本发明属于药物化学领域，具体涉及一类hdac/alk双靶点抑制剂及其制备方法与应用。
技术背景
研究显示，多种肿瘤的发生发展与组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases，hdacs)的异常表达和激活密切相关。一般情况下，组蛋白乙酰化水平与基因转录活性呈现正相关关系，而肿瘤细胞的全基因组蛋白乙酰化水平普遍降低。组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过增加细胞内组蛋白的乙酰化程度，可以促进抑癌基因的转录表达，诱导肿瘤细胞分化或死亡，达到抗肿瘤作用，目前已有多种组蛋白去乙酰化酶抑制剂上市。
间变性淋巴瘤激酶(alk)是一种受体型蛋白质酪氨酸磷酸激酶，同样与多种肿瘤发生发展密切相关。其中，eml4-alk融合(也称为alk阳性突变)在非小细胞型肺癌(nsclc)中的发生率约为3％～7％，并且在不伴有egfr突变或kras突变的腺癌患者中的表达率约为42.8％。因此，alk在多种癌症中的突变和异常的活性，已经成为一个治疗alk阳性癌症的药物靶点，目前已有多种alk抑制剂如克唑替尼，色瑞替尼上市。
最近，多项研究结果表明hdac和alk抑制剂合用可协同增强alk抑制剂对非小细胞肺癌、神经母细胞癌等肿瘤的抑制活性，同时提高其对耐药细胞的敏感性，逆转其耐药。然而，联合用药中不同药物之间潜在的相互作用以及药代动力学性质差异等问题，可能会降低疗效、增强毒性。而开发多靶点药物则在有望解决肿瘤对单靶点药物的不敏感和耐药性问题的同时，避免联合用药带来的药物间相互作用等问题。目前尚未有hdac/alk双靶点抑制剂的报道，因此，研究开发新型的hdac/alk双靶点抑制剂，具有重要的应用前景和意义。
技术实现要素：
本发明的一个目的在于提供一类能够同时抑制hdac靶点和alk靶点的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其通式如式i所示：
本发明的第二个目的在于提供制备本发明的通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药的方法。
本发明的第三个目的在于提供包含本发明的通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药和药学可接受的载体的组合物，以及包含本发明的通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药和另一种或多种抗肿瘤组合物。
本发明的第四个目的在于提供本发明的通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
第一方面，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，
其中，
r1选自烷基、环烷基、杂环烷基、烷氧基和卤代烷基；
r2选自卤素、烷基、烷氧基、烷氧基烷基、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、环烷基、杂环烷基；
m选自0、1、2、3和4；
r3a和r3b独立地选自氢、卤素、烷基、烷氧基、烷氧基烷基、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、环烷基、杂环烷基；
r4选自卤素、烷基、烷氧基、烷氧基烷基、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、环烷基、杂环烷基；
n选自0、1、2、3和4；
l选自键和亚烷基；
k选自键、亚烷基、亚烯基、-nh-c(o)-(ch2)p-、-c(o)-nh-(ch2)p-、芳基和杂芳基，所述的亚烷基、亚烯基、-nh-c(o)-(ch2)p-、-c(o)-nh-(ch2)p-、芳基和杂芳基可以被一个或多个烷基、卤素、烷氧基、羟基、氨基、羧基、氰基和硝基取代，所述的p选自1-8的整数；
r5和r6独立地选自氢、羟基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基，所述的芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基可以被一个或多个氨基、羟基、羧基、烷基、烷氧基、烷氧烷基、卤素、卤代烷基、烷氨基、烷酰胺基、酰胺基、酯基、酰基、烷酰基、烷氨酰基、芳基、杂芳基取代。
在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中r1选自c1-6烷基、c3-8环烷基、c3-8杂环烷基和卤代c1-6烷基；进一步优选地，r1选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、三氯甲基、三氟甲基；更进一步优选地，r1为异丙基。
在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中r2选自卤素、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、c3-8环烷基、c3-8杂环烷基，m选自0、1、2、3和4；进一步优选地，r2选自卤素、c1-3烷基、c1-3烷氧基、c1-3烷氧基c1-3烷基、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基，m选自0、1、2和3；更进一步优选地，r2为卤素，m选自0和1；更进一步优选地，m为0。
在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中r3a和r3b独立地选自氢、卤素、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、c3-8环烷基、c3-8杂环烷基；进一步优选地，r3a和r3b独立地选自氢、卤素、c1-3烷基、c1-3烷氧基、c1-3烷氧基c1-3烷基、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、c3-8环烷基、c3-8杂环烷基；更进一步优选地，r3a和r3b独立地选自氢、氟、氯、溴和碘。
在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中r4选自卤素、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、c3-8环烷基、c3-8杂环烷基，n选自0和1；进一步优选地，r4选自卤素、c1-3烷基、c1-3烷氧基、c1-3烷氧基c1-3烷基、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、c3-8环烷基、c3-8杂环烷基，n选自0和1，更进一步优选地，n为0。
在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中l选自键、亚甲基、亚乙基、亚丙基、异亚丙基；进一步优选地，l选自键和亚甲基。
在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中k选自键、亚甲基、亚乙基、亚丙基、异亚丙基、亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、-nh-c(o)-(ch2)p-、-c(o)-nh-(ch2)p-、苯基和杂芳基，所述的p选自1-6的整数，所述的亚甲基、亚乙基、亚丙基、异亚丙基、亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、-nh-c(o)-(ch2)p-、-c(o)-nh-(ch2)p-、苯基和杂芳基可以被一个或多个c1-6烷基、卤素、c1-6烷氧基、羟基、氨基、羧基、氰基和硝基取代；进一步优选地，k选自键、亚甲基、亚乙基、亚乙烯基、-nh-c(o)-(ch2)p-、-c(o)-nh-(ch2)p-，所述的p选自1-6的整数，所述的亚甲基、亚乙基、亚乙烯基、-nh-c(o)-(ch2)p-、-c(o)-nh-(ch2)p-可以被一个或多个c1-6烷基、卤素、c1-6烷氧基、羟基、氨基、羧基、氰基和硝基取代；更进一步优选地，k选自键、亚乙烯基、-nh-c(o)-(ch2)5-、-nh-c(o)-(ch2)6-、-c(o)-nh-(ch2)5-、-c(o)-nh-(ch2)6-。
在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中r5和r6独立地选自氢、羟基、苯、萘、氮杂芳基、硫杂芳基、氧杂芳基、氮硫杂芳基、氧硫杂芳基、氮氧杂芳基、c3-8环烷基、杂c3-8环烷基，所述的苯、萘、氮杂芳基、硫杂芳基、氧杂芳基、氮硫杂芳基、氧硫杂芳基、氮氧杂芳基、c3-8环烷基、杂c3-8环烷基可以被一个或多个氨基、羟基、羧基、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧c1-6烷基、卤素、卤代c1-6烷基、c1-6烷氨基、c1-6烷酰胺基、酰胺基、酯基、酰基、c1-6烷酰基、c1-6烷氨酰基、芳基、杂芳基取代；进一步优选地，r5为氢，r6选自羟基、苯、萘、氮杂芳基、硫杂芳基、氧杂芳基、氮硫杂芳基、氧硫杂芳基、氮氧杂芳基，所述的苯、萘、氮杂芳基、硫杂芳基、氧杂芳基、氮硫杂芳基、氧硫杂芳基、氮氧杂芳基可以被一个或多个氨基、羟基、羧基、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧c1-6烷基、卤素、卤代c1-6烷基、c1-6烷氨基、c1-6烷酰胺基、酰胺基、酯基、酰基、c1-6烷酰基、c1-6烷氨酰基、芳基、杂芳基取代；更进一步优选地，r5为氢，r6选自羟基和苯，所述的苯可以被一个或多个氨基、羟基、羧基、c1-3烷基、c1-3烷氧基、c1-3烷氧c1-3烷基、卤素、卤代c1-3烷基、c1-3烷氨基、c1-3烷酰胺基、酰胺基、酯基、酰基、c1-3烷酰基、c1-3烷氨酰基、芳基、杂芳基取代。
在一些具体的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中通式i的化合物结构如通式ia所示：
r1为异丙基；
r3a选自氟、氯、溴和碘；
r3b为氢；
l选自键和亚甲基；
k选自键、亚乙烯基、-nh-c(o)-(ch2)5-、-nh-c(o)-(ch2)6-、-c(o)-nh-(ch2)5-、-c(o)-nh-(ch2)6-；
r5为氢；
r6选自羟基和苯，所述的苯可以被一个或多个氨基、羟基、羧基、c1-3烷基、c1-3烷氧基、c1-3烷氧c1-3烷基、卤素、卤代c1-3烷基、c1-3烷氨基、c1-3烷酰胺基、酰胺基、酯基、酰基、c1-3烷酰基、c1-3烷氨酰基、芳基、杂芳基取代。
本发明提供了以下具体化合物：
第二方面，本发明提供本发明的通式i的化合物的制备方法。通式i的化合物的制备方法包括如下步骤：
步骤1：式a的化合物与式b的化合物反应生成式c的化合物；
步骤2：式c的化合物与取代羟胺反应生成式i的化合物；
其中，r1、r2、m、r3a、r3b、r4、n、l、k、r5和r6具有同时i中含义。
第三方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药。
在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明通式i或通式ia的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药，还包含选自下列组成的一种或多种化合物：idh1抑制剂、idh2抑制剂、酪氨酸蛋白酶抑制剂、egfr抑制剂、vegfr抑制剂、bcr-abl抑制剂、c-kit抑制剂、c-met抑制剂、raf抑制剂、mek抑制剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂、vegf抗体、egf抗体、hiv蛋白激酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂等等。
可以将本发明通式i或通式ia的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。
第四方面，本发明提供本发明通式i或通式ia的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药或本发明的药物组合物治疗和/或预防肿瘤的方法和在制备治疗和/或预防肿瘤药物中的应用，包括向肿瘤易发人群或肿瘤患者施用本发明的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药或者包含本发明的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药的药物组合物，以有效降低肿瘤发生率、延长肿瘤患者生命。
在一些实施方案中，本发明提供本发明的通式i或通式ia的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药或本发明的药物组合物治疗具有抗药性的肿瘤的方法，包括向具有抗药性的肿瘤患者施用治疗有效量的本发明通式i或通式ia的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药或者包含本发明的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药的药物组合物。在另一些实施方案中，本发明提供本发明的通式i或通式ia的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药或本发明的药物组合物在制备治疗具有抗药性的肿瘤的药物中的应用。所述肿瘤包括但不限于实体瘤，优选为肺癌、头颈部肿瘤、结直肠癌、膀胱癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、口腔癌、肝癌、卵巢癌；进一步优选地，所述肿瘤是色瑞替尼非小细胞肺癌。
术语说明
本发明的“烷基”是指直链或支链的饱和烃基。合适的烷基为取代或未取代的c1-10烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、环丁基、正戊基、异戊基、环戊基、环己基、正己基等。
本发明的“环烷基”是指环状的饱和烃基。合适的环烷基可以为取代或未取代的具有3-10个碳原子的单环、二环或三环饱和烃基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
本发明的“烷氧基”是指-o-烷基。根据本发明，合适的烷氧基为c1-10烷氧基，如c1-8烷氧基，c1-7烷氧基，c1-6烷氧基，c1-5烷氧基，c1-4烷氧基，c1-3烷氧基，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、异丁氧基、仲丁氧基等。
本发明的“卤素”是指氟、氯、溴、碘。
本发明的“卤代烷基”是指至少被一个卤素取代的烷基。
本发明的“芳基”是指可以包含单环或多稠环例如二环或三环的芳香环的芳香系，其中至少稠合的环的一部分形成共轭的芳香系，其含有5至50个碳原子，优选约6至约14个碳原子。合适的芳基包括但不限于苯基、萘基、联苯基、蒽基、四氢萘基、芴基、茚满基、亚联苯基和苊基。
本发明的“杂芳基”是指芳族单环或多稠环如二环或三环的至少有一个碳原子被杂原子替代的芳香性基团，所述的杂原子为o、s、n。合适的杂芳基包括但不限于咪唑基、苯并咪唑基、咪唑并吡啶基、喹唑啉酮基、吡咯基、咪唑酮基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基等。
本发明的“亚烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链二价基团。
本发明的“亚烯基”是指含有2到6个碳原子和1到3个双键的直链或支链的二价基团。
本发明的“烷酰胺基”是指烷基-c(o)-nh-。
本发明的“酰胺基”是指c(o)h-nh-。
本发明的“烷酰基”是指烷基-c(o)-。
本发明的“烷氨酰基”是指烷基-nh-c(o)-或烷基-n(烷基)-c(o)-。
本发明的“溶剂合物”在常规意义上是指溶质(如活性化合物、活性化合物的盐)和溶剂(如水)组合形成的复合物。溶剂是指本领域的技术人员所知的或容易确定的溶剂。如果是水，则溶剂合物通常被称作水合物，例如一水合物、二水合物、三水合物等。
本发明的“结晶”是指本发明所述的化合物形成的各种固体形态，包括晶型、无定形。
本发明的“异构体”是指分子中原子在空间上排列方式不同所产生的立体异构体，包括对映异构体和非对映异构体。
本发明的“前药”是指在生物体的生理条件下，由于与酶、胃酸等反应而转化成本发明的化合物的化合物，即通过酶的氧化、还原、水解等转化成本发明的化合物的化合物和/或通过胃酸等的水解反应等转化成本发明的化合物的化合物。
本发明的“药学可接受的盐”是指本发明的化合物与酸形成的药学上可接受的盐，所述的酸包括但不限于磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、醋酸、乳酸、硝酸等等。
本发明的“药物组合物”是指包含任何一种本文所述的化合物，包括异构体、前药、溶剂合物、药学上可接受的盐或其化学的保护形式，和一种或多种药学上可接受载体的混合物。
本发明的“药学上可接受的载体”是指对有机体不引起明显刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的载体，包含溶剂、稀释剂或其它赋形剂、分散剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。除非任何常规载体介质与本发明化合物不相容。可以作为药学上可接受的载体的一些实例包括，但不限于糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、以及纤维素和乙酸纤维素；麦芽、明胶等。
本发明的“赋形剂”指加入到药用组合物中以进一步促进给予化合物的惰性物质。赋形剂可以包括碳酸钙、磷酸钙、多种糖类和多种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油、聚乙二醇。
实验例1细胞增殖抑制活性测试
实验设溶剂对照组及药物实验组，药物实验组每组设4个浓度，每个浓度下设3个平行孔。每个实验重复三次。在96孔板中，每孔加入细胞浓度为1×105个/ml的细胞悬液100μl，即每孔含细胞1×104个，接种时注意使细胞均匀分布在各孔中。为防止液体蒸发，96孔板周围一圈孔不接种细胞，加入pbs保湿。细胞贴壁后，药物实验组中每孔中加入浓度为0、4、8、12和16μg/ml的目标化合物100μl，使其终浓度分别0、2、4、6和8μg/ml。将96孔板置于37℃、5％co2孵箱内继续培养，于72h后终止培养。分别于药物处理细胞72h后，取出96孔板，每孔中加入cck-8溶液20μl，在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时后，在自动酶标仪上450nm处测定每孔吸光度值(a)。预实验时在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，选取吸光度范围比较适宜的一个时间点(2h)用于后续实验。
不同药物浓度对肿瘤细胞的生长抑制作用按下式计算：
以抑制率对药物浓度作直线回归分析，用直线方程求算ic50值。检测所得结果以均数±标准偏差表示，实验结果采用spss15.0软件进行统计分析，以p<0.05表示有显著性差异。其结果见表1
表1.受试化合物对人hepg2、a549，nci-h2228肿瘤细胞的增殖抑制活性
“-”未测试
表1结果显示，化合物i-1，i-3，i-5对人肝癌hepg2细胞具有较强的抑制活性，与目前常规的抗肝癌药物索拉菲尼相当，处于微摩尔级别。化合物i-1和i-3对egfr突变的肺癌a549肿瘤细胞株也有抑制活性，与色瑞替尼相当。对alk阳性突变的肺癌细胞株nci-h2228的抑制活性，目标化合物i-3的抑制活性优于阳性对照色瑞替尼。
实验例2hdac/alk酶抑制活性测试
在384孔反应板中，设阳性对照孔和阴性对照孔，其余每孔加入不同浓度的化合物及酶，离心后室温孵育15min，加入荧光底物和终止液，使用synergy连续读取荧光信号并使用synergy选取线性反应段得到斜率(slope)。进而计算百分比抑制率，计算公式如下：酶抑制率＝mean(最大)-样品信号/mean(最大)-空白乘以100％，以化合物浓度的log值作为x轴，对应的百分比抑制率为y轴，用分析软件graphpadprism5拟合量效曲线，从而得出各个化合物抑制酶活性的ic50值。alk酶抑制活性方法与hdac酶抑制方法类似。实验结果见表2
表2受试化合物在10nm和1000nm浓度下对hdac和alk激酶的抑制率
“-”未测试
结果显示，部分化合物对alk野生型及突变型激酶及hdac1均有很强的抑制活性。其中，化合物i-6对hdac1野生型激酶的抑制活性在10nm时为93％，对alk激酶的抑制活性在10nm时为89.4％，表现出较强的双靶点抑制活性。
具体实施例
实施例1n-(2-氨基苯基)-4-[5-氯-4-[2-(丙烷-2-磺酰基)-苯基氨基]嘧啶-2-基氨基]苯甲酰胺(i-1)的制备
步骤1：4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯甲酸甲酯的制备
称取n-[(2-异丙基磺酰基)苯基]-2,5-二氯-嘧啶-4-胺(1.0g)和4-氨基苯甲酸甲酯(0.43g)于50ml茄型瓶中，再加入10ml异丙醇和0.1mlhcl溶液(37％)，90℃加热搅拌反应，tlc监测原料消失。停止反应。降至室温，加入30ml冷水，用乙酸乙酯萃取，合并有机层，并用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥过夜。过滤，收集滤液，减压浓缩得1.12g粗品，甲醇/水重结晶，析出0.83g白色晶体，收率72％。
步骤2：4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯甲酸的制备
称取4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯甲酸甲酯的(2.3g)于100ml茄型瓶中，加入0.6g氢氧化钠水溶液(30ml)和10ml无水乙醇，50℃搅拌反应3h。tlc监测原料消失。停止反应。用浓盐酸调ph至弱酸性，有白色固体析出。抽滤固体，滤饼用水洗涤，得1.8g白色粉末，收率82％。
步骤3：n-(2-氨基苯基)-4-[5-氯-4-[2-(丙烷-2-磺酰基)-苯基氨基]嘧啶-2-基氨基]苯甲酰胺(i-1)的制备
称取4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯甲酸(0.54g)，hobt(0.18g)，edci(0.27g)，diea(0.3g)于50ml茄型瓶中，加入20ml二氯甲烷，30℃搅拌反应0.5h后，再加入邻苯二胺(0.13g)并继续反应18h。tlc监测原料消失。停止反应。加入40ml冷水，用二氯甲烷萃取，合并有机层，并用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥过夜。过滤，收集滤液，减压浓缩，柱层析分离(淋洗剂：石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得0.4g白色粉末，收率为61.2％。m.p.164-166℃.1hnmr(600mhz,dmso)(δ,ppm):δ9.90(s,1h),9.51(d,2h),8.58(s,1h),8.37(s,1h),7.81-7.92(m,4h),7.76(d,2h),7.45(t,1h),7.15(d,1h),6.86-7.02(m,1h),6.79(d,1h),6.61(t,1h),4.88(s,2h),3.48(dt,1h),1.15(d,6h).
实施例24-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]-n-羟基苯甲酰胺的(i-2)制备
步骤1：4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]苯甲酸甲酯的制备
将n-[(2-异丙基磺酰基)苯基]-2,5-二氯-嘧啶-4-胺(1.0g)和4-氨基甲基苯甲酸甲酯(0.48g)加入到50ml茄型瓶中，再加入10ml异丙醇和0.7gdiea，90℃加热搅拌反应，tlc监测。反应完毕后，降至室温，加入30ml冷水，用乙酸乙酯萃取，合并有机层，并用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥过夜。过滤，收集滤液，减压浓缩，柱层析，得0.45g白色粉末，收率为34.6％。
步骤2：4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]-n-羟基苯甲酰胺的(i-2)制备
将4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]苯甲酸甲酯(0.2g)加入到于25ml茄型瓶中，加入20ml新鲜制备的羟胺甲醇溶液，常温搅拌反应3h。溶液由浑浊变得澄清。tlc监测原料消失。用饱和氯化铵溶液调ph至近中性，有固体析出。抽滤固体，滤饼用水洗涤，得0.15g粗品。甲醇中重结晶得0.11g粉红色粉末，收率为55.6％。m.p.164-166℃.1hnmr(600mhz,dmso)(δ,ppm):11.16(s,1h),9.38-9.50(m,1h),8.89-9.02(m,1h),7.88-8.23(m,2h),7.32-7.78(m,4h),7.15-7.30(m,3h),4.51(s,2h),3.40-3.50(m,1h),1.24(d,6h).
实施例34-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]-n-羟基苯甲酰胺(i-3)的制备
称取4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯甲酸甲酯(0.2g)于25ml茄型瓶中，加入20ml新鲜制备的羟胺甲醇溶液，常温搅拌反应3h。tlc监测原料消失。停止反应。用饱和氯化铵溶液调ph至近中性，有白色固体析出。抽滤固体，滤饼用水洗涤，得0.19g粗品。甲醇重结晶得0.1g白色粉末，收率为50.5％。m.p.174-175℃.1hnmr(600mhz,dmso)(δ,ppm):9.84(s,1h),8.94(s,1h),8.54(s,1h),8.36(s,1h),7.76-8.06(m,2h),7.57-7.77(m,4h),7.45(s,1h),3.40-3.52(m,1h),1.19(d,6h).
实施例4n-(2-氨基苯基)-4-[[5-氯-4-[2-(2-异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]苯甲酰胺(i-4)的制备
步骤1：4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]苯甲酸的制备
称取n-[(2-异丙基磺酰基)苯基]-2,5-二氯-嘧啶-4-胺(1.0g)和4-氨甲基苯甲酸(0.5g)于50ml茄型瓶中，再加入20ml异丙醇和diea(0.7g)，90℃加热搅拌反应，tlc检测反应进程。tlc监测原料消失。停止反应。降至室温，加入40ml冷水，用乙酸乙酯萃取，合并有机层，并用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥过夜。过滤，收集滤液，减压浓缩得1.1g粗品，甲醇/水重结晶，析出0.76g白色晶体，收率51.1％。
步骤2：n-(2-氨基苯基)-4-[[5-氯-4-[2-(2-异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]苯甲酰胺(i-4)的制备
称取4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]苯甲酸(0.54g)，hobt(0.15g)，edci(0.22g)，diea(0.15g)于50ml茄型瓶中，加入20ml二氯甲烷，30℃搅拌反应0.5h后，再加入邻苯二胺(0.12g)并继续反应18h。tlc监测原料消失。停止反应。加入40ml冷水，用二氯甲烷萃取，合并有机层，并用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥过夜。过滤，收集滤液，减压浓缩，柱层析分离得0.26g白色粉末，收率为44.1％。m.p.138-140℃.1hnmr(600mhz,dmso)(δ,ppm):9.60(s,2h),8.15(s,2h),7.91(d,2h),7.70–7.79(m,2h),7.25-7.35(m,3h),7.14(s,1h),6.84-7.04(m,1h),6.77(dd,1h),6.59(d,1h),4.87(s,2h),3.34-3.50(m,1h),1.14(d,6h).
实施例24-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]-n-羟基苯烯酰胺(i-5)的制备
步骤1：4-溴苄基氨基甲酸叔丁酯的制备
称取对溴苄胺10g加入至250ml单口瓶中，加入50ml二氯甲烷，再依次加入et3n(5.98g)和(boc)2o(12.9g)。常温搅拌反应2h。向反应体系中加入200ml水，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并二氯甲烷层，用水、饱和食盐水100ml依次洗涤，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥。抽滤，浓缩有机层得白色固体。烘干得固体12.56g，收率81.7％。
步骤2：(e)-3-[4-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]苯基]丙烯酸甲酯的制备
分别取4-溴苄基氨基甲酸叔丁酯10g，丙烯酸甲酯9g，diea9g，醋酸钯0.8g，三(2-甲基苯基)膦2g，乙腈60ml，dmf30ml加入至250ml茄型瓶中，氮气保护，90℃回流反应6h。降温冷却至室温。向反应体系中加入200ml冷水，抽滤。取母液用乙酸乙酯(100ml×2)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，取有机层用无水硫酸钠干燥30分钟。抽滤。取母液加硅胶柱层析，合并洗脱液，减压浓缩得淡黄色固体3.9g，收率38.3％。
步骤3：(e)-3-[4-(氨甲基)苯基]丙烯酸甲酯的制备
在50ml茄型瓶中加入(e)-3-[4-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]苯基]丙烯酸甲酯2.5g，三氟醋酸6ml，二氯甲烷20ml，常温搅拌反应2h。向反应体系中加入50ml水，用饱和碳酸钠溶液调ph至弱碱性，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(100ml)洗涤，取有机层用无水硫酸钠干燥。抽滤，取母液减压浓缩得淡黄色油状物1.21g，收率73.8％。
步骤4：4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]苯烯酸甲酯制备
称取n-[(2-异丙基磺酰基)苯基]-2,5-二氯-嘧啶-4-胺(0.45g)和(e)-3-[4-(氨甲基)苯基]丙烯酸甲酯(0.25g)于50ml茄型瓶中，再加入10ml异丙醇和0.34gdiea，90℃加热搅拌反应，tlc检测反应完全。降至室温，加入30ml冷水，用乙酸乙酯萃取，合并有机层，并用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥过夜。过滤，收集滤液，减压浓缩，柱层析得0.4g白色粉末，收率为61.6％。
步骤5：4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]-n-羟基苯烯酰胺(i-5)的制备
称取4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]甲基]苯烯酸甲酯(0.15g)于25ml茄型瓶中，加入15ml新鲜制备的羟胺甲醇溶液，常温搅拌反应3h。溶液由浑浊变得澄清。tlc监测原料a消失。停止反应。用饱和氯化铵溶液调ph至近中性，有固体析出。抽滤固体，滤饼用水洗涤，得0.12g粗品。甲醇中重结晶得0.08g粉红色粉末，收率为46.7％。m.p.196-198℃.1hnmr(600mhz,dmso)(δ,ppm):10.74(s,1h),9.36-9.50(m,1h),8.89-9.10(m,1h),7.94-8.30(m,2h),7.47-7.93(m,4h),7.41(d,1h),7.30(s,3h),6.40(d,1h),4.45(s,2h),3.35-3.50(m,1h),1.13(d,6h).
实施例64-[(5-氯-4-[(2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]-n-[6-(羟基氨基)-6-氧代己基]苯甲酰胺(i-6)的制备
步骤1：4-[[5-氯-4-[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯甲酸的制备
称取n-[(2-异丙基磺酰基)苯基]-2,5-二氯-嘧啶-4-胺(1.02g)和4-氨基苯甲酸(0.41g)于50ml茄型瓶中，再加入20ml异丙醇和0.3mlhcl溶液(37％)，90℃加热搅拌反应，tlc检测反应进程。tlc监测原料a消失。停止反应。降至室温，加入30ml冷水，析出白色固体，抽滤，烘干得0.87g白色固体，收率62.58％。
步骤2：6-[4-[5-氯-4-[2-(丙烷-2-磺酰基)苯基氨基]-嘧啶-2-基氨基]苯甲酰氨基]己酸甲酯的制备
称取4-((5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲酸(0.80g)，hobt(0.27g)，edci(0.40g)，diea(0.70g)于50ml茄型瓶中，加入20ml二氯甲烷，30℃搅拌反应0.5h后，再加入6-氨基己酸甲酯盐酸盐(0.28g)并继续反应10h。tlc监测原料消失。停止反应。加入40ml冷水，用二氯甲烷萃取，合并有机层，并用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥过夜。过滤，收集滤液，减压浓缩，柱层析分离(淋洗剂：二氯甲烷：甲醇＝30：1)得0.60g白色粉末，收率为57.19％。
步骤3：4-[(5-氯-4-[(2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]-n-[6-(羟基氨基)-6-氧代己基]苯甲酰胺(i-6)制备
称取6-[4-[5-氯-4-[2-(丙烷-2-磺酰基)-苯基氨基]-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酰氨基]-己酸甲酯(0.2g)于25ml茄型瓶中，加入20ml新鲜制备的羟胺甲醇溶液，常温搅拌反应3h。tlc监测原料消失。停止反应。用饱和氯化铵溶液调ph至近中性，有白色固体析出。抽滤固体，滤饼用水洗涤，得0.21g粗品。经甲醇：水＝5:1的混合溶剂打浆，得淡白色粉末0.17，收率为85％。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.35(s,1h),9.83(s,1h),9.49(s,1h),8.68(s,1h),8.56(s,1h),8.36(s,1h),8.28(t,1h),7.89(d,1h),7.83(t,1h),7.71(dd,4h),7.45(t,1h),3.47(dt,1h),3.23(dd,2h),1.96(t,2h),1.55–1.45(m,4h),1.31–1.24(m,2h),1.17(d,6h).
实施例73-[(5-氯-4-[(2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]-n-[6-(羟基氨基)-6-氧代己基]苯甲酰胺(i-7)的制备
以3-氨基苯甲酸为原料，操作同实施例6，得类白色固体，收率78％。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.36(s,1h),9.70(s,1h),9.57(s,1h),8.68(s,2h),8.35(d,2h),8.03(s,1h),7.84(d,1h),7.77(d,1h),7.68(d,1h),7.43(d,1h),7.39–7.24(m,2h),3.46(dt,1h),3.22(d,2h),1.96(dd,2h),1.50(dt,4h),1.28(dd,2h),1.17(d,6h).
实施例84-[(5-氯-4-[(2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]-n-[6-(羟基氨基)-4-氧代丁基]苯甲酰胺(i-8)的制备
以4-氨基苯甲酸为原料，操作同实施例6，得类白色固体，收率80％。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.42(s,1h),9.83(s,1h),9.26–9.20(m,1h),8.73(s,1h),8.57(s,1h),8.42-8.32(m,2h),7.86(d,2h),7.76–7.62(m,4h),7.45(s,1h),3.47(m,1h),3.35-3.24(m,2h),2.12-2.02(m,2h),1.85–1.75(m,2h),1.17(m,6h).
实施例93-[(5-氯-4-[(2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]-n-[6-(羟基氨基)-4-氧代丁基]苯甲酰胺(i-9的制备)
以3-氨基苯甲酸为原料，操作同实施例6，得类白色固体，收率76％。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.40(s,1h),9.70(s,1h),9.57(s,1h),8.73(d,1h),8.66(s,1h),8.42(t,1h),8.33(s,1h),8.04(s,1h),7.84(dd,1h),7.77(d,1h),7.68(t,1h),7.44(d,1h),7.39–7.30(m,2h),3.46(dt,1h),3.23(dd,2h),2.53–2.48(m,2h),2.01(t,2h),1.78–1.67(m,2h),1.17(d,6h).
实施例103-[(5-氯-4-[(2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]-n-[6-(羟基氨基)-7-氧代庚基]苯甲酰胺(i-10的制备)
以3-氨基苯甲酸为原料，操作同实施例6，得类白色固体，收率83％。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.35(s,1h),9.70(s,1h),9.57(s,1h),8.68(s,2h),8.34(d,2h),8.03(s,1h),7.84(d,1h),7.77(d,1h),7.68(t,1h),7.43(d,1h),7.39–7.23(m,2h),3.52–3.40(m,1h),3.22(d,2h),1.94(t,2h),1.55-1.40(m,4h),1.38-1.20(m,4h),1.17(d,6h).
实施例114-[(5-氯-4-[(2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]-n-[7-(羟基氨基)-7-氧代庚基]苯甲酰胺(i-11的制备)
以4-氨基苯甲酸为原料，操作同实施例6，得类白色固体，收率83％。1hnmr(600mhz,dmso)1hnmr(600mhz,dmso)δ10.38(s,1h),9.84(s,1h),9.49(s,1h),8.69(s,1h),8.58(s,1h),8.36(s,1h),8.31(t,1h),7.88(d,1h),7.83(t,1h),7.71(dd,4h),7.45(t,1h),3.51–3.46(m,1h),3.22(dd,2h),2.02–1.87(m,2h),1.58–1.49(m,4h),1.35–1.25(m,4h),1.13(d,6h).
实施例12n1-[4-[[5-氯-4-[[2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯基]-n7-羟基庚二酰胺(i-12的制备)
步骤1：n2-(4-氨基苯基)-5-氯-n4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)嘧啶-2,4-二胺的制备
称取n-[(2-异丙基磺酰基)苯基]-2,5-二氯-嘧啶-4-胺(1.02g)和对苯二胺(0.35g)于50ml茄型瓶中，再加入20ml异丙醇和0.3mlhcl溶液(37％)，90℃加热搅拌反应，tlc检测反应进程。tlc监测原料a消失。停止反应。降至室温，加入30ml冷水，乙酸乙酯萃取三次，用饱和nacl洗涤有机层三次，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，收集滤液，减压旋蒸，浓缩得1.06g褐色固体，收率78.5％。
步骤2：7-[[4-[[5-氯-4-[[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯基]氨基]-庚酸甲酯的制备
称取n2-(4-氨基苯基)-5-氯-n4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(0.80g)，hobt(0.28g)，edci(0.40g)，diea(0.70g)于50ml茄型瓶中，加入30ml二氯甲烷，室温搅拌反应0.5h后，再加入7-氨基庚酸甲酯盐酸盐(0.34g)并继续反应10h。tlc监测原料消失。停止反应。加入40ml冷水，用二氯甲烷萃取三次，合并有机层，并用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥过夜。过滤，收集滤液，减压浓缩，柱层析分离(淋洗剂：二氯甲烷：甲醇＝50：1)得0.62g白色粉末，收率为57.9％。
步骤3：n1-[4-[[5-氯-4-[[2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯基]-n7-羟基庚二酰胺(i-12)的制备
称取7-[[4-[[5-氯-4-[[2-(异丙基磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯基]氨基]-庚酸甲酯(0.2g)于25ml茄型瓶中，加入15ml新鲜制备的羟胺甲醇溶液，常温搅拌反应3h。tlc监测原料消失。停止反应。用饱和氯化铵溶液调ph至近中性，有白色固体析出。抽滤固体，滤饼用水洗涤，得0.10g粗品。经甲醇：水＝5:1的混合溶剂打浆，得淡白色粉末0.75g，收率为37.5％。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.35(s,1h),9.77(s,1h),9.48(d,2h),8.68(s,1h),8.60(s,1h),8.27(s,1h),7.86(d,1h),7.74(s,1h),7.48(d,4h),7.40(s,1h),3.45(s,1h),2.27(s,2h),1.95(s,2h),1.55(d,4h),1.27(s,2h),1.17(s,6h).
实施例13n1-[3-[[5-氯-4-[[2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯基]-n6-羟基己二酰胺(i-13)的制备
以间苯二胺为原料，操作同实施例12，得类白色固体，收率32.2％。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.41(s,1h),9.89(s,1h),9.57(d,2h),8.71(s,2h),8.30(s,1h),7.90–7.80(m,2h),7.69(t,1h),7.36(dd,2h),7.18(dt,2h),3.46(dt,1h),2.29(d,2h),1.98(t,2h),1.54(d,4h),1.19(t,6h).
实施例14n1-[3-[[5-氯-4-[[2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯基]-n7-羟基庚二酰胺(i-14)的制备
以间苯二胺为原料，操作同实施例12，得类白色固体，收率32.2％。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.35(s,1h),9.83(s,1h),9.57(d,2h),8.70(d,2h),8.29(s,1h),7.89–7.80(m,2h),7.70(t,1h),7.35(dd,2h),7.22–7.13(m,2h),3.46(dt,1h),2.28(t,2h),1.95(t,2h),1.61–1.47(m,4h),1.27(dd,2h),1.18(d,6h).
实施例15n1-[3-[[5-氯-4-[[2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯基]-n7-羟基戊二酰胺(i-15)的制备
以对苯二胺为原料，操作同实施例12，得类白色固体，收率42.2％。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.41(s,1h),9.86(s,1h),9.57(d,2h),8.72(s,2h),8.29(d,1h),7.90–7.80(m,2h),7.70(t,1h),7.40–7.30(m,2h),7.18(dt,2h),3.46(dt,1h),2.31(t,2h),2.01(t,2h),1.79(p,2h),1.18(d,6h).
实施例16n1-[4-[[5-氯-4-[[2-(异丙磺酰基)苯基]氨基]嘧啶-2-基]氨基]苯基]-n7-羟基戊二酰胺(i-16)的制备
以对苯二胺为原料，操作同实施例12，得类白色固体，收率38.2％。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.42(s,1h),9.83(s,1h),9.48(d,2h),8.72(s,1h),8.61(s,1h),8.28(s,1h),7.86(d,1h),7.74(t,1h),7.48(t,4h),7.40(t,1h),3.45(dt,1h),2.40–2.20(m,2h),2.02(t,2h),1.86–1.71(m,2h),1.17(d,6h).