1.一种用于检测高致病性h7n9禽流感病毒的荧光rt-pcr引物,其核苷酸序列如下所示:
75f:5’-gaatgttcctgaggttccaaaga-3’(seqidno:1);
75r:5’-ttttcaatgaaacccgctatagc-3’(seqidno:2)。
2.一种用于检测高致病性h7n9禽流感病毒的荧光rt-pcr探针,其核苷酸序列如下所示:
75p:5’-aaaacggactgcgagaggcctatttgg-3’(seqidno:3)。
3.根据权利要求2所述的荧光rt-pcr探针,其特征在于:所述探针序列5’端标记的荧光基团为fam、hex、vic、cy5、tet中一种,探针序列3’端标记的淬灭基团为eclipse、tamra、mgb、bhq中一种。
4.一种用于检测高致病性h7n9禽流感病毒的荧光rt-pcr试剂盒,其特征在于:含有权利要求1所述的引物。
5.根据权利要求4所述的荧光rt-pcr试剂盒,其特征在于:含有权利要求2或3所述的探针。
6.一种检测高致病性h7n9禽流感病毒的荧光rt-pcr方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)从样品中提取病毒核酸;
2)以提取的核酸为模板,用权利要求1所述的引物对75f、75r,及权利要求2或3所述探针75p进行荧光pcr扩增反应,获得扩增产物;
3)对扩增产物进行分析,确定样品中是否含有高致病性h7n9禽流感病毒。
7.根据权利要求6所述的荧光rt-pcr方法,其特征在于:步骤2)中的pcr扩增反应体系为:
8.根据权利要求6或7所述的荧光rt-pcr方法,其特征在于:步骤2)中pcr扩增反应程序为:
9.根据权利要求6所述的荧光rt-pcr方法,其特征在于:步骤3)中对扩增产物分析的方法为:ct值≤35.0的样品判为阳性,表示样品中存在高致病性h7n9禽流感病毒;无ct值且无扩增曲线的样品判为阴性,表示样品中无高致病性h7n9禽流感病毒;ct值在35~40之间的样品须重做,重做结果无ct值者为阴性,否则为阳性。