用于检测高致病性H7N9禽流感病毒的荧光RT-PCR引物、探针及方法与流程

文档序号:19419333发布日期:2019-12-14 01:15阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于检测高致病性h7n9禽流感病毒的荧光rt-pcr引物,其核苷酸序列如下所示:

75f:5’-gaatgttcctgaggttccaaaga-3’(seqidno:1);

75r:5’-ttttcaatgaaacccgctatagc-3’(seqidno:2)。

2.一种用于检测高致病性h7n9禽流感病毒的荧光rt-pcr探针,其核苷酸序列如下所示:

75p:5’-aaaacggactgcgagaggcctatttgg-3’(seqidno:3)。

3.根据权利要求2所述的荧光rt-pcr探针,其特征在于:所述探针序列5’端标记的荧光基团为fam、hex、vic、cy5、tet中一种,探针序列3’端标记的淬灭基团为eclipse、tamra、mgb、bhq中一种。

4.一种用于检测高致病性h7n9禽流感病毒的荧光rt-pcr试剂盒,其特征在于:含有权利要求1所述的引物。

5.根据权利要求4所述的荧光rt-pcr试剂盒,其特征在于:含有权利要求2或3所述的探针。

6.一种检测高致病性h7n9禽流感病毒的荧光rt-pcr方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)从样品中提取病毒核酸;

2)以提取的核酸为模板,用权利要求1所述的引物对75f、75r,及权利要求2或3所述探针75p进行荧光pcr扩增反应,获得扩增产物;

3)对扩增产物进行分析,确定样品中是否含有高致病性h7n9禽流感病毒。

7.根据权利要求6所述的荧光rt-pcr方法,其特征在于:步骤2)中的pcr扩增反应体系为:

8.根据权利要求6或7所述的荧光rt-pcr方法,其特征在于:步骤2)中pcr扩增反应程序为:

9.根据权利要求6所述的荧光rt-pcr方法,其特征在于:步骤3)中对扩增产物分析的方法为:ct值≤35.0的样品判为阳性,表示样品中存在高致病性h7n9禽流感病毒;无ct值且无扩增曲线的样品判为阴性,表示样品中无高致病性h7n9禽流感病毒;ct值在35~40之间的样品须重做,重做结果无ct值者为阴性,否则为阳性。


技术总结
本发明中公开了一种用于检测高致病性H7N9禽流感病毒(HP‑H7N9)的荧光RT‑PCR引物、探针及方法。本发明建立的HP‑H7N9荧光RT‑PCR检测方法,可特异性的检测HP‑H7N9,而与低致病性H7N9流感病毒(LP‑H7N9)、H7N3流感病毒、H3N2流感病毒、H5N1禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒(Re‑6疫苗株)、H5亚型禽流感病毒(Re‑8疫苗株)、H9亚型禽流感病毒、甲型H1N1流感病毒(H1N1)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)等不发生交叉反应;可检测到最低浓度为7.09copies/μL的阳性质粒;重复性试验的变异系数(CV)值在1.97%~4.89%之间,表明该方法具有很好的重复性。本发明建立的HP‑H7N9荧光RT‑PCR方法具有特异、敏感、快速、重复性好的特点,是HP‑H7N9快速检测的良好方法。

技术研发人员:陈轩;黄海超;杨素;沙才华;赵福振;邵建宏
受保护的技术使用者:拱北海关技术中心
技术研发日:2019.09.02
技术公布日:2019.12.13
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