一种用于检测肺炎克雷伯杆菌的引物组合、试剂盒和PSR方法与流程

文档序号:19568815发布日期:2019-12-31 18:41阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于检测肺炎克雷伯杆菌的引物组合,其特征在于,具体引物序列如下:

rcsa-ft1:5’-cgacgtacagtgtttctgcagtaaaaaacaggaaatcgttgagg-3’;seqidno.1;

rcsa-bt1:5’-cgacgtacagtgtttctgcaggcgaataatgccattactttc-3’;seqidno.2;

rcsa-if:5’-atccgcagcactgttga-3’;seqidno.9;

rcsa-ib:5’-gaagactgtttcgtgcatgatga-3’;seqidno.10。

2.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒。

3.一种用于检测肺炎克雷伯杆菌的psr方法,其特征在于,包括如下步骤:用权利要求1所述的引物组合对待测样本进行psr反应,检测psr反应产物,确定待测样本是否为肺炎克雷伯杆菌。

4.根据权利要求3所述的一种用于检测肺炎克雷伯杆菌的psr方法,其特征在于,所述psr反应体系如下:12.5μl的2×rm,2.0μldna模板和1.0μlbstdna聚合酶,引物的rcsa-ft1、rcsa-bt1各1.6μm,rcsa-if、rcsa-ib各0.8μm,并用水补齐25μl。

5.根据权利要求3所述的一种用于检测肺炎克雷伯杆菌的psr方法,其特征在于,所述psr反应条件为65℃,60min。

6.根据权利要求3所述的一种用于检测肺炎克雷伯杆菌的psr方法,其特征在于,所述确定待测样本是否为肺炎克雷伯杆菌的方法为a、b、c或d:

a、钙黄绿素显色法

在psr反应体系中加入1.0μl钙黄绿素指示剂;恒温扩增反应结束后,若待检样品反应管液体呈黄绿色,表示检出肺炎克雷伯杆菌,该样品检测结果为阳性;若待检样品反应管液体呈橙红色,表示未检出肺炎克雷伯杆菌,检测结果为阴性;

b、ph指示剂显色法

在psr反应体系中加入1.0μlph指示剂;恒温扩增反应结束后,若待检样品反应管液体呈黄色,表示待测样本中存在肺炎克雷伯杆菌;若待检样品反应管液体呈红色,表示待测样本中不存在肺炎克雷伯杆菌;如果阴性对照管变为黄色,或者阳性对照管50分钟内颜色无变化,则本次检测结果无效,应重新检测;

c、浊度法

浊度仪检测所述待测样本psr反应产物浊度变化曲线,若所述待测样本psr反应产物浊度变化曲线呈s型反应曲线,则待测样本中存在肺炎克雷伯杆菌,若所述待测样本psr反应产物浊度变化曲线未形成明显s型反应曲线,则所述待测样本中不存在肺炎克雷伯杆菌;

d、荧光法

阳性反应的表现为:在反应阶段出现s型扩增曲线,且溶解曲线为单一峰;阴性反应的表现为:在反应阶段无扩增曲线,且溶解曲线无峰出现;结果判定标准:在阳性对照发生阳性反应且阴性对照发生阴性反应的前提下,待检样本在反应阶段出现s型扩增曲线,且溶解曲线为单一峰,并与阳性对照单一峰位置接近,此时待检样本判断为阳性,否则为阴性;如果阳性待检样本发生了阴性反应,或者阴性待检样本发生了阳性反应,应重新检测。

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