）与第二部分（2）上下排列；

所述的第一部分1的盒体上表面设置存储6孔板或12孔板及1.5ml的EP管和0.5ml的EP管，第一部分1中间设置长方形凹槽101，用于存储6孔板或12孔板培养孔板；第二部分2盒体下表面设置存储3.5厘米培养皿、6厘米培养皿、10厘米培养皿，第二部分2中间设置三个能存储3.5厘米培养皿201、一个能存储10厘米培养皿202及一个存储10厘米培养皿203的圆形凹槽；第三部分3为盒体左右两侧中间位置设置的存储细胞刮；第三部分3为多个中空圆形结构，为细胞刮放置孔，并从上至下顺序编号为A，B，C，D，E。

所述第一部分1中间长方形凹槽101上面设置1.5ml EP管承接孔102，并从左至右顺序编号为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17；左侧设置1.5ml EP管承接孔103，并从上至下编号为A，B，C，D，E，F，G；下面设置0.5ml EP管承接孔104，并从左至右顺序编号为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26；右侧设置0.5ml EP管承接孔103，并从上至下编号为A，B，C，D，E，F，G，K，L。

所述第二部分2中间设置三个能存储3.5厘米培养皿（201）、一个能存储10厘米培养皿（202）及一个存储10厘米培养皿（203）的圆形凹槽。

所述第三部分2中间圆形凹槽上面设置1.5ml EP管承接孔204，并从左至右顺序编号为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17；下面设置0.5ml EP管承接孔205，并从左至右顺序编号为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26。

所述第三部分3为多个中空圆形结构，为细胞刮放置孔，并从上至下顺序编号为A，B，C，D，E；所述整个盒体偏下部设有凹形手持部，便于对冰盒的转移。

本实用新型进一步公开了用于贴壁细胞蛋白质提取实验中的冰盒的使用方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）使用前将实验冰盒放在冰箱内，使得盒体内部的高分子聚冷材料充分蓄冷，需要使用时，将实验冰盒从冰箱中拿出，将干净的细胞刮放入盒体左右两侧的细胞刮放置孔中，将标记好分组的EP管放置于合适的EP管承接孔中，将放入裂解液的细胞培养孔板或培养皿置于孔板承接孔或相应的培养皿承接孔上，盒体内部的高分子聚冷材料通过盒体使得细胞培养孔板及培养皿的温度降低，放置一定时间待裂解液充分与细胞培养孔板及培养皿的细胞接触后，取干净细胞刮对细胞进行刮取，刮取完全后吸取全部液体入相应事先准备好的EP管中；

（2）从刮取蛋白后至煮蛋白间的所有过程除开进行4℃超声放入超声仪及4℃离心放入离心机，其他过程均需在冰盒中进行，防止蛋白质的降解，避免实验失败。

本实用新型中，冰盒材质为高密度聚乙烯，化学稳定性好，能耐除具有氧化性质的酸之外的大多数酸碱的侵蚀。而且，冰盒及冰盖在常温下不溶于一般溶剂，吸水性小，且不发生溶胀，电绝缘性能优良，可使得冰冻后偏差非常小。

本实用新型重点解决的是保证快速方便有效地全程低温条件下进行贴壁细胞蛋白质的提取，主要的创新在于各存储部分的设计应用，及盒体两侧细胞刮放置孔的设计。

本实用新型更进一步公开了用于贴壁细胞蛋白质提取实验中的冰盒在避免传统泡沫冰盒融化的水分渗入含有裂解液的细胞培养孔板、培养皿或EP管造成实验结果偏差、EP管标识被水泡去及实验台凌乱方面的应用。实验结果显示此方法能保证快速方便有效地全程低温条件下进行贴壁细胞蛋白质的提取，避免传统泡沫冰盒融化的水分渗入含有裂解液的细胞培养孔板、培养皿或EP管造成实验结果偏差、EP管标识被水泡去及实验台凌乱等问题。

本实用新型公开的用于贴壁细胞蛋白质提取实验中的冰盒的有益效果是：

本实用新型通过设计用于贴壁细胞蛋白质提取实验中的冰盒来用于多种贴壁细胞蛋白质提取实验过程中蛋白质刮取、存放等，避免传统泡沫冰盒融化的水分渗入含有裂解液的细胞培养孔板、培养皿或EP管造成实验结果偏差、EP管标识被水泡去及实验台凌乱等问题。本实用新型结构简单，操作便利，具有实际操作意义。

附图说明

图1为本实用新型的俯视结构示意图；

图2为本实用新型的底部结构示意图；

图3为本实用新型的正面整体结构示意图；

图4为本实用新型的底面整体结构示意图；

图5为本实用新型的侧视图；

其中，1-第一部分，2-第二部分，3-第三部分，4-防滑装置，101-第一部分1孔板承接孔，102-第一部分1上面1.5mlEP管承接孔，103-第一部分1左侧1.5mlEP管承接孔，104-第一部分1下面0.5mlEP管承接孔，105-第一部分1右侧0.5mlEP管承接孔；

201-第二部分23.5cm培养皿承接孔，202-第二部分210cm培养皿承接孔，203-第二部分26cm培养皿承接孔，204-第二部分2上面1.5mlEP管承接孔，204-第二部分2下面0.5mlEP管承接孔。

具体实施方式

为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。

实施例1

一种用于贴壁细胞蛋白质提取实验中的冰盒，盒体为长方体，其特征在于该冰盒包括三大部分，其中，第一部分（1）与第二部分（2）上下排列

所述的第一部分1的盒体上表面设置存储6孔板或12孔板及1.5ml的EP管和0.5ml的EP管，第一部分1中间设置长方形凹槽101，用于存储6孔板或12孔板培养孔板；第二部分2盒体下表面设置存储3.5厘米培养皿、6厘米培养皿、10厘米培养皿，第二部分2中间设置三个能存储3.5厘米培养皿201、一个能存储10厘米培养皿202及一个存储10厘米培养皿203的圆形凹槽；第三部分3为盒体左右两侧中间位置设置的存储细胞刮；第三部分3为多个中空圆形结构，为细胞刮放置孔，并从上至下顺序编号为A，B，C，D，E。

所述第一部分1中间长方形凹槽101上面设置1.5ml EP管承接孔102，并从左至右顺序编号为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17；左侧设置1.5ml EP管承接孔103，并从上至下编号为A，B，C，D，E，F，G；下面设置0.5ml EP管承接孔104，并从左至右顺序编号为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26；右侧设置0.5ml EP管承接孔103，并从上至下编号为A，B，C，D，E，F，G，K，L；

所述第二部分2中间圆形凹槽上面设置1.5ml EP管承接孔204，并从左至右顺序编号为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17；下面设置0.5ml EP管承接孔205，并从左至右顺序编号为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26；

所述第三部分3为多个中空圆形结构，为细胞刮放置孔，并从上至下顺序编号为A，B，C，D，E；所述整个盒体偏下部设有凹形手持部，便于对冰盒的转移。

实施例2

下面给出一个典型的胎鼠大脑皮层原代神经元蛋白质提取（一个10cm培养皿）的实验为实例，其操作过程如下：

（1）实验前一天将实验冰盒倒置放在-20℃冰箱内，使得盒体内的高分子聚冷材料充分蓄冷；

（2）进行实验前，将实验冰盒从冰箱中取出，将冰盒部分2置于上面，然后将一个干净的细胞刮放入盒体左侧的细胞刮放置孔中，取一个1.5mlEP管分别标记Ⅰ后放于1.5ml EP管承接孔204的第1号孔中；

（3）将预提取蛋白的10cm培养皿取出，PBS清洗神经元三遍，加入裂解液1ml入10cm培养皿中，随后将10cm培养皿放置入203的圆形凹槽上，放置10分钟；

（4）取细胞刮刮取培养皿上的细胞，直至所有细胞彻底掉下（由于神经元长有大量紧密缠绕的突触，不易刮取，宜用力刮取并延长刮取时间）；

（5）随后，将培养皿中的含蛋白的裂解液转移入EP管中，随后进行4℃超声，超声完毕后将EP管放放于1.5ml EP管承接孔204的第1号孔中，半小时后进行4℃离心，将EP管中上清液转移入新一个放于第3号孔中的1.5mlEP管里；

（6）吸取EP管里少量蛋白进行浓度测定，剩余提取的蛋白放于冰盒中，待浓度测定结束后，将EP管里提取的蛋白进行煮样，99℃5分钟，随后，对煮后的蛋白分装后置于-20℃冰箱内；

（7）取出10cm培养皿、细胞刮及EP管后，将冰盒倒置放在-20℃冰箱内，便于下次实验使用。

实施例3

对比试验

本实用新型提供的冰盒结构简单，使用方便，适用于包括293T、A549、分化后神经干细胞、原代神经元等多种贴壁细胞蛋白质提取实验过程中蛋白质刮取、存放等。在提取293T、A549、分化后神经干细胞、原代神经元等多种贴壁细胞蛋白质的过程中，传统泡沫冰盒融化的水分容易渗入含有裂解液的细胞培养孔板、培养皿或EP管造成实验结果偏差，尤其在样本较多的情况下，本实用新型设计的培养皿冰盒则能完全避免此问题，使得由于此原因导致的实验结果偏差率为0。传统方法直接将装有裂解液的EP管插入泡沫盒里，但在样本较多碎冰融化，EP管浸没在冰层中，其外壁上的标识容易使被水泡去，导致实验结果出错，本实用新型设计的培养皿冰盒则能完全避免此问题，使得由于此原因导致的实验结果误差率为0。另外，进行细胞蛋白质提取的实验操作涉及到孔板、培养皿、细胞刮、EP管等多种物品，既不利于实验的有效进行，也很占用实验空间，容易造成实验操作台较为凌乱，而本实用新型设计的EP管存储部分及细胞刮放置孔分别用于存放细胞培养孔板、培养皿、EP管及细胞刮，能解决实验台凌乱的问题。本实用新型结构简单，操作便利，具有实际操作意义。

最后应说明的是：以上所述仅为本实用新型的优选实施例而已，并不用于限制本实用新型，尽管参照前述实施例对本实用新型进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。