D-木糖酸脱水酶及其应用的制作方法

文档序号:20787242发布日期:2020-05-19 21:49阅读:来源:国知局

技术特征:

1.d-木糖酸脱水酶,其特征在于,所述d-木糖酸脱水酶的氨基酸序列如seqidno.:1~4所示。

2.编码权利要求1所述d-木糖酸脱水酶的基因序列。

3.一种重组质粒,其特征在于,该重组质粒中包含权利要求2所述的基因序列。

4.一种重组细胞,其特征在于,该重组细胞中包含权利要求2所述的基因序列。

5.权利要求1或2所述d-木糖酸脱水酶在制备多元醇中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述的多元醇为1,2,4-丁三醇。

7.一株产1,2,4-丁三醇的基因工程菌,其特征在于,在大肠杆菌中导入了权利要求2所述的编码d-木糖酸脱水酶的基因序列。

8.根据权利要求7所述的产1,2,4-丁三醇的基因工程菌,其特征在于,该大肠杆菌中导入了d-木糖脱氢酶基因、苯甲酰甲酸脱羧酶基因、醇脱氢酶基因。

9.根据权利要求7所述的产1,2,4-丁三醇的基因工程菌的构建方法,其特征在于,

(1)将d-木糖酸脱水酶基因、d-木糖脱氢酶基因、苯甲酰甲酸脱羧酶基因、醇脱氢酶基因分别克隆至表达质粒中,所述的表达质粒包括pcwj,得到重组质粒,

(2)再将重组载体转化宿主菌,所述的宿主菌为大肠trans1t1,得到产1,2,4-丁三醇的基因工程菌。

10.权利要求7、8任一所述产1,2,4-丁三醇的基因工程菌在制备1,2,4-丁三醇中的应用。


技术总结
本发明公开了一种D‑木糖酸脱水酶,所述D‑木糖酸脱水酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.:1~4所示,本发明通过易错PCR对来自大肠杆菌的D‑木糖酸脱水酶YjhG进行定向进化,得到四种D‑木糖酸脱水酶YjhG基因序列,将其转化大肠杆菌,获得几组活力较高的突变株91号、96号、62号和286号,这几个菌株在12h内所消耗木糖酸分别为4.2g/L、4.8g/L、6.22g/L、5.43g/L,而出发菌株(亲株A)在同等条件下消耗的木糖酸为2.15g/L,分别提高了2.1倍、2.4倍、2.89倍、2.5倍。

技术研发人员:陈可泉;麦丹丹;王昕
受保护的技术使用者:南京工业大学
技术研发日:2020.01.10
技术公布日:2020.05.19
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